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1、指导原则编号：【H】GPH5-1化学药物质量控控制分析方法法验证技术指导原则二四年十一一月目 录一、概述1二、方法验证的的一般原则2三、方法验证涉涉及到的三个个主要方面2（一）需要验证证的检测项目目2（二）分析方法法3（三）验证内容容3四、方法验证的的具体内容3（一）专属性31、鉴别反应32、杂质检查43、含量测定4（二）线性55（三）范围551、含量测定52、制剂含量均均匀度53、溶出度或释释放度64、杂质6（四）准确度61、含量测定62、杂质定量试试验7（五）精密度71、重复性772、中间精密度度83、重现性88（六）检测限81、直观法882、信噪比法8（七）定量限91、直观法992、信噪
2、比法9（八）耐用性10（九）系统适用用性试验10五、方法再验证证10六、方法验证的的评价11（一）有关方法法验证评价的的一般考虑11（二）方法验证证的整体性和和系统性12七、参考文献12八、著者122化学药物质量控控制分析方法法验证技术指指导原则起草草说明13化学药物质量控控制分析方法法验证技术指指导原则一、概述保证药品安全、有有效、质量可可控是药品研研发和评价应应遵循的基本本原则，其中中，对药品进进行质量控制制是保证药品品安全有效的的基础和前提提。为达到控控制质量的目目的，需要多多角度、多层层面来控制药药品质量，也也就是说要对对药物进行多多个项目测试试，来全面考考察药品质量量。一般地，每每一
3、测试项目目可选用不同同的分析方法法，为使测试试结果准确、可可靠，必须对对所采用的分分析方法的科科学性、准确确性和可行性性进行验证，以以充分表明分分析方法符合合测试项目的的目的和要求求，这就是通通常所说的对对方法进行验验证。方法验证的目的的是判断采用用的分析方法法是否科学、合合理，是否能能有效控制药药品的内在质质量。从本质质上讲，方法法验证就是根根据检测项目目的要求，预预先设置一定定的验证内容容，并通过设设计合理的试试验来验证所所采用的分析析方法能否符合检测测项目的要求求。方法验证在分析析方法建立过过程中具有重重要的作用，并并成为质量研研究和质量控控制的组成部部分。只有经经过验证的分分析方法才能
4、能用于控制药药品质量，因因此方法验证证是制订质量量标准的基础础。方法验证证是药物研究究过程中的重重要内容。本指导原则重点点探讨方法验验证的本质，将将分析方法验验证的要求与与所要达到的的目的结合起起来进行系统统和规律性的的阐述，重点点阐述如何科科学合理地进进行论证方案案的设计。本指导原则主要要包括方法验验证的一般原原则、方法验验证涉及的三三个主要方面面、方法验证证的具体内容容、对方法验验证的评价等等内容。本原则与其他相相关技术指导导原则一起构构成较完整的的质量控制指指导原则。随着我国新药研研发水平的不不断提高，对对方法验证的的认识也会不不断深入，本本指导原则将将会逐步完善善和修订。由于生物制品和
5、和中药的特殊殊性，本原则则主要适用于于化学药品。二、方法验证的的一般原则原则上每个检测测项目采用的的分析方法，均均需要进行方方法验证。方法验证的内容容应根据检测测项目的要求求，结合所采采用分析方法法的特点确定定。同一分析方法用用于不同的检检测项目会有有不同的验证证要求。例如如，采用高效效液相色谱法法用于制剂的的鉴别和杂质质定量试验应应进行不同要要求的方法验验证，前者重重点要求验证证专属性，而而后者重点要要求验证专属属性、准确度度、定量限。三、方法验证涉涉及的三个主主要方面（一）需要验证证的检测项目目检测项目是为控控制药品质量量，保证安全全有效而设定定的测试项目目。根据检测测项目的设定定目的和验
6、证证内容的不同同要求，本指指导原则将需需验证的检测测项目分为鉴鉴别、杂质检检查（限度试试验、定量试试验）、定量量测定（含量量测定、溶出出度、释放度度等）、其他他特定检测项项目等四类。鉴别的目的在于于判定被分析析物是目标化化合物，而非非其它物质，用用于鉴别的分分析方法要求求具有较强的的专属性。杂质检查主要用用于控制主成成分以外的杂杂质，如有机机杂质、无机机杂质等。杂杂质检查可分分为限度试验验和定量试验验两种情况。用用于限度试验验的分析方法法验证侧重专专属性和检测测限。用于定定量试验的分分析方法验证证强调专属性性、准确度和和定量限。定量测定包括含含量测定、制制剂的溶出度度测定等，由由于此类项目目对
7、准确性要要求较高，故故所采用的分分析方法要求求具有一定的的专属性、准准确度和线性性。其他特定检测项项目包括粒径径分布、旋光光度、分子量量分布等，由由于这些检测测项目的要求求与鉴别、杂杂质检查、定定量测定等有有所不同，对对于这些项目目的分析方法法验证应有不不同的要求。（二）分析方法法本指导原则所指指分析方法是是为完成上述述各检测项目目而设定和建建立的测试方方法，一般包包括分析方法法原理、仪器器及仪器参数数、试剂、系系统适用性试试验、供试品品溶液制备、对对照品溶液制制备、测定、计计算及测试结结果的报告等等。测试方法可采用用化学分析方方法和仪器分分析方法。这这些方法各有有特点，同一一测试方法可可用于
8、不同的的检测项目，但但验证内容可可不相同。（三）验证内容容验证内容包括方方法的专属性性、线性、范范围、准确度度、精密度、检检测限、定量量限、耐用性性和系统适用用性等。四、方法验证的的具体内容（一）专属性专属性系指在其其他成分（如如杂质、降解解物、辅料等等）可能存在在下，采用的的分析方法能能够正确鉴定定、检出被分分析物质的特特性。通常，鉴别、杂杂质检查、含含量测定方法法中均应考察察其专属性。如如采用的方法法不够专属，应应采用多个方方法予以补充充。1、鉴别反应鉴别试验应确证证被分析物符符合其特征。专专属性试验要要求证明能与与可能共存的的物质或结构构相似化合物物区分，需确确证含被分析析物的供试品品呈
9、正反应，而而不含被测成成分的阴性对对照呈负反应应，结构相似似或组分中的的有关化合物物也应呈负反反应。2、杂质检查 作为纯纯度检查，所所采用的分析析方法应确保保可检出被分分析物中杂质质的含量，如如有关物质、重重金属、有机机溶剂等。因因此杂质检查查要求分析方方法有一定的的专属性。在杂质可获得的的情况下，可可向供试品中中加入一定量量的杂质，证证明杂质与共共存物质能得得到分离和检检出，并具适适当的准确度度与精密度。在杂质或降解产产物不能获得得的情况下，专专属性可通过过与另一种已已证明合理但但分离或检测测原理不同、或或具较强分辨辨能力的方法法进行结果比比较来确定。或或将供试品用用强光照射，高高温，高湿，
10、酸酸、碱水解及及氧化的方法法进行破坏（制制剂应考虑辅辅料的影响），比比较破坏前后后检出的杂质质个数和量。必必要时可采用用二极管阵列列检测和质谱谱检测，进行行色谱峰纯度度检查。3、含量测定含量测定目的是是得到供试品品中被分析物物的含量或效效价的准确结结果。 在杂质质可获得的情情况下，对于于主成分含量量测定可在供供试品中加入入杂质或辅料料，考察测定定结果是否受受干扰，并与与未加杂质和和辅料的供试试品比较测定定结果。在杂质或降解产产物不能获得得的情况下，可可采用另一个个经验证了的的或药典方法法进行比较，比比对两种方法法测定的结果果。也可采用用破坏性试验验（强光照射射，高温，高高湿，酸、碱碱水解及氧化
11、化），得到含含有杂质或降降解产物的试试样，用两种种方法进行含含量测定比较较测定结果。必必要时进行色色谱峰纯度检检查，证明含含量测定成分分的色谱峰中中不包含其他他成分。（二）线性线性系指在设计计的测定范围围内，检测结结果与供试品品中被分析物物的浓度（量量）直接呈线线性关系的程程度。线性是定量测定定的基础，涉涉及定量测定定的项目，如如杂质定量试试验和含量测测定均需要验验证线性。应在设计的测定定范围内测定定线性关系。可可用一贮备液液经精密稀释释，或分别精精密称样，制制备一系列被被测物质浓度度系列进行测测定，至少制制备5个浓度度。以测得的的响应信号作作为被测物浓浓度的函数作作图，观察是是否呈线性，用用
12、最小二乘法法进行线性回回归。必要时，响应信信号可经数学学转换，再进进行线性回归归计算，并说说明依据。（三）范围范围系指能够达达到一定的准准确度、精密密度和线性，测测试方法适用用的试样中被被分析物的高高低限浓度或或量的区间。范围是规定值，在在试验研究开开始前应确定定验证的范围围和试验方法法。可以采用用符合要求的的原料药配制制成不同的浓浓度，按照相相应的测定方方法进行试验验。范围通常用与分分析方法的测测试结果相同同的单位（如如百分浓度）表表达。涉及到到定量测定的的检测项目均均需要对范围围进行验证，如如含量测定、含含量均匀度、溶溶出度或释放放度、杂质定定量试验等。范围应根据剂型型和（或）检检测项目的
13、要要求确定。1、含量测定范围应为测试浓浓度的80100或更宽。2、制剂含量均均匀度范围应为测试浓浓度的70130。根据剂型型特点，如气气雾剂、喷雾雾剂，必要时时，范围可适适当放宽。3、溶出度或释释放度对于溶出度，范范围应为限度度的20；如如规定限度范范围，则应为为下限的-220至上限限的+20。对于释放度，如如规定限度范范围为，从11小时后为220至244小时后为990，则验验证范围应为为01100。4、杂质杂质测定时，范范围应根据初初步实测结果果，拟订出规规定限度的20。如如果含量测定定与杂质检查查同时测定，用用面积归一化化法，则线性性范围应为杂杂质规定限度度的-20至含量限度度（或上限）的
14、的+20。（四）准确度准确度系指用该该方法测定的的结果与真实实值或认可的的参考值之间间接近的程度度。有时也称称真实度。一定的准确度为为定量测定的的必要条件，因因此涉及到定定量测定的检检测项目均需需要验证准确确度，如含量量测定、杂质质定量试验等等。准确度应在规定定的范围内建建立，对于制制剂一般以回回收率试验来来进行验证。试试验设计需考考虑在规定范范围内，制备备3个不同浓浓度的试样，各各测定3次，即即测定9次，报报告已知加入入量的回收率率（）或测测定结果平均均值与真实值值之差及其可可信限。1、含量测定原料药可用已知知纯度的对照照品或符合要要求的原料药药进行测定，或或用本法所得得结果与已建建立准确度
15、的的另一方法测测定的结果进进行比较。制剂可用含已知知量被测物的的各组分混合合物进行测定定。如不能得得到制剂的全全部组分，可可向制剂中加加入已知量的的被测物进行行测定，必要要时，与另一一个已建立准准确度的方法法比较结果。2、杂质定量试试验杂质的定量试验验可向原料药药或制剂中加加入已知量杂杂质进行测定定。如果不能能得到杂质，可可用本法测定定结果与另一一成熟的方法法进行比较，如如药典方法或或经过验证的的方法。如不能测得杂质质的相对响应应因子，可在在线测定杂质质的相关数据据，如采用二二极管阵列检检测器测定紫紫外光谱，当当杂质的光谱谱与主成分的的光谱相似，则则可采用原料料药的响应因因子近似计算算杂质含量
16、（自自身对照法）。并并应明确单个个杂质和杂质质总量相当于于主成分的重重量比（）或或面积比（）。（五）精密度精密度系指在规规定的测试条条件下，同一一均质供试品品，经多次取取样进行一系系列检测所得得结果之间的的接近程度（离离散程度）。精密度一般用偏偏差、标准偏偏差或相对标标准偏差表示示。用标准偏偏差或相对标标准偏差表示示时，取样测测定次数应至至少6次。精密度可以从三三个层次考察察：重复性、中中间精密度、重重现性。1、重复性重复性系指在同同样的操作条条件下，在较较短时间间隔隔内，由同一一分析人员测测定所得结果果的精密度。重复性测定可在在规定范围内内，至少用99次测定结果果进行评价，如如制备3个不不同
17、浓度的试试样，各测定定3次，或1100的浓浓度水平，用用至少测定66次的结果进进行评价。2、中间精密度度中间精密度系指指在同一实验室，由于于实验室内部条条件改变，如如时间、分析析人员、仪器器设备、测定定结果的精密密度。验证设计方案中中的变动因素素一般为日期期、分析人员员、设备。3、重现性指不同实验室之之间不同分析析人员测定结结果的精密度度。当分析方法将被被法定标准采采用时，应进进行重现性试试验。（六）检测限检测限系指试样样中的被分析析物能够被检检测到的最低低量，但不一一定要准确定定量。该验证指标的意意义在于考察察方法是否具具备灵敏的检检测能力。因因此对杂质限限度试验，需需证明方法具具有足够低的
18、的检测限，以以保证检出需需控制的杂质质。1、直观法 直观评价可以用用于非仪器分分析方法，也也可用于仪器器分析方法。检测限的测定是是通过对一系系列已知浓度度被测物的试试样进行分析析，并以能准准确、可靠检检测被测物的的最小量或最最低浓度来建建立。2、信噪比法用于能显示基线线噪音的分析析方法，即把把已知低浓度度试样测出的的信号与噪声声信号进行比比较，计算可可检出的最低低浓度或量。一一般以信噪比比为3：1时时相应的浓度度或注入仪器器的量确定检检测限。其他方法有基于于工作曲线的的斜率和响应应的标准偏差差进行计算的的方法等。无论用何种方法法，均应用一一定数量的试试样，其浓度度为近于或等等于检测限，进进行分
19、析，以以可靠地测定定检测限。（七）定量限定量限系指试样样中的被分析析物能够被定定量测定的最最低量，其测测定结果应具具有一定的准准确度和精密密度。定量限体现了分分析方法是否否具备灵敏的的定量检测能能力。杂质定定量试验，需需考察方法的的定量限，以以保证含量很很少的杂质能能够被准确测测出。常用信噪比法确确定定量限。一一般以信噪比比为10：11时相应的浓浓度或注入仪仪器的量进行行确定。1、直观法 直观评价可以用用于非仪器分分析方法，也也可用于仪器器分析方法。定量限一般通过过对一系列含含有已知浓度度被测物的试试样进行分析析，在准确度度和精密度都都符合要求的的情况下，来来确定被测物物能被定量的的最小量。2
20、、信噪比法用于能显示基线线噪音的分析析方法，即把把已知低浓度度试样测出的的信号与噪声声信号进行比比较，计算出出可检出的最最低浓度或量量。一般可信信噪比为100：1。其他方法有基于于工作曲线的的斜率和响应应的标准偏差差进行计算的的方法等。无论用何种方法法，均应用一一定数量的试试样，其浓度度为近于或等等于定量限，进进行分析，以以可靠地测定定定量限。 （八）耐用性耐用性系指测定定条件发生小小的变动时，测测定结果不受受影响的承受受程度。耐用性主要考察察方法本身对对于可变试验验因素的抗干干扰能力。开开始研究分析析方法时，就就应考虑其耐耐用性。如果果测试条件要要求苛刻，则则建议在方法法中予以写明明。典型的
21、变动因素素包括：液相相色谱法中流流动相的组成成、流速和ppH值、不同同厂牌或不同同批号的同类类型色谱柱、柱柱温等。气相相色谱法中载载气及流速、不不同厂牌或批批号的色谱柱柱、固定相、担担体、柱温、进进样口和检测测器温度等。经试验，应说明明小的变动能能否符合系统统适用性试验验要求，以确确保方法有效效。（九）系统适用用性试验对一些仪器分析析方法，在进进行方法验证证时，有必要要将分析设备备、电子仪器器与实验操作作、测试样品品等一起当作作完整的系统统进行评估。系系统适用性便便是对整个系系统进行评估估的指标。系系统适用性试试验参数的设设置需根据被被验证方法类类型而定。色谱方法对分析析设备、电子子仪器的依赖
22、赖程度较高，因因此所有色谱谱方法均应进进行该指标验验证，并将系系统适用性作作为分析方法法的组成部分分。具体验证证参数和方法法参考中国药药典有关规定定。五、方法再验证证在某些情况下，如如原料药合成成工艺改变、制制剂处方改变变、分析方法法发生部分改改变等，均有有必要对分析析方法再次进进行全面或部部分验证，以以保证分析方方法可靠，这这一过程称为为方法再验证证。再验证原则：根根据改变的程程度进行相应应的再验证。当原料药合成工工艺发生改变变时，可能引引入新的杂质质，杂质检查查方法和含量量测定方法的的专属性就需需要再进行验验证，以证明明有关物质检检查方法能够够检测新引入入的杂质，且且新引入的杂杂质对主成份
23、份的含量测定定应无干扰。当制剂的处方组组成改变、辅辅料变更时，可可能会影响鉴鉴别的专属性性、溶出度和和含量测定的的准确度，因因此需要对鉴鉴别、含量测测定方法再验验证。当原料料药产地来源源发生变更时时，可能会影影响杂质检查查和含量测定定的专属性和和准确度，因因此需要对杂杂质检查方法法和含量测定定方法进行再再验证。当质量标准中某某一项目分析析方法发生部部分改变时，如如采用高效液液相色谱法测测定含量时，检检测波长发生生改变，则需需要重新进行行检测限、专专属性、准确确度、精密度度、线性等内内容的验证，证证明修订后分分析方法的合合理性、可行行性。同样，已有国家家标准的药品品质量研究中中，基于申报报的原料
24、药合合成工艺、制制剂处方中的的辅料等一般般无法保证与与已上市药品品的一致性，需需对质量标准准中部分项目目进行方法的的再验证。方法再验证是对对分析方法的的完善过程，应应根据实际改改变情况进行行再验证，从从而保证所采采用的分析方方法能够控制制药品的内在在质量。六、对方法验证证的评价对于方法验证，有有以下几个方方面值得关注注。（一）有关方法法验证评价的的一般考虑总体上，方法验验证应围绕验验证目的和一一般原则来进进行，方法验验证内容的选选择和试验设设计方案应系系统、合理，验验证过程应规规范严谨。并非每个检测项项目的分析方方法都需进行行所有内容的的验证，但同同时也要注意意验证内容应应充分，足以以证明采用
25、的的分析方法的的合理性。如如杂质限度试试验一般需要要验证专属性性和检测限，而而对于精密度度、线性、定定量限等涉及及定量测定的的项目，则一一般不需要进进行验证。（二）方法验证证的整体性和和系统性方法验证内容之之间相互关联联，是一个整整体。因此不不论从研发角角度还是评价价角度，方法法验证均注重重整体性和系系统性。例如，对于鉴别别项目所需要要的专属性，一一般一种分析析方法不太可可能完全鉴别别被分析物，此此时采用两种种或两种以上上分析方法可可加强鉴别项项目的整体专专属性。在方法验证内容容之间也存在在较多的关联联性，可以相相互补充。如如原料药含量量测定采用容容量分析法时时，由于方法法本身原因，专专属性略
26、差，但但假如在杂质质检测时采用用了专属性较较强的色谱法法，则一般认认为整个检测测方法也具有有较强的专属属性。总之，由于实际际情况较复杂杂，在方法验验证过程中，不不提倡教条地地去进行方法法验证。此外外，越来越多多的新方法不不断被用于质质量控制中，对对于这些方法法如何进行验验证需要具体体情况具体分分析，而不能能照搬本指导导原则。七、参考文献1. FDA.Guiidancee for Indusstry:aanalyttical proceeduress and methoods vaalidattion,cchemisstry,mmanufaacturiing,annd conntrolss do
27、cuumentaation(Draftt), 20000.8。2. ICH Q2AA.Testt on VValidaation of Annalytiical PProceddures3. ICH Q2BB.Validaation of Annalytiical PProceddures:Methoodologgy4.中国药典22000年版版二部附录.药品质量标标准分析方法法验证八、著者化学药物质量控控制分析方法法验证技术指指导原则课题题研究组化学药物质量控控制分析方法法验证技术指指导原则起草草说明一、背景资料关于方法验证，美美国、欧盟等等药政管理当当局出台了相相关指导性文文件，对方法法验证
28、的具体体内容进行了了阐述和规定定1-3，中国药典典2000年年版二部附录录亦收载了药药品质量标准准分析方法验验证内容44。为药品品研发和注册册申请提供技技术指导。但目前我国药物物研究中，在在质量研究部部分，方法学学验证方面还还存在较多的的问题，主要要表现在：方方法验证设计计不科学、验验证不充分、试试验过程不规规范、验证数数据不合理、忽忽视方法再验验证等。产生上述问题的的原因之一是是，已有的国国内外指导原原则主要告知知研发者如何何做，却较少少阐述深层次次的原因，研研发者在药物物研究时往往往不知技术要要求背后深层层次的原因。针对这种情况，本本指导原则重重点探讨方法法验证的本质质，将分析方方法验证的
29、要要求与所要达达到的目的结结合起来进行行系统和规律律性的阐述，重重点阐述如何何科学合理地地进行论证方方案的设计，希希望能对研发发提供技术参参考。二、本指导原则则内容设置的的考虑本指导原则包括括方法验证的的一般原则、方方法验证涉及及的三个主要要方面、方法法验证的具体体内容、对方方法验证的评评价等内容。内内容编排上，先先阐述方法验验证的一般规规律和基本要要素，然后对对方法验证的的具体内容进进行阐述，以以对一般规律律有更深刻的的理解。对方方法验证的评评价体现了药药物研究的整整体性和系统统性，符合药药物研究规律律，希望从评评价角度给研研发者以有益益的启示。三、方法验证的的一般原则该部分内容重点点阐述对
30、方法法验证的一般般认识和原则则要求。强调调验证内容应应根据检测项项目的要求，同同时考虑所采采用分析方法法的特点来进进行。根据验证内容的的不同要求，本本文将检测项项目分成鉴别别、杂质检查查、定量测定定、其他特定定检测项目等等四类，简要要叙述了各自自特点及对方方法验证的要要求。本文所采取的分分类方式是参参考了FDAA有关指导原原则1的分类类，经重庆会会议讨论后确确定。四、方法验证的的具体内容此部分内容以验验证内容为主主线，明确各各验证内容的的含义，根据据检测项目的的不同类型和和要求，具体体阐述方法验验证的试验设设计思路。此此部分主要内内容参考了国国内外有关文文献1-44，并结合合了实际情况况加以制
31、订。五、关于方法再再验证在实际审评工作作中，该方面面遇到了较多多的问题，因因此单列一节节，希望引起起研发企业的的重视。原料料药的合成路路线改变、制制剂处方改变变；已有国家家标准药品如如何进行方法法验证的问题题；检测方法法发生部分改改变时；本节节以上述情况况举例说明如如何进行方法法再验证六、对方法验证证的评价此部分内容主要要阐述了评价价方法验证的的基本观点，注注重方法验证证的整体性和和综合性。也也希望通过该该部分撰写启启发研发企业业系统地进行行方法验证。七、与其他指导导原则的关联联性问题本指导原则与质质量标准建立立、有机溶剂剂研究、杂质质研究等相关关指导原则具具有相关性，不不应孤立地看看待本指导原原则。14