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1、理科选修三动物细胞培养和核移植技术 从动物机体中取出从动物机体中取出相关组织相关组织，将它分散成，将它分散成单个细胞单个细胞，然后，然后,放在放在适宜的培养基适宜的培养基中，让这些中，让这些细胞细胞生长和繁殖生长和繁殖。1.1动物细胞培养概念：动物细胞培养概念：为什么要进行动物细胞培养？为什么要进行动物细胞培养？如何培养动物细胞培养？如何培养动物细胞培养？胚胎或幼龄动物胚胎或幼龄动物器官、组织器官、组织1.2动物细胞培养过程：动物细胞培养过程：用胰蛋白酶处理用胰蛋白酶处理分散成单个细胞分散成单个细胞细胞悬液细胞悬液原代培养原代培养传代培养传代培养幼龄动物的组织细胞比老龄动物分化程度幼龄动物的组
2、织细胞比老龄动物分化程度低，增殖能力强，更易于培养低，增殖能力强，更易于培养动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤 维等蛋白质维等蛋白质,将细胞网络起来形成具有一将细胞网络起来形成具有一 定弹性和韧性的组织和器官定弹性和韧性的组织和器官原代培养原代培养：动物组织消化后的初次培养：动物组织消化后的初次培养动物细胞的动物细胞的贴壁生长贴壁生长原代培养：原代培养：动物组织消化后的初次培养动物组织消化后的初次培养细胞贴壁：细胞贴壁：培养贴附性细胞时，悬液中分散的培养贴附性细胞时，悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上细胞很快就贴附在瓶壁上接触抑制：接触抑制：当贴壁细胞分裂
3、生长到表面相互接当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时触时,细胞就会停止分裂增殖细胞就会停止分裂增殖传代培养：传代培养：当原代培养的细胞处于接触抑制后当原代培养的细胞处于接触抑制后,用胰蛋白酶处理，并分瓶继续培养的过程用胰蛋白酶处理，并分瓶继续培养的过程 原代培养原代培养（分瓶之前）（分瓶之前）传代培养传代培养（分瓶之后）（分瓶之后）关于原代培养，注意：关于原代培养，注意：关于传代培养，注意：关于传代培养，注意：1 12、细胞培养到、细胞培养到50代后，大部分细胞会死亡，少代后，大部分细胞会死亡，少数细胞的细胞核型会发生变化，获得不死性，数细胞的细胞核型会发生变化，获得不死性，并带有癌变的特点。并
4、带有癌变的特点。细胞株细胞株：传代细胞一般能传到：传代细胞一般能传到40-5040-50代，代，遗遗传物质一般不会发生改变传物质一般不会发生改变，叫细胞株。，叫细胞株。细胞株、细胞细胞株、细胞系系（了解即可，老课本体系了解即可，老课本体系）细胞系细胞系：传代：传代5050代以后代以后又出现细胞生长停又出现细胞生长停滞状态，滞状态，部分细胞部分细胞遗传物质发生了改变，遗传物质发生了改变，能连续传代，获得不死性，叫细胞系。能连续传代，获得不死性，叫细胞系。细胞株和细胞系的区别细胞株和细胞系的区别：细胞系的遗传物细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制
5、，容易传代培养。制，容易传代培养。1.3 动物细胞培养的条件：动物细胞培养的条件：l无菌、无毒环境无菌、无毒环境l营养：营养：糖、氨基酸、无机盐、维生素、糖、氨基酸、无机盐、维生素、促生长因子、微量元素、动物血清等促生长因子、微量元素、动物血清等l温度和温度和PH：36.5+0.5度，度，pH7.27.4l气体环境：气体环境：O2和和CO2，CO2可维持培养可维持培养液液pH（5%的的CO2 培养箱）培养箱）离体培养的细胞对离体培养的细胞对微生物和有毒物质微生物和有毒物质没有防御能力没有防御能力能否用胃蛋白酶能否用胃蛋白酶代替胰蛋白酶？代替胰蛋白酶？植物组织培养和动物细胞培养的比较植物组织培养
6、和动物细胞培养的比较比较项目比较项目植物组织培养植物组织培养动物细胞培养动物细胞培养原理原理细胞的全能性细胞的全能性细胞增殖细胞增殖培养基性质培养基性质固体培养基固体培养基液体培养基液体培养基培养基特有成分培养基特有成分蔗糖蔗糖 植物激素植物激素葡萄糖、动物血葡萄糖、动物血清清培养目的培养目的快速繁殖、培育快速繁殖、培育无病毒植株无病毒植株获得细胞或细胞获得细胞或细胞分泌蛋白分泌蛋白5.5.动物细胞培养技术的应用动物细胞培养技术的应用:1.1.蛋白质生物制品的生产蛋白质生物制品的生产 如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体2.2.应用于基因工程应用于基因工程 主要用于作为
7、受体细胞主要用于作为受体细胞3.3.检测有毒物质，判断某种物质的毒性检测有毒物质，判断某种物质的毒性 4.4.细胞的生理、药理、病理研究细胞的生理、药理、病理研究 如用于筛选抗癌药物如用于筛选抗癌药物 二、动物体细胞核移植技术和克隆动物二、动物体细胞核移植技术和克隆动物1、定义：定义：动物核移植是将动物的动物核移植是将动物的一个细胞一个细胞的细胞核的细胞核,移入一个已经移入一个已经去掉细胞核的卵母去掉细胞核的卵母细胞中细胞中.使其重组并发育成一个使其重组并发育成一个新的胚胎新的胚胎,这这个新的胚胎最终发育为个新的胚胎最终发育为动物个体动物个体.3、分类：分类：胚胎核移植、体细胞核移植。胚胎核移
8、植、体细胞核移植。胚胎细胞分化程胚胎细胞分化程度低，恢复其全度低，恢复其全能性相对容易。能性相对容易。动物体细胞分化动物体细胞分化程度高，恢复其程度高，恢复其全能性十分困难全能性十分困难2、原理：原理：动物细胞核具有全能性动物细胞核具有全能性卵细胞卵细胞黑面母绵羊黑面母绵羊白面母绵羊白面母绵羊乳腺细胞乳腺细胞细胞质细胞质细胞核细胞核细胞核移植细胞核移植早期胚胎早期胚胎卵裂卵裂第三只母绵羊子宫第三只母绵羊子宫胚胎移植胚胎移植多莉羊多莉羊分娩分娩妊娠妊娠多多莉莉羊羊的的培培育育过过程程融合后的卵细胞融合后的卵细胞注意：注意：克隆动物性状克隆动物性状与供体动物完全一样吗？与供体动物完全一样吗？取供体
9、细胞取供体细胞传代培养传代培养1010代代以内的细胞以内的细胞.为什么？为什么？用的是去用的是去核的减数核的减数第二次分第二次分裂中期细裂中期细胞（胞（M中中期期）为什）为什么？么？激活方法：激活方法：激活目的：激活目的：促融方法：促融方法：电刺激电刺激胚胎移植至胚胎移植至代孕受体内代孕受体内 妊娠、分娩妊娠、分娩体细胞核移植流程体细胞核移植流程供体：优质高产奶牛供体：优质高产奶牛受体：普通奶牛（卵受体：普通奶牛（卵母细胞的采集与培养）母细胞的采集与培养）1.体积大，易体积大，易操作。操作。2.含有含有促使细胞核表促使细胞核表达全能性的物达全能性的物质和营养条件。质和营养条件。有人说它三个母有
10、人说它三个母亲，对吗？亲，对吗？去核去核卵母卵母细胞细胞供体供体细胞细胞电电刺刺激激使使两两细细胞胞融融合合重组细胞重组细胞重组胚胎重组胚胎新个体新个体代孕母牛代孕母牛胚胎移植胚胎移植卵母卵母细胞细胞培养培养体体细细胞胞的的核核移移植植过过程程高高产产奶奶牛牛（供供体体）供体供体细胞细胞培养培养（受受体体）供供卵卵奶奶牛牛四、体细胞核移植技术的应用前景四、体细胞核移植技术的应用前景 1、加速家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育、加速家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育2、保护濒危物种，增加存活数量、保护濒危物种，增加存活数量3、克隆动物作为生物反应器，生产医用蛋白、克隆动物作为生物反应器，生产医用
11、蛋白4、可以作为异种移植的供体，可以用于组织、可以作为异种移植的供体，可以用于组织器官的移植器官的移植五、体细胞核移植技术存在的问题五、体细胞核移植技术存在的问题胚胎移植动物幼体产出胚胎移植动物幼体产出 概率概率10克隆动物存在着健康问题克隆动物存在着健康问题克隆动物的食品安全性问题存在争议克隆动物的食品安全性问题存在争议1 1、定义：、定义：指用自然或人工方指用自然或人工方法使两个或多个不同的细胞法使两个或多个不同的细胞融合成一个细胞的过程。融合成一个细胞的过程。一、动物细胞融合一、动物细胞融合（也称细胞杂交）（也称细胞杂交）2.原理：细胞膜的流动性原理：细胞膜的流动性细胞细胞A细胞细胞B杂
12、种细胞杂种细胞灭活的病毒灭活的病毒物理法物理法化学法化学法用灭活的病毒诱导动物细胞融合过程用灭活的病毒诱导动物细胞融合过程细胞核细胞核病毒颗粒病毒颗粒细胞核细胞核病毒颗粒黏附细胞表面病毒颗粒黏附细胞表面细胞膜被病毒颗粒穿通细胞膜被病毒颗粒穿通细胞膜连接细胞膜连接细胞融合、形成杂种细胞细胞融合、形成杂种细胞 意义：细胞融合技术突破了有性杂交方法的局意义：细胞融合技术突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能。限，使远缘杂交成为可能。人们获得抗体的传统方法是人们获得抗体的传统方法是?将抗原注入动物体将抗原注入动物体,然后从动物血清中提取抗体然后从动物血清中提取抗体这种方法的缺点是什么这种方法的缺点是什么?效率低，产量有限，纯度低，而且制备的抗体特异效率低，产量有限，纯度低，而且制备的抗体特异性差。性差。怎样获得单一类型的抗体？怎样获得单一类型的抗体？二：动物细胞融合的成功应用二：动物细胞融合的成功应用二：动物细胞融合的成功应用二：动物细胞融合的成功应用 单克隆抗体的制备单克隆抗体的制备单克隆抗体的制备单克隆抗体的制备思考思考此课件下载可自行编辑修改，仅供参考！此课件下载可自行编辑修改，仅供参考！感谢您的支持，我们努力做得更好！谢谢感谢您的支持，我们努力做得更好！谢谢