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1、体外PCR 扩增和体内DNA 复制 体外PCR 扩增和体内DNA 复制是获得复制DNA 的2 种途径,它们都依据半保留复制的原理,但因其操作的环境不同,所要求的条件和具体的过程又有所不同。PCR 扩增和DNA 复制过程程的比的比较1.两者都遵循碱基互补配对原则 PCR 扩增和DNA 复制过程程的比的比较2.两者都遵循半保留复制PCR 扩增和DNA 复制过程程的比的比较3.3.模板模板DNA DNA 经加热至经加热至90909595左右一定时间后,左右一定时间后,使模板使模板DNA DNA 双链成为单链。而体双链成为单链。而体内内DNADNA复制的复制的解链需要单链解链需要单链DNADNA结合蛋
2、白(结合蛋白(ssbDNAssbDNA蛋白)、蛋白)、DNADNA解链酶(解链酶(DNA helicaseDNA helicase)等的参与。)等的参与。4.4.体内体内DNA DNA 的复制是的复制是边解旋边复制边解旋边复制,且是,且是半不连半不连半不连半不连续复制续复制续复制续复制:由于:由于DNADNA聚合酶只能以聚合酶只能以5 53 3方向聚合方向聚合子代子代DNADNA链,因此两条亲代链,因此两条亲代DNADNA链作为模板聚合链作为模板聚合子代子代DNADNA链时的方式是不同的。以链时的方式是不同的。以3 35 5方向的方向的亲代亲代DNADNA链作模板的子代链在聚合时基本上是连链作
3、模板的子代链在聚合时基本上是连续进行的,这一条链被称为前导链(续进行的,这一条链被称为前导链(leading leading strand)strand)。而以。而以5 53 3方向的亲代方向的亲代DNADNA链为模板的链为模板的子代链在聚合时则是不连续的,这条链被称为随子代链在聚合时则是不连续的,这条链被称为随从链(从链(lagging strand)lagging strand)。DNADNA在复制时,由随从在复制时,由随从链所形成的一些子代链所形成的一些子代DNADNA短链称为冈崎片段短链称为冈崎片段(Okazaki fragment)Okazaki fragment)。由。由DNADNA连接酶将冈崎片段连接酶将冈崎片段连起来。连起来。PCR PCR 扩增中扩增中2 2 条单链完全解开,分别同条单链完全解开,分别同时以时以5 53 3方向连续合成。方向连续合成。结束语结束语谢谢大家聆听!谢谢大家聆听!12