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1、活血化瘀药对血瘀证心肌缺血再灌注损伤家兔内源性活性因子及炎症因子的影响家兔心肌缺血再灌注实验 黄政德李鑫辉谢雪姣张少泉 摘要：目的：探讨活血化瘀药对血疼证心肌IRI家兔炎症因子与内源性活性因子影响，以探讨活血化瘀药对心肌IRI爱护作用机制。方法：建立血瘀证家兔IRI模型，视察活血化瘀药对炎症因子(TNF和IL-2)、内源性活性因子(TXB2和6-酮-PGF1)，以及心肌酶(IDH和CK-MB)的含量改变。结果：IRI组TNF、IL-2、TXB2、LDH和CK-MB水平明显上升，6-酮-PGF1明显下降，与空白组比较(PO.01)；丹参和川芎嗪组可以对抗TNF、IL-1、TXB2、LDH和CK-
2、MB水平上升，提高6-酮-PGF1的水平，与IRI组比较(P0.05或PO.01)。结论：活血化瘀药可以调整内源性血管活性因子TXA2/PGI2平衡，降低炎症因子水平，这可能是其爱护心肌IRI作用机制之一。 关键词：血瘀证；心肌缺血再灌注损伤；内源性活性因子；炎症因子 中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1673-7717(2007)07-1319-03 随着心脏介入水平的提高，以及心脏外科学的发展，缺血心肌在复原血流灌注的过程，会出现再灌注损伤，如何有效预防和治疗心肌缺血/再灌注损伤(ischemia reperfusioninjury IRI)是近年临床和科研的探讨热点。中
3、医理论把心肌缺血/再灌注损伤归属于“胸痹”、“伤心”、“真伤心”的范畴，其病机关键在于血脉瘀阻。本探讨建立了血瘀证心肌IRI模型，视察活血化瘀药(DAMRS)对血瘀证心肌IRI家兔炎症因子与内源性活性因子影响，以探讨DAMRS对心肌IRI爱护作用机制。 1 试验材料 1.1动物家兔60只，体重1.52.5kg雌雄兼用。购自湖南中医药高校试验动物中心。许可证号：SYXK(湘)2003-0001。 1.2主要仪器小动物呼吸机，DW2000型，上海嘉鹏；全自动生化分析仪，CL7200型，日本岛津；低速自动平衡离心机，TDZ41.8A型，长沙天创；ac1500r放射免疫记数器，中国科技高校。 1.3试
4、剂及药品乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶同工酶(CKMB、)试剂，北京九强生物技术有限公司；血浆TXB2和6酮PGF1，血清TNF和IL1试剂，均购于北京科美东雅生物技术有限公司；丹参注射液，由正大青春宝药业有限公司，生产批号：国药准字Z33020177，10mL/支；注射用磷酸川芎嗪，海南普利制药有限公司，生产批号：国药准字H20040889，50me/支。 2 试验方法 2.1 试验分组家兔60只，随机分为A、B、C、D、E、F6组，每组10只。A.空白组：与造模组同期注射等量生理盐水，同期开胸，冠脉穿线不结扎。B.血瘀证组：血瘀证造模结束后第2日，开胸前30min静注等量生理盐水，再开胸穿
5、线不结扎。C.IRI组：血瘀证造模结束后第2日。开胸前30min静注等量生理盐水，再开胸结扎冠脉30min，复原冠脉血流90min。D.预处理组：血瘀证造模结束后第2日，开胸结扎冠脉5min，再灌注5min，共反复3次，余同C组。E.丹参组：血瘀证造模结束后第2日，开胸前30min静注丹参，余同C组。F.川芎嗪组：血瘀证造模结束后第2日，开胸前30min静注川芎嗪，余同C组。 2.2 造模方法建立血瘀证动物模型 于兔耳缘静脉缓慢注射去甲肾上腺素0.1ms/(kgd)连续20天，于造模第1天同时静注牛血清白蛋白250ms/kg，间隔10天，再注射1次，共2次。 建立心肌缺血再灌注模型血瘀证家兔用
6、25乌拉坦(4mL/kg)麻醉后固定，记录标准导联心电图。气管切开，连接动物呼吸机。开胸暴露心脏，于左心耳下左冠状动脉前降支上三分子处穿线，在线两段各穿一结扎环以阻断冠脉血流。以心电图ST段出现弓背抬高为结扎胜利，以ST段下降1/2为血流再灌注胜利。 2.3 给药剂量及方法于兔耳缘静脉给药，给药剂量依据成人临床剂量，按动物体表面积换算，E组在开胸前30min静注丹参注射液0.6mL/kg体重，F组注射用磷酸川芎嘹，用生理盐水配成10mL，在开胸前30min静注0.6mg/kg体重相当于生药含量2.76mg/ks体重，A、B、C、D组在开胸前30min静注等量的生理盐水，根据60kg的人算。 2
7、.4试验指标测定各组在试验结束时颈动脉取血，血浆TXB2和6酮PGF1；血清TNF和IL-2测定采纳放射免疫法测定，详细操作按试剂盒操作说明进行。测定LDH和CKMB，用岛津全自动生化分析仪，由湖南中医药高校第一附属医院检验科测定。 2.5 统计学方法计量资料数据用均数标准差(xs)表示，用SPSS11.50版统计软件在计算机上进行统计，多组间两两比较用单因素方差分析，方差齐时，两两比较用q检验；方差不齐时用非参数检验。 3 结 果 3.1 活血化瘀药对缺血再灌注损伤家兔心肌酶影响，结果表明，C组LDH和CKMB均高于A组和B组，差别显著(P0.01)；E和F组LDH和CKMB均较C组明显降低
8、，其中LDH水平降低(PO.05或P0.01).CKMB水平均降低(PO.01)。说明心肌此后血瘀证家兔心肌酶水平明显上升，而DAMIIS可明显降低。LDH和CKMB的水平。见表1。 结果表明，B组和A组比较TXB2水平明显上升(P0.01)，6酮PGF1水平明显降低(PO.01)，说明血瘀证造模胜利；C组较A和B组，TXB2水平明显上升(P0.01)，6酮PGF1水平明显降低(P0.01)；D、E和F组与C组比较，TXB2均显著降低(PO.01或P0.05)，6酮PGF1水平均显著上升(PO.01)。说明心肌IRI后TXB2水平明显上升，6酮PGF1水平明显降低，DAMRS可明显降低TXB2
9、水平，上升6酮PGF1水平。 3.3活血化瘀药对缺血再灌注损伤家兔炎症因子的影响见表3。 结果表明，C组TNF和IL2水平均高于A组和B组。差别显著(PO.01)，E和F组较C组明显降低，其中TNF水平降低(P0.05或P0.01)，IL2水平降低(P 0.01或P0.05)。说明心肌IRI后血瘀证家兔炎症因子水平明显上升，而DAMRS可明显降低炎症因子水平。 4讨论 心肌酶在正常生理状况下广泛存在于心肌细胞中，在心肌缺血后由于无氧代谢导致大量有害的物质如乳酸和氧自由基等在心肌中积累，导致心肌细胞损伤，细胞膜通透性增加，使细胞内酶大量释放入血液，因此，临床常以血清心肌酶作为心肌损伤的重要指标。
10、本试验中，IRI组的LDH和CKMB水平明显提高，而活血化瘀药能使IRI上升的LDH和CKMB水平明显下降，说明中医活血化瘀药能有效地削减心肌酶外漏，从而对心肌损伤起着爱护作用。 目前对中医血瘀证的探讨已经进入细胞学和分子生物学水平，概括起来主要在血小板功能、内皮细胞功能、微循环探讨、免疫功能改变等方面的探讨，其重点和热点是对血管内皮细胞的探讨。现代医学相识到血管内皮细胞不仅是血液和血管平滑肌的屏障。而且是高度活跃的代谢库。内皮细胞对维持血管的舒缩，抑制血小板的聚集及平滑肌细胞增殖均具有重要作用。6ketoPGF1为前列环素(PGI2)的代谢产物，PGI2是内皮细胞合成并分泌的血管舒张因子，P
11、GI2的主要作用抑制血小板的黏附与聚集，拮抗血栓烷A2，使血管扩张。体内PGI2削减可引起冠状动脉收缩、血小板聚集和血栓形成，诱发或加重心肌缺血，TXB2是TXA2的稳定水解产物，是体内调整血小板功能的主要因子，具有剧烈的血小板聚集和血管收缩作用，已知在正常生理状态下，TXA2/PGI2的浓度比例相对平衡，以保持机体的内环境稳定。HRI时TXA2/PGI2严峻失衡，导致微血管剧烈收缩和微血管内血栓形成，发生心血管事务，本试验发觉活血化瘀药能有效上升6ketoPGF1水平，降低TXB2水平，与IRI组比较差别有显著意义(P2/PGI2严峻失衡，防治微血管剧烈收缩和血管内血栓形成，遏制无复流现象。
12、 已有探讨表明，心肌IRI是炎症反应过程，中性粒细胞对缺血心肌的损伤起了重要作用，TNF和IL2是重要的炎性细胞因子，在正常的心肌组织中它们的含量很低，心肌IRI后数分钟由巨噬细胞和单核细胞等大量释放。过量的炎性细胞因子可通过其次信使通路蛋白激酶C(PKC)和丝裂原蛋白激酶(MAPK2)使核转录因子KB(NFKB)得以活化而转核发挥其调控作用。NFKB活化能调控多种靶基因的表达，如黏附分子家族的细胞间黏附分子1(ICAM1)和血管细胞黏附分子1(VCAM1)，前炎症性细胞因子TNF和白细胞介素2(IL2)等。在这些递质的作用下，白细胞在缺血区黏附、聚集，造成内皮损伤，血栓形成。同时，这些递质又
13、促使白细胞穿内皮迁移、浸润并损难过肌。而采纳一些因素抑制NFKB活化则可减轻心肌IRI。唐旭东等视察了心肌IRI时心肌组织TNFa表达与心肌NFKB活化之间的关系，结论提示IR能刺激心肌NFKB的活化，活化的NFKB启动TNF的表达而参加IRI发生过程。韩宁林等探讨益气活血法能够减轻大鼠心肌IRI，其作用机理可能与削减心肌细胞释放lL6和TNF等有关，本试验探讨视察到IRI后TNF和lL2水平均明显上升，活血化瘀药能明显降低TNF和lL2水平，表明心肌IRI后炎症因子水平明显上升，而活血化瘀药可明显降低炎症因子水平，防治炎症因子在缺血区血管中黏附、聚集，造成内皮损伤，斑块裂开，血栓形成。至于活血化瘀药是否可以通过抑制NFKB活化，起到抑制白细胞在缺血区血管中黏附、聚集，造成心肌损伤，还须要进一步探讨。 综上所述，活血化瘀中药可以通过调整血瘀证IRI家兔内源性血管活性因子TXA2/PGI2平衡，预防炎症级联反应导致内皮损伤、斑块裂开、血栓形成，从而爱护血管内皮功能，防止心肌细胞损伤，至于其抗心肌缺血作用的深层次机制有待进一步探讨。