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1、动物细胞的原代培养动物细胞的原代培养无菌室下风口上风口液氮罐安全柜着装n n操作者进入无菌室前先用肥皂洗净双手，然后用1 新洁尔灭浸泡消毒5分钟将小白鼠断颈处死，然后用将小白鼠断颈处死，然后用75%75%酒精或酒精或1 1 新洁尔新洁尔灭浸泡消毒，迅速进入无菌室。灭浸泡消毒，迅速进入无菌室。n n将小白鼠置超净工作台上，打开腹腔 n n用眼科剪和镊，将肾外膜剪破，并将其剥向肾门，去肾外膜及脂肪，剪碎组织n n接种组织块n n移入培养箱中（注意贴有组织块的一面朝上），n n静止23小时，然后将细胞培养瓶轻轻翻转，继续静止培养。观察n n24244848小时后若培养液变成黄色且混浊，表示已小时后若
2、培养液变成黄色且混浊，表示已被污染；被污染；n n若培养液变成紫色，一般细胞生长不好，则培养若培养液变成紫色，一般细胞生长不好，则培养液液pHpH过高；过高；n n若培养液显为橙黄、橘红且清澈，一般显示细胞若培养液显为橙黄、橘红且清澈，一般显示细胞生长良好。在相差显微镜下观察，若此时见细胞生长良好。在相差显微镜下观察，若此时见细胞自组织边缘长出。自组织边缘长出。n n继续培养继续培养3 35 5日，再换部分或全部培养液，待多日，再换部分或全部培养液，待多数组织块的生长晕相接，小心挑掉组织块，继续数组织块的生长晕相接，小心挑掉组织块，继续培养培养3 34 4天，细胞贴满细胞培养瓶壁时便可进行天，
3、细胞贴满细胞培养瓶壁时便可进行传代培养。传代培养。骨髓瘤细胞的培养n n骨髓瘤细胞消化数分钟中止消化、吹散细胞n n收集细胞、离心计数细胞传代37、5CO2培养小鼠的免疫实验n n市售绵羊血n n血球计数板计数，调整细胞浓度 n n抓小鼠的方法n n腹腔注射免疫n n尾静脉免疫n n皮下免疫n n足垫免疫n n脾脏免疫1所需器具称重n n脾脏免疫2注射麻药n n脾脏免疫3打结固定小鼠n n脾脏免疫4酒精消毒去毛碘酒消毒n n脾脏免疫5剪开外皮剪开腹膜找到脾脏n n脾脏免疫6注射抗原n n脾脏免疫7注射双抗缝合伤口n n每隔15天重复注射作加强免疫，共重复2次 n n第三次免疫之后10天，将小鼠断尾取血，用ELISA方法，检测血清效价。n n取脾细胞融合前3天加强免疫一次，以活化B淋巴细胞 The EndThe End结束结束