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1、培养基制备技术培养基制备技术南华大学预防医学与放射卫生实验教学中心南华大学预防医学与放射卫生实验教学中心n教学对象：高等医学院校卫生检验专业学生教学对象：高等医学院校卫生检验专业学生n实验课时：实验课时：4 4学时学时n课程类型：专业实验课课程类型：专业实验课n课程要求：必修课程要求：必修n每组人数：每组人数：2 2人人实验目的和要求实验目的和要求n掌握常用培养基制备的基本过程。n熟悉常用培养基的种类及用途。n熟悉高压蒸汽灭菌的使用。实验内容实验内容n常用培养基（液体培养基、半固体培养基及固体培养基）制备。n高压蒸汽灭菌器使用。一、培养基的种类一、培养基的种类（按用途分类按用途分类）n基础培养
2、基基础培养基n营养培养基营养培养基n鉴别培养基鉴别培养基n选择培养基选择培养基n增菌培养基增菌培养基n厌氧培养基厌氧培养基培养基的种类培养基的种类（按物理性状分类按物理性状分类）n液体培养基：n不含凝固剂，用于增菌和接种纯种细菌。n半固体培养基：n含0.30.5琼脂。n用于观察细菌动力、保存菌种。n固体培养基：平板、斜面。n含22.5琼脂。n平板：用于细菌的分离培养。n斜面：用于纯培养、保存菌种。二、培养基制备的一般程序二、培养基制备的一般程序调配调配溶化溶化矫正矫正pH过滤澄清过滤澄清分装分装灭菌灭菌检定检定保存保存二、培养基制备的一般程序二、培养基制备的一般程序n调配：按照培养基配方正确称
3、取各种原料放于搪瓷杯中。另用量筒量取所需蒸馏水量。n溶化：在搪瓷杯中加入所需水量，玻棒搅匀，加热溶解。n加琼脂溶化：加热过程中要不断搅拌，可适当补水。n调pH值：用1N NaOH或1N HCl调至培养基规定的pH值，用pH试纸对照。二、培养基制备的一般程序二、培养基制备的一般程序n分装加塞：注意不要污染棉塞。塞好棉塞的试管和锥形瓶应盖上厚纸用绳捆札，准备灭菌。n灭菌：不同培养基采取不同灭菌方法。n检定：培养基灭菌后必须在37下恒温培养24h，确定无菌生长，方可使用。n保存：一般至4保存备用。分装量的要求分装量的要求n液体培养基n分装量约为试管高度的1/41/3，加塞后灭菌直立；n半固体培养基n
4、分装量为试管高度的1/41/3，加塞后灭菌趁热直立凝固；n斜面培养基n分装量约为试管高度的1/41/3，加塞后灭菌，趁热摆成斜面；灭菌后斜面摆放灭菌后斜面摆放n斜面长度约为试管长度的2/3，且下端有1cm柱高；分装量的要求分装量的要求n琼脂平板：n先将灭菌琼脂融化后冷却至50左右，以无菌操作倾注于灭菌平皿内，水平旋转平皿，待琼脂凝固后将平皿翻转，置4保存备用。分装包扎分装包扎培养基灭菌培养基灭菌n耐热培养基（如普通营养琼脂平板）：n常用高压蒸汽灭菌，条件为103.43kPa，15-20min；含糖培养基以68.95kPa，10-15min；n不耐热培养基：如糖类、明胶和牛乳等。n常用间歇蒸汽灭
5、菌；n富含蛋白质的培养基：n用血清凝固器灭菌；n对含高营养不耐热培养基：如血清,细胞培养液等。n用滤过除菌。三、高压蒸汽灭菌器的使用三、高压蒸汽灭菌器的使用 n灭菌器内加入适量的水，将包扎好的拟灭菌物品灭菌器内加入适量的水，将包扎好的拟灭菌物品放入其中。放入其中。n盖好盖子，接通电源，进行加热。盖好盖子，接通电源，进行加热。n排除高压锅内的冷空气：可将排气阀打开，待排排除高压锅内的冷空气：可将排气阀打开，待排出大气后关闭排气阀；或关闭排气阀，待压力上出大气后关闭排气阀；或关闭排气阀，待压力上升到升到0.5kg/cm0.5kg/cm2 2时再打开排气阀，待压力回复到时再打开排气阀，待压力回复到0
6、 0时再关闭排气阀。时再关闭排气阀。三、高压蒸汽灭菌器的使用三、高压蒸汽灭菌器的使用 n当压力达当压力达1.05kg/cm1.05kg/cm2 2时，此时灭菌器内的温度为时，此时灭菌器内的温度为121121，维持，维持30min30min。对热不稳定的培养基如含有。对热不稳定的培养基如含有葡萄糖、氨基酸等物时，应适当降低压力，延长葡萄糖、氨基酸等物时，应适当降低压力，延长时间。时间。n灭菌时间一到，切断电源，待压力降至零时，才灭菌时间一到，切断电源，待压力降至零时，才能打开排气阀，然后打开灭菌器盖，取出物品。能打开排气阀，然后打开灭菌器盖，取出物品。高压蒸汽灭菌器使用注意事项高压蒸汽灭菌器使用
7、注意事项n无菌包不宜过大，不宜过紧，各包裹间要有间隙，无菌包不宜过大，不宜过紧，各包裹间要有间隙，使蒸汽能对流易渗透到包裹中央。消毒前，打开使蒸汽能对流易渗透到包裹中央。消毒前，打开贮槽或盒的通气孔，有利于蒸汽流通。而且排气贮槽或盒的通气孔，有利于蒸汽流通。而且排气时使蒸汽能迅速排出，以保持物品干燥。消毒灭时使蒸汽能迅速排出，以保持物品干燥。消毒灭菌完毕，关闭贮槽或盒的通气孔，以保持物品的菌完毕，关闭贮槽或盒的通气孔，以保持物品的无菌状态。无菌状态。高压蒸汽灭菌器使用注意事项高压蒸汽灭菌器使用注意事项n布类物品应放在金属类物品上，否则蒸汽遇冷布类物品应放在金属类物品上，否则蒸汽遇冷凝聚成水珠，使包布受潮。阻碍蒸汽进入包裹凝聚成水珠，使包布受潮。阻碍蒸汽进入包裹中央，严重影响灭菌效果。中央，严重影响灭菌效果。n定期检查灭菌效果。经高压蒸汽灭菌的无菌包、定期检查灭菌效果。经高压蒸汽灭菌的无菌包、无菌容器有效期以无菌容器有效期以1 1周为宜。周为宜。