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1、XXX医院检验科基因扩增实验室标准操作规程适用部门：基因扩增实验室XX医院抱怨的处理程序1. 目的：以病人为“中心”，以质量为“核心”，优质服务。“抱怨”基于对临床和病人（包 括家属等）的返馈意见的重视，往往从中能发现实验室存在的问题或漏洞。有利于提高检验和 服务质量，减少医疗过失和事故，巩固和有效改进实验室质量体系，2. 范围：来自于患者或家属，临床医护人员或实验室工作人员针对检测结果质量、服务 质量和实验室管理等问题的投诉或抱怨。3. 职责：3.1 通常由实验室负责人负责抱怨的处理，必要时应会同科主任一起处理。3.2 对外部抱怨，实验室工作人员不得推卸，应负责将抱怨人领到实验室主任处，对
2、抱怨须 作记录并及时报告负责人。4. 工作流程：4.1 抱怨的接受：执行者在接受抱怨时应热情、友好、礼貌、严肃和认真，应记录抱怨者姓名、 地址、联系方式、抱怨内容（首先注意稳定抱怨者情绪）。4.2 抱怨的处理：4.2.1 能及时处理的抱怨应给予及时解决，记录处理结果。4.2.2 不能及时处理的报怨应争取与抱怨者约定反响时间，尽可能将问题向实验室主任汇报，寻 求妥善的处理方法，尽快答复抱怨者。423抱怨的处理一般步骤：接受、安抚、倾听、回应、致歉、解释、处理、回复4.2.4 抱怨的处理以抱怨者的满意为目的，但必须以遵重科学，遵重事实为原那么，在不违背科学 原那么，医疗行为规范的基础上，争取抱怨者
3、最大程度的理解。4.3 抱怨处理的善后4.3.1 执行人对报怨作两份记录：保存一份，上交检验科一份。4.3.2 对抱怨的审核遵照科内部审核安排执行。4.3.3 对抱怨中反映出的影响到试验室质量及质量体系有效性的问题，室验室负责人应会同相关 人员及时分析存在的问题，提出有效的纠正措施，并由试验室负责人负责组织执行。4.4 . 4实验室工作人员在向实验室负责人报怨得不到满意解决时，有权向科主任提出报怨。第四局部实验室质量控制实验室试剂、耗材购买管理程序.目的：规定试剂购买原那么、审核验收的程序和试剂的正确贮存。1 .范围：适用于本实验室所购的诊断试剂盒、实验耗材。2 .职责：本程序由科主任落实，室
4、负责人主管协助。3 .工作程序：3.1 试剂的购买和管理试剂购买原那么：试剂的购买须根据科内的有关规定本着“质优价廉”进行，所购基因诊断试 剂必须三证齐全（生产许可证、产品注册证、经营许可证），并与荧光定量扩增仪相配套。3.1.1 剂购买程序：试剂厂家确实定：先由具体工程操作人员提出初步意见，提供2家或2家以 上（特殊情况1家亦可）试剂厂家的有关试剂信息（包括试剂厂家的信息广告、同行对有关试 剂盒的使用评价和有关机构的综合评价），提交科试剂审核小组讨论决定第一试剂商和第二试剂 供货商，并与供货商商谈试剂价格；试剂的购买：具体工程操作人员每月底提出所购试剂的 品种和数量，由实验室负责人或委托人与
5、供货商联系供货；试剂厂商的变更：为保证试剂使 用的稳定性，原那么内一年内不变更试剂厂商，如在使用过程中发现质量问题，由室负责人向科 主任提出申请，交试剂审核小组讨论决定。3.1.2 试剂的审核验收：供货商送来试剂后由科专门人员和工程操作人员共同验收，在厂家的供货清 单上签字，工程操作人员负责试剂质量验收（内外包装），科专门人员核对试剂的数量和价格， 供货清单交室负责人保管；试剂验收后登记。3.1.3 试剂贮存：试剂登记后，及时放入试剂贮备区的冰箱，保存条件按说明书规定进行。4. 1.5试剂的质检：按试剂质检SOP进行。4. 2实验耗材的购买和管理421购买：由实验室负责人填写申请，按需提出所购
6、耗材的品名、规格、数量，由科主任签字同意 后交科室指定人员送交院设备科购买。审核验收：消耗品购进后由科专门人员验收、领进检验科，交实验室人员，实验室人员核对数 量、规格，查验外包装是否破损，如发生破损，给予退回。4 . 2.3贮存：消耗品按要求存入各区指定位置。4.3工程具体负责人发现试剂或耗材少于一定的数量时（缺乏2周使用时），应向室负责人提出，以 便及时购买；使用过程中发现试剂有质量问题时向室负责人提出，由室负责人核实后采取措施。5 .相关的文件试剂的质检标准操作程序实验耗材质检的标准操作程序试剂的质检标准操作程序1 目的：保证每批用于临床实验的试剂的质量良好，符合。2 适用范围：各种用于
7、临床实验的核酸扩增荧光检测试剂质检程序2.1 收到试剂后，目测试剂是否处在冻存状态。2.2 核对试剂品种和数量并检查包装：外包装（厂名厂址、批准文号、批号和有效期等）；内 包装（试剂瓶完整性、试剂配备品种完整性、使用说明书有否等）。2.3 及时将试剂转入一20C冰箱保存。将上述检测核对情况在记录表上登记。2.4 最迟在前批次试剂存量尚可维持常规实验一周时，按如下要求对新批号试剂进行效验实 验。2.5 效验实验：3. 5.1要求设置：空白对照、阴性对照、阳性对照、室内质控各一，阳性标准品梯度（101 10） 10% 107）o3. 5.2出现如下情况中任何一种的，判断为试剂不合格，不能用于临床检
8、测：a）空白对照出现扩增。如扩增曲线CT值大于25,需重复实验确证试剂污染。b）阳性对照和阳性标准品均未检出，或阳性对照未检出而阳性标准品检出率大幅下降，表示试 剂失效或检测灵敏度大幅下降。3. 5.3阳性对照未检出，阳性标准品检测正常，提示样品提取液可能存在问题。重复新旧提取 液阳性对照实验，确定提取液失效问题。更换提取液后该批试剂方可使用。3. 5.4空白对照无扩增，阴性对照有扩增，排除其他污染可能性后，提取液存在污染可能。单 独用提取液点样上机，出现扩增，需更换提取液后方可使用该批试剂。3. 5.5阳性对照检出，阳性标准品未检出或扩增曲线明显系统性CT值偏大5个循环以上。提 示阳性标准品
9、存在问题。更换阳性标准品后该批试剂方可投入使用。3. 5.6空白对照、阴性对照无扩增，阳性对照正常检出，阳性标准品导出的标准曲线之斜率（一 2.9 3.9）、截距（2634）、相关性（一0.99）均在使用范围内，说明该批试剂良好，可以投 入临床使用。3.6将实验结果归入记录。实验耗材质检的标准操作程序1 .目的：保证耗材的使用质量不会影响检测工作的正常进行。2 .适用范围：核酸扩增荧光检测实验室常用耗材：1.5ml离心管、0.5ml离心管、带滤芯的吸头等。3、操作程序3. 1检测1.5ml离心管1.1 .1目测:检查离心管有无畸形、破损、不能闭盖的情况。1.2 . 2实验检测（每批随机抽样离心
10、管50个用于实验检测）oa.将抽取的50个目测合格的离心管插在浮板上,置于沸水浴锅中20分钟后取出，如发现有爆开情况 发生，即认为该批离心管不符合本实验室实验要求，作退货处理。b.再将这50个离心管加半量生理盐水后，1万转/别离心20分钟，如发现有管盖爆开或漏液情况发 生，即认为该批离心管不符合本实验室实验要求，作退货处理。c.经上述检测未发现不合格情况后，即启用该批耗材。1.3 检测0. 5ml离心管 方法、步骤同上。1.4 检测带滤芯的吸头3. 3.1检查吸头有无畸形、破损的情况，如无以上情况那么做以下质检。3. 3. 2滤心漏气检验：配制1%-2%甲基橙的水溶液，如果吸头的最大体积为lO
11、Oul,那么将加样器吸 取体积调至110120ul （如果吸头的最大体积为200ul,那么将加样器吸取体积调至210220ul；如果 吸头的最大体积为10ul,那么将加样器吸取体积调至再套紧吸头，吸取甲基橙溶液，如滤 心中有甲基橙溶液透过，表示滤心漏气，不能用于PCR检测，作退货处理。如果滤心中无甲基橙透 过，那么再检测10个吸头，假假设都未发现滤心漏气现象即可启用该批吸头。3. 3. 3吸头是否含抑制物、是否能有效防止气溶胶污染的检验：先纯化制备3份强阳性和10份阴 性核酸标本，然后使用待评价带滤心吸头对强阳性样本来回吸取10次（模拟10份阳性样本的吸取）, 将最后一次的吸取液加至一含扩增反
12、响液的管中，之后，换一个新吸头，连续吸取10份阴性样本分 别至10个扩增反响管中，此过程重复35次，最后对每一管按所用试剂方法进行扩增检测。强阳性 样本如为强阳性，那么可启用该批吸头；如出现阳性弱或出现阴性那么说明吸头可能含有扩增抑制物， 不能用于PCR检测，作退货处理。所有阴性样本如为阴性，那么可启用该批吸头；如出现阳性那么说明 吸头不能有效地防止气溶胶对加样器的污染，不能用于PCR检测，作退货处理。备注：实验耗材在目测合格后基本上都可以初步通过验收。如果在目测不合格或目测合格后出现甚 至频繁出现爆管、堵塞、漏液、漏气等情况下，再由实验人员进行实验检测。室内质控标准操作程序1 .目的控制实验
13、的重复性、精密度，并检测其准确度的改变，提高本室常规工作中的批间、批内标 本检测的一致性。2 .适用范围 本程序适用临床基因扩增检验质量负责人和检验人员对DNA和RNA分析的室内质量控 制。3 .制定依据 临床基因扩增检验技术申子瑜 李金明 主编 人民卫生出版社2002年第一 版.职责 实验室质量负责人和检验人员负责本规程的执行。评估检测结果正确与否，判定当日结果 是否可以被采用。5、操作步骤5.1血清质量控制品a）质控品的来源：卫生部临检中心或试剂盒内质控品。b）质控品与样本同时处理，排列顺序为：标准品或校准品，阴性质控品，阳性质控品，临床样本。c）质控品的处理及分析判断。d）实验结果的判断
14、：实验结果合格，即发报告；实验结果不合格，报告室主任，会同有关人员，查 找原因，妥善解决。e）记录每次检测质控结果。f）记录失控原因及纠正措施。5. 2室内质控图的使用方法：描点：a）图中X线刷线，X2s为警告线，X3s为失控线。对于同一批号的质控血清不管使用几个月，其空图均不变化。只要将图纸上方“起止日期”项填入 每个月的实际起止日期即可。b）每天将该批号质控血清按有关规定程序复融随同病人的标本同时检测。将日期、检测结果和操作 者如实记录在图下方的相应位置，并按前面的方法画出图上的对应点，用直线将该点与前一天的点 连接。C）月底计算当月全部质控血清检测结果的X、s和CV,并进行图形分析和小结
15、，将质量控制图存入 质控资料档案。图形分析a）如果在X3s线以外，那么为失控，应立即报告有关负责人，迅速查找原因。必要时复测标本，然 后方可发出报告，并将失控情况、查找过程及处理结果等详细记录。b）如果在X2s线以外，或出现连续6点以上在一侧等规律变化，均应立即向有关负责人反映，并 积极查找原因。但当天的检验结果一般可以发出。通过观察图形的规律性变化进行误差分析，消除误差来源a）曲线漂移：提示有系统误差，准确度发生了一次性的向上或向下改变。这种变化往往是由于一个 新的情况引起的。如更换不同批号试剂，启用新批号的质控血清、操作人员的变换等。在找原因时，应重点注意“漂移”前后发生了那些变动的因素。
16、b）趋势性变化：向下或向上的趋势性变化说明检测的准确度发生了渐渐地变化。这种变化往往是由 于一个逐渐改变的因素造成的。如质控血清的降解，试剂效价的降低等。c）连续多点分布在靶值一侧：目前，一般认为质控血清的检测结果连续6天以上出现在靶值同一侧, 那么应迅速查找原因，争取尽快使之回复围绕在靶值随机分布的状态。因为按照统计学原理，由纯随 机误差造成的这种情况的可能性很小。连续6天以上出现在靶值同一侧可能性小于1.5%。因此凡 出现连续6天以上出现在靶值同一侧者均有可能存在非随机误差因素。如结果与靶值偏离并不太大, 不会给临床使用带来太大影响时，一般化验报告可以照常填发。d）其他规律变化：（周期性等
17、）3通过图形的资料比照进行误差分析，消除误差来源a）每个月的月底将该月的全部质控血清检测结果的X和s与函比测定的X和s进行比拟。如果X发 生了变化，说明准确度发生了变化提示有非随机误差存在。如果当月S不同侧说明检测的精密度发 生了变化。b）将使用同一批号质控血清的CT值的X和s按月份列出。如果X逐在月上升，应考虑保存不当造成 的试剂效价降低或质控血清本身出现降解。如果各月份X基本一致而s逐月加大，那么主要提示常规 工作的精密度下降，应重点从操作、管理上找原因。5.4失控限的判定：当阳性对照呈假阴性或阴性质控呈假阳性时为失控；当阳性标本呈假阴性或阴 性标本呈假阳性时为失控。此次实验结果不合格，报
18、告室主任，会同有关人员，查找原因，妥善解 决，并将失控情况、查找过程及处理结果等详细记录。5. 5阴性对照品失控的处理程序：阴性对照A、B为假阳性时，那么应考虑为：a.试剂污染；b.扩增产物的“污染”。可作以下实 验鉴定：取4个空管翻开静置于标本制备区60分钟，然后加入扩增反响混合液同时以水替代核酸样 本进行扩增，如为阳性，而上述仅含扩增反响混合物的管为阴性，即可排除试剂污染的可能，表示 实验室有扩增产物“污染”。此时，应立即报告实验室负责人，然后先暂时停止PCR实验，采取各种 有效的消毒清洁工作直至产物污染彻底消失后才可进行PCR实验。如果有试剂污染时，应更换另一 批号的试剂进行重复实验，待
19、重复实验阴性质控品无失控后，方可报告结果。5. 5.2如果以上实验鉴定没有实验室的产物污染时，那么应判断为实验操作过程中所致的标本间的交 叉“污染”，出现这种情况很大程度上属于偶然误差，具体地说，如强阳性的标本气溶胶经加样器所 致的污染，强阳性标本经操作者的手所致的污染、使用的离心管核酸提取时在较高温度温育时盖子 崩开。因此在PCR实验前离心管、滤心吸头的质检以及在实验中一发现手套可能有污染就立即更换 手套显得尤为重要，并且PCR实验人员的严格按照操作程序进行实验的工作态度是实验成败的关键。 5. 6阳性对照品失控的处理程序：5. 6.1临界阳性对照品失控的原因有：抵临界对照品是否还好：可更换
20、新的临界对照品，进行重复实验，如果对照品无失控那么表示上次实 验的临界对照品已失效，不能再用于实验。如果还有失控现象，那么应考虑：b.核酸提取过程中的随 机误差：如核酸性对照失控。如核酸提取中的丧失、裂解温度不够、裂解不充分、有机溶剂的去除 不彻底、标本中扩增抑制物的残留等。应重新严格核查该过程中的各步骤是否出错，然后重新操作 一遍，临界对照品无失控现象后才报告结果。如果仍失控，那么考虑：仪器问题b.仪器问题。如扩增仪孔间温度的不均一性、孔内温度与所示温度的不一致性等。此时应请厂家及 时校正仪器。仪器校正好之后再重复操作如无失控那么可报告结果。如果仍有失控现象那么应考虑：试 齐问题c.试剂的问
21、题：如Taq酶的失活、探针的纯度及标记效率和核酸提取试剂的效率、试剂的灵敏度等。 可更换另一批号的试剂重复实验，无失控结果后才可发出报告。5. 6.2强阳性对照品失控的原因和临界阳性对照品失控的原因基本相同，但最首要的原因应考虑试 剂的问题。由此可见，在PCR实验前对试剂的质检是必不可少的环节之一。5. 7阳性标本失控的处理程序：5. 7.1失控的主要原因有：a.标本的收集是否符合要求（包括标本采集的时间是否合适、标本采集部位的准备工作是否适度、 标本的类型和采集量是否合适、采集的标本所含的细胞数量和核酸总量是否足够、采样容器是否合 格。）;b.标本保存是否正确；c.标本的运送是否延误；d.标
22、本在核酸制备、扩增检测中所存在的随机误差（与上述阳性质控品的失控原因相同）。处理程序：a.如果是标本收集、标本保存、标本运送等环节所导致阳性标本失控，那么应严格 按要求重取标本后复查才可报告结果。另外还应对临床标本采集人员、标本运送相关人员进行必要 的培训。b.如果是标本的核酸制备、扩增检测中所存在的随机误差问题，那么可参照以上所述阳性质控品失控的处理方法，另外对PCR实验人员的培训非常重要。5. 8阴性标本失控的处理程序：5.8. 1主要原因有：a.标本采集容器是否合格（是否使用一次性采样材料、使用的玻璃器皿是否经过高压灭菌）；b.标本运送过程是否存在污染因素（如没有密闭、管漏等）；c.标本
23、在核酸制备、扩增检测中所存在的随机误（与上述阴性质控品的失控原因相同）处理程序：a.如果是标本采集容器、标本运送等环节所导致阴性标本失控，那么应严格按要求重取标本后复查才 可报告结果。另外应加强对临床标本采集人员、标本运送相关人员的防污染意识。b.如果是标本的核酸制备、扩增检测中所存在的随机误差问题，那么可参照以上所述阴性质控品失控 的处理方法。室间质评管理程序1 .目的：室间质评（EQA）是实验室质量控制体系中重要局部，是保证患者检验结果和其报告的准 确性和可靠性，以及各实验室间结果的可比性的重要手段。2 .适用范围：卫生部或省临检中心下发的PCR室间质控血清检测。3 .职责：实验室工作人员
24、均须熟知并遵守本程序，具体工程负责人执行。室负责人监督落实。4 .工作程序质控标本的接收和验收：收到质控血清后由相关人员登记、签字，根据质控标本的有关说明对 血清的数量、批号、包装进行验收并将质控标本按要求置-20保存于标本制备区。4. 2质控标本的检测按常规临床标本对待，假设需要复溶的检测前先根据说明对质控物进行复溶。4. 3室间质评样本必须按实验室常规工作进行，由进行常规工作的人员测试，工作人员必须使用实验室的常规检测方法和试剂，不得特殊对待。检测结果须在截止日期前上报。4.4实验室检测室间质评（EQA）样本的次数必须与常规检测病人样本的次数一样（即1次）。4.5室间质评（EQA）样本的检
25、测在卫生部临检中心规定的时间内进行，检测结果的上报也必须在截 止日期前，通过挂号信寄出或网上填报。4. 6室间质评的检测结果和反响结果均记录于室间质评记录表，根据反响结果分析室间质评的状态, 如有出控应查找原因，并采取相应的措施。4. 7严禁与其它实验室交流室间质评的检测结果。PCR实验室应急处理程序1 .目的：在实际工作中，仪器设备发生故障、试剂盒发生质量问题时，为保证检验结果的准确性、 及时，应正确采取应急措施，最大程度上防止或减轻不利影响。2 .适用范围：适用于满足核酸扩增荧光检测实验室检测需要并可能对检验结果造成误差的仪器设备 和试剂盒。3 .细那么：3. 1核酸扩增荧光检测实验室工作
26、人员在职责范围内均有责任熟悉各种仪器和相关设备的性能、要 求、维护和保养、常见故障的排除、尤其要严格按照操作规程操作。3. 2工作人员在职责范围内均有责任有意识地注意以求及时发现并报告仪器设备和试剂盒的异常情 况。3. 3作为应急处理，潜在着一定的可能影响检测质量的不确定因素。室负责人负责在第一时间检查 核实应急措施的有效性。3. 4仪器设备故障4. 1室负责人接到异常情况报警后，立即现场确认异常情况的性质：观察有无误操作、偶发 现象或确属不能立即排除的故障。3. 4. 2用红牌故障标志标示故障仪器，以防被错误使用。4. 4. 3有满足要求的替用设备的，启用替用设备（准用仪器）。借用其他部门仪
27、器设备时，及时 联系借用并核实该设备的使用状态。替用、借用或备用设备的使用在满足质量要求的同时， 必须同时满足实验室管理措施（特别是防污染）的要求。5. 4. 4不能解决的问题，应及时与供应方会同解决。根据双方合同约定，及时通知供应方。供应 方技术支持人员将在规定的时间内随身携带备用设备到达现场。6. 4. 5仪器维修后，必须经验收合格并供需双方签字，调试实验通过后才能重新启用。取下红色 故障标示（暂停使用），换上绿色正常标示（正常使用）。7. 4. 6室主任须检查并随时跟踪所采取措施的有效性。8. 4. 7对未能及时排除故障时，必须及时上报科室，在科主任批准下，应积极联系附近的其他已 得到山
28、东省临检中心认证的临床基因扩增检验实验室检验，以满足患者和临床需求。3. 5试剂盒质量发生问题，经核实后，及时通知供货商迅速更换另一批次试剂，使用前需先作质 量检测，合格后方可使用。3. 6仪器设备故障或试剂质量问题不能得到解决，预期将会影响到检测报告的及时发出，可将标本送至其它已得到上海市临检中心认证的临床基因扩增检验实验室检查；如已影响到报告的及时发出，应在门诊取报告处向病人公告或向相关病区公告，取得病人的谅解。3. 7影响到检测报告发出的情况，应在应急处理记录表作记录。第二局部标准操作规程临床标本的采集及处理操作程序1 .目的：规范临床待检标本的正确采集、送检和处理。2 .适用范围：基因
29、扩增检验实验室的所有临床检测标本。3 .职责：所有采集标本的人员均需按本SOP操作，实验室工作人员有责任向临床医生、护士或病 人宣教。4 .操作程序本实验室检测标本为：血清或血浆、痰、生殖道拭子标本、尿液及脑脊液和胸腹水。4.1 血液标本：用真空采集管采集血液标本，病区标本由护士采集，门诊标本由门诊抽血处专人采 集，血标本采集后在2小时内送达实验室。实验室工作人员对标本进行查验，如标本采血量不 足、严重溶血、采样时间过长（特别是进行RNA检测时）或出现其它不合要求的情况，应拒收 标本，登记并告知相关科室。4.2 痰标本：用带盖的无菌一次性塑料瓶收集清晨第一口痰标本送检。（对于无痰或少痰的患者，
30、可 用45加温的100g/L NaCl水溶液雾化吸入或改变体位以使痰液易于咳出；对于小儿可以轻压 胸骨柄上方以诱导咳痰，用消毒棉拭子刺激喉部引起咳嗽反射，用棉拭子采集标本。）标本在室 温下保存不能超过24小时。样本处理时，在样本中加入2倍体积的4%NaOH溶液，吹打均匀后 于室温放置30分钟使之液化。取液化后的痰标本1ml于1. 5ml无菌离心管中，15000r/min离 心lOmin,弃上清，在沉淀中加TE溶液1ml （自备）混匀，15000r/min离心lOmin 弃 上 清，重复上述洗涤步骤一次。沉淀中加入50ulTB DNA提取液，震荡混匀后100摄氏度沸水浴 15分钟，15000r/
31、min离心10分钟备用。4. 4生殖道拭子：尿道或阴道分泌物由医生用专用取样拭子（灭菌，一次性）采集样本，及时送检。 采集生殖道拭子标本，要求病人在采样有2小时内不能排尿，采样时，将棉拭子伸入男性尿道 及女性宫颈口 23cm,转动一周以获得上皮细胞。将取样后的棉拭子放入含1ml无菌生理盐水 离心管中洗涤片刻，在管壁上挤干后丢弃拭子，13000rpm离心lOmin,弃上清，保存沉淀。4. 5尿液：由病人自留尿液于无菌封闭的试管中送检。取1ml于无菌离心管中，13000rpm离心lOmin, 弃上清，保存沉淀。4.6脑脊液和胸腹水：由临床医生采集后放入消毒的试管中及时送检。取1ml于无菌离心管中，
32、 13000rpm离心10心n,弃上清，保存沉淀，置-20保存。标本接收、拒收及保存程序1 .目的：本程序是对分析前标本的质量管理.，是与确保检验质量为临床提供准确有效结果密切相关，实验室工作人员必须重视标本的采集、处理、贮存、平安处置等全过程。2 .范围：PCR扩增的临床各类检测标本；.职责：PCR检测实验室现有工作人员须熟知标本的采集、处理、贮存、平安处置等全过程。并有 责任向临床医护人员进行宣传培训如PCR工程选择、标本采集、运用、处理等技术要求和注意 事项。3 .标本的唯一性标识：标识由三局部构成：检测工程、标本采集日期、该检测批次的标本序号， 三局部间无间隔符号，例如：B111210
33、001分别表示实验工程、年、月、日、序号，序号(001-999),整个标识为10T1位;由于标本容器太小，对应标本唯一性标识，产生工作标本序号，其组成有检验工程加序号(1-99)。 HBV用B表示、HCV用C、TB用TB、CT用CT、UU用UU表示等。3.1 标本种类用中文表示：全血、血清、血浆、痰、尿、分泌物、各种穿刺物、组织等。4 . 3标本的唯一性标识须字迹清晰明了，不得随意作任何涂改；必须时，在旧标识上划双线更改， 更改后应保持旧标识可辨识。5 .标本的接收：5.1 所有标本均可能具有传染性，须严格遵守医院有关院内感染及医用垃圾的管理和处理规定，工 作人员须注意保持并随时检查容器的完整
34、和无标本外泄发生。5.2 接收标本时应核对标本与检验申请单的一致性。工作人员有权拒收与检验申请单不一致的标本、 标识不清的标本。检验申请有不清晰情况时，应即时与临床科室或相关人员联系核实。5. 3标本接收人须检查标本状态.5.4标本合乎要求，须在可接收标本记录本上按内容记录，作进一步处理，标本不合乎要求，须在 记录本上记录拒收原因。6 .标本的拒收：标本在以下情况下，视为不合格，工作人员有权拒收标本； 无被检标本基本信息或与申请单不符合(姓名、年龄、性别、住院号、检验工程等)使用不适当的容器；容器有破损；(4)标本外泄污染；标本溶血；标本量缺乏 其它如后续处理过程中发现的不合格，应记录其状态并
35、通知临床重新送检。对拒检的不合格标本应登记在拒收标本记录本上。填写不合格标本处置单，并随同申请单送返送检科室。必要时 告之相关科室医生或护士。7 .标本的保存：7.1 处理前的标本保存：a） HBV：全血样本可4下短期（12周）保存，或别离出血清（血浆），保存于-20C下。b） HCV：在室温下1小时内别离血清，吸取20014,保存于-20。尽可能快的提取RNA。c） TB：液化的痰标本如果不立即用于核酸提取，可保存于-20C下。处理后的痰或胸腹水、脑脊液、脓液用于TB检测的标本可置于4下短期保存。长期保存于-20下。d） CT和UU：处理后的沉淀标本可置于一20C下短期保存。7. 2报告发出
36、后的标本保存：a）提取的核酸标本当天检测可置4保存，如当天不检测应置-20保存。报告发出后丢弃。b）原始血清/血浆样本在报告发出后放入低温冰箱-20保存3个月，以备查。超过3个月保 存期的标本由室负责人酌情处理，一般按生物传染性物品交医院统一处理。c）血清/血浆标本放置低温冰箱保存时须有记录，按检测工程分类存放，并由专人负责管理。实验室化学试剂的管理和配制标准操作程序1 目的：保证实验中用到的各种溶液符合实验要求。2 .适用范围：核酸扩增荧光检测实验室常用溶液：4%NaOH溶液、75%的酒精、4%84消毒液、2000mg/L 有效氯溶液等。3 .管理程序：3.1 化学试剂的购买或领用：每月清点
37、一次试剂，发现试剂存量缺乏时，及时领用或提交请购申请。 发现有试剂过期或明显变质时要立即报废，并将报废试剂妥善处理。3.2 化学试剂贮存：临床基因扩增实验室常用化学试剂均置于避光、阴凉、干燥处保存。实验中常 用到的一些化学试剂那么根据要求保存于不同环境（如预冷乙醇保存于4）o PCR试剂一律贮存于 -20o化学试剂使用：临床基因扩增实验室常用化学试剂均无毒性或仅有低腐蚀性，故使用时主要应 注意分类、分区保存、关注失效日期和使用后的及时清洁等。4 配制4. 1用具 干燥洁净的1000ml量筒一只，200ml量筒一只，501nl量筒一只，三角烧瓶两只，天平一 架，250ml、1000ml 广口瓶各
38、一只。4. 2 .配制步骤4. 2. 1配制4% NaOH溶液a.用天平称取4克分析纯的NaOH固体，置于一只三角烧瓶中。b.用200ml量筒准确取100ml蒸储水，缓缓注入盛放NaOH固体的三角烧瓶中。c.摇荡三角烧瓶使NaOH固体充分溶解。d.然后缓缓倾倒入250nli广口瓶中密封保存备用。4. 2. 2 配制4% 84消毒液a.用50ml量筒准确取40ml84消毒液原液，缓缓注入一只三角烧瓶中。b.用1000ml量筒准确取960ml水，缓缓注入盛84消毒液的三角烧瓶中。c.摇荡混匀溶液，将混匀的溶液转移入广口瓶中。4. 2. 3配制2000mg/L有效氯溶液消毒剂本室采用片剂配制有效氯溶
39、液，根据实际配制液体体积加入适当数量片剂。5. 2. 4配制1%-2%甲基橙溶液a.用天平称取2克分析纯的甲基橙固体，置于一只三角烧瓶中。b.用200ml量筒准确取100ml蒸储水，缓缓注入盛放甲基橙固体的三角烧瓶中。C.摇荡三角烧瓶使甲基橙固体充分溶解。d.然后缓缓倾倒入250ml广口瓶中密封保存备用。4. 2.5 配制75 %酒精溶液a. 一般常规消毒的75%酒精由医院库房提供。b.RNA提取的75%酒精的配制，试剂盒提供DEPC水，酒精用分析纯的无水酒精。c.根据当天的标本数量配制。考前须知：每份配制好的溶液保质期为14天。标本前处理（核酸纯化）标准操作程序L目的规定DNA和RNA核酸样
40、本提取和纯化实验应遵守的操作。2 .适用范围从人体体液、细胞、组织等标本大批量提取和纯化DNA和RNA。，并包括对核酸样本的长期保存。3 .定义和术语DNA Deoxyribonucleic Acid即脱氧核糖核酸,是遗传信息储存及传递者。3.1 RNA Ribonucleic Acid由脱氧核糖核酸（DNA）为模板转录合成的核糖核酸的片断。4 .职责实验技术员负责从不同样本中提取和纯化DNA和RNAo5 .设备和器材见正文内容6 .正文实验室设置6 .L1在实验室内，试剂贮存，核酸提取，核酸质量控制以及核酸样本保存的区域应相互隔离。严禁 不同工作区内的设备物品如加样器、试剂等的移出移进造成不
41、同的工作区间发生交叉污染。7 .1.2进入各个工作区的所有人员和物品必须遵循严格的顺序，只能按单一方向进行，即从试剂贮存 和准备区一提取区一质量分析区一标本保存区。8 .L3工作人员穿着的工作服应经常洗涤，尽量防止不同工作区内的工作服相互混穿，造成污染。同 时，应假定样本可能含有病原微生物，样本DNA提取工作应参考P2级实验室操作规范进行。6.1 工作区域功能和设备试剂贮存和准备区该工作区用于贮存溶液的制备、溶液的分装。本工作区仪器设备配置应包括如下：A.4C冰箱和-20C冰箱、混匀器、微量加样器（覆盖11000口各个容量的加样器）、生物平安柜（带 紫外灯）；B.专用办公用品、专用工作服和工作
42、鞋；C.消耗品：一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头等。6.1.1 提取区该工作区用于标本贮存、核酸提取。本工作区仪器设备配置应包括如下：A.4C冰箱、一20冰柜、高速台式冷冻离心机、混匀器、水浴箱或加热模块、微量加样器（包括11000口各个容量的加样器）、核酸提取仪、可移动紫外灯（近工作台面）；B.超净工作台和超声波水浴（处理大分子DNA），专用办公用品、专用工作服和工作鞋；C.消耗品：一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头等。6.1.2 质量分析区该工作区用于核酸浓度和纯度测定。本工作区仪器设备配置应包括如下：A.核酸分析仪；微量加加样器假设干支（覆盖
43、1100可）；B.专用办公用品、专用工作服和工作鞋；C.消耗品：一次性手套、一次性吸水纸、离心管和加样器吸头等。6.1.3 标本保存区该工作区用于标本贮存。本区仪器设备配置应包括-80C冰柜。6.2 RNA酶污染源及预防实验室用的普通玻璃器皿和塑料制品经常有RNA酶污染，使用前必须于180干烤8小时或更 长时间（玻璃器皿）。632对于塑料制品等不适合高温烘烤的材料，使用RNA酶的抑制剂焦碳酸二乙酯（DEPC）处理。 通常是以0.1%的DEPC水溶液浸泡用于制备RNA的烧杯，试管和其他用品。灌满DEPC的玻璃或 塑料器皿在37放置2小时，在121 高压蒸汽灭菌15分钟。633预防研究人员造成的污
44、染RNA酶最主要的潜在污染源是研究人员的手。因此，在准备别离的和分析RNA的材料和溶液时， 主要涉及RNA的一切操作过程中，都应戴一次性手套，接触“脏的”玻璃器皿和其他物品以后，手套 就可能沾染上RNA酶，因此进行RNA实验时应勤换手套。6.3.4 防止溶液的污染用高压灭菌的水和RNA研究专用的化学试剂配制溶液，用干烤过的药匙称取试剂，将溶液装入无 RNA酶的玻璃器皿。可能的话溶液均应用0.1%DEPC于37至少处理12小时，然后于100C加热 15分钟或在151bf/in2 （1.034xl05Pa）的高压下蒸汽灭菌15分钟。注：DEPC可与胺类迅速发生化学反响，因此不能用来处理含有Tris
45、 一类的缓冲液。6.4 核酸标本保存质检完毕后，打印条码贴于样品冻存管外壁，置于-80C保存，可保存5年以上。做好标本贮存登记。第一局部工作制度及程序1PCR实验室各区工作制度及程序1PCR实验室人员配置及培训程序4PCR实验室清洁程序5PCR实验室废弃物处理程序6PCR实验室生物平安防护程序7抱怨的处理程序 8PCR实验室应急处理程序9第二局部标准操作规程11临床标本的采集及处理操作程序11标本接收、拒收及保存程序12实验室化学试剂的管理和配制标准操作程序14标本前处理（核酸纯化）标准操作程序16新型冠状病毒核酸检测标准操作程序18人乳头瘤病毒分型检测（基因芯片法）标准操作规程24核酸扩增及
46、产物分析检测的操作程序30检测结果分析的标准操作程序31检测结果报告程序34实验记录管理程序35第三局部 设备SOP文件36AU1001-96全自动核酸提取仪（96通道）操作流程、校准及维护保养程序36乐普Lepgen-96全自动医用PCR分析系统操作流程、校准及维护保养程序41净化工作台SW-CJ系列操作流程及维护保养程序48博科生物平安柜操作流程及维护保养程序49多恒DHG-9053BS-III电热恒温鼓风干燥箱操作流程及维护保养程序54多恒HH-100干式恒温器（金属浴）操作流程、校准及维护保养程序56多恒TD4Z低速离心机操作流程及维护保养程序60多恒DH18R台式高速冷冻离心机操作流
47、程及维护保养程序66新型冠状病毒核酸检测标准操作程序1目的在当前新型冠状病毒肺炎疫情期间，规范PCR方法检测新型冠状病毒核酸的工作程序，保证实验 结果的正确可靠。2范围适合于检验科PCR实验室。3职责检验人员负责按照本检测细那么对被检样本进行检测；3.1 复核人员负责对检测操作是否规范以及检测结果是否准确进行复核；专业组负责人负责对专业组综合管理和检测报告的审核。4检测流程核酸检测前的生物平安防护（工作人员个人三级防护的穿戴）4.1.1 穿戴流程：在基因扩增实验室的清洁区（更衣区）或者普通实验室的洁净区，工作人员按顺序依次穿戴好一次 性帽子、医用N95 口罩、一次性防护服、一次性鞋套、一次性防水靴套、防护目镜和双层乳胶手套, 进入样本处理工作区域或实验室。4.1.2 要点提示： 具备标准基因扩增布局条件的实验室，应在清洁更衣区做好个人三级防护，条件有限的实验室亦可 选择在一洁净的实验室中按流程穿戴好个人三级防护。 需佩戴医用N95 口罩，假设无医用N95 口罩，可以考虑用普通N95/KN95 口罩外加一次性外科口罩 的组合方式，但不要佩戴有呼吸阀的N95 口罩。 佩戴N95 口罩时需检查密闭性，通过双手按压、深呼吸、左右转头等动作严格检查口罩是否佩戴 正确。 一次性防护服已具备新型冠状病毒核酸检测的防护需求，有条件时可以考虑加穿一次性反穿隔离 衣，穿衣时需由他人协