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1、第六章分离分析导论ppt第1页，本讲稿共57页一、概述定义 分离分析法是一种利用试样中共存的组分间的吸附、分配、交换、迁移速率及其性能上的差异，先将其分离，而后通过检测器按一定顺序进行分析的一种方法。色谱法的产生 色谱法是一种分离技术，它是俄国植物学家茨维特色谱法是一种分离技术，它是俄国植物学家茨维特1906年创立的。分离植物叶子中的色素年创立的。分离植物叶子中的色素时，将叶片的石油醚（饱和烃混合物）提取液倒入玻璃管中，柱中填充时，将叶片的石油醚（饱和烃混合物）提取液倒入玻璃管中，柱中填充CaCO3粉末（粉末（CaCO3 有有吸附能力吸附能力)，用纯石油醚洗脱（淋洗）。色素受两种作用力影响：，
2、用纯石油醚洗脱（淋洗）。色素受两种作用力影响：（1）一种是）一种是CaCO3 吸附，使色素在柱中停滞下来吸附，使色素在柱中停滞下来（2）一种是被石油醚溶解，使色素向下移动）一种是被石油醚溶解，使色素向下移动 各种色素结构不同，受两种作用力大小不同，经过一段时间洗脱后，色素在柱各种色素结构不同，受两种作用力大小不同，经过一段时间洗脱后，色素在柱子上分开，形成了各种颜色的谱带，这种分离方法称为色谱法。子上分开，形成了各种颜色的谱带，这种分离方法称为色谱法。第2页，本讲稿共57页一、概述Tsweet的实验第3页，本讲稿共57页一、概述色谱法混合物在流动相的携带下通过色谱柱分离出几种组分的方法。流动相
3、气体 1952年产生气相色谱，是色谱法一项革命性进展。液体 流的速度慢，加压，使其流快，1969年HPLC发展，高压液相色谱。第4页，本讲稿共57页一、概述固定相：固定相：（1）固体吸附剂：）固体吸附剂：CaCO3、Al 2O3等等（2）液体固定相（载体）液体固定相（载体+固定液固定液高沸点有机化合物，涂在载体上）高沸点有机化合物，涂在载体上）色谱分离法一定是先分离。后分析色谱分离法一定是先分离。后分析 一定具有两相；固定相和流动相一定具有两相；固定相和流动相 分离：利用组分在两相中分配系数或吸附能力的差异进行分离分离：利用组分在两相中分配系数或吸附能力的差异进行分离特点（1）分离效能高（2）
4、灵敏度高（3）分析速度快（4）应用范围广第5页，本讲稿共57页一、概述我国情况 我国在色谱分析领域的研究起于我国在色谱分析领域的研究起于1954年，由中国科学年，由中国科学院大连化学物理研究所卢佩章院士领衔首先开发。经过几院大连化学物理研究所卢佩章院士领衔首先开发。经过几十年的努力，我国色谱基础理论研究和应用技术研究方面十年的努力，我国色谱基础理论研究和应用技术研究方面具有特色，居世界领先行列。具有特色，居世界领先行列。第6页，本讲稿共57页二、色谱分析法分类1、按两相状态分类、按两相状态分类气相色谱气相色谱气体作流动相气体作流动相（1）气固色谱：气体作流动相，固体吸附剂作固定相。）气固色谱：
5、气体作流动相，固体吸附剂作固定相。（2）气液色谱：气体作流动相，固定液作固定相。）气液色谱：气体作流动相，固定液作固定相。液相色谱液相色谱液体作流动相液体作流动相（1 1）液固色谱：液体作流动相，固体吸附剂作固体相。）液固色谱：液体作流动相，固体吸附剂作固体相。（2 2）液液色谱：液体作流动相，固定液作固定相。）液液色谱：液体作流动相，固定液作固定相。超临界液体色谱超临界液体色谱超临界流体作色谱流动相。超临界流体作色谱流动相。第7页，本讲稿共57页二、色谱分析法分类2、按操作形式分类、按操作形式分类（1 1）柱色谱：）柱色谱：填充柱色谱填充柱色谱固定相填充到柱管内固定相填充到柱管内 毛细管柱色
6、谱毛细管柱色谱把固定相涂在毛细管内壁上，把固定相涂在毛细管内壁上，中间是空的。中间是空的。第8页，本讲稿共57页二、色谱分析法分类（2）纸色谱：滤纸为固定相的色谱法，流动相是含一定比例水的有机溶剂，样品在滤纸上展开进行分离。（3）薄层色谱：把固体固定相压成或涂成薄膜的色谱法。第9页，本讲稿共57页二、色谱分析法分类 3、按分离原理分类、按分离原理分类（1）吸附色谱吸附色谱：利用吸附剂表面对被分离的各组分吸附能：利用吸附剂表面对被分离的各组分吸附能力不同进行分离。力不同进行分离。（2）分配色谱分配色谱：利用不同组分在两相分配系数或溶解度不同进行分：利用不同组分在两相分配系数或溶解度不同进行分离。
7、离。（3）离子交换色谱离子交换色谱：利用不同组分对离子交换剂亲和力不同进行分：利用不同组分对离子交换剂亲和力不同进行分离。离。（4）凝胶色谱凝胶色谱：利用凝胶对分子的大小和形状不同的组分所：利用凝胶对分子的大小和形状不同的组分所产生的阻碍作用不同而进行分离的色谱法。产生的阻碍作用不同而进行分离的色谱法。第10页，本讲稿共57页三、色谱图及常用术语一、色谱图一、色谱图 混合物样品（混合物样品（A+BA+B）色谱柱中分离色谱柱中分离检测器检测器记录下来。记录下来。组分从色谱柱流出时，各个组分在检测器上所产生的信号组分从色谱柱流出时，各个组分在检测器上所产生的信号随时间变化，所形成的曲线叫色谱图。随
8、时间变化，所形成的曲线叫色谱图。记录了各个组分流出色谱柱的情况，又叫色谱流出曲线记录了各个组分流出色谱柱的情况，又叫色谱流出曲线第11页，本讲稿共57页三、色谱图及常用术语二、色谱图中的基本术语二、色谱图中的基本术语 1、基线、基线在实验在实验操作条件下，色谱操作条件下，色谱柱后没有组分流出柱后没有组分流出的曲线叫基线。的曲线叫基线。稳定情况下，一条稳定情况下，一条直线。直线。基线上下波动称为基线上下波动称为噪音。噪音。第12页，本讲稿共57页三、色谱图及常用术语2、色谱峰的高度、色谱峰的高度h（1）峰高）峰高h 色谱峰最高点与基线之间的距离色谱峰最高点与基线之间的距离，可用，可用mm,mV，
9、mA表示。峰高低与组分浓度有关，峰越高越窄越好。表示。峰高低与组分浓度有关，峰越高越窄越好。h第13页，本讲稿共57页三、色谱图及常用术语3.色谱峰的宽度色谱峰的宽度标准偏差标准偏差 峰高峰高0.607倍处的色谱峰宽的一半。倍处的色谱峰宽的一半。第14页，本讲稿共57页峰底宽峰底宽Wb色谱峰两侧拐点所作切线在基线上的距离色谱峰两侧拐点所作切线在基线上的距离 Wb=4 半峰宽半峰宽W1/2峰高一半处色谱峰的宽度峰高一半处色谱峰的宽度 W1/2=2.354 Wb=4 W1/2=0.589Wb Wb三、色谱图及常用术语第15页，本讲稿共57页三、色谱图及常用术语 4.色谱峰面积色谱峰面积A 色谱峰与
10、峰底所围的面积。色谱峰与峰底所围的面积。对于对称的色谱峰对于对称的色谱峰 A=1.065h W1/2 对于非对称的色谱峰对于非对称的色谱峰 A=1.065h(W 0.15+W 0.85)/2 5.色谱保留值色谱保留值定性的依据定性的依据 组组分分在在色色谱谱柱柱中中停停留留的的数数值值，可可用用时时间间t 和和所所消消耗耗流流动动相相的的体体积积来来表表示示。组组分分在在固固定定相相中中溶溶解解性性能能越越好好，或或固固定定相相的的吸吸附附性性越越强强，在在柱柱中中滞滞留留的的时时间间越越长长，消消耗耗的的流流动相体积越大，动相体积越大，固定相、流动相固定，条件一定时，组分的保留值是个定值。固
11、定相、流动相固定，条件一定时，组分的保留值是个定值。第16页，本讲稿共57页三、色谱图及常用术语（1）死死时时间间t0不不被被固固定定相相吸吸附附或或溶溶解解的的组组分分流流经经色色谱谱柱柱所所需需的的时间。时间。从进样开始到柱后出现峰最大值所需的时间。从进样开始到柱后出现峰最大值所需的时间。气相色谱气相色谱惰性气体（空气、甲烷等）流出色谱柱所需的时间。惰性气体（空气、甲烷等）流出色谱柱所需的时间。t0第17页，本讲稿共57页三、色谱图及常用术语(2)保保留留时时间间tR 组组分分流流经经色色谱谱柱柱时时所所需需时时间间。进进样样开开始始到到柱柱后后出出现现最最大大值值时时所所需需的的时时间间
12、。操操作作条条件件不不变变时时，一一种种组组分分有有一一个个tR定值，定性参数。定值，定性参数。第18页，本讲稿共57页二、原子吸收光谱仪（3）调整保留时间）调整保留时间tR扣除了死时间扣除了死时间的保留时间。的保留时间。tR=tR-t0又称校正又称校正保留时间，实际保保留时间，实际保留时间。留时间。tR体现的是组分在体现的是组分在柱中被吸附或溶解柱中被吸附或溶解的时间的时间。tR第19页，本讲稿共57页三、色谱图及常用术语保留值用体积表示：保留值用体积表示：（4）死死体体积积V0不不被被固固定定相相滞滞留留的的组组分分流流经经色色谱谱柱柱所所消消耗耗的的流流动动相相体体积积称称死死体体积积，
13、色色谱谱柱柱中中载载气气所所占占的的体体积积。V0=t 0F0 柱柱后后出口处流动相的体积流速出口处流动相的体积流速mL/min（5）保保留留体体积积VR 组组分分从从进进样样开开始始到到色色谱谱柱柱后后出出现现最最大大值值时时所所需需流流动动相相体体积积，组组分分通通过过色色谱谱柱柱时时所所需需流流动动相相体体积积 VR=t RF 0（6）调调整整保保留留体体积积VR扣扣除除了了死死体体积积的的保保留留体体积积，真真实实的的将将待待测组分从固定相中携带出柱子所需的流动相体积。测组分从固定相中携带出柱子所需的流动相体积。VR=tRF 0 V0、t0与被测组分无关，因而与被测组分无关，因而VR.
14、tR更合理地反映更合理地反映了物质在柱中的保留情况。了物质在柱中的保留情况。第20页，本讲稿共57页（7）相相对对保保留留值值 2，1或或i,s 在在相相同同操操作作条条件件下下，组组分分2或或组组分分i对另一参比组分对另一参比组分1或或s调整保留值之比调整保留值之比三、色谱图及常用术语第21页，本讲稿共57页三、分配平衡 在在一一定定温温度度下下，组组分分在在流流动动相相和和固固定定相相之之间间所所达达到到的的平平衡衡叫叫分分配配平平衡衡，组组分分在在两两相相中中的的分分配配行行为为常常采采用用分分配配系系数数K K和分配比和分配比kk来表示。来表示。1、分配系数 K(浓度分配系数)=cs/
15、cm组分在固定相中的浓度组分在流动相中的浓度K=K随T变化，与固定相、流动相的体积无关三、色谱图及常用术语第22页，本讲稿共57页三、色谱图及常用术语2、分配比、分配比k(又叫容量因子，容量比又叫容量因子，容量比)k=组分在固定相中的质量 组分在流动相中的质量 =ms/mm=svs/mvm=K vs/vm k随随T、固定相、流动相的体积变化而变化、固定相、流动相的体积变化而变化k越大，组分在固定相中质量越多，越大，组分在固定相中质量越多，tR越长越长K、k越大，组分在固定相中越大，组分在固定相中tR就越长就越长经推导得经推导得k与与tR之间的关系：之间的关系：第23页，本讲稿共57页三、色谱图
16、及常用术语k=tR/t0=(tR-t0)/t0 k=VR/V0=(VR-V0)/V0总结（1）色谱峰的位置即保留值）色谱峰的位置即保留值进行定性分析。进行定性分析。（2）色谱峰的）色谱峰的h.A 进行定量分析。进行定量分析。（3）色谱峰的位置及峰的宽度）色谱峰的位置及峰的宽度可评价色谱可评价色谱 柱效的高度。柱效的高度。第24页，本讲稿共57页四、色谱法的基本理论一、塔板理论一、塔板理论 在50年代，色谱技术发展的初期，Martin等人把色谱分离过程比作分馏过程，并把分馏中的半经验理论塔板理论用于色谱分析法。第25页，本讲稿共57页四、色谱法的基本理论 1、塔板理论把色谱柱比作一个分馏塔，假设
17、柱内有n个塔板，每个塔板高度称为理论塔板高度，用H表示，在每个塔板内，试样各组分在两相中分配并达到平衡，最后，挥发度大的组分和挥发度小的组分彼此分离，挥发度大的最先从塔顶（即柱后）逸出。尽管这个理论并不完全符合色谱柱的分离过程，色谱分离和一般的分馏塔分离有着重大的差别，但是因为这个比喻形象简明，因此几十年来一直沿用。第26页，本讲稿共57页四、色谱法的基本理论 对一个色谱柱来说，若色谱柱长度固定对一个色谱柱来说，若色谱柱长度固定L，每一个塔，每一个塔板高度板高度H越小，塔板数目越多，分离的效果越好，柱效越越小，塔板数目越多，分离的效果越好，柱效越高。塔板数用高。塔板数用n 表示。表示。n=L/
18、H 或或 H=L/n H越小，越小，n越多，分离效果越好，用越多，分离效果越好，用 H,n 评价柱效。评价柱效。由塔板理论导出由塔板理论导出n与与Wb，W 1/2 的关系。的关系。*n=5.54(tR/W 1/2)2 =16(tR/Wb)2 第27页，本讲稿共57页四、色谱法的基本理论 有有时时n 大大，分分离离效效果果也也不不好好，因因用用tR 内内含含tm，后来改用有效塔板数。后来改用有效塔板数。n 有效有效=5.54(tR/W 1/2)2 =16(tR/Wb)2 H有效有效n 有效有效n理=5.54(tR/W 1/2)2 =16(tR/Wb)2 H理n 理塔板理论的成功之处，提出了计算理
19、论塔板高度、塔板数的公式及评价柱效的方法，具有开创性，但有一定局限性。第28页，本讲稿共57页四、色谱法的基本理论、速率理论、速率理论范第姆特方程范第姆特方程 1956年，荷兰学者范第姆特年，荷兰学者范第姆特VanDeomter）提出一）提出一个描述色谱柱分离过程中复杂因素使色谱峰变宽而致个描述色谱柱分离过程中复杂因素使色谱峰变宽而致柱效降低（即：使柱效降低（即：使 H 增大）影响的方程。此方程经增大）影响的方程。此方程经简化后写为简化后写为:u为流动相线速度cm.s-1，线速度=柱长/死时间该式称为速率方程（范氏方程）。下面我们将对公式中的各项进行讨论 第29页，本讲稿共57页四、色谱法的基
20、本理论（1）提提出出了了影影响响的的三三项项因因素素：涡涡流流扩扩散散项项，分分子子扩扩散散项项，传质阻力项。传质阻力项。（2）在流动相流速一定时，）在流动相流速一定时，当、最小时，才小，当、最小时，才小，n 才最高，柱效高。才最高，柱效高。当、最大时，才大，当、最大时，才大，n 才最小，柱效低。才最小，柱效低。第30页，本讲稿共57页四、色谱法的基本理论（1）涡流扩散项）涡流扩散项A 在填充色谱柱中，当组分随流动相向柱出口迁移时，流动相由在填充色谱柱中，当组分随流动相向柱出口迁移时，流动相由于受到固定相颗粒障碍，不断改变流动方向，使组分分子在前进于受到固定相颗粒障碍，不断改变流动方向，使组分
21、分子在前进中形成紊乱的类似中形成紊乱的类似“涡流涡流”的流动，故称涡流扩散。的流动，故称涡流扩散。第31页，本讲稿共57页 A2dp A与填充物的平均直径与填充物的平均直径dp的大小和的大小和填充不规则因子填充不规则因子有关。有关。减小：固定相颗粒应适当细小、均减小：固定相颗粒应适当细小、均匀填充要均匀。匀填充要均匀。四、色谱法的基本理论第32页，本讲稿共57页四、色谱法的基本理论（2）分子扩散项）分子扩散项B/u（纵向扩散项）（纵向扩散项）待待测测组组分分是是以以“塞塞子子”的的形形式式被被流流动动相相带带入入色色谱谱柱柱的的，在在“塞塞子子”前前后后存存在在浓浓度度梯梯度度，由由浓浓稀稀方
22、方向扩散，产生了纵向扩散，使色谱峰展宽。向扩散，产生了纵向扩散，使色谱峰展宽。第33页，本讲稿共57页四、色谱法的基本理论 B B2D2D 是填充柱内流动相扩散路径弯曲的因素，也称是填充柱内流动相扩散路径弯曲的因素，也称弯曲因子弯曲因子，它反映了固定相的几何形状对分子扩散的阻碍情况。它反映了固定相的几何形状对分子扩散的阻碍情况。D为组分在流动相中扩散系数（为组分在流动相中扩散系数（c m2s-1）。）。D Dg g气相扩散系数比液相扩散系数气相扩散系数比液相扩散系数D Dm m大的多（约大的多（约10105 5倍）倍）减小纵向扩散项减小纵向扩散项u u 采取措施：采取措施：适当提高流动相流速适
23、当提高流动相流速u u，减小保留时间，减小保留时间 用相对分子质量较大的气体作流动相。用相对分子质量较大的气体作流动相。适当降低柱温适当降低柱温c.c.第34页，本讲稿共57页四、色谱法的基本理论（3）传质阻力项）传质阻力项Cu传质阻力系数包括两部分，传质阻力系数包括两部分，m+Cs两项组成两项组成Cm 流动相传质阻力系数流动相传质阻力系数 组分从流动相移动到固定相表面组分从流动相移动到固定相表面进行两相之间的质量交换时所受到的阻力，质量交换慢，进行两相之间的质量交换时所受到的阻力，质量交换慢，引起色谱峰变宽。引起色谱峰变宽。m第35页，本讲稿共57页四、色谱法的基本理论C Cs s 固固定定
24、项项传传质质阻阻力力系系数数 即即组组分分从从两两相相界界面面移移动动到到固固定定相相内内部部，达达分分配配平平衡衡后后，又又返返回回到到两两相相界界面面，在在这这过过程程中中所所受到的阻力为固定相传质阻力。受到的阻力为固定相传质阻力。2固定液膜厚度组分在固定相中扩散系数第36页，本讲稿共57页四、色谱法的基本理论二、色谱基本分离方程二、色谱基本分离方程、分离度、分离度色谱柱的总分离效能指标色谱柱的总分离效能指标 定义：相邻两个峰的保留值之差与两峰宽度平均值之比定义：相邻两个峰的保留值之差与两峰宽度平均值之比v式中：分子反映了溶质在两相中分配行为对分离的影响，是色谱分离的热力学因素。v分母反映
25、了动态过程溶质区带的扩宽对分离的影响，是 色谱分离的动力学因素。v从中得到：两溶质保留时间相差越大，色谱峰越窄，分离越好。第37页，本讲稿共57页四、色谱法的基本理论两个峰tR 相差越大，W越窄，值越大，说明柱分离较能高。.5 两个组分能完全分开。.0 两组分能分开，满足分析要求。.0 两峰有部分重叠。第38页，本讲稿共57页四、色谱法的基本理论第39页，本讲稿共57页四、色谱法的基本理论2、柱效能、柱效能指色谱柱在分离过程中的分离效能，常用n，来描述，n 越大，越小，柱效越高，对单个组分而言。对多个组分的分离来说，无法用n,H 来描述，n 大，小，几个峰未必分的开。3 3、选择性、选择性描述
26、两个相邻组分在同一固定相中热力学分布行为的重要参数，用r2,1相对保留值表示.r2,1越大，保留时间相差大，分离越好（但未考虑峰宽因素）第40页，本讲稿共57页四、色谱法的基本理论4、分离度与柱效能，选择性的关系、分离度与柱效能，选择性的关系 第41页，本讲稿共57页四、色谱法的基本理论a:柱效项柱效项：塔板数决定，：塔板数决定，n 越大，柱效越高分离的越好。越大，柱效越高分离的越好。b b：选择性项：选择性项：r r2,12,1越大，越大，t tR R（）（）与与ttR R（1 1）相差越大，分的越好。相差越大，分的越好。C C：柱容量项：柱容量项：kk大一些对分析有利大一些对分析有利;太大
27、，太大，t tR R长，柱容量合适长，柱容量合适,分的分的才好。才好。一般一般k k 第42页，本讲稿共57页四、色谱法的基本理论以n有效表示，则有：第43页，本讲稿共57页四、色谱法的定性定量分析一、定性分析一、定性分析 定性分析的任务是确定色谱图上各个峰代表什么定性分析的任务是确定色谱图上各个峰代表什么物质。物质。1.利用保留值与已知物对照定性利用保留值与已知物对照定性（1）利用保留时间定性）利用保留时间定性 在相同色谱条件下，将标准物和样品分别进样，在相同色谱条件下，将标准物和样品分别进样，两者保留值相同，可能为同一物质。两者保留值相同，可能为同一物质。此方法要求操作条件稳定、一致，必须
28、严格控制操作此方法要求操作条件稳定、一致，必须严格控制操作条件，尤其是流速。条件，尤其是流速。第44页，本讲稿共57页四、色谱法的定性定量分析第45页，本讲稿共57页（2）利用峰高增量定性）利用峰高增量定性 若样品复杂，流出峰距离太近，或操作条件不易控制，若样品复杂，流出峰距离太近，或操作条件不易控制，可将已知物加到样品中，混合进样，若被测组分峰高增可将已知物加到样品中，混合进样，若被测组分峰高增加了，则可能含该已知物。加了，则可能含该已知物。（3）利用双色谱系统定性）利用双色谱系统定性 通过改变色谱条件来改变分离选择性，使不同物质显示不同保留通过改变色谱条件来改变分离选择性，使不同物质显示不
29、同保留值。例：选用极性差别较大的两种不同固定液来制备色谱柱，不值。例：选用极性差别较大的两种不同固定液来制备色谱柱，不同物质具有不同保留值同物质具有不同保留值四、色谱法的定性定量分析第46页，本讲稿共57页2.与其它分析仪器联用的定性方法四、色谱法的定性定量分析小型化的台式色质谱联用仪（GC-MS；LC-MS）色谱-红外光谱仪联用仪；组分的结构鉴定SampleSampleSampleSample 589058901.0 1.0 DEG/MDEG/MININHEWLETTHEWLETTPACKARDPACKARDHEWLEHEWLETTTTPACKAPACKARDRD5972A5972AMass
30、 Mass SelectivSelective e DetectDetectororD DC CB BA A A A A AB B B BC C C CD D D DGasChromatograph(GC)GasChromatograph(GC)MassSpectrometerMassSpectrometer(MS)(MS)SeparatioSeparation nIdentificatIdentificationionB B B BA A A AC C C CD D D D第47页，本讲稿共57页二、定量分析二、定量分析 气相色谱定量分析是根据检测器对溶质产生的响应信号气相色谱定量分析是根据
31、检测器对溶质产生的响应信号与溶质的量成正比的原理，通过色谱图上的峰面积或峰高，计与溶质的量成正比的原理，通过色谱图上的峰面积或峰高，计算样品中溶质的含量。算样品中溶质的含量。m mi i=f=fi i A Ai i m mi i=f=fi ih hi i m mi i被测组分被测组分i i的质量，的质量，f fi i比例系数比例系数A Ai i、h hi i被测组分的峰面积及峰高被测组分的峰面积及峰高A=1.065hW12 A=1.065h（W0.15W0.85）/2四、色谱法的定性定量分析第48页，本讲稿共57页四、色谱法的定性定量分析1、定量校正因子 色谱定量分析是基于峰面积与组分的量成正
32、比关系。色谱定量分析是基于峰面积与组分的量成正比关系。但由于同一检测器对不同物质具有不同的响应值，即不同物质但由于同一检测器对不同物质具有不同的响应值，即不同物质检测器的灵敏度不同，相同的峰面积并不意味着有相等的量。检测器的灵敏度不同，相同的峰面积并不意味着有相等的量。定量校正因子：单位峰面积对应组分的质量。定量校正因子：单位峰面积对应组分的质量。fi=mi/Ai fi绝对校正因子绝对校正因子(1)绝对校正因子 绝对校正因子受操作条件影响较大，要严格控制色谱条件，不易准确测定，没有统一标准，无法直接引用，定量分析中采用相对较正因子。第49页，本讲稿共57页四、色谱法的定性定量分析（2）相对校正
33、因子）相对校正因子 用一个标准，把所有组分的用一个标准，把所有组分的A较正到标准物的较正到标准物的A上，在同一标准上进行上，在同一标准上进行比较计算，热导检测器常用苯作标准。比较计算，热导检测器常用苯作标准。相对定量校正因子相对定量校正因子fi定义：样品中各组分的定量校正因子与标准物的定量校定义：样品中各组分的定量校正因子与标准物的定量校正因子之比。正因子之比。fi(m)表示相对质量校正因子表示相对质量校正因子第50页，本讲稿共57页四、色谱法的定性定量分析也可用相对摩尔校正因子也可用相对摩尔校正因子fi(M)凡文献查得的校正因子都是指相对校正因子，凡文献查得的校正因子都是指相对校正因子，可用
34、可用f fM M,f,fm m分别表示摩尔校正因子和质量分别表示摩尔校正因子和质量校正因子校正因子第51页，本讲稿共57页四、色谱法的定性定量分析2、定量方法、定量方法（1）归一化法）归一化法 试样各组分都出峰，可用归一化法定量。试样各组分都出峰，可用归一化法定量。把所有出峰组分的含量之和当作把所有出峰组分的含量之和当作100%的定量分析方法称为归一化法。的定量分析方法称为归一化法。若样品中有几个组分，每个组分的量分解为若样品中有几个组分，每个组分的量分解为m1 m2mn 各组分各组分含量总和为含量总和为m，则组分的质量为，则组分的质量为mi,质量分数质量分数Wi为为 第52页，本讲稿共57页
35、四、色谱法的定性定量分析优优点点：简简便便、准准确确、不不需需标标准准物物，不不必必准准确确称称量量和和准准确确进进样，操作条件稍有变化对结果影响较少。样，操作条件稍有变化对结果影响较少。缺点：所有组分都出峰，并测所有组分的缺点：所有组分都出峰，并测所有组分的A A和和f fi i第53页，本讲稿共57页四、色谱法的定性定量分析（2）内标法）内标法准称样品准称样品m（含（含mi被测组分）被测组分）+准称纯物质作内标物准称纯物质作内标物ms混合物进样第54页，本讲稿共57页四、色谱法的定性定量分析ssiisiAfAfmm=AfssiisiAfmm=第55页，本讲稿共57页四、色谱法的定性定量分析
36、（3）外标法）外标法标准曲线法标准曲线法 当样品中各组分不能完全流出，又没有合适内标时，可采用当样品中各组分不能完全流出，又没有合适内标时，可采用此法。此法。将待测组分的纯物质配制不同浓度的标准系列，在相同操将待测组分的纯物质配制不同浓度的标准系列，在相同操作条件下，定量进样，测各个峰的作条件下，定量进样，测各个峰的A或或h，绘制，绘制AC曲线曲线或或h C曲线。曲线。第56页，本讲稿共57页四、色谱法的定性定量分析 在完全相同条件下，测待测样在完全相同条件下，测待测样品，根据品，根据A待或待或h待，从曲线上待，从曲线上查出待测组分含量。查出待测组分含量。优点：操作简单，计算方便，不优点：操作简单，计算方便，不用用fi。缺点：要求准确进样，操作缺点：要求准确进样，操作条件稳定。条件稳定。A(h)A待C待C第57页，本讲稿共57页