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1、基因工程专题 Still waters run deep.流静水深流静水深,人静心深人静心深 Where there is life,there is hope。有生命必有希望。有生命必有希望2.基因表达载体的构建基因表达载体的构建 什么叫载体？表达载体？什么叫载体？表达载体？表达载体（表达载体（Expression vectors）：）：就是在克隆载体就是在克隆载体基本骨架的基础上增加表达元件（如启动子、终止子基本骨架的基础上增加表达元件（如启动子、终止子等），不仅使目的基因稳定存在、复制，从而可以遗等），不仅使目的基因稳定存在、复制，从而可以遗传给下一代，也是目的基因进行转录传给下一代，也
2、是目的基因进行转录,进而翻译出该插进而翻译出该插入基因编码的蛋白产物的载体。如表达载体入基因编码的蛋白产物的载体。如表达载体pKK223-3是一个具有典型表达结构的大肠杆菌表达载体。其是一个具有典型表达结构的大肠杆菌表达载体。其基本骨架为来自基本骨架为来自pBR322和和pUC的质粒复制起点和氨的质粒复制起点和氨苄青霉素抗性基因。苄青霉素抗性基因。克隆载体（克隆载体（Cloning Vector）：）：通常采用从病毒、质通常采用从病毒、质粒或高等生物细胞中获取的粒或高等生物细胞中获取的DNA作为克隆载体，在载作为克隆载体，在载体上插入合适大小的外源体上插入合适大小的外源DNA片段，并注意不能破
3、坏片段，并注意不能破坏载体的自我复制性质。将重组后的载体引入到宿主细载体的自我复制性质。将重组后的载体引入到宿主细胞中，并在宿主细胞中大量繁殖。胞中，并在宿主细胞中大量繁殖。3.将目的基因导入受体细胞，得到转基因生物将目的基因导入受体细胞，得到转基因生物根癌农杆菌（根癌农杆菌（Agrobacterium tumefaciens）是一）是一种能诱发植物产生肿瘤的细菌，根癌农杆菌中诱导植种能诱发植物产生肿瘤的细菌，根癌农杆菌中诱导植物产生肿瘤的物产生肿瘤的质粒（质粒（Tumor inducing plasmid），），简称为简称为Ti质粒。质粒。野生型农杆菌的野生型农杆菌的Ti质粒，含有两个与质粒
4、，含有两个与致瘤有关的区域：一个是致瘤有关的区域：一个是TDNA区（区（transferred DNA region），含致瘤基因；另一个是毒性区），含致瘤基因；另一个是毒性区（Virulence region），在），在TDNA的切割、转移与的切割、转移与整合过程中起作用。用于植物基因转化的农杆菌整合过程中起作用。用于植物基因转化的农杆菌Ti质质粒载体系统的构建，是将野生粒载体系统的构建，是将野生Ti质粒中的致瘤基因删质粒中的致瘤基因删除，除，并在并在TDNA区域内插入适当的选择标记和多区域内插入适当的选择标记和多克克隆隆位点。位点。(1)转基因植物培育过程？转基因植物培育过程？乳汁中含人的凝血因子乳汁中含人的凝血因子运载体是什么运载体是什么？怎样导入受？怎样导入受体细胞？体细胞？（2）转基因动物培育：）转基因动物培育：将目的基因导入动物细胞将目的基因导入动物细胞（3）将目的基因导入微生物细胞）将目的基因导入微生物细胞完完