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1、结核分支杆菌的检验 第1页，本讲稿共18页一般特性一般特性1.G杆菌杆菌，偶有分支分支，抗酸染色抗酸染色；2.需氧需氧，营养要求特殊，生长大多缓慢生长大多缓慢；3.致病多为慢性慢性 病变，常有肉芽肿肉芽肿；4.无无鞭毛鞭毛、无无芽胞芽胞、无无荚膜荚膜，不产生外毒素不产生外毒素或或内毒素内毒素，其致病性与菌体成分有关；第2页，本讲稿共18页分类：分类：分支杆菌属主要有分支杆菌属主要有3种：种：结核分支杆菌结核分支杆菌（M.tuberculosis）牛分支杆菌牛分支杆菌（M.bovis）禽分支杆菌禽分支杆菌（M.avium）第3页，本讲稿共18页一、形态染色一、形态染色1.1.形态细长形态细长,着
2、色不匀着色不匀,排列成分枝索状排列成分枝索状2.2.抗酸性染色（抗酸性染色（结核杆菌为结核杆菌为红色红色，其他细菌为，其他细菌为蓝色蓝色）。）。第4页，本讲稿共18页结核分支杆菌牛分支杆菌禽分支杆菌致病性致病性人+-牛+家禽-+豚鼠+-家兔-+染色革兰氏染色阳性；抗酸染色阳性（结合杆菌为红色，其他细菌为蓝色）形态染色形态染色在陈旧培养基或干酪变性病变组织，菌体可见分支。病灶组织中，菌形比较一致，单个，成双，间或成丛。无荚膜，无芽胞。细长、正直或微弯杆菌，长1.54um,宽0.20.6um比结核分支杆菌短而粗具有多形性，可呈杆状、球菌状、链球状。培培养养特特性性专性需氧，营养要求严格，最适pH6
3、.56.8，最适温度3737.5，在含有鸡蛋、血清、牛乳、马铃薯和甘油（牛型菌除外）易于生长。12周开始生长，34周才能旺盛发育。生长速度居中最慢较快42发育-+硝酸盐还原+-尿素酶+-烟酸形成性+-甘油促进生长+-+抗原性具有相同的抗原性具有单独的抗原结构抵抗力抵抗力含大量类脂和蜡质成分，抵抗力较强，干痰中可存活68个月；对湿热抵抗力弱(6030min)，对低温抵抗力强，射线可影响其活力（阳光直射4h可杀灭）。一般消毒剂对其杀菌力不大，链霉素、环丝氨酸、异烟肼、对氨水杨酸、利福平为常用药。第5页，本讲稿共18页禽分支杆菌 结核分支杆菌第6页，本讲稿共18页禽分支杆菌第7页，本讲稿共18页结核
4、分支杆菌结核分支杆菌肺结核肺结核(TEM x48,185)第8页，本讲稿共18页牛型结核杆菌M.bovisM.bovis BCG BCG 第9页，本讲稿共18页二、培养特性二、培养特性1.营养要求高；营养要求高；2.需氧，加需氧，加6%8%CO2可促进生长；可促进生长；3.生长缓慢。生长缓慢。第10页，本讲稿共18页三、抵抗力三、抵抗力 1.强的方面强的方面:抗干燥；抗酸、碱或染料；抗干燥；抗酸、碱或染料；抗一般化学试剂。抗一般化学试剂。2.2.弱的方面弱的方面:怕热、怕酒精、怕阳光。怕热、怕酒精、怕阳光。第11页，本讲稿共18页四、致病性四、致病性1.1.1.1.感染途径感染途径感染途径感染
5、途径(1)呼吸道为主(2)消化道(3)破损皮肤粘膜2.2.2.2.致病作用致病作用致病作用致病作用(1)在细胞内寄生且顽强增殖(2)菌体成分致病：脂类、蛋白质和多糖质脂类，含量愈高毒力愈强。肺结核肺结核肺组织肺组织第12页，本讲稿共18页3.3.可通过呼吸道、消化或皮肤损伤侵可通过呼吸道、消化或皮肤损伤侵入易感机体入易感机体,其中其中肺结核肺结核为最多。为最多。慢性纤维空洞性肺结核干酪样肺炎粟粒性肺结核第13页，本讲稿共18页五、免疫性五、免疫性1.1.以以细胞免疫细胞免疫为主为主,与与变态反应变态反应同时存在。同时存在。2.2.传染性免疫传染性免疫(带菌免疫带菌免疫)。第14页，本讲稿共18
6、页六、微生物学检验六、微生物学检验n n标本的采集标本的采集标本的采集标本的采集 根据病变部位的不同，可采取根据病变部位的不同，可采取根据病变部位的不同，可采取根据病变部位的不同，可采取痰痰痰痰、胸腹水胸腹水胸腹水胸腹水、尿尿尿尿、脑脊脑脊脑脊脑脊液液液液、粪粪粪粪、分泌物分泌物分泌物分泌物及组织等。痰最好是清晨第一口痰，尿为清晨中、后及组织等。痰最好是清晨第一口痰，尿为清晨中、后及组织等。痰最好是清晨第一口痰，尿为清晨中、后及组织等。痰最好是清晨第一口痰，尿为清晨中、后段。段。段。段。n n标本的处理标本的处理标本的处理标本的处理 用用用用4%4%的硫酸或的硫酸或的硫酸或的硫酸或3%3%的盐
7、酸处理的盐酸处理的盐酸处理的盐酸处理20 min20 min或或或或4%4%氢氧氢氧氢氧氢氧化钠化钠化钠化钠30 min30 min。第15页，本讲稿共18页n n痰痰痰痰,尿尿尿尿,脑脊液脑脊液脑脊液脑脊液,粪便等，直接粪便等，直接粪便等，直接粪便等，直接涂片涂片涂片涂片，萋萋萋萋-尼二氏染色尼二氏染色尼二氏染色尼二氏染色法。法。法。法。抗酸性细菌抗酸性细菌抗酸性细菌抗酸性细菌能抵抗含酸酒精脱色作用，而染为能抵抗含酸酒精脱色作用，而染为能抵抗含酸酒精脱色作用，而染为能抵抗含酸酒精脱色作用，而染为红色红色红色红色，非抗酸性细菌非抗酸性细菌非抗酸性细菌非抗酸性细菌和组织细胞被盐酸酒精脱色，美蓝复
8、染成和组织细胞被盐酸酒精脱色，美蓝复染成和组织细胞被盐酸酒精脱色，美蓝复染成和组织细胞被盐酸酒精脱色，美蓝复染成蓝色蓝色蓝色蓝色 。2.分离培养分离培养：初次分离常用潘曲吉尼氏培养基潘曲吉尼氏培养基、青霉素血液琼青霉素血液琼脂脂等。初次培养的可疑菌落可疑菌落（抗酸染色阳性）移植于改良改良Herrold培养基培养基上进行传代。结核分枝杆菌一般生长较慢，需24周才能发育好，菌落呈干燥、不规则、坚硬表面呈粗糙的颗粒菌落呈干燥、不规则、坚硬表面呈粗糙的颗粒状状。第16页，本讲稿共18页3.动物试验动物试验：豚鼠腹腔或皮下接种豚鼠腹腔或皮下接种豚鼠腹腔或皮下接种豚鼠腹腔或皮下接种0.5 ml0.5 ml
9、，经，经，经，经2323周周周周局部淋局部淋局部淋局部淋巴结肿大、变硬，逐渐变成溃疡，有脓性排出物，始终不愈巴结肿大、变硬，逐渐变成溃疡，有脓性排出物，始终不愈巴结肿大、变硬，逐渐变成溃疡，有脓性排出物，始终不愈巴结肿大、变硬，逐渐变成溃疡，有脓性排出物，始终不愈合。合。合。合。56 56 周周周周后病变扩展至全身，动物因衰弱而死。全身淋巴结、肝、后病变扩展至全身，动物因衰弱而死。全身淋巴结、肝、后病变扩展至全身，动物因衰弱而死。全身淋巴结、肝、后病变扩展至全身，动物因衰弱而死。全身淋巴结、肝、脾、肺均有弥漫性结核结节。脾、肺均有弥漫性结核结节。脾、肺均有弥漫性结核结节。脾、肺均有弥漫性结核结
10、节。4.变态反应诊断法变态反应诊断法：我国常用：我国常用皮内法皮内法和和点眼法点眼法，可检出可检出9598%的结核病牛。的结核病牛。第17页，本讲稿共18页七、防治原则七、防治原则1、防防接种卡介苗接种卡介苗接种卡介苗接种卡介苗（1 1月龄免疫，月龄免疫，月龄免疫，月龄免疫，20 20 天产生抗体，可维持天产生抗体，可维持天产生抗体，可维持天产生抗体，可维持11.5 11.5 年）。年）。年）。年）。2 2、治治抗结核药抗结核药抗结核药抗结核药,联合用药。联合用药。联合用药。联合用药。链霉素链霉素链霉素链霉素，利福平，利福平，利福平，利福平,环丝霉素等。环丝霉素等。环丝霉素等。环丝霉素等。患者休息，增加营养，供给新鲜空气，患者休息，增加营养，供给新鲜空气，患者休息，增加营养，供给新鲜空气，患者休息，增加营养，供给新鲜空气，补充维生素补充维生素补充维生素补充维生素A A、C C、D D等。等。等。等。第18页，本讲稿共18页