生物化学实训教案fylq.docx

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1、 天津开开发区职职业技术术学院20077 20008 学年度度 第 一 学期教 案案（实践课课） 工 学院 生生物技术术 系（部部）生物物专业066年级课程 生生物化学学实验班级 生生物066122姓名 张 冲 实践课教教案首页页课题名称称生物化学学实验课程类型型实验课课时（或或单元）4课时实验课类类型生物化学学实践教材材（名称称、作者者、出版版社）生物化学学实验讲讲义（自自编）教学场所所生物实验验室接受实践践教学单单位性质质与特色色教学目的的学习柱色色谱的原原理和操操作方法法重点、难难点分析析实验原理理与操作作技法实践分组组要求34人人一组，以以个人为为单位撰撰写实验验报告组长条件件与职责责

2、管理本组组的实验验器材和和设备，组组织组员员进行实实验实践课所所需仪器器设备与与条件色谱柱（225毫升升滴定管管），分分液漏斗斗（2550毫升升），烧烧杯，滴管，中中性氧化化铝和碱碱性氧化化铝（11002000目，干干燥失重重不大于于1%）每每组各115克，洗洗脱剂：95%乙醇和和蒸馏水水，样品品：亚甲甲基蓝，荧荧光黄，11毫升每每组，滤滤纸，玻玻璃棉或或脱脂棉棉实践报告告（总结结）要求求 实验题目目 日期 实验目的的 基本原理理 实验步骤骤 实验结果果与分析析 思考题小 结学生对基基本理论论的理解解一般，操操作能力力有待进进一步提提高。说明：由由于该教教案涵盖盖较广，因因此不是是各栏必必须填

3、写写教 案 纸实验一 柱色色谱法分分离物质质原理一、 目的要求求学习柱色色谱的原原理和操操作方法法二、 基本原理理柱色谱法法可看作作是一种种面液色普普法，它它是通过过色谱柱柱进行分分离的。色色谱柱是是一根长长约200厘米，内内径为22厘米，下下端具有有一个活活塞或具具有一橡橡皮管带带有弹簧簧夹的玻玻璃管，管管内装填填活化的的固体吸吸附剂（固固定相）如如氧化铝铝、硅胶胶等。在在柱子顶顶部装一一分液漏漏斗，液液体样品品从柱顶顶加入，被被吸附在在柱的上上端，然然后从分分液漏斗斗加入洗洗脱溶剂剂（流动动相）如如丙酮、石石油醚等等，由于于吸附剂剂对各组组分的吸吸附能力力不同，被被吸附较较弱的组组分随溶溶

4、剂以较较快的速速率向下下移动，各各组分随随溶剂以以不同的的时间从从色谱柱柱下端流流出，用用容器收收集。如如各组分分为不同同颜色的的物质，则则可以观观察到谱谱带。如如为无色色物质，则则不可直直接观察察到谱带带，有时时有的物物质在紫紫外光照照射下发发出荧光光，有时时也可以以分段收收集一定定体积的的流出液液，再用用薄层色色谱或其其他方法法检定。三、 实验内容容柱色谱分分离有色色物质四、 仪器和试试剂色谱柱（225毫升升滴定管管），分液漏斗斗（2550毫升升），烧杯，滴管，中性氧化化铝和碱碱性氧化化铝（11002000目，干干燥失重重不大于于1%）每每组各115克，洗洗脱剂：95%乙醇和和蒸馏水水，样

5、品：亚亚甲基蓝蓝，荧光光黄，11毫升每每组，滤纸，玻玻璃棉或或脱脂棉棉开发区职职业技术术学院教 案 纸五、 实验步骤骤1、 装柱将已经洗洗干净并并烘干的的色谱柱柱固定在在铁架台台上，在在柱子的的底部铺铺放一点点玻璃棉棉或脱脂脂棉（不不要赛得得太紧），然然后在柱柱中装溶溶剂至一一半高，打打开柱子子下端的的活塞，让让液体向向下流（控控制流速速每分钟钟两毫升升），将将氧化铝铝分次加加入，直直到固体体离柱的的顶部约约34厘米米即可。然然后在柱柱顶加入入柱径大大小的滤滤纸或加加入5毫毫升的砂砂层。不允许柱柱子的顶顶部变干干（在柱柱顶必须须要保留留0.551.00厘米高高的溶剂剂以免柱柱子干裂裂）。如如果

6、不立立即使用用这个色色谱柱，就就关好下下端的活活塞或橡橡皮弹簧簧夹。在本实验验中在层层析柱底底端放一一点棉花花，加入入0.55厘米的的石英砂砂，关闭闭阀门加加入100毫升995%乙乙醇，加加入5克克氧化铝铝，开塞塞保持流流速为每每秒一滴滴，使氧氧化铝均均匀下沉沉（避免免出现气气泡和裂裂缝），待待氧化铝铝沉积完完成后，再再加入11厘米石石英砂。2、 上样将色谱柱柱中的溶溶剂从下下端放出出，直到到液面与与石英砂砂表面一一致时，停停止放出出。用滴滴管或玻玻璃棒引引流将样样品缓慢慢的注入入柱中。注注意不要要把氧化化铝冲浮浮起来。待待样品加加完后，放放开柱子子的活塞塞使液体体流出，直直到液面面与石英英砂

7、表面面一致时时，停止止放出，用用0.55毫升乙乙醇清洗洗壁上余余样；放放开柱子子的活塞塞使液体体流出，直直到液面面与石英英砂表面面一致时时，停止止放出，再再用0.5毫升升乙醇清清洗壁上上余样；放开柱柱子的活活塞使液液体流出出，直到到液面与与石英砂砂表面一一致时，停停止放出出。3、 洗脱分离离先用955%的乙乙醇进行行洗脱，流流速控制制在每秒秒一滴，待待接收亚亚甲基蓝蓝后，将将乙醇界界面放至至石英砂砂表面，关关闭活塞塞。在用蒸馏馏水进行行洗脱，流流速控制制在每秒秒一滴，待待接收荧荧光黄（注注意：在在更换洗洗脱液的的过程中中柱面不不能干。）开发区职职业技术术学院教 案 纸六、 实验结果果测量回收收

8、组分的的体积，并并计算组组分的稀稀释倍数数七、 思考题1、 洗脱液的的流速过过快或太太慢时，对对分离效效果有什什么影响响？2、 为什么极极性大的的组分要要用极性性大的洗洗脱剂来来洗脱？板书设计计：生物化学学实验一、 实验室规规则二、 试验报告告要求三、 考核办法法四、 考勤办法法实验一 柱色色谱法分分离物质质原理一、 目的要求求二、 基本原理理三、 实验内容容四、 仪器和试试剂五、 实验步骤骤1、 装柱2、 上样3、 洗脱分离离六、 实验结果果七、 思考题开发区职职业技术术学院实践课教教案首页页课题名称称氨基酸的的纸层析析课程类型型实验课课时（或或单元）4课时实验课类类型生物化学学实践教材材（

9、名称称、作者者、出版版社）生物化学学实验讲讲义（自自编）教学场所所生物实验验室接受实践践教学单单位性质质与特色色教学目的的学习氨基基酸的提提取和分分离方法法重点、难难点分析析实验原理理与操作作技法实践分组组要求34人人一组，以以个人为为单位撰撰写实验验报告组长条件件与职责责管理本组组的实验验器材和和设备，组组织组员员进行实实验实践课所所需仪器器设备与与条件层析用滤滤纸国产新新华1号号中速滤滤纸，层层析器，毛毛细管，剪剪刀，研研钵，漏漏斗，漏漏斗架，小小烧杯，移移液管，喷喷雾器。80%乙乙醇；氨氨基酸显显色剂（00.1%茚三酮酮丙酮溶溶液）；标准氨氨基酸混混合液（分分别将甘甘氨酸、丝丝氨酸、亮亮

10、氨酸各各1毫克克溶于55毫升880%乙乙醇中）；氨基酸酸纸层析析溶剂（正正丁醇：乙醇：水=44：1：5）实践报告告（总结结）要求求 实验题目目 日期 实验目的的 基本原理理 实验步骤骤 实验结果果与分析析 思考题小 结学生操作作的规范范性有待待提高说明：由由于该教教案涵盖盖较广，因因此不是是各栏必必须填写写教 案 纸实验二 氨基酸酸的纸层层析一、 目的要求求色谱法是是现代一一种新的的分析分分离技术术，除纸纸色谱法法外，还还发展有有气相色色谱法，液液相色谱谱法，离离子交换换色谱法法，以及及薄层色色谱法等等，已成成为现代代生物化化学研究究中的重重要工具具。纸色谱法法具有操操作简便便，分离离效率高高

11、，不需需要复杂杂设备的的特点，能能对氨基基酸、肽肽、糖类类、脂肪肪酸、维维生素等等多种物物质进行行分离鉴鉴定，是是生化研研究中的的重要手手段之一一。二、 基本原理理纸色谱法法是以滤滤纸为支支持剂的的一种层层析方法法。是根根据各种种溶质在在两种不不相混溶溶的溶剂剂中的分分配系数数不同而而将不同同物质分分离开来来，它属属于分配配色谱分分离的范范畴。由于滤纸纸是由纤纤维素组组成的，具具有亲水水性，能能吸附一一层水膜膜，这层层固定在在滤纸上上的水膜膜称为固固定相，用用做推动动（或冲冲洗）样样品的试试剂称为为流动相相。将待分离离的样品品溶于适适当的溶溶剂，点点样于滤滤纸的一一端，在在层析时时借毛细细作用

12、使使作为流流动相的的溶剂，从从滤纸一一端推向向另一端端，样品品中的各各个组分分由于分分配系数数不同，而而表现在在溶剂中中的移动动速度（RRf值）不不同，从从而在滤滤纸上集集中在不不同的部部位，用用测量RRf值的的显色定定性，洗洗脱定量量，达到到分离的的目的。Rf值=某物质质移动的的距离/溶剂移移动的距距离物质结构构，溶剂剂的酸碱碱性，滤滤纸质量量，层析析温度等等均能对对Rf值值产生影影响。本实验进进行的是是上行纸纸层析法法，除此此之外，还还有下行行纸层析析法，双双向纸层层析法，连连续纸层层析法等等，可参参阅有关关资料介介绍。三、 材料与设设备层析用滤滤纸国产新新华1号号中速滤滤纸，层层析器，毛

13、毛细管，剪剪刀，研研钵，漏漏斗，漏漏斗架，小小烧杯，移移液管，喷喷雾器。开发区职职业技术术学院教 案 纸80%乙乙醇；氨氨基酸显显色剂（00.1%茚三酮酮丙酮溶溶液）；标准氨氨基酸混混合液（分分别将甘甘氨酸、丝丝氨酸、亮亮氨酸各各1毫克克溶于55毫升880%乙乙醇中）；氨基酸酸纸层析析溶剂（正正丁醇：乙醇：水=44：1：5）四、 实验步骤骤1、 取材称取不同同的萌发发时间的的种子（或或其他植植物材料料）24克，每每组作一一种材料料，研碎碎，加入入10毫毫升800%乙醇醇，在沸沸水浴中中提取55分钟，冷冷却过滤滤，收集集滤液（可可反复过过滤三次次，收集集滤液），将将滤液在在80水浴上上浓缩至至约

14、为22毫升左左右，放放入冰箱箱中备用用。2、 滤纸准备备将层析用用滤纸裁裁成515 平方厘厘米的长长条（注注意：保保持滤纸纸洁净，汗汗手、唾唾沫切勿勿沾上），在在距滤纸纸边2厘厘米处用用铅笔轻轻划一条条线，线线上距左左右侧11厘米处处各点一一点，为为点样处处。3、 点样将层析用用滤纸用用干净纸纸夹于其其中（露露出点样样处），分分别用毛毛细管吸吸取提取取液和标标准氨基基酸溶液液，分别别点样于于点样处处，注意意使毛细细管口与与滤纸垂垂直，轻轻轻碰触触点中心心，此时时，样品品就能自自动流出出，控制制样品滴滴直径在在0.55厘米以以内（点点样量以以各种氨氨基酸含含520微微克为宜宜）。点点样过程程中必

15、须须在第一一滴样品品干后再再点第二二次。本本实验中中提取液液点样5510次次。标准准氨基酸酸点样22次。4、 展层准备洁净净、干燥燥的标本本筒（或或大口瓶瓶等），将将氨基酸酸层析溶溶剂155毫升注注入底部部，盖盖盖备用。将将已点样样的滤纸纸靠近上上沿1厘厘米处打打眼穿线线后，将将此滤纸纸条悬挂挂于已准准备好的的层析器器中，饱饱和一小小时后，迅迅速将层层析纸垂垂直浸入入溶剂中中，盖紧紧盖子，放放于恒温温处进行行层析，待待流动相相的溶剂剂已达到到滤纸上上沿1.5厘米米处，开开盖，小小心取出出滤纸，用用铅笔在在溶剂前前沿轻划划一线，后后悬挂于于凉处，使使溶剂挥挥发，滤滤纸干燥燥，准备备显色。开发区职

16、职业技术术学院教 案 纸5、 显色将0.11%茚三三酮丙酮溶溶液装在在喷雾器器中，将将滤纸条条喷湿后后，静置置挥发丙丙酮，待待丙酮挥挥发后放放在655烘箱（或或使用吹吹风机的的暖风）内内保温显显色，滤滤纸上有有氨基酸酸的地方方显现紫紫红色。五、 实验结果果根据显色色情况计计算Rff值，判判断提取取液中氨氨基酸数数量，并并与标准准氨基酸酸比较。六、 思考题试比较不不同萌发发时期种种子氨基基酸有何何不同？板书设计计：实验二 氨基酸酸的纸层层析一、 目的要求求二、 基本原理理：分配配色谱三、 材料与设设备四、 实验步骤骤1、 取材2、 滤纸准备备3、 点样4、 展层5、 显色五、 实验结果果六、 思

17、考题开发区职职业技术术学院实践课教教案首页页课题名称称斐林试剂剂比色法法测定还还原糖课程类型型实验课课时（或或单元）4课时实验课类类型生物化学学实践教材材（名称称、作者者、出版版社）生物化学学实验讲讲义（自自编）教学场所所生物实验验室接受实践践教学单单位性质质与特色色教学目的的 学习7221型分分光光度度计的使使用方法法 学习低速速离心机机的使用用方法 掌握实验验原理和和方法重点、难难点分析析721型型分光光光度计的的使用方方法实践分组组要求34人人一组，以以个人为为单位撰撰写实验验报告组长条件件与职责责管理本组组的实验验器材和和设备，组组织组员员进行实实验实践课所所需仪器器设备与与条件1.

18、斐斐林试剂剂A液：40ggCuSSO4.5HH2O溶解解于蒸馏馏水定容容至1LL。22. 斐斐林试剂剂B液：2000g酒石石酸钾钠钠（KNNaC44H4O6.5HH2O）与与1500g NNaOHH溶于蒸蒸馏水中中，并定定容至11升。AA、B两两液分别别贮存，使使用前等等体积混混合。3. 0.11葡萄萄糖标准准液：取取80下烘至至恒重的的葡萄糖糖0.110000g，加加蒸馏水水溶解，定定容至1100mml。实践报告告（总结结）要求求 实验题目目 日期 实验目的的 基本原理理 实验步骤骤 实验结果果与分析析 思考题小 结实验结果果的准确确度不够够说明：由由于该教教案涵盖盖较广，因因此不是是各栏必

19、必须填写写教 案 纸实验三 斐林试试剂比色色法测定定还原糖糖一、实验验原理植植物组织织中的可可溶性糖糖可分为为还原糖糖（主要要是葡萄萄糖和果果糖）和和非还原原糖（主主要是蔗蔗糖）两两类。还还原糖具具有醛基基和酮基基，在碱碱性溶液液中煮沸沸，能把把斐林试试剂中的的Cu22+还原原成Cuu+，使蓝蓝色的斐斐林试剂剂脱色，脱脱色的程程度与溶溶液中含含糖量成成正比。二、材材料、仪仪器设备备及试剂剂（一一）材料料：新鲜植物物样品或或烘干粉粉碎过的的植物样样品。（二）仪仪器设备备：1. 分分光光度度计；22. 分分析天平平（感量量11100000）；3. 水浴锅锅；4. 具塞塞刻度试试管；55. 刻刻度吸

20、管管；6. 容量量瓶；77. 研研钵；88. 离离心机。（三）试试剂：1. 斐斐林试剂剂A液：40ggCuSSO4.5HH2O溶解解于蒸馏馏水定容容至1LL。22. 斐斐林试剂剂B液：2000g酒石石酸钾钠钠（KNNaC44H4O6.5HH2O）与与1500g NNaOHH溶于蒸蒸馏水中中，并定定容至11升。AA、B两两液分别别贮存，使使用前等等体积混混合。3. 0.11葡萄萄糖标准准液：取取80下烘至至恒重的的葡萄糖糖0.110000g，加加蒸馏水水溶解，定定容至1100mml。4. 0.11NNaaOH。5. 甲基红红指示剂剂：0.1g甲甲基红溶溶于2550mll 600乙醇醇中。6. 1

21、0Pb（AAc）22。7.饱饱和Naa2SO4。开发区职职业技术术学院教 案 纸三、实验验步骤1. 标准曲曲线的绘绘制：各管混合合后加塞塞，于沸沸水浴中中加热115miin。取取出后自自来水冷冷却，115000rpmm离心115miin。取取上清液液，用分分光光度度计在5590nnm波长长下比色色，以蒸蒸馏水作作对照，读读取吸光光度用空空白管的的吸光度度与不同同浓度糖糖的各管管的吸光光度之差差为横坐坐标，对对应的糖糖含量为为纵坐标标，绘制制标准曲曲线。2. 样品品中还原原糖的提提取：取新鲜的的植物样样品洗净净、擦干干、剪碎碎，称取取10.00gg，放入入研钵中中研磨至至糊状，用用水洗入入250

22、0ml容容量瓶中中。当体体积近1150mml左右右时，加加233滴甲基基红指示示剂，如如呈红色色，可用用0.11moll/L 的NaaOH中中和至微微黄色。若若用风干干样品，可可称取干干粉3.00gg，先在在烧杯中中用少量量水湿润润，然后后用水洗洗入2550mll容量瓶瓶中，如如显酸性性，可用用上法中中和。将将容量瓶瓶置于880的的恒温水水浴中保保温300minn，其间间摇动数数次，以以便将还还原糖充充分提取取出来。对对含蛋白白质较多多的样品品，此间间可加110PPb(AAc)22，除去去蛋白质质，至不不再产生生白色絮絮状沉淀淀时，加加饱和NNa2SO4除去多多余的铅铅离子。330miin后取

23、取出冷却却，定容容至刻度度，摇匀匀后过滤滤待测。3. 样品测定：吸取6mml待测测液，加加4mll斐林试试剂，其其它操作作与标准准曲线相相同，在在5900nm波波长下读读取吸光光度。以以不含样样品的空空白管的的吸光度度减去样样品管的的吸光度度，在标标准曲线线上查出出糖含量量.四、结果果计算按下式式计算还还原糖的的百分含含量：还原糖糖（）查得的的糖毫克克数样样品总体体积稀稀释倍数数/(测测定时取取用体积积样品品重110000)1100开发区职职业技术术学院教 案 纸板书设计计实验三 斐林试试剂比色色法测定定还原糖糖一、 实验原理理植物组织织中的可可溶性糖糖可分为为还原糖糖（主要要是葡萄萄糖和果果

24、糖）和和非还原原糖（主主要是蔗蔗糖）两两类。还还原糖具具有醛基基和酮基基，在碱碱性溶液液中煮沸沸，能把把斐林试试剂中的的Cu22+还原原成Cuu+，使蓝蓝色的斐斐林试剂剂脱色，脱脱色的程程度与溶溶液中含含糖量成成正比。二、 材料、仪仪器设备备及试剂剂1. 分光光度度计的工工作原理理2. 分光光度度计的使使用方法法3. 台式低速速离心机机的工作作原理4. 台式低速速离心机机的使用用方法三、 实验步骤骤1. 标准曲线线的绘制制：2. 样品中还还原糖的的提取：3. 样样品测定定：四、 结果计算算按下下式计算算还原糖糖的百分分含量：还原原糖（）查查得的糖糖毫克数数样品品总体积积稀释释倍数/(测定定时取

25、用用体积样品重重10000)1000开发区职职业技术术学院实践课教教案首页页课题名称称还原糖的的测定（3，55二硝基基水杨酸酸比色法法）课程类型型实验课课时（或或单元）4课时实验课类类型生物化学学实践教材材（名称称、作者者、出版版社）生物化学学实验讲讲义（自自编）教学场所所生物实验验室接受实践践教学单单位性质质与特色色教学目的的掌握3，55二硝基基水杨酸酸比色法法测定还还原糖重点、难难点分析析实验原理理与操作作技法实践分组组要求34人人一组，以以个人为为单位撰撰写实验验报告组长条件件与职责责管理本组组的实验验器材和和设备，组组织组员员进行实实验实践课所所需仪器器设备与与条件仪器：分光光度度计、

26、恒恒温水浴浴、沸水水浴、分分析天平平、具塞塞刻度试试管、刻刻度吸管管、容量量瓶、烧烧杯、研研钵、漏漏斗试剂： 1毫克/毫升葡葡萄糖标标准液 3，5二二硝基水水杨酸溶溶液实践报告告（总结结）要求求 实验题目目 日期 实验目的的 基本原理理 实验步骤骤 实验结果果与分析析 思考题小 结对数据的的分析能能力需要要提高说明：由由于该教教案涵盖盖较广，因因此不是是各栏必必须填写写教 案 纸实验四 还原原糖的测测定（33，5二二硝基水水杨酸比比色法）一、 目的要求求掌握还原原糖测定定方法测测定的基基本原理理，学习习比色法法的基本本操作；熟悉7721分分光光度度计的使使用方法法。二、 基本原理理在植物体体内

27、含有有多种还还原糖。利利用还原原糖的还还原性，可可用3，55二硝基基水杨酸酸（黄色色）来测测定还原原糖的含含量，反反应在碱碱性条件件下进行行，将还还原糖与与3，55二硝基基水杨酸酸共热，33，5二二硝基水水杨酸被被还原成成3-氨氨基-55-硝基基水杨酸酸（棕红红色物质质），还还原糖被被氧化成成糖酸及及其它产产物。在在一定范范围内还还原糖的的量与棕棕红色物物质颜色色的深浅浅的程度度成一定定的比例例关系，在在5400nm下下测定棕棕红色的的消光值值，查对对标准曲曲线，便便可求出出样品中中还原糖糖的含量量。三、 实验内容容3，5二二硝基水水杨酸比比色法测测定苹果果中的还还原糖四、 仪器和试试剂仪器：

28、分分光光度度计、恒恒温水浴浴、沸水水浴、分分析天平平、具塞塞刻度试试管、刻刻度吸管管、容量量瓶、烧烧杯、研研钵、漏漏斗试剂：1) 1毫克/毫升葡葡萄糖标标准液，称称取在880烘至恒恒重的分分析纯葡葡萄糖1100毫毫克，溶溶解后定定容到1100毫毫升，冰冰箱中保保存待用用2) 3，5二二硝基水水杨酸溶溶液：称取1克克3，55二硝基基水杨酸酸溶于220毫升升1MnnaOHH溶液中中，加入入50毫毫升蒸馏馏水，再再加入330克酒酒石酸钾钾钠，带带溶解后后，用蒸蒸馏水稀稀释至1100毫毫升，贮贮存于棕棕色瓶中中密封保保存备用用，勿使使二氧化化碳进入入。开发区职职业技术术学院教 案 纸五、 实验步骤骤1

29、. 标准曲线线的制作作取15毫毫升具塞塞刻度试试管7支支，编号号，分别别加入葡葡萄糖标标准液00，0.1，00.3，00.5，00.7，11.0毫毫升，然然后用刻刻度吸管管向各管管加蒸馏馏水，时时最后体体积为11.0毫毫升，摇摇匀，再再加入33，5二二硝基水水杨酸溶溶液1毫毫升，摇摇匀，在在沸水浴浴中准确确加热55分钟，取取出冷却却，用蒸蒸馏水稀稀释至88毫升混混匀，用用分光光光度计在在5400nm下下测定消消光值。以以消光值值为纵坐坐标，以以葡萄糖糖含量为为横坐标标，绘制制标准曲曲线。2. 样品中还还原糖的的提取将植物样样品（苹苹果）洗洗净，吸吸干其表表面水分分，切碎碎混匀，称称取1克克放入

30、研研钵中，加加少许石石英砂，磨磨成匀浆浆，转移移到1000毫升升容量瓶瓶中，加加水达770880毫升升，摇匀匀，置于于80恒温水水浴浸提提半小时时，其间间摇动数数次，使使还原糖糖浸出。3. 还原糖含含量的测测定待上述提提取液冷冷却后，定定容到1100毫毫升（如如果蛋白白质含量量过多时时，需作作沉淀蛋蛋白质处处理，方方法见附附注）。取取5毫升升，再定定容到1100毫毫升（此此步视样样品的含含糖量而而定）过过滤，取取滤液11毫升放放入155毫升具具塞试管管中，加加入1毫毫升3，55二硝基基水杨酸酸溶液，摇摇匀后在在沸水浴浴中加热热5分钟钟，取出出冷却后后稀释至至15毫毫升。测测定ODD5400（作

31、两两个重复复取平均均值）六、 实验结果果从标准曲曲线上查查出样品品的ODD5400值对应应的还原原糖量AA（毫克克/毫升升），然然后按下下式计算算样品中中还原糖糖的含量量。还原糖的的含量=A*样样品稀释释总体积积（毫升升）/样样品重*10000开发区职职业技术术学院教 案 纸附注：沉沉淀蛋白白质的方方法方法一：在提取取液中加加入5%硫酸锌锌5毫升升，再慢慢慢加入入0.33N,BBa(OOH)22溶液55毫升，振振荡后静静置，至至上层出出现清液液后再加加一滴BBa(OOH)22溶液，直直至白色色沉淀时时，向容容量瓶加加水至刻刻度。方法二：向提取取液中滴滴入100%醋酸酸铅，至至不再产产生白色色絮

32、状沉沉淀为止止。过多多的铅离离子加饱饱和硫酸酸铵除去去。七、 思考题A) 比色测定定法的原原理及特特点是什什么？B) 比色测定定法中为为什么要要设空白白？设空空白时要要注意什什么？C) 试分析一一下样品品的稀释释倍数是是如何确确定的以以及对测测定结果果的影响响？板书设计计实验四 还原原糖的测测定（33，5二二硝基水水杨酸比比色法）一、 基本原理理二、 实验步骤骤1. 标准曲线线的制作作2. 样品中还还原糖的的提取3. 还原糖含含量的测测定三、 实验结果果还原糖的的含量=A*样样品稀释释总体积积（毫升升）/样样品重*10000四、 思考题A) 比色测定定法的原原理及特特点是什什么？B) 比色测定

33、定法中为为什么要要设空白白？设空空白时要要注意什什么？C) 试分析一一下样品品的稀释释倍数是是如何确确定的以以及对测测定结果果的影响响？开发区职职业技术术学院实践课教教案首页页课题名称称蛋白质的的两性反反应和等等电点的的测定课程类型型实验课课时（或或单元）4课时实验课类类型生物化学学实践教材材（名称称、作者者、出版版社）生物化学学实验讲讲义（自自编）教学场所所生物实验验室接受实践践教学单单位性质质与特色色教学目的的观察蛋白白质的两两性反应应，掌握握等电点点的测定定方法重点、难难点分析析 蛋白质的的结构和和两性反反应的关关系 梯度缓冲冲溶液的的配置 等电点的的测定方方法实践分组组要求34人人一组

34、，以以个人为为单位撰撰写实验验报告组长条件件与职责责管理本组组的实验验器材和和设备，组组织组员员进行实实验实践课所所需仪器器设备与与条件材料：酪酪蛋白试剂：00.5%酪蛋白白液，00.011%溴甲甲酚绿指指示剂（变变色范围围是PHH 3.855.4），00.022N HCll 溶液液，0.02NN NNaOHH溶液，11.000N醋酸酸溶液设备：110毫升升试管110支，55毫升移移液管44支，22毫升移移液管11支。实践报告告（总结结）要求求 实验题目目 日期 实验目的的 基本原理理 实验步骤骤 实验结果果与分析析 思考题小 结需要加深深对基本本理论的的理解说明：由由于该教教案涵盖盖较广，因

35、因此不是是各栏必必须填写写教 案 纸实验五 蛋白白质的两两性反应应和等电电点的测测定一、 目的要求求掌握蛋白白质等电电点的测测定方法法二、 基本原理理蛋白质由由许多氨氨基酸组组成，虽虽然绝大大多数的的氨基与与羧基结结合成肽肽键，但但是总有有一定数数量自由由的氨基基与羧基基以及酚酚基、巯巯基、胍胍基、咪咪唑基等等酸碱基基团，因因此蛋白白质和氨氨基酸一一样具有有两性电电解质的的性质。调调节溶液液的酸碱碱度达到到一定的的离子浓浓度时，蛋蛋白质分分子所带带的正电电荷和负负电荷相相等，以以兼性离离子状态态COOO-RNH33+存在,在电场场内该蛋蛋白质分分子既不不向阴极极移动，也也不向阳阳极移动动，这时

36、时溶液的的PH值值称为该该蛋白质质的等点点点（PPI）。当当溶液的的PH值值低于蛋蛋白质等等电点时时，即在在H+较多的的条件下下，蛋白白质分子子带正电电荷成为为阳离子子，当溶溶液的PPH大于于等电点点时，即即在OHH-较多的的条件下下，蛋白白质分子子带负电电荷成为为阴离子子。本实验采采用蛋白白质在不不同PHH溶液中中的混浊浊度来确确定其等等电点，在在等电点点时蛋白白质溶解解度最小小，最容容易沉淀淀析出。三、 实验内容容蛋白质等等电点的的测定四、 仪器和试试剂材料：酪蛋白试剂：0.5%酪蛋白白液，00.011%溴甲甲酚绿指指示剂（变变色范围围是PHH 3.855.4），00.022N HCll

37、溶液液，0.02NN NNaOHH溶液，11.000N醋酸酸溶液设备：10毫升升试管110支，55毫升移移液管44支，22毫升移移液管11支。开发区职职业技术术学院教 案 纸五、 实验步骤骤一) 蛋白质的的两性反反应1. 取1支试试管，加加入0.5%酪酪蛋白220滴和和0.001%溴溴甲酚绿绿指示剂剂（变色色范围是是PH 3.885.4。在在酸性溶溶液中为为黄色，而而在碱性性溶液中中为蓝色色）57滴，混混匀，观观察溶液液的颜色色。2. 用滴管缓缓慢加入入0.002N HCll溶液，随随加随摇摇，直到到有大量量沉淀产产生。说说明原因因，并观观察溶液液颜色的的变化。3. 继续滴入入0.002 NN

38、 HCCl溶液液，观察察沉淀和和溶液颜颜色的变变化，说说明原因因。4. 再滴入00.022N NNaOHH溶液，观观察溶液液沉淀和和颜色的的变化过过程，说说明原因因。二) 酪蛋白等等电点的的测定1. 取9支试试管编号号后按下下表顺序序准确加加入试剂剂，加入入每种试试剂后应应混匀。管号123456789蒸馏水（毫升）2.43.2/2.03.03.51.52.753.381.00N Hac（毫升）1.60.8/0.10 N Hac（毫升）/4.02.01.00.5/0.01 N Hac（毫升）/2.51.250.62酪蛋白-NaAc（毫升）1.01.01.01.01.01.01.01.01.0溶液

39、的最终PH3.53.84.14.44.75.05.35.65.9沉淀出现的情况2. 静置约220分钟钟，观察察每支试试管内的的混浊度度，以-，+，+，+，+符号表表示沉淀淀的多少少。根据据观察结结果，指指出哪个个PH是是酪蛋白白的等电电点。六、 实验结果果按照上表表的统计计结果进进行分析析开发区职职业技术术学院教 案 纸七、 思考题1. 何为蛋白白质的等等电点？2. 在等电点点时蛋白白质的溶溶解度为为什么最最低？板书设计计实验五 蛋白白质的两两性反应应和等电电点的测测定一. 基本原理理二. 仪器和试试剂三. 实验步骤骤1) 蛋白质的的两性反反应0.011%溴甲甲酚绿指指示剂（变变色范围围是PH

40、H 3.855.4。在在酸性溶溶液中为为黄色，而而在碱性性溶液中中为蓝色色）2) 酪蛋白等等电点的的测定管号123456789蒸馏水（毫升）2.43.2/2.03.03.51.52.753.381.00N Hac（毫升）1.60.8/0.10 N Hac（毫升）/4.02.01.00.5/0.01 N Hac（毫升）/2.51.250.62酪蛋白-NaAc（毫升）1.01.01.01.01.01.01.01.01.0溶液的最终PH3.53.84.14.44.75.05.35.65.9沉淀出现的情况四. 实验结果果五. 思考题1. 何为蛋白白质的等等电点？2. 在等电点点时蛋白白质的溶溶解度为为

41、什么最最低？开发区职职业技术术学院实践课教教案首页页课题名称称双缩脲法法测定蛋蛋白质含含量课程类型型实验课课时（或或单元）4课时实验课类类型生物化学学实践教材材（名称称、作者者、出版版社）生物化学学实验讲讲义（自自编）教学场所所生物实验验室接受实践践教学单单位性质质与特色色教学目的的掌握双缩缩脲法测测定蛋白白质含量量的技术术重点、难难点分析析原理与操操作技法法实践分组组要求34人人一组，以以个人为为单位撰撰写实验验报告组长条件件与职责责管理本组组的实验验器材和和设备，组组织组员员进行实实验实践课所所需仪器器设备与与条件材料：大豆、蛋蛋清试剂：标准牛血血清蛋白白，酪蛋蛋白粉末末，PHH7.22磷

42、酸缓缓冲液（00.2MM），双双缩脲试试剂设备：研钵、离离心机、水水浴锅、7721型型分光光光度计，55毫升移移液管11支，22毫升移移液管11支、550毫升升容量瓶瓶1个、烧烧杯1个个。实践报告告（总结结）要求求 实验题目目 日期 实验目的的 基本原理理 实验步骤骤 实验结果果与分析析 思考题小 结数据的平平行性不不好说明：由由于该教教案涵盖盖较广，因因此不是是各栏必必须填写写教 案 纸实验六 双缩缩脲法测测定蛋白白质含量量一、 目的要求求 学习蛋白白质含量量测定的的原理 掌握蛋白白质测定定的方法法二、 基本原理理蛋白质含含有两个个以上的的肽键，因因此有双双缩脲反反应。在在碱性溶溶液中蛋蛋白

43、质与与Cu22+形成成紫红色色络合物物，其颜颜色的深深浅与蛋蛋白质的的浓度成成正比，而而与蛋白白质的分分子量及及氨基酸酸的成分分无关，因因此被广广泛应用用。在一定的的实验条条件下，未未知样品品的溶液液与标准准蛋白质质溶液同同时反应应，并于于54005660nmm下比色色，可以以通过标标准蛋白白质的标标准曲线线求出未未知样品品的蛋白白质浓度度。标准准蛋白质质溶液可可以用结结晶牛血血清蛋白白、卵清清蛋白或或酪蛋白白粉末配配制。除COONH有此反反应外，CONH2、CH2NH2、CSNH2等基团亦有此反应。三、 实验内容容双缩脲法法测定蛋蛋白质含含量四、 仪器和试试剂材料：大豆、蛋蛋清试剂：标准牛血血清蛋白白，酪蛋蛋白粉末末，PHH7.22磷酸缓缓冲液（00.2MM），双双缩脲试试剂开发区职职业技术术学院教 案 纸设备：研钵、离离心机、水水浴锅、7721型型分光光光度计，55毫升移移液管11支，22毫升移移液管11支、550毫升升容量瓶瓶1个、烧烧杯1个个。五、 实验步骤骤1. 标准曲线线的绘制制：取6支试试管，分分别加入入0，00.4，00.8，11.2，11.6，22.0毫毫升标准准酪蛋白白溶液，用用水补足足到2毫毫升，然然后加入入4毫升升双缩脲