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1、投送一级级学科： 生物物学二级学科科： 细细胞生物物学原件复制件中国博士士后科学学基金资助金申申请表申请人姓姓名 丁乃乃峥 编号 27 设站单位位 北京京大学 流动站名名称(一级学学科) 化化学 进站日期期 20004年年7月 通讯地址址 北京京大学化化学学院院 邮政编码码10008711 电话 0100-62275112999 20044年8月月20日填填表申 请须知1、申请请者必须须认真阅阅读现时时执行的的中国国博士后后科学基基金资助助条例，并并按该条条例有关关规定进进行申请请。2、申请请者打字字填写（如如不具备备打字条条件时，请请用钢笔笔或圆珠珠笔正楷楷书写，不不要用铅铅笔填写写）本表表
2、1至6页，并并由二位位推荐人人在7和8页分别别填写推推荐意见见，报所所在设站站单位（含含经批准准招收博博士后的的非设站站单位，下下同）。经经设站单单位在99页填写写审核意意见后再再用B55复印纸纸进行复复制。3、每位位申请者者需向中中国博士士后科学学基金会会交纳评评审资料料费1000元人人民币，未未交纳的的，不予予受理。4、各设设站单位位于每年年三月十十日至三三月三十十一日或或九月十十日至九九月三十十日期间间将本单单位所有有申请者者的申申请表（一一式六份份，必含含原件）和和评审资资料费集集中汇至至中国博博士后科科学基金金会。5、本表表封面上上的“原件”和“复印件件”系指本本份材料料是原件件或复
3、印印件，请请在相应应的方框框内打“”；“编号”系指申申请进站站时，全全国博士士后管委委会办公公室或有有关省、市市对博士士后研究究人员的的统一编编号；“投送学学科”系指申申请资助助项目所所属的学学科领域域。若是是交叉学学科或跨跨学科，则则应填写写所涉及及的主要要学科名名称。学学科须按按国务院院学位委委员会公公布的标标准名称称填写。6、填表表必须实实事求是是，认真真翔实，不不得虚报报或留空空。有的的栏目如如无内容容可填，请请写上“无”、“未”等字；若填写写不下，可可另附纸纸。3姓名丁乃峥性别女出生年月月19733年100月民族汉博士后日日常经费费来源国家资助助 g单位位自筹 企业提提供（企企业博士
4、士后）来自重大大科研项项目经费费（项目目博士后后）学位情况学位获得年月月攻读学位位单位学位论文文题目导师学士19966年7月月东北农业业大学应用聚合合酶链反反应技术术检测沙沙门氏菌菌李景鹏硕士19999年7月月东北农业业大学犬干扰扰素基因因的克隆隆与鉴定定师守信博士20022年7月月东北农业业大学PPARR基因在在大鼠和和小鼠早早期妊娠娠子宫中中的表达达与调节节杨增明主要研究究工作经经历起止年月月单位研究工作作职务19955年7月月-119966年6月月东北农业业大学生命科学学学院分子生物物学学生19966年7月月-119999年6月月东北农业业大学生命科学学学院微生物学学与免疫疫学学生199
5、99年7月月-220022年6月月东北农业业大学生命科学学学院动物组织织、胚胎胎与解剖剖学学生20022年7月月至今北京大学学生命科学学学院细胞分子子生物学学博士后主要研究究成果：已发表表在国内内外核心心学术刊刊物上的的论文题题目、全全部作者者署名顺顺序、发发表时间间、刊登登论文的的刊物名名称以及及被SCCI、EI、ISRR、SSCCI收录录、引用用的情况况；请务务必具体体说明以以上成果果的科学学价值、应应用前景景、经济济效益、社社会效益益以及本本人在这这些成果果中的主主要贡献献及所获获得奖励励的名称称、等级级和获奖奖人员的的排名顺顺序。申请人曾曾作为主主要参加加者参加加了黑龙龙江省科科委攻关
6、关项目和和多项国国家自然然基金项项目的研研究。克克隆和鸡鸡贫血病病毒哈尔尔滨分离离株基因因组全长长，研究究结果在在微生物物学报及及中国兽兽医学报报等刊物物上发表表。在博博士期间间主要从从事研究究哺乳动动物母体体与胚胎胎相互作作用的分分子机理理，证明明了PPPARd基基因的表表达与大大鼠和小小鼠胚胎胎着床及及蜕膜化化过程紧紧密相关关。研究结结果在 Biool RReprrod.，Moll Reeprood DDev., RReprroduuctiion，及及Zyggotee.等刊刊物上发发表论文文多篇，其其中SCCI索引引的杂志志9篇；并于220044年获教教育部科科技进步步二等奖奖。发表文章章
7、：1. Dingg NZZ, HHe MM, Huu JSS, Hee CQQ, Sii R, Hee SHH, Chhen JG.Clooninngannd CCharractteriizattionn off thhe MMousse PP55GGenee Prromooterr. Thhe JJourrnall Off Biioloogiccal Cheemisstryy (ssubmmittted)2. Qiann Feeng, Huuan Yu, Yiingyyingg Liiu, Cheengqqianng HHe, Jinngsoong Hu, Huuachhun Sanng,N
8、Neizzhenng DDingg, MMinggxiaao DDingg, YYin-Wann Weendyy Fuungcc, LLok-Tinng LLaucc,Allberrt CCheuung-Hoii Yuuc, Jiaanguuo CChenn. 220044. GGenoome commparrisoon oof aa noovell fooot-andd-moouthh diiseaase virruswwithh ottherr FMMDV strrainns. BBRRC. 3233:2554-2263.3. Dingg NZZ, TTengg CBB, MMa HH,
9、NNi HH, MMa XXH, Xu LB, Yaang ZM.Perroxiisomme pprollifeerattor-acttivaatedd reecepptorr deeltaa exxpreessiion andd reegullatiion in mouuse uteeruss duurinng eembrryo impplanntattionn annd ddeciiduaalizzatiion.Moll Reeprood DDev. 20003 Novv;666(3):2118-224.4. Dingg NZZ, MMa XXH, Diaao HHL, Xu LB, Ya
10、ang ZM.Diffferrenttiall exxpreessiion of perroxiisomme pprollifeerattor-acttivaatedd reecepptorr deeltaa att immplaantaatioon ssitees aand in decciduual cellls of ratt utteruus.RReprroduuctiion. 20003 Junn;1225(66):8817-25. 5. Dingg NZZ, HHe CCQ, Yanng ZZM.Quaantiificcatiion of bassigiin mmRNAA inn
11、moousee ooocyttes andd prreimmplaantaatioon eembrryoss byy coompeetittivee RTT-PCCR.ZZygoote. 20002 Augg;100(3):2339-443.6. Xiaoo LJJ, CChanng HH, DDingg NZZ, NNi HH, KKadoomattsu K, Yanng ZZM.BBasiiginn exxpreessiion andd hoormoonall reegullatiion in mouuse uteeruss duurinng tthe perri-iimpllanttat
12、iion perriodd.Mool RReprrod Devv. 220022 Seep;663(11):447-554.7. Ni HH, DDingg NZZ, HHarpper MJ, Yaang ZM.Exppresssioon oof lleukkemiia iinhiibittoryy faactoor rreceeptoor aand gp1130 in mouuse uteeruss duurinng eearlly ppreggnanncy.Moll Reeprood DDev. 20002 Octt;633(2):1443-550. 8. Xiaoo LJJ, DDiao
13、o HLL, MMa XXH, Dinng NNZ, Kaddomaatsuu K, Muurammatssu TT, YYangg ZMM.Baasiggin exppresssioon aand horrmonnal reggulaatioon iin tthe ratt utteruus dduriing thee peeri-impplanntattionn peeriood.RReprroduuctiion. 20002 Augg;1224(22):2219-25. 9. Ni HH, SSun T, Dinng NNZ, Ma XH, Yaang ZM.Diffferrenttia
14、ll exxpreessiion of miccrossomaal pprosstagglanndinn e synnthaase at impplanntattionn siitess annd iin ddeciiduaal ccellls oof mmousse uuterrus.Biool RReprrod. 20002 Jull;677(1):3551-88.10. Ni HH, DDingg NZZ, YYangg ZMM.Exxpreessiion of leuukemmia inhhibiitorry ffacttor reccepttor andd gpp1300 inn m
15、oousee utteruus dduriing earrly preegnaancyy.Biiol Repprodd. 220011,65(ssuppplemmentt):1184.11. Xiaoo LJJ, CChanng HH,Diing NZ, Kaadommatssu KK, YYangg ZMM. BBasiiginn exxpreessiion andd hoormoonall reegullatiion in mouuse uteeruss duurinng tthe perri-iimpllanttatiion perriodd.Biiol Repprodd. 220011
16、,65(ssuppplemmentt):1184-185512. 何成强,丁乃峥峥,李景景鹏,李李云龙 鸡贫贫血病毒毒衣壳蛋蛋白克隆隆、测序序和比较较 病毒毒学报 20003，119 (2) ：1779-118213. 何成强,丁乃峥峥,李景景鹏,李李云龙 鸡贫血血病毒VVP2基基因了克克隆、测测序和比比较 中中国兽医医杂志 20002，338 (11) ：88-11114. 丁乃峥，何何成强, ,李李景鹏,李云龙龙 鸡鸡贫血病病毒vpp3基因因克隆和和序列分分析中国兽兽医学报报20003，223（22）：1130-135515. 何成强,丁乃峥峥,李景景鹏,李李云龙 蛋白质质翻译后后修饰和和
17、自身免免疫病 上海免免疫学杂杂志 220033，233 (11)： 66-6916. 何成强,丁乃峥峥,李景景鹏,李李云龙 鸡贫贫血病毒毒哈尔滨滨分离株株全基因因克隆和和序列分分析 微生生物学报报20002，442（44）：4436-441117. 丁乃峥，滕滕春波，杨杨增明 IGFF系统与与哺乳动动物生殖殖 生殖殖医学杂杂志 220022，111（6）：3777-388118. 魏鹏，丁丁乃峥，杨杨增明 从基因因敲除看看生殖激激素的作作用 生生殖医学学杂志 20002，110（55）：3316-320019. 滕春波,丁乃峥峥,杨增增明黄体退退化的分分子机制制及早期期黄体钝钝化的某某些原因因
18、探讨 中国国畜牧杂杂志20002，338（44）：555-55720. 肖丽娟,丁乃峥峥,马兴兴红,刁刁红录,秦鹏春春,杨增增明Baasiggin基基因在大大鼠子宫宫及胚胎胎中的表表达与调调节 Devveloopmeentaal aand Reeprooducctivve BBiollogyy20001年SS1期 21. 倪华,丁丁乃峥,马兴红红,徐立立滨,秦秦鹏春,杨增明明 前列列腺素EE合成酶酶在小鼠鼠子宫及及胚胎中中的表达达与调节节 DDeveeloppmenntall annd RReprroduuctiive Bioologgy20001年年S1期期 22. 张桂红,丁乃峥峥,杨林林
19、,师守守信,刘刘宝全 犬干扰素素基因的的克隆与与序列分分析 黑龙龙江畜牧牧兽医220000年066期 23. 李景鹏,李成梅梅,虞塞塞明,何何成强,丁乃峥峥,吴丹丹 应用用聚合酶酶链反应应技术检检测沙门门氏菌中国兽兽医学报报19998年006期 24. 李景鹏,李成梅梅,丁乃乃峥,吴吴丹,周周静,石石绍业应用聚聚合酶链链反应快快速检测测沙门氏氏菌东北农农业大学学学报119977年011期25. 李景鹏,肖仁良良,李成成梅,丁丁乃峥,王宏 沙门氏氏菌简便便的核酸酸检测技技术 黑龙江江畜牧兽兽医19997年年02期期获奖情况况获国家科科技进步步二等奖奖（第五五完成人人）获奖项目目名称：胚胎着着床分
20、子子机理的的研究主要完成成人：杨杨增明 倪 华华 岳占占碰 肖肖丽娟 丁乃峥峥 霍立立军 李李世杰 马兴红红 刁红红录 徐徐立滨 王洪斌斌申请资助助项目情况名称中文一个新基基因p555与小小鼠胚胎胎着床和和蜕膜化化的关系系英文The Funnctiionssof a Noovell Geene p55 in MMousse EEmbrryo Impplanntattionn and Decciduualiizattionn.研究类别别基础研究究 g应用用研究 技术开开发项目来源源国家重点点项目省省市或部部门重大大项目自自选项目目 8633高技术术研究项项目 国国家自然然科学基基金项目目其他项目
21、目 g研究经费费来源及数额无项目的具具体内容容、预期期目标及及国内外外在这方方面研究究的现状状：具体内容容:在进行小小鼠不同同发育阶阶段的mmRNAA差异表表达研究究过程中中，我们们发现了了一种未未报道过过功能的的新基因因p555（分子子量为555K）。我我们采用用原位杂杂交检测测发现，p55基因在妊娠第7.5天小鼠子宫中的蜕膜区高度表达，并发现该基因是转录因子YY1调节的下游基因。由于YY1 基因敲除小鼠在围着床期死亡，p55基因很可能在小鼠胚胎着床和蜕膜化期间发挥着重要作用。本项目将利用原位杂交、免疫组化、反转录PCR、RNA干涉等技术，详细研究p55在小鼠早期妊娠子宫及胚胎中的表达规律，
22、通过假孕、延迟着床及人工蜕膜化等实验动物模型确定p55在胚胎着床及蜕膜化中的作用，并采用卵巢切除模型研究激素对p55的表达调节。由于p55基因的功能到目前为止尚未见报道，本项目将有助于揭示p55基因的功能及其与胚胎着床的关系，为治疗人类不孕症、特异的避孕药物提供、提高家畜的繁殖率及开发胚胎着床等重要的理论依据。预期目标标：通过小鼠鼠假孕、延延迟着床床、人工工蜕膜化化及卵巢巢切除等等动物模模型，采采用原位位杂交、免免疫组化化、RTTPCCR、NNorttherrn BBlott等实验验方法，详详细研究究p555基因在在小鼠子子宫及胚胚胎中的的表达；明确pp55基基因在胚胚胎着床床及蜕膜膜化中的的
23、作用。并并利用RRNAii技术进进一步研研究p555基因因表达对对胚胎着着床的影影响。由由于p555基因因功能到到目前为为止尚未未见报道道，本研研究将有有助于揭揭示p555基因因功能和和进一步步了解胚胚胎着床床的分子子机制，为为治疗人人类不孕孕症、提提高家畜畜的繁殖殖率及开开发胚胎胎着床特特异的避避孕药物物等提供供重要的的理论依依据。国内外在在这方面面研究的的现状：胚胎着床床是一个个涉及到到子宫与与胚胎间间紧密对对话的复复杂发育育过程。成成功的胚胚胎着床床需要类类固醇激激素、生生长因子子、细胞胞因子、转转录因子子和脂类类介质等等分子的的协同作作用 (Parria et al, 20001)。利
24、用用基因芯芯片比较较小鼠胚胚胎着床床位点和和非着床床位点的的差异性性表达时时发现，在在小鼠子子宫的胚胚胎着床床点处有有36个个基因上上调，227个基基因下调调。比较较人子宫宫内膜在在胚胎着着床窗口口开放期期与增殖殖晚期的的基因表表达变化化，共分分析了1126886个基基因，在在胚胎着着床窗口口开放期期有1556个基基因的表表达上调调，而3377个个基因的的表达下下调(KKao et al, 20002)。然而而，有意意思的是是，在上上述有关关胚胎着着床的基基因芯片片研究中中，以前前已证实实与胚胎胎着床紧紧密相关关的许多多基因，如如白血病病抑制因因子LIIF(SStewwartt ett all
25、, 119922)、环环氧合酶酶-2（CCOX-2）、肝肝素结合合样表皮皮生长因因子（HHB-EEGF）及及肝素硫硫酸盐蛋蛋白多糖糖（peerleecann）(Paariaa ett all, 220022)、bassigiin和前前列腺素素E合成成酶（mmPGEES）基基因(XXiaoo ett all, 220022; NNi eet aal, 20002)，均均未在这这些研究究中得到到证实。看看来采用用传统的的方法研研究与胚胚胎着床床相关的的基因是是非常有有必要的的。我们在进进行小鼠鼠不同发发育阶段段的mRRNA差差异表达达研究时时，发现现了一个个功能未未知基因因，暂时时命名为为p555
26、基因。通通过Noorthhernn Bllot发发现p555基因因在多种种小鼠组组织中广广泛表达达。我们们已经通通过实验验确定了了小鼠pp55基基因启动动子，在在其最小小的上游游启动子子中存在在Yinn Yaang 1 (YY11)的调调节元件件。通过过凝胶阻阻滞实验验（EMMSA）分分析表明明， HHeLaa和NIIH3TT3细胞胞核抽提提物以及及纯化的的GSTTYYY1蛋白白均能与与合成的的YY11寡核苷苷酸探针针形成DDNA蛋白质质复合物物。并且且，YYY1区的的突变导导致p555基因因启动子子活性明明显下降降（Diing et al，待待发表）。YY1是一个具有多种功能的转录调节因子。
27、YY1 基因敲除小鼠胚胎能够着床并发生蜕膜化，但迅速退化，在围着床期发生死亡； YY1/纯合子囊胚内细胞团和滋养外胚层缺陷，将其移入假孕YY1/小鼠子宫，胚胎不能发育到原肠胚，在围着床期也发生死亡。这表明YY1对于小鼠早期胚胎发育是至关重要的，推测在着床期YY1可能调控着一些小鼠胚胎细胞迅速增殖和分化所必需的基因(Donohoe et al，1999)。既然p55基因是YY1调节的基因，暗示它可能在小鼠胚胎着床期间发挥重要的作用。进一步分分析启动动子序列列还发现现，在最最小的pp55基基因启动动子上游游还存在在一个过过氧化物物酶体增增殖因子子活化受受体 （peroxisome prolifer
28、ator-activated receptors, PPAR）应答元件。PPAR是配体依赖的转录因子的核受体超家族成员，由三个成员，PPAR、和组成。PPARd被敲除的小鼠胚胎绝大部分不能形成正常的胎盘(Barak et al, 2002)。我们以前的研究结果显示，PPARd在大鼠和小鼠胚胎着床及蜕膜化中具有重要作用(Ding et al，2003)。PPARd可能通过调节着床相关的基因表达而在哺乳动物的着床过程中起重要作用。如COX-2基因启动子中有一个PPAR应答元件，因此PPAR可能直接调节COX-2的表达。COX-2缺陷小鼠不孕，具有排卵、受精、着床及蜕膜化方面的异常(Carolyn
29、et al , 2002)。我们推测p55基因可能象COX-2一样受到PPAR的调节，在小鼠胚胎着床、蜕膜化及胎盘形成中可能具有非常重要的作用。此外，我我们分析析发现，在在最小的的p555基因启启动子上上游存在在一个孕孕酮受体体结合位位点。子子宫系膜膜侧蜕膜膜的维持持和生长长完全依依赖于孕孕酮的作作用，而而孕酮的的作用由由细胞核核内的孕孕酮受体体所介导导，从而而调节靶靶基因的的转录(Oglle eet aal, 19998)。在在小鼠子子宫蜕膜膜化过程程中P555基因因是否受受孕酮的的调节还还待证明明。从PP55基基因启动动子上的的这些调调节元件件我们推推测其可可能在胚胚胎着床床和蜕膜膜化过程
30、程中起作作用。为为了证明明这个假假设，我我们通过过Norrtheern Bloot检测测发现，在在小鼠卵卵巢、子子宫、睾睾丸等组组织中pp55基基因均有有表达。采采用原位位杂交技技术对妊妊娠第77.5天天小鼠子子宫中pp55基基因的表表达进行行了检测测，发现现在胎盘盘发生中中心及蜕蜕膜区pp55基基因高度度表达。这这些实验验结果初初步支持持了我们们的假设设。目前，对对p555基因功功能及其其表达调调控的研研究尚未未见任何何报道。我我们将采采用研究究哺乳动动物着床床相关基基因的常常用方法法，结合合最近发发展起来来的RNNA干涉涉(RNNA iinteerfeerennce, RNNAi)技术，对
31、对p555基因在在胚胎着着床及蜕蜕膜化过过程中表表达调节节进行系系统研究究。这些些工作将将有助于于揭示该该基因的的功能，并并且对研研究与治治疗人类类很多原原因不明明的不孕孕症、提提高家畜畜的繁殖殖率等提提供重要要的理论论依据。参考文献献：Baraak YY ett all，20002. Prroc Nattl AAcadd Scci UUSA.99: 3003-3308.Caroolynn M et al, 20002. Biioloogy of Reeprooducctioon.666: 15331-115399.Dingg NZZ ett all, 220033. Mool RReprro
32、d Devv.666:2118-224.Dingg NZZ ett all, 220033. Reeprooducctioon.1125:8177-255.Dingg NZZ ett all, 220044. JJBiool. Chhem. (ssubmmittted)DonoohoeeME eet aal, 19999. Moll. CCelll. BBioll. 119, 72337-72444.Kao LC et al, 20002. Enndoccrinnoloogy 1433:21119-21338.Ni HH ett all, 220022. Biool RReprrod. 677
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34、义、学术术价值、应应用前景景、解决决什么前前人尚未未解决的的问题并并务必说说明本人人的创新新之处及及主要特特色：项目的科科学意义义、学术术价值、应应用前景景：在所有的的哺乳动动物中，大大量的胚胚胎在出出生前死死亡。在在人类，据据估计在在试图受受孕的健健康妇女女中高达达三分之之二的妊妊娠中途途夭折。在在完成体体外受精精及胚胎胎移植后后胚胎的的损失量量更大，这这些胚胎胎损失绝绝大多数数都发生生在胚胎胎着床前前或胚胎胎着床期期间。尽尽管在进进行人体体外受精精时受精精率很高高，但妊妊娠率一一直只有有20-30%。猪为为多胎动动物，在在1144天的妊妊娠期内内出生前前死亡率率很高，一一般为220%-46
35、%，而且且绝大部部分胚胎胎死亡发发生在220天以以前。羊在着着床前后后也有大大量的胚胚胎损失失发生。目目前，对对p555基因功功能及其其表达调调控的研研究尚未未见任何何报道。本项目将有助于揭示p55基因的功能及其与胚胎着床的关系，为治疗人类不孕症、提高家畜的繁殖率及开发胚胎着床特异的避孕药物等提供重要的理论依据。解决什么么前人尚尚未解决决的问题题：1 明确p555基因因在胚胎胎着床及及蜕膜化化中的作作用。2 明确p555基因因是否受受到激素素调节。3 由于p555基因因功能到到目前为为止尚未未见报道道，本研研究将有有助于揭揭示p555基因因功能和和进一步步了解胚胚胎着床床的分子子机制，创新之处
36、处及主要要特色：（1）至至今为止止，对pp55基基因功能能的研究究未见任任何报道道。p555基因因受YYY1的调调节也是是我们首首次发现现，确定定小鼠pp55基基因与胚胚胎着床床及蜕膜膜化的关关系，将将有助于于了解pp55基基因的功功能，揭揭示胚胎胎着床的的调控机机制。（2）用用慢病毒毒作为载载体将ssiRNNA导入入受精卵卵是一项项新发展展的技术术，将其其应用于于胚胎着着床研究究将有望望揭示pp55基基因功能能及其在在胚胎着着床中的的作用。（3）我我们从基基因表达达调控方方向着手手，研究究p555基因在在胚胎着着床中的的作用，为为今后研研究胚胎胎着床相相关基因因的作用用提供了了新思路路。拟采
37、用的的研究方方法、实实验方案案、技术术路线：研究胚胚胎着床床过程中中p555基因的的表达变变化:利利用已克克隆的pp55基基因cDDNA和和自己研研制的单单克隆抗抗体研究究p555基因mmRNAA及蛋白白在正常常小鼠早早期妊娠娠子宫及及胚胎中中的表达达分布；通过小小鼠假孕孕、延迟迟着床和和延迟着着床激活活等动物物模型，研研究p555基因因在小鼠鼠子宫及及胚胎中中的表达达调节；利用RRNAii技术研研究p555基因因表达对对胚胎着着床的影影响。研究蜕蜕膜化过过程中pp55基基因的表表达变化化：采用用原位杂杂交、免免疫组化化、RTT-PCCR、NNorttherrn BBlott等实验验方法，检检
38、测正常常妊娠和和人工蜕蜕膜化条条件下pp55基基因mRRNA及及蛋白在在小鼠子子宫中的的表达。研究类类固醇激激素对pp55基基因的调调节：通通过凝胶胶阻滞实实验验证证p555基因启启动子区区是否存存在孕酮酮受体结结合位点点；利用用卵巢切切除、延延迟着床床和延迟迟着床激激活等动动物模型型，研究究孕酮及及雌激素素对p555基因因mRNNA及蛋蛋白表达达的影响响; 研究工作作的总体体计划及及目前进进展情况况：研究工作作的总体体计划：20044.7-20004.122：利用用已克隆隆的p555基因因cDNNA和自自己研制制的单克克隆抗体体研究胚胚胎着床床和蜕膜膜化过程程中p555基因因的表达达变化。2
39、0055.1-20005.122：研究究类固醇醇激素对对p555基因的的调节, 并利利用RNNA干涉涉技术研研究p555基因因表达对对胚胎着着床的影影响。20066.1-20006.7：完完成每项项实验内内容并进进行总结结，进一一步揭示示p555基因功功能。目前进展展情况：我们用差差异显示示方法克克隆了pp55的的cDNNA，并并进行了了原核表表达和真真核表达达，纯化化了p555蛋白白，制备备了单克克隆抗体体和兔抗抗p555抗体。NNorttherrn BBlott结果显显示该基基因在小小鼠所有有检测的的组织中中均有表表达。通通过对pp55基基因5侧翼区区研究，确确定了最最小的启启动子区区。采
40、用用EMSSA确定定了几个个调控元元件，其其中一个个是YYY1结合合区，并并经过突突变证实实p555基因是是YY11的下游游基因。对对p555基因启启动子方方面的研研究结果果已经整整理后，提提交到JJ. Biiol. Chhem.杂志。我我们还对对p555在胚胎胎着床过过程中作作用进行行初步研研究，采采用原位位杂交技技术对妊妊娠第11-8天天小鼠子子宫中pp55基基因的表表达进行行了检测测，发现现在胚胎胎及蜕膜膜区p555基因因高度表表达现有条件件（参加加该项目目工作的的科研人人员简况况、仪器器设备、实实验材料料、图书书资料等等）与尚尚缺的条条件：现有条件件：申请人近近年来一一直从事事哺乳动动
41、物胚胎胎着床和和基因表表达调控控方面的的工作，具具有较好好的研究究工作基基础和成成熟的实实验技术术。曾经经对PPPARdd、PGESS、Baasiggin、LIFR及gp130在小鼠子宫中的表达与调节进行过研究。参加本项目的科研人员有一名博士后和4个博士研究生，是一个很好的科研队伍。实验中所用的小鼠假孕、延迟着床、人工蜕膜化及卵巢切除等动物模型，以及原位杂交、免疫组化、RT-PCR、Northern Blot等实验方法均已掌握，而且有这方面的论文发表。用慢病毒作为载体将siRNA导入受精卵是一项新发展起来的方便有效的技术，而且我们实验室具有从事病毒载体操作方面的长期经验。本实验室在p55基因研
42、究方面，经过前期工作已经取得了一些良好的结果：申请人所所在的细细胞生物物学专业业为重点点学科，并并受“2111工程”资助，具具有电子子显微镜镜、激光光共焦显显微镜、多多功能显显微镜、CO2培养箱、紫外分光光度计、-80C低温冰箱、超净工作台、低温冷冻切片机、杂交炉、超速离心机、凝胶成像系统、PCR仪、高速离心机、流式细胞仪等必需设备。我们学科的动物室能保证提供实验所需的小鼠。北京大学图书馆可供查询详尽的文献资料，并可方便快捷在网上查询，可确保本项研究的顺利完成。尚缺的条条件需要购买买的是细细胞生物物学和分分子生物物学研究究所需试试剂、药药品和其其他消耗耗品。并并缺乏用用于支付付在国外外SCII
43、期刊上上发表22-3篇篇文章的的版面费费和彩色色图版费费。申请资助助等级与与金额一等，人人民币330,0000元元使用资助助金的计计划及用用途：实验试剂剂费：118,0000元元用于购买买mRNAA纯化及及扩增试试剂盒、抗体及及免疫组组化相关关试剂、原原位杂交交用cRRNA探探针标记记盒及分分子生物物学试剂剂、加样样头、离离心管、塑塑料及玻玻璃耗材材、实验验动物购购买及饲饲养科研业务务费：112,0000元元用于资料料查询、复复印、计计算机使使用及网网络费、发发表文章章版面费费和彩色色图版费费和会议议交流。总计： 330,0000元元推荐人意意见（请请对项目目的意义义、具体体内容、创创新点、主
44、主要特色色和取得得预期成成果的可可能性，申申请人的的学术水水平及研研究能力力等进行行评价）：小鼠P555基因因是在在在进行不不同发育育阶段的的mRNNA差异异表达研研究过程程中发现现的功能能未知的的新基因因。该基基因在中中枢神经经系统中中的表达达量从幼幼鼠至老老年期呈呈上升调调节。丁丁乃峥博博士在研研究该基基因表达达的调控控机理是是发现其其上游启启动子区区域由YYY1结结合位点点。联想想到YYY1 基基因敲除除小鼠在在围着床床期死亡亡，因而而推测pp55基基因很可可能在小小鼠胚胎胎着床和和蜕膜化化期间发发挥着重重要作用用。于是是便开展展了p555基因因与小鼠鼠胚胎着着床和蜕蜕膜化的的关系的的研
45、究工工作。在在前一阶阶段的研研究中查查明了pp55基基因在妊妊娠第77.5天天小鼠胚胚胎和蜕蜕膜区高高度表达达，并发发现该基基因是转转录因子子YY11调节的的下游基基因，与与预期的的完全一一致。该该项目的的进行将将有助于于揭示pp55基基因的功功能及其其与胚胎胎着床的的关系，揭示胚胎着床的调控机制。为治疗人类不孕症，以及提高家畜的繁殖率等提供重要的理论依据。丁乃峥博士从事的是一个全新的项目，研究自己克隆的p55基因的生物学功能，所采用的研究方法、手段先进，技术路线思路清晰，有说服力。丁乃峥博士工作努力，熟悉该研究领域的国内外进展情况，并且掌握了多种实验技术，已经在SCI刊物上发表多篇高质量的研
46、究论文，具有较高的学术水平和研究能力。如给予资助能够取得预期的成果。推荐人姓姓名：陈陈建国 职称称：教授授专业：细胞生生物学推荐人单单位：北北京大学学生命科科学学院院签字或盖盖章：20044年9月3日注：填写写推荐人人姓名时时，请正正楷书写写推荐人意意见（请请对项目目的意义义、具体体内容、创创新点、主主要特色色和取得得预期成成果的可可能性，申申请人的的学术水水平及研研究能力力等进行行评价）：丁乃峥博博士毕业业于东北北农业大大学，自自20002年77月进入入本院细细胞生物物学及遗遗传学系系从事博博士后研研究工作作，具体体研究项项目为“小鼠PP55基基因的功功能分析析”。P555基因因为他们们自己克克隆的发发育相关关的新基基因。经经过丁乃乃峥博士士两年的的努力，初初步搞清清了该基基因的组组织表达达谱，表表达调控控序列及及调控因因子等问问题，并并且发现现该基因因在子宫宫内的表表达胚胎胎着床有有重要关关系，在在附睾头头部表达达与精子子的成熟熟相关。有有关YYY1与该该基因表表达调控控方面的的研究论论文已经经投往