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1、上课动物细胞培养和核移上课动物细胞培养和核移植技术植技术动物细胞工程常用的技术动物细胞工程常用的技术1 1、概念：、概念：是从动物机体中取出相关是从动物机体中取出相关组织组织，将，将它分散成它分散成单个细胞单个细胞,放在适宜的放在适宜的培养基培养基中，中，让这些细胞让这些细胞生长和增殖生长和增殖一、动物细胞培养一、动物细胞培养胚胎组织或幼龄动物组织胚胎组织或幼龄动物组织贴壁生长接触抑制5%CO2维持培养液的pHP46讨论讨论剪碎剪碎剪碎剪碎胰蛋白酶胰蛋白酶胰蛋白酶胰蛋白酶1010代以后，细胞增殖缓慢，细胞核型可能变化代以后，细胞增殖缓慢，细胞核型可能变化贴壁生长贴壁生长贴壁生长贴壁生长接触抑制
2、接触抑制接触抑制接触抑制2、动物细胞培养过程：、动物细胞培养过程：转入培养液中进行原代培养转入培养液中进行原代培养转入培养液中进行传代培养转入培养液中进行传代培养制成细胞悬液制成细胞悬液胰蛋白酶胰蛋白酶胰蛋白酶胰蛋白酶制成细胞悬液制成细胞悬液细胞贴壁细胞贴壁:培养贴附性细胞时培养贴附性细胞时,细胞要能贴附于底物上才细胞要能贴附于底物上才能生长繁殖能生长繁殖.有关概念有关概念细胞接触抑制细胞接触抑制 细胞在贴壁细胞在贴壁生长过程中，随生长过程中，随着细胞分裂，数着细胞分裂，数量不断增加，最量不断增加，最后形成一个单层，后形成一个单层，此时细胞间相互此时细胞间相互接触，细胞分裂接触，细胞分裂和生长
3、停止，数和生长停止，数量不再增加。量不再增加。有关概念有关概念原代培养原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。一般培养的第原代细胞。一般培养的第1 1代细胞与传代细胞与传1010代代以内的细胞称为原代细胞培养。以内的细胞称为原代细胞培养。传代培养传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。培养瓶中继续培养，称为传代培养。有关概念有关概念细胞株：细胞株：原代细胞一般传至原代细胞一般传至1010代左右细胞代左右细胞生长停滞，大部分细
4、胞衰老死亡，少数细胞存生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存活到活到40504050代，这种传代细胞为细胞株。代，这种传代细胞为细胞株。细胞系：细胞系：细胞株传代至细胞株传代至5050代后又出现细胞代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。种传代细胞为细胞系。细胞株和细胞系的区别：细胞株和细胞系的区别：细胞系的遗传物细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传代培养。容易传代培养。动物组
5、织细胞间隙中含动物组织细胞间隙中含有一定量的蛋白质，将有一定量的蛋白质，将细胞网络起来形成具有细胞网络起来形成具有一定弹性和韧性的组织一定弹性和韧性的组织和器官。和器官。传代培养传代培养动物胚胎或幼龄动动物胚胎或幼龄动物的组织、器官物的组织、器官细胞悬浮液细胞悬浮液胰蛋白酶胰蛋白酶（分解弹性纤维）（分解弹性纤维）10代细胞代细胞原代培养原代培养50代细胞代细胞细胞株细胞株无限传代无限传代细胞系细胞系遗传物质遗传物质未改变未改变遗传物质遗传物质改变改变动物细胞培养动物细胞培养讨论讨论:细胞株与细胞系的特点细胞株与细胞系的特点有何不同有何不同?思考：思考：1.1.根据细胞生活的内环境的知识，根据细
6、胞生活的内环境的知识，体外培养细胞时需要提供哪些物质体外培养细胞时需要提供哪些物质？2.2.体外培养的细胞需要什么样的环体外培养的细胞需要什么样的环境条件？境条件？3 3、动物细胞培养的条件、动物细胞培养的条件（抗生素，更换培养液）（抗生素，更换培养液）无菌、无毒无菌、无毒营养：与体内基本相同营养：与体内基本相同温度和温度和PHPH气体环境气体环境（95%95%空气空气+5%+5%COCO2 2 ）（36.50.536.50.5 7.2-7.4 7.2-7.4）（合成培养基）（合成培养基）培养目的培养目的培养基特有成分培养基特有成分培养基性质培养基性质原理原理动物细胞培养动物细胞培养植物组织培
7、养植物组织培养植物组织培养、动物细胞培养的比较植物组织培养、动物细胞培养的比较细胞的全能性细胞的全能性获得细胞或细获得细胞或细胞产物胞产物获得植株或细获得植株或细胞产品物胞产品物动物血清动物血清植物激素植物激素液体培养基液体培养基固体培养基固体培养基细胞增殖细胞增殖4.4.动物细胞培养技术的应用动物细胞培养技术的应用1 1 生物制品的生产生物制品的生产 如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体2 2 基因工程中的受体细胞的培养、获得大量基因工程中的受体细胞的培养、获得大量自体健康皮肤自体健康皮肤3 3 用于检测物质的毒性用于检测物质的毒性4 4 细胞的生理、药理、病理研究细
8、胞的生理、药理、病理研究 1 1、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的细胞是变的细胞是-（）A A细胞系细胞系 B B细胞株细胞株 C C原代细胞原代细胞 D D传代细胞传代细胞2 2、动物细胞工程技术的基础是、动物细胞工程技术的基础是-（）（）A.A.动物细胞融合动物细胞融合 B.B.单克隆抗体单克隆抗体 C.C.胚胎移植胚胎移植 D.D.动物细胞培养动物细胞培养AD3 3、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这样的组织
9、细胞是这样的组织细胞 （）A.A.容易产生各种变异容易产生各种变异 B B具有更强的全能性具有更强的全能性 C.C.取材十分方便取材十分方便 D D分裂增殖的能力强分裂增殖的能力强D 4.4.动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在于动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在于-（）A.A.培养基不同；培养基不同；B.B.动物细胞培养不需要在无菌条件下进行；动物细胞培养不需要在无菌条件下进行；C.C.动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能；动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能；D.D.动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培 养成植株。养成植株。A 离体的植物组织或
10、细胞在适当的离体的植物组织或细胞在适当的条件下可发育成完整的植株，那么，是条件下可发育成完整的植株，那么，是否能用类似的方法，使动物的细胞发育否能用类似的方法，使动物的细胞发育成一个完整的个体？成一个完整的个体？克隆羊多利克隆羊多利二、细胞核移植技术和克隆动物二、细胞核移植技术和克隆动物绵羊绵羊绵羊绵羊乳腺细胞乳腺细胞卵细胞卵细胞重组胚胎重组胚胎C C母绵羊子宫母绵羊子宫多莉羊多莉羊克隆羊多利的培育过程细胞核移植细胞核移植胚胎移植胚胎移植(减减中期中期卵母细胞卵母细胞)1 1、概念、概念将一个动物的将一个动物的细胞核细胞核，移入一个已经去掉，移入一个已经去掉细胞核的细胞核的卵母细胞卵母细胞中，
11、使其重组发育成中，使其重组发育成新的胚新的胚胎胎，这个新的胚胎最终发育为，这个新的胚胎最终发育为动物个体动物个体。2 2、结果：、结果：3 3、原理：、原理：克隆动物克隆动物动物细胞核动物细胞核的全能性的全能性二、细胞核移植技术和克隆动物二、细胞核移植技术和克隆动物4 4、种类、种类体细胞核移植体细胞核移植胚胎细胞核移植胚胎细胞核移植（难度较高）（难度较高）5 5、体细胞核移植的过程（克隆高产奶牛）、体细胞核移植的过程（克隆高产奶牛）高产奶牛高产奶牛（供体）（供体）供体细胞培养供体细胞培养(去核去核)重组胚胎重组胚胎胚胎移植胚胎移植 M期期 卵母细胞卵母细胞重组细胞重组细胞P496 6、应用、应用器官移植器官移植加快家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育加快家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育转基因转基因克隆动物克隆动物作为生物反应器，生产医用作为生物反应器，生产医用蛋白蛋白保护频危物种保护频危物种体细胞核移植技术用体细胞核移植技术用于人类疾病治疗于人类疾病治疗7 7、存在问题、存在问题成功率非常低成功率非常低 对克隆动物食品的安全性问题也存有争议对克隆动物食品的安全性问题也存有争议存在健康问题存在健康问题P50思考与探究思考与探究DC结束结束