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1、【实 验】叶绿体中色素的提取叶绿体中色素的提取(tq)和分离和分离 主讲人：主讲人：段段 娜娜 肖祖文肖祖文 助助 理：谷维佳理：谷维佳 黄素黄素(hun s)(hun s)芬芬 孙捷吉孙捷吉 马牧原马牧原 周周枭楠枭楠第一页，共18页。色素(s s)的提取和分离实验一、实验(shyn)目的进行绿叶中色素的提取和分离探究绿叶中含有色素种类数目(shm)和颜色培养合作和严谨的科学精神 第二页，共18页。色素的提取和分离(fnl)实验二、实验(shyn)原理提取：叶绿体色素(s s)易溶于无水乙醇（酒精、汽油、苯、石油醚等）等有机溶剂中，可以用无水乙醇提取绿叶中的叶绿体色素(s s)。分离：纸层析
2、法 不同的叶绿体色素(s s)随层析液在滤纸上扩散速度不同。不同的色素(s s)会在扩散过程中分离开来，形成条带。（色素(s s)在层析液中溶解度不同，溶解度高的色素(s s)分子随层析液在滤纸条上的扩散速度快，溶解度低的色素(s s)分子随层析液在滤纸条上的扩散速度慢，因而可用层析液将不同的色素(s s)分离。）第三页，共18页。色素的提取(tq)和分离实验三、实验(shyn)材料【实验材料】：新鲜菠菜绿叶【实验材料】：新鲜菠菜绿叶【实验药品【实验药品(yopn)】：层析液（汽油：石油醚：丙酮：】：层析液（汽油：石油醚：丙酮：苯苯=20:2：2:1），无水乙），无水乙 醇，石英砂，碳酸钙醇，
3、石英砂，碳酸钙【实验用具】：研钵，药匙，纱布，小烧杯，干燥滤纸，【实验用具】：研钵，药匙，纱布，小烧杯，干燥滤纸，剪刀，试管，毛细吸管，棉塞剪刀，试管，毛细吸管，棉塞第四页，共18页。色素的提取和分离(fnl)实验提取(tq)叶绿体色素v取材：取新鲜菠菜叶取材：取新鲜菠菜叶5g5g，撕去叶脉，尽量剪碎，放入研钵。，撕去叶脉，尽量剪碎，放入研钵。v研磨：向研钵中放入少量石英砂和碳酸钙（量约为药匙的研磨：向研钵中放入少量石英砂和碳酸钙（量约为药匙的1/31/3），加入），加入6ml6ml无水乙醇，充分、迅速地研磨至匀浆状态。无水乙醇，充分、迅速地研磨至匀浆状态。v过滤：在小烧杯过滤：在小烧杯(sh
4、obi)(shobi)上放上上放上4 4层纱布，将研磨液倒入层纱布，将研磨液倒入小烧杯小烧杯(shobi)(shobi)，过，过v滤制备得到滤液。滤制备得到滤液。v【注】【注】v加石英砂是为了使研磨充分加石英砂是为了使研磨充分v加碳酸钙是为了防止叶绿体色素被破坏加碳酸钙是为了防止叶绿体色素被破坏v加入加入CaCO3CaCO3和石英砂的量均很少，无水乙醇的量不应太少和石英砂的量均很少，无水乙醇的量不应太少四、实验步骤第五页，共18页。第六页，共18页。色素的提取(tq)和分离实验v制备滤纸条：将干燥的定性滤纸剪成长制备滤纸条：将干燥的定性滤纸剪成长(chngzhng)(chngzhng)与宽略小
5、于试管长与宽的滤纸与宽略小于试管长与宽的滤纸条，将其一端剪去两个角，并在距这一端条，将其一端剪去两个角，并在距这一端1cm1cm处用铅笔划线。处用铅笔划线。v画滤液细线：用毛细吸管吸取少量滤液，沿画滤液细线：用毛细吸管吸取少量滤液，沿铅笔线均匀画出细线（细而齐）。待滤液干铅笔线均匀画出细线（细而齐）。待滤液干后，重复画线后，重复画线3-43-4次。次。v【注】【注】v画滤液线时尽量画直、画细、画浓画滤液线时尽量画直、画细、画浓v每次画完，要等滤液干时再重复画，以防滤每次画完，要等滤液干时再重复画，以防滤液扩散开使滤液线过宽，影响结果液扩散开使滤液线过宽，影响结果分离(fnl)叶绿体色素四、实验
6、步骤第七页，共18页。色素(s s)的提取和分离实验v固定装置：将固定装置：将3mL3mL层析液倒入试管中，将画好层析液倒入试管中，将画好线的滤纸条插入层析液中，用棉塞塞紧试管线的滤纸条插入层析液中，用棉塞塞紧试管口。口。v观察现象：观察现象：10min10min后，将滤纸条取出，风干后，将滤纸条取出，风干(fnggn)(fnggn)。观察色素带及其颜色，作好记录。观察色素带及其颜色，作好记录。v【注】【注】v放滤液条时，要避免滤液细线浸没到层析液。放滤液条时，要避免滤液细线浸没到层析液。不要让滤纸条贴在层析管壁上。不要让滤纸条贴在层析管壁上。v层析液中一些成分易挥发，要避免开放在空层析液中一
7、些成分易挥发，要避免开放在空气中。气中。分离(fnl)叶绿体色素四、实验步骤第八页，共18页。1 1、选材时应注意选择鲜嫩、色浓绿、无浆汁的菠菜叶片。、选材时应注意选择鲜嫩、色浓绿、无浆汁的菠菜叶片。2 2、研磨要快，收集的滤液要用棉塞塞住，层析时要加盖，、研磨要快，收集的滤液要用棉塞塞住，层析时要加盖，尽量减少有机溶剂的挥发。（无水乙醇和层析液都易挥尽量减少有机溶剂的挥发。（无水乙醇和层析液都易挥发、易燃且有一定毒性）发、易燃且有一定毒性）3 3、每次点样前要把烧杯中的滤液摇匀。、每次点样前要把烧杯中的滤液摇匀。4 4、尽量避免手上的杂质沾到滤纸条上。、尽量避免手上的杂质沾到滤纸条上。5 5
8、、实验时保持通风，安全操作、实验时保持通风，安全操作6 6、实验注重团队合作、实验注重团队合作(hzu)(hzu)，组员们共同完成实验。，组员们共同完成实验。五、注意事项色素的提取和分离(fnl)实验第九页，共18页。实验结果实验结果(ji(ji gu)gu)探究探究六、实验(shyn)结果第十页，共18页。叶绿素的提取(tq)与分离第十一页，共18页。实验结果实验结果(ji(ji gu)gu)探究探究七、实验(shyn)总结最宽（最多）：叶绿素最宽（最多）：叶绿素a最窄（最少）：胡萝卜素最窄（最少）：胡萝卜素相邻距离最近：叶绿素相邻距离最近：叶绿素a和叶绿素和叶绿素b色素在滤纸上自上而下分布
9、依次为：胡色素在滤纸上自上而下分布依次为：胡萝卜素萝卜素叶黄素叶黄素叶绿素叶绿素a 叶绿素叶绿素b第十二页，共18页。实验结果实验结果(ji(ji gu)gu)探究探究叶绿体中的色素能够在滤纸上彼此分离的原因是（）A色素提取液中色素已经分层B阳光的照射使不同色素彼此分开C乙醇有使色素溶解并彼此分离的特性(txng)D各种色素在滤纸上随层析液扩散的速度不同加SiO2、加CaCO3的目的分别是：研磨充分；保护叶绿素。为什么滤液细线越细、越齐越好？防止色素带之间部分重叠。为什么层析液不能没及滤纸条的滤液细线？防止色素溶解在层析液中，影响实验结果。八、课堂(ktng)反馈D第十三页，共18页。聚焦(j
10、jio)高考（2012上海理综17）图6表示叶绿体色素提取分离实验中纸层析的结果，据图判断用作实验材料的叶片颜色为（）A红色(hngs)B黄色 C绿色 D紫色B第十四页，共18页。聚焦(jjio)高考（2011江苏生物4）某研究组获得了水稻的叶黄素缺失突变体。将其叶片进行了红光照射光吸收测定和色素层析条带分析（从上至下），与正常叶片相比，实验(shyn)结果是（）A.光吸收差异显著，色素带缺第2条B.光吸收差异不显著，色素带缺第2条C.光吸收差异显著，色素带缺第3条D.光吸收差异不显著，色素带缺第3条B第十五页，共18页。第十六页，共18页。（1）二氧化硅（SiO2）使研磨更加充分（2）8.0以1.0作为pH梯度进行实验（3）pH小于6.0叶绿素会由于酸性pH值而被破坏（4）纸层析(cnx)法主要步骤：制备滤纸条画色素液细线层析(cnx)分离色素观察色素带你做对了吗？第十七页，共18页。实验实验(shyn)(shyn)结果探究结果探究“叶绿素的提取与分离(fnl)”实验可在哪些方面进行改进？九、课后思考(sko)第十八页，共18页。