GB∕T 38478-2021 虾青素旋光异构体含量的测定 液相色谱法.pdf

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1、ICS 07.080CCS A 21OB中年人民共和国国家标准GB/T 384782021虾青素旋光异构体含量的测定 液相色谱法Determination of astaxanthin opticalisomers content一 Liquid chromatography2021-12-31 发布2022-07-01 实施国家市场监督管理总局 国家标准化管理委员会GB/T 3847820211刖 百本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则的规定 起草。本文件由中国标准化研究院提出并归口。本文件起草单位:中国科学院烟台海岸带研究所、中国科学院海洋

2、研究所、中国标准化研究院、山东 省标准化研究院、云南龙布瑞生物科技有限公司、福建师范大学福清分校、中国科学院过程工程研究所。本文件主要起草人:刘建国、秦松、苏芳、韩春梅、梁文伟、崔玉琳、马爱进、陈军、王寅初、黄永东。IGB/T 384782021虾青素旋光异构体含量的测定 液相色谱法1范围本文件规定了用液相色谱法测定虾青素中旋光异构体含量的方法。本文件适用于虾青素产品中虾青素旋光异构体含量的测定。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文

3、件。GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4原理试样经研磨、浸提其中的虾青素后,胆固醇酯酶酶解处理成为游离虾青素,经手性色谱柱分离后,用 配有紫外检测器的液相色谱仪测定,外标法定量。5试剂或材料除非另有规定,仅使用分析纯试剂。5.1 水应符合GB/T 6682中的二级水规定。5.2 乙睛色谱纯。5.3 胆固醇酯酶酶活力210 U/mg。5.4 甲基叔丁基酸色谱纯。1GB/T 3847820215.5石油醴沸点60 C90 05.6 左旋虾青素纯度96%。5.7 右旋虾青素纯度96%。5.8 内消旋虾青素纯度)96%。左旋虾青溶液准确称筲素标准

4、品约1.0 mg,置于10 mL棕色容量瓶中烷溶解,然后用乙二氯烷灌解,然后用乙.L,充氮青素标消旋虾青甲卷溶解,然后用量取4.2缓缓加到100 mL去离子水中5.13 0.05 mol/;准确称取1.211 4“甲鎏|pH至7.0,然后用水定容甲烷,用约150水淹用0.5 mol/L的盐酸调节5.14 4 U/mL胆固醇酯酶工作溶液500U的胆固醇酷酶用125 mL的0.05 mol/L三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液,pH=7,溶解混匀后 分装至2 mL小玻璃瓶内,一20 C保存,有效期一个月。6仪器设备6.1 高效液相色谱仪:配紫外检测器。6.2 分析天平:感量0.000 1 g。6.3 冷

5、冻离心机。6.4 超声波清洗机。6.5 恒温水浴锅。2GB/T 3847820216.6 玻璃匀浆器:20mL。7测定步骤7.1 提取7.1.1 对于虾青素含量500 mg/kg的样品可直接按照以下步骤提取,而对于小于该浓度的样品需适 当增加取样量或对提取液进一步浓缩。7.1.2 固体试样:称取50.0 mg100.0 mg置于干燥的20 mL玻璃匀浆器中,加入2 mL丙酮,充分研 磨使样品破碎完全,转移至10 mL电演3次清洗玻璃匀浆器,合并提取液,5。下3 800 r/min离心5 mi)交1株转移至50 mL容量诵除时管中加入2 mL丙酮溶液。重 复上述步骤3次以上,直茅丙酮溶液定容至5

6、0 mL,待测。7.1.3 液相油剂沙彳最岁盛将试样置于50 C水浴锅中水浴加热京馨不再黏稠且状态 均匀,以少量试孽的 浴为宜,然后根据试样中虾青素的含量,称取3l%g、.O mg均匀试样 至100 mL容赢中4A丙酮溶液定容至定。mL,过0.45 ptm尼龙滤膜,滤扁僦!、用移管小移取1篇L待测滤液于&静具越触管中:加入2礼丙酮4 2 m1三羟甲基 氨基甲烷串酸缓冲液,加蜀混匀箱于37小嫌斛中保甯熊.in后雌棚入1 mL&田醇露酶工作溶 液震荡均必1 37 C水德瞬一丽反遥礴in(翻:整0岬出,加人 2.0 A g十水硫酸钠后加盖剧烈震薄餐秒嬲避俗空中静毫溶晶或分层,色素被转移至上层f醛中,

7、用移液管地毒爨星容量瓶中?再从2,L石油酸至 原具塞玻璃飞/,穗震荡数蓍聂您复/所有的色素 全部转移至容飞低温避光环境中使用氮气将试管中的石油醍吹干,号/5成乙睛溶解容量 瓶中的色素,得,液于一20 C避光保存待测。/7.3.1 色谱条件/色谱参考条件如下:a)色谱柱:三(3,5-二氯苯基氨基最霹霹霆霜,4.6 mmX250 mm,5 2m,或相当者;b)柱温:25-C)c)紫外检测器:检测波长470 nm;d)进样量:20 fiL;e)流速:1.0 mL/min;f)流动相:甲基叔丁基酸+乙睛=35+65。7.3.2定性方法分别注入20 jzL适当浓度的左旋虾青素的标准品溶液,内消旋虾青素标

8、准工作溶液,右旋虾青素的 标准品溶液及试样溶液,进行液相色谱分析测定,根据标准品溶液色谱中的虾青素旋光同分异构体的保 留时间定性。标准品色谱图参见附录A。3GB/T 3847820217.3.3定量方法根据试样溶液中虾青素的含量情况,选择峰面积相近的左旋虾青素标准品溶液单点定量或多点校 准定量。试样测定结果以实际存在的旋光异构体的含量计,外标法定量,同时标准品溶液和试样溶液的 响应值均应在仪器检测的线性范围之内。8结果计算虾青素旋光异构体的含量按式(1)进行计算:A,Xps X VX 10-3,孙=长=-X/X 100AsXm(1)式中:WiA;Ps一样品中目标虾青素旋光异构体的含量,%;一试

9、样溶液中目标虾青素旋光异构体的峰面积;-左旋虾青素旋光异构体标准溶液中虾青素的含量,单位为微克每毫升(/xg/mL)V-试样溶液体积,单位为毫升(mL);As左旋虾青素旋光异构体标准溶液的峰面积;m-样品质量,单位为毫克(mg);f稀释倍数。测定结果用平行测定的算术平均值表示,保留3位有效数字。9重复性在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。10定量限本方法的定量限为500 mg/kgo4GB/T 384782021附录 A(资料性)虾青素旋光异构体色谱图虾青素旋光同分异构体标准品色谱图见图A.l0内消旋虾青素.o o o o o O o o o o o O6 5 4 3 2 1 2 4 6 8 10 12 14 16时间/min图A.1虾青素旋光同分异构体标准品色谱图5

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