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1、TSA联合基因工程腺病毒 H101治疗人食管癌裸鼠皮下移植瘤的研究冯婷1刘霞1 董子明#1#通讯作者：男 54岁 教授 博士研究生导师 研究方向：病理与病理生理学Emaill：doongzzimiingzzuu.eddu.ccn（1郑州大大学基础础医学院院病理生生理教研研室 河河南 郑郑州 44500052）摘要 目的的：研究究TSAA药物对对基因工工程腺病病毒 HH1011杀伤食食管癌 EC997066细胞作作用的影影响，探讨HHDACC抑制剂剂在腺病病毒载体体基因治治疗中应应用的可可能性和和作用机机制。方法：先成瘤瘤后治疗疗组，构构建裸鼠鼠食管癌癌移植瘤瘤模型，待待肿瘤长长出1WW后，分组
2、组：TSAA治疗组组（瘤内内注射11.0moll/LTTSA /只/次），HH1011治疗组组（瘤内内注射550108 vpp/d），TTSA联联合H1101治治疗组即即先注射射TSAA，第二二天注射射H1001，注注射剂量量同上。另设空空白对照照组，以以上治疗疗持续两两周，治治疗结束束取瘤组组织检测测。先处理理后成瘤瘤组分别别采用浓浓度为44.0moll/LTTSA体体外处理理EC9906细细胞488h，浓浓度2000108 vpp/dHH1011处理ECC97006细胞胞48hh，及二二者联合合处理EEC97706细细胞488h，同同样设置置空白对对照组，将将处理后后的细胞胞种植于于裸鼠皮
3、皮下构建建裸鼠食食管癌移移植瘤模模型。待待瘤体长长出2周周后，取取瘤组织织用 RReall Tiime PCRR、Weesteern-biootinng和免免疫组化化法检测测 CAAR在移移植瘤中中的表达达，测量肿肿瘤体积积。结果果：无论论是先处处理后成成瘤组还还是先成成瘤后治治疗组，TSA组和TSA联合H101治疗组均可上调裸鼠食管癌移植瘤组织中CAR蛋白的表达，相比与对照组和H101治疗组均有明显差异(P0.05)。而对人食管癌 EC9706细胞裸鼠皮下移植瘤大小影响TSA联合H101治疗组与TSA组、H101单独治疗组相比均有明显差异(P0.05)。各治疗组与空白对照组相比，差异均有统计
4、学意义(P0.05)。结论：TSA能增强H101治疗人食管癌裸鼠皮下移植瘤，其作用机制是TSA上调了食管癌CAR蛋白的表达。关键词：柯柯萨奇-腺病毒毒受体（CCoxssackkie andd addenoovirrus reccepttor，CCAR)；TrrichhosttatiinA（TTSA)；基因因工程腺腺病毒； ECC97006； 裸鼠中图分类类号：R7335.11；R7730.2311 文文献标识识码： A TSA commbinned gennetiicallly enggineeereed aadennoviiruss HH1011forr trreattmennt oof t
5、tumoor ttisssue of nudde mmicee trranssplaanteed wwithh huumannesophhageeal canncerr ceellss fenngtiing11 liuuxiaa1 doongzzimiing11#Deparrtmeent of Patthopphyssiollogyy, CColllegee off Baasicc Meediccal Sciiencces, Zhhenggzhoou Uniiverrsitty, Zheengzzhouu 45500552, ChiinaABSTTRACCT Obbjecctivve：tthe
6、 stuudy is to obsservve TTSA druug ffor thee efffecct oof ggeneeticc ennginneerringg addenoovirrus H1001 kkilllingg essophhageeal canncerr ECC97006 ccelll ,aand disscusss tthe acttionn mechhaniismss annd tthe posssibble appllicaatioons of HDAAC iinhiibittor in adeenovviruus vvecttorss foor ggenee th
7、heraapy .Methoods: thhe ffirsst eexamminaatioon iis ttreaatmeent aftter groowinng ttumoour . thee exxamiinattionn foolloowinng iis bbuilldinng nnudee moodell off trranssplaanteed ttumoor iin eesopphaggeall caanceer ,andd grrouppingg whhen thee tuumorr grrowiing onee weeek .TSSA treeatmmentt grroupp
8、(iinjeectiion TSAA 11.0moll/LTTSA / oonlyy / timme);H1001 ttreaatmeent grooup(injjecttionn HH1011 550 1008 vpp / d); TSSA aand H1001 ttreaatmeent grooup, thhe ffistt too innjecct TTSA , andd thhe nnextt daay tto iinjeect H1001,tthe injjecttionn doosagge aas aabovve. anootheer ggrouup iis mmatcchedd
9、grroupp. Obtaainiing tummor tisssuee affterr trreattingg twwo wweekks. thee seectiion exaaminnatiion is treeatmmentt beeforre ggrowwingg tuumouur .onee grroupp iss uttiliizinng tthe conncenntraatioon oof 44.0moll/LTTSA to ttreaat EEC9006 ccellls 448h, tnne ssecoond grooup is utiilizzingg thee coonce
10、entrratiion of 2000 1088 vpp/dHH1011 too ttreaat EEC97706 cellls, 488h, tnne tthirrd ggrouup iis tthe twoo drrugss innjoiinedd to treeat ECC97006 ccellls 448h, annothher grooup is mattcheed ggrouup . thhe ttreaatedd ceellss grrownn uundeern skiin oof nnudee miice to buiilt xennogrraftt moodell off e
11、ssophhageeal canncerr . Affterr twwo wweekks ,obttainningg thhe ttumoor ttisssuess annd uusinng RReall Tiime PCRR, WWestternn-biiotiing andd immmunnohiistoocheemisstryy too deetecct eexprresssionn off CAAR iin tthe tummor andd meeasuure tuumorr voolumme.Resullts:. WWhettherr thhe ffirsst eexamminaat
12、ioon oof ttumoor oor tthe secctioon eexamminaatioon ,coompaareiing thee maatchhed grooup andd onnly H1001 ttreaatmeent grooup ,TSSA ttreaatmeent grooup andd TSSA aassoociaatinng wwithh H1101 treeatmmentt grroupp aablee tto rrisee thhe eexprresssionn off CAAR pprotteinn inn essophhageeal cannce xenno
13、grraftt tiissuue iin nnudee miice(P 0.005). buut tthe TSAA coombiinedd H1101 grooup to thee huumann essophhageeal canncerr ECC97006 ccellls iin nnudee miice , ccomppareed wwithh H1101 or TSAA grroupp ,wwas alll siigniificcantt diiffeerennce (P 0.05), EEachh trreattmennt ggrouup aand blaank conntrool
14、 ggrouup, thee diiffeerenncess weere staatissticcallly ssignnifiicannt (P 0.005).Concllusiion : TTSA cann ennhannce thee H1101 treeatiing nudde mmicee ssubccutaaneoou ttrannspllantted tummor of humman esoophaageaal ccarccinooma . Moreeovee, thhe ccombbineed TTSA andd H1101 druug hhas a bbestt thhera
15、apy .Thhe mmechhaniism poossiibllly iis TTSA inccreaasinng thee exxpreessiion of CARR prroteein in esoophaageaal ccarccinooma . KEYY WOORDSS：Coxxsacckiee annd aadennoviiruss reecepptorr，CAAR； TriichoostaatinnA（TTSA)；Geenetticaallyy Moodiffiedd Addenoovirrus；Nudde随着基因治治疗理论论和技术术的发展展，腺病病毒作为为溶瘤病病毒或基基因治疗
16、疗的载体体已应用于恶恶性肿瘤瘤的治疗疗，复制制选择性性腺病毒毒(Reepliicattionn-seelecctivve aadennoviirusses)以其独独特的优优势成为为肿瘤病病毒治疗疗研究最最为广泛泛的病毒毒热点之之一，通通过遗传传工程改改造后使其能够够通过特特异性在在肿瘤细细胞中复复制、裂裂解肿瘤瘤细胞，而而对正常常的细胞胞无杀伤伤力。目目前已成功构构建了多多种溶瘤瘤腺病毒毒1-22。H1101就就是其中中一种溶溶瘤病毒毒药物，它它是利用了基因重重组删除除了人55型腺病病毒E11B部分分基因片片段所构构建的。但但在很多多研究中中表明：H1001作为为单一的的治疗剂剂效果并并不明显
17、显，而且且在不同同肿瘤中中治疗效效果存在在显著差差异3-4。临临床研究究表明，造造成这种种差异的的原因是是受到组组织器官官表达柯柯萨奇病病毒腺病病毒受体体的影响响。而组组氨酸去去乙酰化化酶（HHisttonee deeaceetyllasee，HDDAC)是最近近研究最最多的抗抗肿瘤药药物，它它可以调调节肿瘤瘤的分化化、迁移移、转移移和血管管生成。已已有研究究表明，它它的抑制制剂TSSA对肿瘤组组织CAAR的表表达有影影响。那那么TSSA药物物联合HH1011药物能能否提高高溶瘤效效应？我们用用TSAA、H1001、以及TTSA联联合H1101分分别治疗疗人食管管癌裸鼠鼠皮下移移植瘤，在在动物
18、体体内来验验证TSSA能否否可以增强强基工程程腺病毒毒H100以治疗人人食管癌癌裸鼠皮皮下移植植瘤，其作用用机制是是TSAA上调食食管癌柯柯萨奇-腺病毒毒受体（CCAR）的表达。1 材料与与方法 1.1 材材料 食管癌细胞胞由郑州州大学基基础医学学院病生生教研室室提供，RPMI-1640培养基购自美国HyClone公司；胎牛血清购于杭州赛乐生物科技有限公司；胰蛋白酶购于美国Hykelone公司；免疫组化SP试剂盒购于北京中杉金桥公司；RT-PCR试剂盒（TaKaRa公司）；总RNA提取试剂Trizol购自Invitrogen公司；琼脂糖（BIO BASIC公司）；兔抗人CAR 和Action单
19、克隆抗体购自美国Santa Cruz，TSA 购买Sigma（USA）公司，BALB/C裸小鼠，雌性，鼠龄4W，体质量18g-22g，购自上海斯莱克实验动物有限责任公司。1.2 实实验方法法1.2.11食管癌癌EC997066细胞的的培养：食管癌癌EC997066细胞于于RPMMI-116400培养液液（含110胎牛血血清，青青霉素1100uu/mll，链霉霉素1000u/mll），337、5%CO22孵箱内内贴壁培培养。1.2.22 食管管癌移植植瘤模型型的建立立和分组组：先成瘤瘤后治疗疗组：培培养ECC97006细胞胞，经胰胰酶消化化后离心心，用PPBS液液清洗22次；调调整细胞胞浓度为为
20、1107ml,接种于于裸鼠左左上肢皮皮下，于于肿瘤长长至8 mm 7 mmm后分为为4组。AA组：腹腹腔注射射PBSS代替药药物。BB组：腹腹腔注射射H1001500108 vpp/d/只/次次。C组组：1.0moll/LTTSA /只/次。DD组：联联合应用用TSAA和H1101，先注射TSA，第二天注射H101，注射剂量分别同B组、C组。以上各组治疗连续2 W，治疗结束，取瘤组织。先处理细胞后成瘤，分为4组，每组5只。A组 ：细胞不作任何处理。 B组： 采用浓度为200108 vp/dH101处理细胞48h。C组：采用浓度为4.0mol/LTSA的处理细胞48h. D组：TSA和H101联
21、合处理细胞，TSA作用细胞24h后，再用H101，浓度同 B、C组。然后将各组细胞分组种植于裸鼠左上肢皮下构建裸鼠食管癌移植，待肿瘤长出2周后，取瘤组织。1.2.33 裸鼠移移植肿瘤瘤体积测测量:裸裸鼠处死死后 ,剥离肿肿瘤 , 用游游标卡尺尺测量肿肿瘤最长长径及最最短径 (mmm) ,肿瘤体体积 VV (mmm ) = 最长径径 最短径径2/6.1.2.44 免疫疫组化检检测CAAR的表表达: 严格采用用免疫组组化 SSP法试试剂盒进进行检测测,随机机挑选裸裸鼠制作作组织切切片；将将封闭好好的切片片用 PPBS洗洗涤3 minn 3次；用 55%的正正常羊血血清于室室温下封封闭非特特异性抗抗
22、原 115 mmin；弃去多多余的血血清,滴滴加适当当稀释的的一抗 (1：50)，在湿湿盒内44 冰箱过过夜，隔隔日室温温复温11h后用用 PBBS洗涤涤3 mmin 3次 ,滴加加适当二二抗（11:2000）孵育330miin。阴阴性对照照用PBBS代替替一抗。显显色、脱水、封封片。1.2.55：免疫组组化结果果判断：采用高高清晰图图像处理理系统，随随机取55个高倍倍视野进进行定量量分析，对对免疫组组化检测测CARR蛋白阳阳性信号号面积，求求出CAAR的表表达量55。1.2.66 RT-PCRR检测CCARmmRNAA的表达达：取 2535mmg移植植瘤加入入1 mmL TTrizzol,用
23、研磨磨器研磨磨成匀浆浆，室温放置置15mmin，严严格参照照Triizoll试剂盒盒说明书书从分组组并处理理好的组织中提取总总RNAA。以随随机六合合引物11l做逆逆转录引引物， 2lRNNA在AAMV的的作用下下合成ccDNAA第一链链后以-acttin为为内参照照进行PPCR反反应, -acttin，F：55-AAAATCCTGGGCACCCACCACCCTT-3，RR：5-TAGGCACCAGCCCTGGGATTAGCCAA-3，产产物大小小为1770bpp。CAAR, F：55-TTTCAGGGTGGCGAAGATTGTTTA-33, R：55- GAAATGAATTAACTGGCCG
24、GATGG-3，产物大大小为4460bbp（引引物序列列设计合合成均由由上海生生工完成成）。所有操操作严格格按照RRT-PPCR试试剂盒说说明书进进行，PCRR反应条条件：99530ss， 5430 s, 741 mmin，330个循循环，最最后722C延延伸100minn。PCCR 产产物各22l在11.5%琼脂糖糖凝胶中中电泳。凝凝胶成像像仪扫描描后分析条带带峰面积积来检测CAARmRRNA的的表达水水平。每组至少少重复33次。1.2.7 Westeern-blootinng/检检测CAAR 的的表达：参照分分子克隆隆实验指指南提提取肿瘤瘤组织总总蛋白，测测定浓度度后，在在标准蛋蛋白曲线线
25、下算出出50g 蛋蛋白上样样量，以以B-aactiin为内内参照，wwestternn-bllot检检测各组组肿瘤细细胞表面面CARR蛋白表达达。500g上样样量蛋白白分别用用8%、112% SDSS-聚丙丙烯酰胺胺凝胶进进行垂直直电泳分分离后，用“三明治法”转移至PVDF膜上，用含50g/L牛血清白蛋白（Bovine Serum Albumin，BSA）摇床封闭三小时，加入兔抗人CAR单克隆抗体4冰箱过夜。用TBST洗涤3次后加入1：5000稀释的二抗孵育1小时后化学发光法进行X线胶片曝光显影。以-actin抗体作为上样对照。结果用Gel-Doc图像分析软件检测各条带的灰度值，将各处理组的灰
26、度值与对照组灰度值比较分析。每组至少重复3次。1.3统计计学处理理 应用SPSSS 111.00统计软软件进行行统计学学处理，计计量资料料采用均均数标标准差（S）表示示；两组组均数的的比较用用t检验验（t-ttestt）；两组组以上均均数的比比较用方方差分析析（ANNVOAA）；以以=00.055为显著著性标准准。 2结果2.1 裸裸鼠食管管癌移植植瘤各组组生长情情况先成瘤后处处理组各治疗组裸裸鼠移植植瘤体积积均小于于空白对对照组，TSA和H101治疗组两组之间瘤体积差别不大。TSA和H101联合治疗组裸鼠移植瘤体积减小最明显，与其它各组差异明显。见图1和图2。 A空白对照照组 BB H110
27、1治治疗组CC TSSA治疗疗组 DD TSSA和HH1O11联合治治疗组 A空白对对照组 B HH1011治疗组组C TSAA治疗组组D TTSA和和H1OO1联合合治疗组组图1各组裸裸鼠成瘤瘤大体照照片 图2 取出出的各组组瘤组织织A空白对照照组 BB H1001治疗疗组 CC TSAA治疗组组 D TSAA和H11O1联联合治疗疗组 各组组裸鼠移移植瘤终终体积数数据经统统计分析析，各治治疗组与与空白对对照组相相比，差差异均有有统计学学意义（P0.05）,治疗组组内两两比较结果显示，TSA、H101单独治疗组分别与联合治疗组有明显差异（P0.05）结果见图3。结果显示，TSA和H101联合
28、组肿瘤体积明显缩小，二者联合治疗组效果最显著。*与空白对对照组相相比P0.05，#与各组组间相比比P0.05图3 各组组裸鼠治治疗前后后肿瘤体体积的比比较先处理后成成瘤组各处理细胞胞组与空空白对照照组相比比，肿瘤瘤体积均均小于空空白对照照组，TTSA和和H1001处理理组之间间瘤体积积差别不不大。TTSA和和H1001联合合处理组组裸鼠移移植瘤体体积减小小最明显显，与其其它各组组差异明明显。见见图4和图5。 图4各组裸裸鼠成瘤瘤大体照照片 图55 取出出的各组组瘤组织织各组间肿瘤瘤标本的的平均重重量相比比较，各各处理组组与空白白对照组组相比，差差异均有有统计学学意义（P0.05）,处理组内两两
29、比较结果显示，TSA、H101单独处理细胞组分别与联合处理细胞组有明显差异（P0.05）,结果见图6-1和图6-2，结果显示，TSA和H101联合处理组肿瘤重量下降明显，以二者联合处理组效果最显著。*与空白对对照组相相比P0.05，#与各组组间相比比P0.05图6-1各各组间肿肿瘤标本本的平均均重量比比较 图图6-22 各组肿瘤瘤的抑制制率2.2免疫疫组化裸裸鼠食管管癌移植植瘤组织织中CAAR蛋白白表达情情况裸鼠移植瘤瘤组织免免疫组化化 SPP法染色色后 ,可看到到 TSSA组和和TSAA、H1101联联合组CCAR蛋蛋白在移移植瘤细细胞的表表达主要要表现为为胞膜着着色为黄黄色，对对照组和和H
30、1001组几几乎不着着色，可可见经过过TSAA作用后后移植瘤瘤细胞中中的CAAR蛋白白的水平平得到有有效上调调。见彩图7。由图8-1和和8-2可知知，无论论是先成成瘤后治治疗还是是先处理理细胞后后成瘤，相比于对照组，TSA和TSA、H101 联合组CAR的表达量差异均有统计学意义（P0.05）。TSA、H101单独作用相比，CAR蛋白的表达量其差异有统计学意义（P0.05）。 A B C DD 图7 人食食管癌裸裸鼠移植植瘤组织织中CAAR蛋白白的表达达。A:空白对对照组CCAR表表达阴性性（spp 4000） B:H1001治疗疗组CAAR表达达阴性（ sp4000） CC:TSSA治疗疗组
31、CAAR表达达阳性（sp 400） D:二者联合治疗组CAR表达阳性（sp 400） *与空白对对照组相相比P0.05，#与H1101组组相比P0.05 *与空白白对照组组相比PP0.05，#与H1101组组相比P0.05图8-1先先成瘤后后治疗各各组CAAR蛋白白的表达达 图88-2先先处理细细胞后成成瘤各组组CARR蛋白的的表达2.3移植植瘤组织织 R-T PPCR鉴鉴定CAAR mmRNAA的表达达情况无论是先成成瘤后治治疗还是是先处理理细胞后后成瘤，相相比于对对照组，TTSA和和TSAA、H1101 联合组组 CARR mRRNA的的表达量量差异均均有统计计学意义义（P0.05），TS
32、A、H101单独作用相比，CAR mRNA的表达量其差异有统计学意义（P0.05）。见图9-1和9-2。图9-1 RT-PCRR检测移移植瘤组组织 CCARmmRNAA表达Figurre6 RT-PCRR deetecctioon oof CCAR mRNNA eexprresssionn inn trranssplaanteed ttumoor massslane A：cconttroll grroupp lanne BB:H1101ccureed ggrouup lanee C：TSAA cuuredd grroupp laane D:TTSA andd H1101 commbinned
33、curremeent grooup图9-2 RT-PCRR检测移移植瘤组组织 CCARmmRNAA表达Figurre7 RT-PCRR deetecctioon oof CCARmmRNAA exxpreessiion in traanspplanntedd tuumorr mmassslane A：coontrrol grooup lanne B：H1101ttreaatedd grroupp laane C ：TTSA treeateed ggrouup lanne DD :TTSA andd H1101 commbinned treeatmmentt grroupp2.4 WWestte
34、rnn-bllotiing检检测CAAR 蛋蛋白表达达情况无论是先成成瘤后治治疗还是是先处理理细胞后后成瘤，相相比于对对照组，TTSA和和TSAA、H1101 联合组组CARR的表达达量差异异均有统统计学意意义（PP0.05）。与TSA、H101单独作用组相比，CAR蛋白的表达量其差异有统计学意义（P0.05）。这与R-T PCR鉴定结果趋势相一致。见图10-1和10-2。图10-11 Weesteern-blootinng检测测移植瘤瘤组织 CARR表达Figurre8 Weesteern-blootinng ddeteectiion of CARR exxpreessiion in tra
35、anspplanntedd tuumorr massslane A：cconttroll grroupp laane B:HH1011curred grooup lane C：TTSA curred grooup laane D:TTSA andd H1101 commbinned curremeent grooup图10-22 Wessterrn-bblottingg检测移移植瘤组组织 CCAR表表达Figurre9 Weesteern-blootinng ddeteectiion of CARR exxpreessiion in traanspplanntedd tuumorr masss
36、lane A：coontrrol grooup lanne BB：H1101ttreaatedd grroupp laane C ：TTSA treeateed ggrouuplane D :TTSA andd H1101 commbinned treeatmmentt grroupp3 讨论目前，病毒毒溶瘤作作用的研研究越来来越受到到重视，随随着人们们对病毒毒认识的的不断加加深和 DNAA 重组组技术的的发展，人人们通过过基因工工程改造造使病毒毒具有更更高的安安全性和和抗癌活活性。复复制选择择性腺病病毒(RRepllicaatioon-sseleectiive adeenovviruuses
37、s)即溶瘤腺腺病毒就就是一种通过过遗传工工程改造造使其改改造后能能通过特特异性在在肿瘤细细胞中复复制、裂裂解肿瘤瘤细胞，而而对正常常的细胞胞无杀伤伤力的溶溶瘤病毒毒，H1101就就是利用用基因工工程技术术对人 5型腺腺病毒AAd5进进行基因因重组得得到的一一种溶瘤瘤腺病毒毒，能直接接在肿瘤瘤细胞中中复制、包包装，导致肿肿瘤细胞胞最终裂裂解。但但是临床床试验研研究表明明，单一一的使用用疗效不不佳，其其原因在在于病毒毒的转导导效率低低下。腺腺病毒要要感染靶靶细胞，病病毒衣壳壳蛋白的的fibber蛋蛋白首先先要和靶靶细胞表表面的CCAR受受体结合合，完成成病毒-细胞的的识别(ideentiificc
38、atiion)过程，这一步至关重要，多数肿瘤细胞特别是恶性肿瘤细胞CAR往往低表达甚至缺如，这就间接地导致腺病毒基因治疗效果下降甚至无效6-7。TSA是HDAC抑制剂的代表药物之一，HDAC抑制剂由于抑制了HDAC的活性，使靶细胞中组蛋白高度乙酰化，通过乙酰化修饰改变了DNA链间与组蛋白的结合状态，使染色体结构变得疏松，从而通过抑制转录因子与DNA的结合而改变基因的转录。TSA作为一类抗肿瘤药物，在血液病肿瘤和实体肿瘤中均具有强大的抗肿瘤活性，以前认为TSA的抗瘤作用主要是通过抑制肿瘤细胞生长和诱导其凋亡而实现的8。但最新研究显示TSA可以上调一系列黏附分子的表达包括CAR。CAR最早是作为细
39、胞表面的病毒受体为人们所认识，1997年发现的柯萨奇腺病毒受体(Coxsackie adenovirus receptor，CAR )是 Ad5和 Ad2的受体，CAR在不同组织来源肿瘤细胞中的表达水平很不相同，即使在同一组织来源的肿瘤细胞中差异也很明显, 这种差异有可能影响了腺病毒的转导效率,从而影响以腺病毒为载体的基因治疗药物在不同肿瘤类型甚至同种肿瘤的不同个体中的疗效。CAR作为一种粘附分子已被证实与肿瘤的运动和侵袭力相关，所以，我们推测上调细胞表面的CAR表达水平对治疗肿瘤有疗效，那么TSA联合溶瘤腺病毒H101治疗肿瘤能否提高疗效？因此在本实验中，我们选择TSA、H101及两者联合治
40、疗人食管癌裸鼠皮下移植瘤，结果显示各组裸鼠移植瘤终体积数据经统计分析，各治疗组与空白对照组相比，差异均有统计学意义（P0.05）,治疗组组内两两比较结果显示，TSA、H101单独治疗组分别与联合治疗组有明显差异（P0.05），而肿瘤组织CAR的表达情况显示无论是先成瘤后治疗还是先处理细胞后成瘤，相比于对照组，TSA和TSA、H101 联合组CAR的表达量差异均有统计学意义（P0.05）。与TSA、H101单独作用相比，CAR蛋白的表达量其差异有统计学意义（P0.05）。所有结果显示TSA和H101两者联合治疗效果明显提高。这对指导腺病毒治疗食管癌等恶性肿瘤提供了一个新的思路。参考文献：1 Wa
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44、cckiee annd aadennoviiruss reecepptorr reeducces thee luung mettasttatiicpotenntiaal oof mmuriine tummor cellls.J Innt. J. Canncerr: 220077,1221, 16990116966. 8 Kittazoono, M., GGolddsmiith, M. E., AAikoou, T., Baatess, SS., andd Foojo, T. Enhhanccedaadennoviiruss trranssgenne iin mmaliignaant cellls treeateed wwithh thhe hhisttonee deaacettylaase inhhibiitorrFR99012228. C