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1、1.1 1.1 DNADNA重组技术的基本重组技术的基本工具工具基因工程基因工程分子水平改变生命分子水平改变生命 基因工程基因工程又叫做又叫做基因拼接技术基因拼接技术或或DNADNA重组重组技术技术。就是按人们的意愿，把一种就是按人们的意愿，把一种生物的某种生物的某种基因提取出来，加以修饰改造，然后放到另一基因提取出来，加以修饰改造，然后放到另一种生物的细胞中，定向地改造生物的遗传性状。种生物的细胞中，定向地改造生物的遗传性状。基因工程的基因工程的“专用工具专用工具”分子的手术刀分子的手术刀限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶：(一种限制性内切酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并且一种限制性内切酶只
2、能识别一种特定的核苷酸序列，并且能在特定的切点上切割能在特定的切点上切割DNA分子的酶。分子的酶。)来源：来源：从原核生物中分离纯化出来从原核生物中分离纯化出来作用：作用：识别由识别由6个核苷酸组成的序列个核苷酸组成的序列(大多数大多数)识别由识别由458个核苷酸组成的序列个核苷酸组成的序列(少数少数)结果：结果：黏性末端和平末端黏性末端和平末端EcoR I的切割的切割切割位点：在中轴线两侧切割位点：在中轴线两侧得到：黏性末端得到：黏性末端G A A T T C C T T A A G 限制酶限制酶限制酶限制酶C T T A AG A A T T C G限制酶限制酶C T T A AG A A
3、 T T C G限制酶限制酶C T T A AG A A T T C GC T T A AG A A T T C GC T T A AG A A T T C G黏性末端黏性末端黏性末端黏性末端Sma I的切割的切割vCCCGGGvGGGCCC切割位点：在中轴线处切割位点：在中轴线处得到：平末端得到：平末端C T T A AG A A T T C GDNA连接酶连接酶2.分子的分子的“缝合针缝合针”DNA连接酶连接酶DNA连接酶的作用连接酶的作用 甲片段甲片段CTTCATG AATTCCCTAA GAAGTACTTAA GGGATT 乙片段乙片段GGCATCTTAAAATTCCGTAG 磷酸二酯
4、键磷酸二酯键GGCATCTTAAAATTCCGTAG vE.coli DNA连接酶连接酶v 只能只能连接黏性末端连接黏性末端vT4DNA连接酶连接酶v 连接黏性末端或平末端连接黏性末端或平末端基因进入受体细胞的载体“分子的运输车”质粒、质粒、质粒、质粒、噬菌体、噬菌体、噬菌体、噬菌体、病毒病毒病毒病毒运载体运载体1 1能够在宿主细胞内能够在宿主细胞内复制复制并并 稳定保存；稳定保存；具有具有一个一个或或多个限制酶多个限制酶切位点切位点以便与外源基因相以便与外源基因相连；连；具有具有标记基因标记基因，便于进，便于进行筛选行筛选12基因工程的操作工具基因工程的操作工具1.基因的剪刀基因的剪刀 限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶2.基因的针线基因的针线 连接酶连接酶 3.基因的运输工具基因的运输工具 运载体运载体 基因工程的操作步骤基因工程的操作步骤1.目的基因的目的基因的提取提取2.目的基因与运载体目的基因与运载体结合结合3.目的基因目的基因导入导入受体细胞受体细胞4.目的基因的目的基因的检测检测与与表达表达