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1、专题专题2 2 微生物的培养与应用微生物的培养与应用【课题目标】【课题目标】研究培养基对微生物的选择作用，进行微研究培养基对微生物的选择作用，进行微生物数量的测定。生物数量的测定。【研究对象】【研究对象】土壤中能分解尿素的细菌土壤中能分解尿素的细菌【达到目的】【达到目的】（1）从土壤中分离出能够分解尿素的细菌）从土壤中分离出能够分解尿素的细菌（2）统计每克土壤样品中究竟含有多少这）统计每克土壤样品中究竟含有多少这 样的细菌样的细菌【研究思路】【研究思路】（一）筛选菌株（一）筛选菌株原理：原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、人为提供有利于
2、目的菌株生长的条件（包括营养、人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、温度、温度、温度、PHPHPHPH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。等），同时抑制或阻止其他微生物生长。等），同时抑制或阻止其他微生物生长。等），同时抑制或阻止其他微生物生长。回答：回答：1 1 1 1、在该配方中，为微生物生长提供碳、在该配方中，为微生物生长提供碳、在该配方中，为微生物生长提供碳、在该配方中，为微生物生长提供碳源和氮源的是什么物质？源和氮源的是什么物质？源和氮源的是什么物质？源和氮源的是什么物质？2 2 2 2、绝大多数的微生物都能利用葡萄糖，、绝大多数的微生物都能利用葡萄糖，、绝大多数的微生物
3、都能利用葡萄糖，、绝大多数的微生物都能利用葡萄糖，但是，只有能合成脲酶的微生物才能分但是，只有能合成脲酶的微生物才能分但是，只有能合成脲酶的微生物才能分但是，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，请分析该培养基是否对微生物解尿素，请分析该培养基是否对微生物解尿素，请分析该培养基是否对微生物解尿素，请分析该培养基是否对微生物有选择作用？如果有，是如何进行选择有选择作用？如果有，是如何进行选择有选择作用？如果有，是如何进行选择有选择作用？如果有，是如何进行选择的？的？的？的？葡萄糖、尿素葡萄糖、尿素葡萄糖、尿素葡萄糖、尿素有选择作用，选择培养基：选择培养基：在微生物学中，将允许在微生物学中，将允许特
4、定种类的微生物生长，同时抑制或阻止特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。其他种类微生物生长的培养基。【统计菌落数目】【统计菌落数目】常用方法常用方法：稀释涂布平板法、显微镜直接计数法，：稀释涂布平板法、显微镜直接计数法，还可以用过滤膜法还可以用过滤膜法1 1 1 1、稀释涂布平板法（也叫活菌计数法）、稀释涂布平板法（也叫活菌计数法）、稀释涂布平板法（也叫活菌计数法）、稀释涂布平板法（也叫活菌计数法）原理原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表：当样品的稀释度足够高时，培养基表 面生长的一个菌落，来源于样品稀释面生长的一个菌落，来源于样品稀释 液中的一个活菌，通过统计平板
5、上的液中的一个活菌，通过统计平板上的 菌落数，就能推测出样品中大约含有菌落数，就能推测出样品中大约含有 多少活菌。多少活菌。为了保证结果的准确，一般选择菌落数在为了保证结果的准确，一般选择菌落数在3030030300的平板进的平板进行计数，若设置的重复组中结果相差太远，意味着操作有误，行计数，若设置的重复组中结果相差太远，意味着操作有误，需重新实验需重新实验。计算公式计算公式：每克样品中的菌落数每克样品中的菌落数每克样品中的菌落数每克样品中的菌落数=（某一稀释度下平板上生长的平均菌落（某一稀释度下平板上生长的平均菌落（某一稀释度下平板上生长的平均菌落（某一稀释度下平板上生长的平均菌落数涂布平板
6、所用稀释液体积）数涂布平板所用稀释液体积）数涂布平板所用稀释液体积）数涂布平板所用稀释液体积）稀释倍数稀释倍数稀释倍数稀释倍数设置重复组，目的是增强实验的说服力与准确性。将待测样设置重复组，目的是增强实验的说服力与准确性。将待测样品经一系列品经一系列1010倍稀释，然后选择三个稀释度的菌液，分别取倍稀释，然后选择三个稀释度的菌液，分别取0.1ml0.1ml接种到已制备好的平板上，然后用无菌涂布器将菌液涂接种到已制备好的平板上，然后用无菌涂布器将菌液涂布在整个平板表面，放在适宜的温度下培养计数菌落数。为是布在整个平板表面，放在适宜的温度下培养计数菌落数。为是结果接近真实值，可将同一稀释度菌液加到
7、三个或三个以上的结果接近真实值，可将同一稀释度菌液加到三个或三个以上的平板上，经涂布培养，计算出菌落平均数平板上，经涂布培养，计算出菌落平均数操作操作2、显微镜直接计数法（1）原理：此法利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量。（2）方法：用计数板计数。计数板是特制的载玻片，其上有特定的面积为1mm2，高为0.1mm的计数室，一个计数室又被分成25个（或16个）中格，每个中格再被分成16个（或25个）小格，每个计数室都由400个小格组成。（3）操作：将稀释的样品滴在计数板上，盖上盖玻片，然后在显微镜下计数45个中格中的细菌数，并求出每个小格所含的细菌数，再按计
8、数公式求出每毫升样品中所含的细菌数。（4）计算公式每毫升原液所含细菌数=每小格平均细菌数X400X10000X稀释倍数（5）缺点：不能区分死菌与活菌。3过滤膜法以测定饮用水中大肠杆菌的数目为例。将已知体积的水过滤后，将滤膜放在伊红美蓝培养液基上培养。在该培养基上，大肠杆菌的菌落呈现黑色。可以根据培养基上黑色菌落的数目，计算出水样中大肠杆菌的数量。1.1.想一想，如何从平板上的菌落数推测出想一想，如何从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数？每克样品中的菌落数？答：统计某一稀释度下平板上的菌落数，答：统计某一稀释度下平板上的菌落数，最好能统计最好能统计3 3个平板，计算出平板菌落数的平个平板，计
9、算出平板菌落数的平均值，然后按课本旁栏的公式进行计算。均值，然后按课本旁栏的公式进行计算。A A同学的结果与其他同学不同，可能同学的结果与其他同学不同，可能的解释有两种。的解释有两种。一是由于土样不同一是由于土样不同；二是由于培养基污染或操作失误二是由于培养基污染或操作失误。（三）设置对照（三）设置对照究竟是哪个原因，可以通过实验来证明。究竟是哪个原因，可以通过实验来证明。另一种方案另一种方案：将将A A同学配制的培养基在不加土样的情况同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。通过这个事例可以看出，实验结否受到污
10、染。通过这个事例可以看出，实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的。果要有说服力，对照的设置是必不可少的。实验方案有两种实验方案有两种一种方案一种方案：可以由其他同学用与可以由其他同学用与A A同学一样的土样进同学一样的土样进行实验，如果结果与行实验，如果结果与A A同学一致，则证明同学一致，则证明A A无无误；如果结果不同，则证明误；如果结果不同，则证明A A同学存在操作失同学存在操作失误或培养基的配制有问题。误或培养基的配制有问题。四、实验案例四、实验案例 实验的具体操作步骤如下实验的具体操作步骤如下:1.1.土壤取样土壤取样 从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土表层土3 cm3 cm左右，再取样，将样品装入事左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。先准备好的信封中。土壤中某样品细菌的分离与计数土壤中某样品细菌的分离与计数