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1、1.验证目的验证方案初始污染菌检查方法验证文件编号NO:编制:审核:批准:日期:日期:日期:目录13 .变更控制记录初始污染菌检查法方法验证方案执行过程中产生的每个变更。在初始污染菌 检查法方法验证方案执行过程中产生的变更必须按照JK/CX17-04变更控制管 理规程进行管理。13.1 在表4中填写初始污染菌检查法方法验证方案执行过程中产生的每个变更。表1:培养基适用性检查试验结果检测日期培养基批号使用仪器微限超净工作仪器编号：JK-FA-ZL-016台生物平安柜仪器编号：JK-FA-ZL-015生化培养箱仪器编号：JK-FA-ZL-005 JK-FA-ZL-047培养温度、时间h： 培养基菌
2、株铜绿假单胞菌金黄色葡萄球菌枯草芽抱杆菌胰酪大豆膝琼脂培养基12平均胰酪大豆陈琼脂对照培养基12平均计算结果阴性对照组无菌生长，被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值 在0.5-2范围内，且菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致。检验人复核人日期日期检测日期培养基批号使用仪器微限超净工作台仪器编号：JK-FA-ZL-016生物平安柜仪器编号：j K-FA-ZL-015霉菌培养箱仪器编号：JK-FA-ZL-006、JK-FA-ZL-048培养温度、时间:h： h：菌白色念珠菌黑曲霉胰酪大豆豚琼脂培养基12平均胰酪大豆陈琼脂对照培养基12平均计算结果沙氏葡萄糖琼脂培养基12平均
3、沙氏葡萄糖琼脂对照培养基12平均计算结果阴性对照组无菌生长，被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比 值在0.5-2范围内，且菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致。检验人复核人日期日期表2：计数方法适用性检查试验结果日期取样产品检测日期产品序列号培养基批号使用仪器微限超净工作台仪器编号：JK-FA-ZL-016生物平安柜仪器编号：J K-FA-ZL-015生化培养箱仪器编号：JK-FA-ZL-005、JK-FA-ZL-047霉菌培养箱仪器编号：JK-FA-ZL-006、JK-FA-ZL-048微生物限度检测仪仪器编号：JK-FA-ZL-013JK-FA-ZL-050培养温度、
4、时间细菌：h： 霉菌：h： 霉菌：h： 菌株铜绿假单胞菌金黄色葡萄球菌枯草芽泡杆菌试验组菌液对照组供试品对照组计算结果菌株白色念珠菌黑曲霉白色念珠菌黑曲霉培养基试验组菌液对照组供试品对照组计算结果阴性对照组无菌生长，试验组菌落数减去供试品对照组菌落数的值与菌液对照组菌落数的 比值应在0.52范围内。检验人复核人日期表3：偏差及纠偏措施序号偏差描述后续措施评估人/日期批准人/日期预计完成时间完成时间批准人/日期表4：变更控制序号变更编号变更类型变更名称及变更简介变更申请日期变更批准日期变更关闭日期第9页共10页2 .验证依据13 .验证人员组成与职责14 .验证人员培训15 .验证时间安排26
5、.验证用的测试仪器27 .验证用的菌株38 .验证用的培养基39 .菌株介绍410 .验证环境的检测411 .验证操作4计数培养基适用性检查411.1 计数方法适用性试验512 .偏差处理713 .变更控制71 .验证目的1.1初始污染菌检查用胰酪大豆陈琼脂培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基的适用性检查, 确认胰2.验证依据中华人民共和国药典2015版3.验证人员组成与职责人员职能部门职责4.验证人员培训培训人签名/日期序号姓名部门职责已接受培训？签名/日期1是否2是否3是否4是否5.验证时间安排时间工程2017.02.152017. 02. 17确定验证方案：验证方案的编制、审批、确定2017.0
6、2.212017. 02. 27验证实施：验证前确认、准备工作和验证操作工作2017.02.272017. 03. 01验证总结：数据分析、汇总，验证报告编制，审批。6 .验证用的测试仪器仪器名称型号仪器编号计量证书编号微限超净工作台SW-CJ-2FDJK-FA-ZL-016/生物平安柜BSC-1300IIA2JK-FA-ZL-015/生化培养箱（无菌培养室）LRH-70FJK-FA-ZL-005JK-JL(T)-022生化培养箱（阳控培养室）LRH-70JK-FA-ZL-047JK-JL(T)-027霉菌培养箱（无菌培养室）MJ-70F-IJK-FA-ZL-006JK-JL(T)-023霉菌
7、培养箱（阳控培养室）MJ-70-IJK-FA-ZL-048JK-JL(T)-028立式压力灭菌锅LDZF-50KB-11JK-FA-ZL-010JK-JL(T)-043微生物限度检测仪（微限室）ZW-600JK-FA-ZL-013/微生物限度检测仪（阳控室）ZW-300JK-FA-ZL-050/7 .验证用的菌株菌株中文名CMCC编号批号生产厂家铜绿假单胞菌CMCC(B)10104GC210816-1温州微穹检验 技术服务有限 公司枯草芽狗杆菌CMCC(B)63501GC080816-1B温州微穹检验 技术服务有限 公司金黄色葡萄球菌CMCC(B)26003GC030816-2温州微穹检验 技
8、术服务有限 公司白色念珠菌CMCC(F)98001GC161007-3温州微穹检验 技术服务有限 公司黑曲霉CMCC(F)98003GC080816-2A温州微穹检验 技术服务有限 公司8 .验证用的培养基名称批号规格生产厂家胰酪大豆陈琼脂培养160426250g/瓶上海中科昆虫生物基技术开发胰酪大豆陈琼脂对照培养基135025-20160312.0g/300ml中国食品药品检定研究所胰酪大豆豚液体培养基160909250g/瓶上海中科昆虫生物技术开发胰酪大豆豚液体对照培养基135026-2014016.0g/200ml中国食品药品检定研究所沙氏葡萄糖琼脂培养基160603250g/瓶上海中科
9、昆虫生物技术开发沙氏葡萄糖琼脂对照培养基135013-20150213.0g/200ml中国食品药品检定研究所9.菌株介绍L来源：温州微穹检验技术服务。2 .质控菌株MicroDome是一个含有定性或定量活性微生物的半球形水溶物，它适用 于微物实验室中培养基质量检验，微生物方法学适用性验证，抑菌效力认证以及阳 性对照等实验。3 .质控菌株MicroDome质控菌株符合中国药典、美国药典、欧洲药典、日本药局方 的规和GMP要求。4 .质控菌株MicroDome分类：定量菌株MicroDomeGP定性菌株MicroDomeWC 定制菌株CM。5 .铜绿假单胞菌、枯草芽抱杆菌属于定量菌株MicroD
10、omeGPo.定量菌株MicroDomeGP：由质控菌株MicroDomeGP和1.1ml复溶液MicroDome RHF两局部组成。每颗MicroDome GP含有100-999cfu特定菌株，溶解在1.1ml复 溶液后，每0.1ml中含有10-99cfu的纯活性菌种，产品适用于微生物培养基的促生 长试验和实验方法适用性以及阳性对照试验等。10 .验证环境的监测进行初始污染菌方法验证的环境条件应符合要求。1L验证操作计数培养基适用性检查11.1.1 菌悬液制备.准备好MicroDome GP和MicroDome RHF,及备用标签。1 .贴好相对应的备用标签并确认标签一致。2 .撕开铝塑组合
11、盖，并在无菌操作下翻开胶塞。3 .将 MicroDome GP 菌株倒入 MicroDome RHF1.1 ml 复溶液中。4 .漩涡振荡使其充分溶解（约10秒）。6,取0.1ml菌悬液，内含10-99cfuo验证进行3次独立的平行试验，每次的试验结果都应符合要求。L取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽泡杆菌各0.1ml分别移入被检 胰酪大豆陈琼脂培养基中，均匀涂布（用涂布棒）菌悬液，直到培养基外表 干燥。每一试验菌株制备两个平皿。置3035,培养时间不超过3天。2 .取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽泡杆菌各0.1ml分别移入被检 胰酪大豆豚液体培养基中。每一试验菌株制备两试管。置30
12、35,培养时 间不超过3天。3 .取白色念珠菌、黑曲霉各0.1ml分别移入被检胰酪大豆陈琼脂培养基中， 均匀涂布（用涂布棒）菌悬液，直到培养基外表干燥。每一试验菌株制备两 个平皿。置3035,培养时间不超过5天。4,取白色念珠菌、黑曲霉各。.lml分别移入被检沙氏葡萄糖琼脂培养基中， 均匀涂布（用棉拭子）菌悬液，直到培养基外表干燥。每一试验菌株制备两 个平皿。置2025,培养时间不超过5天。5 .所有被检培养基中不加菌液做阴性对照。6 .用相对应的对照培养基代替被检培养基进行上述试验。结果判断1LL3.1在3次独立的平行试验中，阴性对照应无菌生长，被检固体培养基 上的菌落平均数与对照培养基上的
13、菌落平均数的比值应在0.5-2范 围内，且菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致。被检液体培养 基管与对照培养基管比拟，试验菌应生长良好。11.132试验后填写表U结论假设各试验组的结果均符合要求，胰酪大豆陈琼脂培养基、沙氏葡萄糖琼脂 培养基适合用来检测医疗器械产品、半成品、包装袋初始污染菌的检查。11.2计数方法适用性试验菌悬液制备1 .准备好MicroDome GP和MicroDome RHF,及备用标签。2 .贴好相对应的备用标签并确认标签一致。3 .撕开铝塑组合盖，并在无菌操作下翻开胶塞。4 .将 MicroDome GP 菌株倒入 MicroDome RHFl.lml 复溶液中。5 .
14、漩涡振荡使其充分溶解（约10秒）。6 .取0.1ml菌悬液，内含10-99cfuo1122供试液制备将整个样品浸于100ml 0.9%氯化钠溶液中，浸泡，振摇，制成1:100的供 试液。11.2.3接种和稀释进行3次独立的平行试验，每次的试验结果都应符合要求。1 .试验组：取制备好的供试液150mL分成3份，分别加入0.1ml的金黄色 葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽抱杆菌，混匀，过滤，滤膜贴于胰酪大豆 陈琼脂培养基，置3035,培养时间不超过3天;取制备好的供试液100mL 分成2份，分别加入0.1ml的白色念珠菌、黑曲霉的滤膜贴于胰酪大豆陈琼 脂培养基，置3035,培养时间不超过5天；取制备
15、好的供试液100mL 分成2份，分别加入0.1ml白色念珠菌、黑曲霉的滤膜贴于沙氏葡萄糖琼脂 培养基，置2025,培养时间不超过5天，每株试验菌每种培养基制备一 张滤膜。2 .供试品对照组：取制备好的供试液100ml,分成两份，不加菌株，过滤, 每种培养基制备一张滤膜。3,菌液对照组：取无菌0.9%氯化钠溶液，加入0.1ml的各试验菌株，混匀， 分成两份，过滤，金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽泡杆菌的滤膜贴 于胰酪大豆陈琼 脂培养基，置3035,培养时间不超过3天；白色念 珠菌、黑曲霉的滤膜贴于胰酪大豆陈琼脂培养基，置3035C,培养时间不 超过5天；白色念珠菌、黑曲霉的滤膜贴于沙氏葡萄糖
16、琼脂培养基，置 2025,培养时间不超过5天，每株试验菌每种培养基制备一张滤膜。并 进行微生物回收试验。4 .阴性对照组：取0.9%氯化钠溶液100mL不加菌株，分成两份，过滤，每 种培养基制备一张滤膜。1124结果判断L在3次独立的平行试验中，阴性对照组应无菌生长，试验组菌落数减去供 试品对照组菌落数的值与菌液对照组菌落数的比值应在0.5-2范围内。5 .试验后填写表2。1125结论假设各试验菌的回收试验均符合要求，医疗器械产品、包装袋适合采用上述方法进 行初始污染菌的检查。12.偏差处理记录初始污染菌检查法方法验证方案执行过程中产生的每个偏差。在初始污染菌 检查法方法验证方案执行过程中产生的偏差必须按照JK/CX17-03偏差处理管 理规程进行管理。12.1 在表3中填写初始污染菌检查法方法验证方案执行过程中产生的每个偏差。