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1、人胃癌裸鼠原位种植转移模型的建立 姜氏抗癌散号对裸鼠原位人胃癌模型抗癌作用的实验研究 摘要：目的：探讨姜氏抗癌散号的扶正祛邪，清热解毒，攻下祛症，活血化瘀，通络祛积法，抑制肿瘤作用和其对血液系统和脾、对鼠体的影响。方法：将40只裸鼠原位移植人胃癌MKN45瘤株（中国科学院上海动物试验供应的裸鼠分成4组）。第1组：比照组10只；第2组：5Fu阳性比照组；第3组：姜氏抗癌散号（KW号）20mL/Kg；第4组：姜氏抗癌散号（KW号）25mL/Kg。视察抑制肿瘤作用体重改变。结果：人胃癌MKN45：KW号20mL/kg组、KW号25mL/kg组、5FU抑瘤率分别为36.8%、64.8%、61.6%；3
2、1天以后3组平均始终体重分别为（16.5g/23.71g）、（16.8g/23.81g）、（16.6g/20.72g）和比照组（16.8/24.10）。结论：接着30天服用KW25mL/kg中药组对裸鼠原位人胃癌MKN45组有特别明显的抑制率。而且中药组在增加体重上没有化疗组样明显下降，但化疗组比别的组体重下降15%以上，其说明5Fu化疗对鼠体的不良影响明显。 关键词：姜氏抗癌散I号、号及号；抑制肿瘤；脾系数；体重改变 中图分类号：R-33文献标识码：A 文章编号：1673-7717(2007)04-0793-02 姜氏抗癌散号是依据中医的扶正祛邪，攻下祛瘀，通络祛积，整体理论和西医抑制肿瘤血
3、管生长理论总结出来的治疗消化道恶性肿瘤的复方，经笔者临床初步应用取得了肯定的疗效。为了进一步探讨和开发本方在临床上广泛的应用，提高抗癌药效和减轻化疗的副作用，进行试验探讨。 1材料和方法 11动物和癌株BALB/C（nu/nu）裸鼠；由上海斯莱克试验动物有限责任公司，许可证号：SCXK（沪）2003-0003。裸鼠饲养在中国科学院上海试验动物中心，运用许可证号：SYXK（沪）2004-0011。瘤株：人胃癌MKN45，由中国科学院上海斯莱克试验动物有限责任公司肿瘤药理室供应。 12药物中药：姜氏抗癌散号（KW号）。KW号的组成：人参、薏仁、蜈蚣、壁虎、全蝎、明矾、 虫、蓖麻子等。KW号组成是纯
4、中药，均购自成都荷花池中药材专业市场（国字中医药生1997，批号2），每种中药均为当年新干品。精密称量，经过两次清洗，去掉杂物及泥土后，加5倍量的水，第一煎用文火煎1h后虑出药液，然后再加5倍量的水在文火煎1h后虑出药液，然后浓缩为相当于生药1.5g/mL浓度（生药30g/kg）。本方用传统的煎煮方法给药来试验，因为重视保持中药的全部成分的整体活性。化疗药：5Fu为上海华联制药厂产品，5Fu是每次用50mL/kg隔日灌胃1次。 13试验方法裸鼠人胃癌MKN45组：BALB/C（nu/nu）裸鼠40只，体重1518g，把雌、雄组分开每组为10只。选择瘤体生长良好的MKN45荷瘤鼠，以颈椎脱臼法处
5、死，无菌条件下取出瘤块置生理盐水中切割成直径1.5mm小块备用。在无菌手术条件下将麻醉裸鼠仰卧保定用0.4%戊巴比妥钠0.3mL/只麻醉裸鼠，术部皮肤消毒后腹中线偏左斜开口0.81cm，暴露并拉出胃小挛近幽门部分，划伤胃壁，取切好的无菌的瘤块置于划伤处，滴少量ob生物胶粘合，待生物胶完全干透后将胃组织推回腹腔，术部缝合。 14分组及给药方法裸鼠人胃癌MKN45组：移植手术第3天，将裸鼠按体重随机分为4组，每组10只，起先灌胃药水。设比照组，5Fu阳性比照组，KW号20mL/kg、25mL/kg两剂量组。5Fu 50mg/kg隔日灌胃1次连续给药1个月，KW号每天灌胃1次，连续给药1个月。 15
6、检测指标人胃癌MKN45组；30天给药后24h，颈椎脱臼处死裸鼠，称体重，剥瘤称重，计算肿瘤生长抑制率，并将各组结果进行统计学处理。肿瘤生长抑制率（%）=（比照组平均瘤重-治疗组平均瘤重）/比照组平均瘤重100%。 16统计学方法统计分析用SPSS10.0软件。计资料数据用s表示组间均数比较采纳t检验。 2结果 21本试验造模方法的意义 中药明显抑制肿瘤生长率 裸鼠体重改变在人胃低分化腺癌MKN45的原位移植试验过程中，一般原位MKN45移植试验的部位是胃大弯侧前壁浆膜下，此部位血供较好，肿瘤易于生长，而又不易过早地出现幽门梗阻。但本试验中的移植部位是胃小弯近幽门部分，因为在临床上常见胃癌的部
7、位是胃窦部、胃小弯、胃幽门、贲门部位，而胃大挛侧及胃底部较少见。不过试验的做模型胜利率是相对的比较底。一般胜利率为60%80%，在术后3周左右于左上腹部可扪及直径37mm，质地较硬地结节，随后肿瘤结节渐渐生长增大，4周以后肿块的直径可达613mm左右。表5表明30天后KW 20mL/kg、25mL/kg中药组的抑制肿瘤作用明显，而且KW25mL/kg中药组的抑制肿瘤移植活动，所以脱落和不长的瘤块比别的组多一些。化疗组抑制肿瘤作用明显，但比别的组体重下降15%以上，这说明化疗组的对鼠体有副作用。见表1。 表1姜氏抗癌散号（KW号）两剂量和5Fu 对裸鼠人胃癌MKN45抑制肿瘤生长度（%，s） 比
8、照组KW20mL/kgKW25mL/kg5Fu 22脾脏的系数来表明中药和西药对鼠体内不良影响的程度3种不同剂量中药组与比照组的脾系数差不大，说明中药组对小鼠脾影响不明显，但西药组与比照组有一些差异，这说明西药组对鼠体内有肯定的副反应。见表2。 3探讨 胃癌的发病率仍旧居高不下, 胃癌的防治工作亟待加强。手术切除是目前惟一可能根治胃癌的手段，但实际仅限于病变较早的期胃癌，术后的5年生存率为85%95%。而进展期胃癌术后的5年生存率一般在30% 50%，多不超过60%。进展期胃癌术后局部复发率高，生存率低，更不能预防肝转移及腹膜播散。临床上早期胃癌的发觉非常困难，而中晚期胃癌目前多采纳综合疗法，
9、中医药治疗胃癌积累了肯定的阅历，本探讨探讨了姜氏抗癌散抑制胃癌的理论依据及试验探讨。 中医理论认为肿瘤是属于“积聚”或“症瘕”等范畴。积症的病因病机是肝气郁结、气机阻滞、血行不畅、瘀结成块；脾失健运产生湿浊、聚而成痰、痰阻气机、血行不畅而成瘀块；寒阻气机，脉络受阻、气滞血瘀、痞块乃成。形成症积的共同缘由是气滞血瘀，其中，形成坚硬、固定不移症积是由血瘀为主。此情形与癌相像。素问•至真要大论1言，“坚者消之”、“客者除之”、“结者散之”、“留者攻之”、“逸者行之”、“衰者补之”，对治疗积聚有着根本性的指导意义。 姜氏抗癌散中用大黄、明矾等攻下祛瘀、软坚散结，即：“坚者消之”、“结者散之
10、”之义。本方中用虫、全蝎、蜈蚣等以活血消肿、祛瘀通络法来治症瘕。此外，用人参、黄芪、茯苓、薏仁来扶正祛邪，即“衰者补之”之义。目前，治愈肿瘤不论是在早期、中、晚期都有困难，所以医学界多角度找新的治疗方法，其中，限制肿瘤血管生长是目前最有前途的方法之一。Folkman2等在70年头初发觉，实体瘤的发展有赖于新生血管的生成。现在医学界已经普遍相识到肿瘤假如没有新的血液供应，其生长就不能超过13mm3。肿瘤细胞限制着新生血管的生成，它可分泌血管生成因子，作用于内皮细胞（EC），而活化的EC反过来又能产生生长因子，以旁分泌的方式作用于肿瘤细胞。 人体在正常状况下，体内释放抑制新生血管因子和促进血管生长
11、因子且二者维持动态平衡，所以不发生异样的血管生长。但在受伤、手术、病变、肿瘤和局部缺氧等状况时，血液里生成大量的血管生长因子，促进病发部位的血管大量生长。本方加减大黄虫散中，大黄、水蛭、全蝎、壁虎、土鳖虫、蜈蚣等具有活血化瘀，通络消症的作用，能改善局部细胞缺氧从而抑制肿瘤新生血管的形成，而且，水蛭、土鳖虫、全蝎等虫类药释放大量的纤维蛋白溶酶原，此纤维蛋白溶酶原水解片段有很剧烈的抑制血管内皮细胞生长作用，从而抑制肿瘤血管生成3-5。这也是传统医学与现代医学治疗方法上的结合，是中医临床学新的发展。 肿瘤在人体中从单个细胞转化长成肿瘤细胞，再克隆形成肿瘤是一个多步骤的过程。在肿瘤发生早期阶段，即增生
12、、发育不全阶段，因为某种缘由免疫系统的T、B淋巴细胞，DC细胞、巨噬细胞、NK细胞、粒细胞等忽视，或者不能刚好完全清除发展而来。肿瘤的发生中整个免疫系统功能下降时，其发展速度快，向恶性化程度高的方向发展。所以在肿瘤发生和生长全过程中人体免疫系统是特别重要的。其免疫系统中对肿瘤细胞抑制功能的最重要细胞是T、B细胞，巨噬细胞、NK细胞。本方中人参、黄芪、茯苓等对T、B细胞，巨噬细胞，NK细胞有明显刺激和增加的功能。姜氏抗癌散提高T、B细胞数量，巨噬细胞的吞噬功能，NK细胞活性，即通过增加免疫系统的功能来抑制肿瘤生长。 此外，在小鼠抗肿瘤试验中最重要两项指标是体重和血细胞检测。用中药复方抑制小鼠肝癌H22、肉瘤S180、裸鼠胃癌MKN45试验中，假如忽视小鼠的体重和血细胞检测，单纯说明抑瘤率是不够的。例如10天的皮下接种小鼠H22试验中，不给小鼠吃3天的食物，肿瘤的抑瘤率达到30%的结果，但血细胞检测、体重明显差。假如不提体重和血液分析的问题，试验中用纯中药抑瘤率能达到80%左右效果，但是体重不长或者下降血液检测不正常，骨髓生长抑制明显所以这种试验是没有临床价值的。只有将肿瘤抑制率和体重改变血细胞的检测结合起来，才更有在临床上的意义。 本文中所涉及到的图表、注解、公式等内容请以PDF格式阅读原文。