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1、肌肌肉肉特特殊殊染染色色文稿归稿存档编号：KKUY-KKIO69-OTM243-OLUI129-肌肉冰冻切片常用组织学及酶组织化学染色技术肌肉冰冻切片常用组织学及酶组织化学染色技术（）苏木精和伊红染色（Hematoxylin and Eosin,HE）1苏木精溶液染色 10 分钟 2流水冲洗 10 分钟2伊红溶液染色 3 分钟4流水冲洗 1 分钟 5梯度酒精脱水，透明树胶封固骨骼肌 HE 染色（肌膜核蓝色，肌纤维粉红色，结缔组织淡红色）（二）改良 Gomori 三色染色方法（Modified Gomori Trichrome,MGT）1Harris 苏木精 10 分钟2水冲洗 10 分钟3Go
2、mori 氏溶液 30 分钟 60 分钟402%醋酸浸洗 1 分钟5酒精脱水，二甲苯透明，树胶封固。骨骼肌 MGT 染色（核紫红,肌纤维暗绿色,胶原亮绿色,线粒体红色）（三）PAS 反应法(Periodic Acid Schiffs reaction,PAS)1固定于 Carnoiy 氏固定液 10 分钟2流水冲洗 2 分钟305%过碘酸 5 分钟4蒸溜水洗 12 分钟5Schiff 氏溶液 1530 分钟6流水洗 510 分钟7Harris 苏木精溶液 2 分钟8流水洗 5 分钟9脱水、透明、封固（合成树胶）骨骼肌 PAS 染色结果：糖原红色，肌内肌原纤维用清晰可见A 纤维染色反应强，B、C
3、、型纤维呈中间型。（四）苏丹黑 B 染色1.苏丹黑溶液 20 分钟（加盖防气化）2 流水洗1过滤的苏木精染 1 分钟4 流水洗 2 分钟5 甘油明胶封固结果：脂类物质染成黑色，。（五）四氮唑还原酶(NADHtetrarolium redutase,NADHTR)1.孵育于下列基质内 30 分钟，37?0.05M（或 0.2M）Tric 缓冲液（PH7.4）30ml硝基四氮唑（BNT）30mgNADH 24mg2.蒸馏水洗。3.甘油明胶封固。骨骼肌 NADHTR 染色(型肌纤维紫兰色，型肌纤维淡灰色)。（六）琥铂酸脱氢酶（Succinate dehydrogenase，SDH）染色步骤1孵育于下
4、列基质 30 分钟,37（琥泊酸钠 100 mg 硝基四氮唑兰10 mg 吩嗪二甲脂硫酸盐 0.3 mg 0.1M Tris 缓冲液 30ml调 PH7.2）2顺序在 60%、90%、60%丙酮顺序脱水及蒸馏水清洗3甘油明胶封固。骨骼肌 SDH 染色（型纤维色深，A、C 中间型，B 染色浅）（七）细胞色素氧化酶染色（COX）1 下述基质内孵育 14 小时 37DAB（3，-3，-二氨基联苯二氨盐酸盐）30mg01M 醋酸缓冲液14.0ml1%氯化锰 1.5ml01%新鲜过氧化氢 0.15ml2 蒸馏水冲洗3 1%硫酸铜冲洗 5 分钟4 蒸馏水冲洗5 甘油封固肌纤维呈褐红色，代表线粒体反应，细胞
5、色素氧化酶缺陷时则无色。（八）腺苷三磷酸酶(AdenosineTriphosphatase,ATPase)1.制备下述溶液：A）碱性溶液：0.1M 巴比妥钠 1 份体积 0.18M CaCl2 1 份体积蒸馏水 3 份体积调 PH 9.7-11.0B）主要孵育液及上清液：0.1M 巴比妥钠 2 份体积 0.18M CaCl2 1 份体积蒸馏水 7 份体积上述溶液分成二份即 B（-）与 B（+），B（-）为上清液，B（+）液为孵育液，即将 B 液 20ml+ATP-Na:50mg 调 PH9.7。C）酸性反应液：0.2M-巴比妥醋酸缓冲液 0.2M-巴比妥醋酸盐溶液 5 份体积 0.1M HCL
6、 10 份体积蒸馏水 8 份体积调 PH 4.2-4.62碱性 PH 染色片置于 A 液 15 分钟310 分钟后将酸性 PH 染色片置 C 液内 5 分钟4取出5全部切片置于 B（+）溶液内 45 分钟6制备下述溶液 1%CaCl2 2g/200ml 2%CoCl2 1g/50ml 0.01M-巴比妥钠溶液 1000ml7 1%Cacl2 溶液内洗三次 10 分钟.8 2%Cocl2 溶液内 3 分钟9流水洗 2 分钟100.01M-巴比妥钠溶液内洗 8 次111%黄色硫化铵 30 秒12流水洗 15 分钟 013脱水、50%100%酒精14二甲苯透明两次15封固（九）AMP 染色(单磷酸腺
7、苷脱氢酶)adenosine monophosphate deaminase1）反应液蒸馏水 14ml AMP 6mgNBT 15mg 3MKCl 1ml(搅拌同时慢慢加入)0.1N NaOH调整 PH6.1DTT 8mg2)室温 1 小时反应3）150mKCl-1.5mM citrate(PH6.0)2 次洗净4）自然干燥5）甘油胶封片固定（十）Acid Phosphataso 染色（酸性磷酸酶）1）反应液 萘酚 AS-BI（naphtol AS-BI）1ml巴比妥醋酸钠缓冲液(veronal acetate)5ml蒸馏水 14ml4%NaNo2(sodium nitrite)0.8ml副品红碱液(pararosaniline)0.8ml室温放置 2 分加入中混合 PH4.7-5.0 用 1N NaOH 调整过滤2）37孵化 60 分3）水洗4）2%甲基绿(methyl green)（滤过）数秒 酒精脱水，二甲苯透明。5）加拿大胶封片固定