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1、专题专题5DNA和蛋白质技术和蛋白质技术课题课题1.DNA的粗提取与鉴定的粗提取与鉴定1DNA的溶解性：的溶解性：思考题思考题1：DNA在氯化钠溶液中的溶解度有什么在氯化钠溶液中的溶解度有什么特点？对此有什么应用？特点？对此有什么应用？DNADNA在氯化钠溶液中的溶解度，随着氯化钠的浓度在氯化钠溶液中的溶解度，随着氯化钠的浓度的变化而改变的。当氯化钠的物质的量浓度为的变化而改变的。当氯化钠的物质的量浓度为0 014mol/L14mol/L时，时，DNADNA的溶解度最低。利用这一原理，的溶解度最低。利用这一原理，可以使溶解在氯化钠溶液中的可以使溶解在氯化钠溶液中的DNADNA析出；析出；思考题
2、思考题2：利用什么原理来将利用什么原理来将DNA与蛋白质分离与蛋白质分离开？开？一、实验原理：一、实验原理：2DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性：对酶、高温和洗涤剂的耐受性：蛋白酶蛋白酶能水解能水解 ，但对，但对 没有影响。大多没有影响。大多数蛋白质不能忍受数蛋白质不能忍受 的高温，而的高温，而DNADNA在在 以上才会变性。以上才会变性。能够瓦解细胞膜，但对能够瓦解细胞膜，但对DNADNA没有影响没有影响。3细胞在细胞在 中易吸水而导致细胞膜和细胞核膜中易吸水而导致细胞膜和细胞核膜的破裂，据此可得到含有核的破裂，据此可得到含有核DNA的溶液。的溶液。4DNA的鉴定：的鉴定：思考题思考题3：依据
3、什么原理来鉴定依据什么原理来鉴定DNA？三、实验材料：鸡血细胞液三、实验材料：鸡血细胞液思考题思考题4：能否选用牛、羊、马血做实验材能否选用牛、羊、马血做实验材料？为什么？料？为什么？不能。不能。因为哺乳动物成熟的红细胞中无细因为哺乳动物成熟的红细胞中无细胞核，仅靠白细胞和淋巴细胞中的少数胞核，仅靠白细胞和淋巴细胞中的少数DNA，在实验中很难提取到。，在实验中很难提取到。四、实验步骤：四、实验步骤：1制备鸡血细胞液：制备鸡血细胞液：在鸡血中加入质量浓度为01g/mL的 溶液，离心处理；2提取鸡血细胞的细胞核物质：提取鸡血细胞的细胞核物质：向鸡血细胞液中加入蒸馏水，搅拌、过滤过滤；思考题5：加入
4、蒸馏水的目的是什么？为什么能达到此目的？加速了鸡血细胞的破裂加速了鸡血细胞的破裂(细胞膜和核膜的破裂细胞膜和核膜的破裂)，从而释放出从而释放出DNADNA；蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种；蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体，水分可以大量进入血细胞内，使血细低渗液体，水分可以大量进入血细胞内，使血细胞胀裂。胞胀裂。3溶解细胞核内的溶解细胞核内的DNA：加入2mol/L的氯化钠溶液，搅拌，使DNA呈溶解状态；过滤过滤4析出含析出含DNA的黏稠物：的黏稠物：加入蒸馏水，用玻璃棒搅拌；思考题6：此时加入蒸馏水的目的是什么？使氯化钠溶液浓度接近使氯化钠溶液浓度接近0 014mol/L14mol/L，使，
5、使DNADNA最大限最大限度地析出。度地析出。5滤取含滤取含DNA的黏稠物：的黏稠物：过滤过滤；思考题7：这次过滤与上次过滤的目的一样吗？为什么？不一样；这次过滤是为了去除溶于氯化钠溶液的不一样；这次过滤是为了去除溶于氯化钠溶液的杂质，而上次过滤是为了去除破裂的细胞膜等物杂质，而上次过滤是为了去除破裂的细胞膜等物质。质。6将将DNA的黏稠物再溶解：的黏稠物再溶解：加入2mol/L的氯化钠溶液，搅拌，使DNA呈溶解状态；7过滤含有过滤含有DNA的氯化钠溶液：的氯化钠溶液：过滤过滤；思考题8：这一步骤的目的是什么？除去含有除去含有DNADNA滤液中的杂质；滤液中的杂质；思考题9：为什么反复地溶解与
6、析出DNA，能够去除杂质？用高盐浓度的溶液溶解用高盐浓度的溶液溶解DNADNA，能除去在高盐中不能，能除去在高盐中不能溶解的杂质；溶解的杂质；用低盐浓度使用低盐浓度使DNADNA析出，能除去溶解在低盐溶液中析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂质。的杂质。因此，通过反复溶解与析出因此，通过反复溶解与析出DNADNA，就能够除去与，就能够除去与DNADNA溶解度不同的多种杂质。溶解度不同的多种杂质。8提取含杂质较少的提取含杂质较少的DNA：加入冷却的95%的酒精，搅拌；思考题10：这一步骤的目的是什么？去除溶于酒精的杂质；去除溶于酒精的杂质；思考题11：为什么加入的酒精需要冷却的？可可抑抑制制核核酸酸
7、水水解解酶酶的的活活性性，防防止止降降解解DNADNA；凝凝集集DNADNA；减少；减少DNADNA链的断裂。链的断裂。9DNA的鉴定：的鉴定：取两支试管，各加入0015mol/L的氯化钠溶液5mL，一支加入提取的DNA，两支各加入4mL的二苯胺试剂。混合均匀后置于沸水中加热。思考题12：为什么要设置对照组？实验中能观察到什么现象？确定二苯胺不与氯化钠发生颜色反应；实验组试确定二苯胺不与氯化钠发生颜色反应；实验组试管中可看到溶液变蓝色管中可看到溶液变蓝色 本实验中有三次过滤本实验中有三次过滤,分别有什么作用分别有什么作用?过滤用蒸馏水稀释过的鸡血细胞液过滤用蒸馏水稀释过的鸡血细胞液目的目的:含
8、核物质的滤液含核物质的滤液 过滤含粘稠物的过滤含粘稠物的0.14mol/LNaCl0.14mol/LNaCl溶液溶液目的目的:纱布上的粘稠物纱布上的粘稠物 过滤溶解有过滤溶解有DNADNA的的2mol/LNaCl2mol/LNaCl溶液溶液目的目的:含含DNADNA的滤液的滤液 实验中有五次用玻璃棒搅拌实验中有五次用玻璃棒搅拌?分别有什么作用分别有什么作用?第一次搅拌加蒸馏水的鸡血细胞液第一次搅拌加蒸馏水的鸡血细胞液 加速细胞的破裂加速细胞的破裂第二次搅拌加第二次搅拌加2mol/LNaCl溶液的滤液溶液的滤液 使使DNADNA与溶液混合均匀与溶液混合均匀第三次搅拌加蒸馏水至第三次搅拌加蒸馏水至0.14mol/LNaCl溶液溶液 稀释稀释NaClNaCl溶液溶液,析出析出DNADNA第四次搅拌放入第四次搅拌放入2mol/LNaCl溶液中纱布上的粘稠溶液中纱布上的粘稠物物 使使DNADNA尽可能多的溶于溶液中尽可能多的溶于溶液中第五次搅拌体积分数为第五次搅拌体积分数为95%的酒精的酒精 提取含杂质较少的提取含杂质较少的DNADNA