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1、 ICS 67.050 CCS X 04 15 内蒙古自治区地方标准 DB15/T 27832022 食用向日葵抗列当生理小种 温室鉴定技术规程 Standard protocol for the identification of Orobanche resistance in confection sunflower using inoculation method in greenhouses 2022-08-30 发布 2022-09-30 实施 内蒙古自治区市场监督管理局 发 布 DB15/T 27832022 I 前言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标
2、准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件中的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由内蒙古自治区农业标准化技术委员会（SAM/TC 20）归口。本文件起草单位：三瑞农业科技股份有限公司提出、内蒙古农业大学、巴彦淖尔市产品质量计量检测中心（巴彦淖尔市天赋河套质量标准检验研究中心）、内蒙古自治区质量和标准化研究院。本文件主要起草人：JIUHUAN FENG(冯九焕)、魏志恒、刘劼、张键、李新、卞伟勋、贾向春、黄勇、张文兵、李昊佼、常敏、安燕珂、张之为、涂伟伟、靳晓梅。DB15/T 27832022 1 食用向日葵抗列当生理小种温室鉴定技术规程 1 范围 件规定了
3、食用向日葵抗列当生理小种温室鉴定技术的术语和定义、设备和材料、抗性鉴定流程及步骤等。本文件适用于温室盆栽条件下食用向日葵品种对不同生理小种列当的抗性鉴定。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB 4407.2 经济作物种子 第 2 部分：油料类 GB/T 15063 复合肥料 NY/T 496 肥料合理使用准则 通则 SN/T 1144 列当属检疫鉴定方法 3 术语和定义 SN/T 1144界定的以及下列术语和定义适用于本文件。
4、向日葵列当 Orobanche cumana Wallr.专性寄生于向日葵根部，茎不分枝、花序疏松状、花冠呈蓝紫色的一种全寄生列当。本文件中的列当特指向日葵列当。生理小种 physiological race 病原物种内的一个分类单元，一种病原物的某个生理小种仅与该病原物寄主植物的某个或少数品种发生相互作用。列当生理小种的鉴别寄主（鉴别系）differential lines 含有不同列当抗性基因，能够鉴别列当不同生理小种的向日葵品种或品系。灭活 inactivation DB15/T 27832022 2 用高温高压方法杀灭试验所用的土壤中或器具（如塑料营养钵，筛网）上的列当种子、植物种子、
5、害虫（及虫卵）、病菌、病毒等生物的处理方法。4 设备和材料 本试验宜选用以下设备：a)灭菌锅(热水罐)：设计温度 147；容积 1.37 m3，最高允许工作压力：0.3 MPa；b)加厚塑料营养钵：规格27.5 cm25 cm（耐高温高压灭菌）；c)不锈钢微量药勺：勺头直径约 0.6 cm；d)筛网：孔径 0.18 mm0.25 mm；e)微量离心管：2 mL。5 抗性鉴定流程及步骤 向日葵抗列当生理小种鉴定流程 向日葵抗列当生理小种鉴定流程见图1。图1 向日葵抗列当生理小种鉴定流程 列当采集 选择全国向日葵列当发生严重地区的地块，采集植株生长健壮、完全成熟的列当，并单株收获装入牛皮纸袋中，每
6、一地块采集30个单株。采集的列当要充分晾晒干燥。列当清选 将列当蒴果压碎后过筛网（直径0.18 mm0.25 mm）去除杂质，过筛后的列当种子装入2 mL微量离心管中。筛选不同列当样品时应更换一次性手套和筛网。用过的筛网灭活后可重复使用。培养土准备 培养土由大田耕层土细沙基质珍珠岩=1110.2体积比混合而成。装入加厚塑料营养钵（27.5 cm25 cm）至五分之四高度。大田耕层土与塑料营养钵均需高温高压灭活（灭活温度：121；时间：20 min），避免列当种子污染；或使用未被列当污染的大田耕层土。列当采集列当筛选生生理理小小种种验验证证纯化列当接种供试向日葵种植列当统计分析向向日日葵葵抗抗列
7、列当当生生理理小小种种判判定定培养土准备培养土准备列当接种鉴别系种植生理小种判定已知生理小种列当收获无抗性鉴别系已已知知生生理理小小种种列列当当扩扩繁繁接种列列当当纯纯化化向向日日葵葵抗抗性性鉴鉴定定DB15/T 27832022 3 列当接种 在加厚塑料营养钵的土中心位置挖约5 cm深的凹坑，用不锈钢微量药勺（勺头直径约0.6 cm）取列当种子一勺（约10 mg）放入凹坑中，用四周土与列当种子充分搅拌混匀；或把列当种子倒入自封袋，加适量土颠倒混匀，倒入凹坑中，用四周土铺平。浇透水。向日葵种植与管理 向日葵种植与管理采用以下方法：a)供试品种：样品纯度符合 GB 4407.2 规定；b)播种与
8、定苗：将向日葵种子播种于塑料营养钵中心位置，深度约 2 cm 处，每盆 2 粒，待长至四叶期保留 1 株；c)温室管理：常规条件下管理，最适温度 25（最低 15，最高 30）、相对湿度约 40%、光照强度约 3000 Lux，光照时间 14 h/d 左右；d)水肥管理：浇水应一次性浇透，不宜太频繁。应避免土壤湿度处于持续水饱和状态下，否则将会导致列当种子无法萌发或列当芽浸水坏死。现蕾期前后施加适当水溶肥粉剂（总养分大于等于 60%，N:P:K=1:1:1，每盆施 3 g）,确保向日葵正常生长。肥料使用应符合 GB/T 15063 和 NY/T 496 规定。列当纯化 5.7.1 标准鉴别系品
9、种选择选用附录 A 中抗不同生理小种列当的标准鉴别系，品种纯度应符合 GB 4407.2 规定。5.7.2 列当纯化方法见附录 B。列当寄生情况调查 5.8.1 将已纯化的不同生理小种（D、E、F、F）列当各接种最少 20 盆，接种方法见 5.4。5.8.2 将待测向日葵品种按不同生理小种列当各种植 10 盆。同时各生理小种分别种植高感品系（如B117、SH361）10 盆作为对照，以验证列当种子活力。依照 5.5 进行待测向日葵品种的种植与管理。5.8.3 通常现蕾后期列当即陆续出土（约出苗后 45 d）。于向日葵开花后期（约 70 d80 d），统计每盆出土列当数目并记录，然后剪除列当茎秆
10、进行无害化处理。5.8.4 向日葵种植完成后，培养土、加厚塑料营养钵均应进行灭活处理。向日葵品种抗性评价 向日葵品种对不同列当生理小种的抗性按照表1判定，表述如下：a)感生理小种 D：在 D、E、F、F小种上均寄生；b)抗生理小种 D：在 D 小种上未长，在 E、F、F小种上均寄生；c)抗生理小种 E：在 D、E 小种上均未长，在 F、F小种上均寄生；d)抗生理小种 F：在 D、E、F 小种上均未长，在 F小种上寄生。DB15/T 27832022 4 表1 向日葵品种对不同列当生理小种的抗性判定标准 待测向日葵品种 纯化的向日葵列当 抗性结果 D小种 E小种 F小种 F+小种 品种1 长 长
11、 长 长 感D 品种2 未长 长 长 长 抗D 品种3 未长 未长 长 长 抗E 品种4 未长 未长 未长 长 抗F 注1：实际试验中，针对接种某一列当生理小种（如，E小种）的品种，若有弱小的“零星”列当发生，且AD0.3，则判定为抗性品种；若0.3AD1.0，需重新鉴定。注2：寄生程度(AD)=寄生的列当数量/向日葵植株总数 DB15/T 27832022 5 A A 附录A （规范性）国际通用抗列当标准鉴别系 表A.1规定了国际通用抗列当标准鉴别系。表A.1 国际通用抗列当标准鉴别系 生理小种 标准鉴别系 抗性基因 参考文献 高感 B117、AD-66 1 A 71NCAI01、Krugl
12、ik A-41 Or1 1 B Jdanov8281 Or2 1 C 1532、1589、Record Or3 1 D S-1358、1506 Or4 1 E P-1380、NR5、1507 Or5 1，2 F P96、LC1093 Or5,or6,or7 3，4 DB15/T 27832022 6 B B 附录B （规范性）列当生理小种纯化 B.1 列当生理小种鉴定 B.1.1 培养土准备见5.3。B.1.2 将采集的单株列当种子依次接种于表B.1中向日葵标准鉴别系，目前国际上通用的列当生理小种的向日葵标准鉴别系及其抗性反应见附录A。每个鉴别系接种5盆，列当接种见5.4，种植与管理见5.5。
13、B.1.3 根据列当寄生情况，判定该单株列当的级别，将每组最高级别鉴别系上寄生的列当混合收获，相应低级别列当即可于未成熟前剪除，减少传播。具体如下：a)生理小种 D：1532 寄生，S1358、1507 和 P96 均未长，收获 1532 寄生的列当；b)生理小种 E：1532 和 S1358 寄生，1507 和 P96 均未长，收获 S1358 寄生的列当；c)生理小种 F：1532、S1358 和 1507 寄生，P96 未长，收获 1507 寄生列当；d)生理小种 F+:1532、S1358、1507、P96 均寄生，收获 P96 上寄生的列当。B.1.4 试验完成后，培养土、加厚塑料营
14、养钵均应进行灭活处理。表B.1 向日葵标准鉴别系对不同生理小种列当的反应 列当生理小种 向日葵鉴别寄主（系）1532（抗C）S1358（抗D）1507（抗E）P96（抗F）D小种 长 未长 未长 未长 E小种 长 长 未长 未长 F小种 长 长 长 未长 F+小种 长 长 长 长 B.2 纯化列当扩繁 鉴于上述鉴别系上收获的列当种子量较少，将收获的已知级别的列当种子依次接种到无抗性鉴别系上（如B117）进行扩繁，每个生理小种接种10盆。B.3 扩繁列当验证 将扩繁的列当种子利用鉴别系重新进行二次接种鉴定（重复B.1）核验其准确性。成熟后收获的列当即为纯化的特定生理小种列当，4 下可保存510年
15、，用于向日葵品种抗列当鉴定。DB15/T 27832022 7 参考文献 1 Vranceanu,AV，Tudor VA，Stoenescu FM，Pirvu N.1980.Virulence groups of Orobanche cumana Wallr.differential hosts and resistance sources and genes in sunflower.In Proceedings of the 9th International Sunflower Conference,Torremolinos,Spain,pp.7482.2 Sukno S,Melero-
16、Vara JM，Fernndez-Martnez JM.1999.Inheritance of resistance to Orobanche cernua Loefl.in six sunflower lines.Crop Science,39:674-678.3 Akhtouch B,Mu oz-Ruz J,Melero-Vara JM,Fernandez-Martinez JM;Dominguez J.2002.Inheritance of resistance to race F of broomrape(Orobanche cumana Wallr.)in sunflower lines of different origin.Plant Breeding,121:266268.4 P rez-Vich B,Akhtouch B,Knapp S,Leon A,Velasco L,Fernandez-Martinez JM,Berry ST.2004.Quantitative trait loci for broomrape(Orobanche cumana Wallr.)resistance in sunflower.Theor Appl Genet,109:92102.