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1、硕士生物仪器分析之液相色谱High-performanceliquidchromatography(HPLC)isaformofliquidchromatographytoseparatecompoundsthataredissolvedinsolution.HPLCinstrumentsconsistofareservoirofmobilephase,apump,aninjector,aseparationcolumn,andadetector.IntroductionCompoundsareseparatedbyinjectingaplugofthesamplemixtureontothe
2、column.Understandinghowachromatographiccolumnworks-BandsIntroductionThedifferentcomponentsinthemixturepassthroughthecolumnatdifferentratesduetodifferencesintheirpartitioningbehaviorbetweenthemobileliquidphaseandthestationaryphase.IntroductionTheHPLCSystemGC system气相色谱仪由以下五大系统五大系统组成：气路系统、进样系统、分离系统、温控
3、系统、检测记录系统。HPLC system气相色谱仪由以下五大系统五大系统组成：液路系统（梯度冲洗装置）、进样系统、分离系统、温控系统、检测记录系统。HPLC system高效液相色谱是在气相色谱和经典色谱的基础上发展起来的。不同点仅仅是现代液相色谱比经典液相色谱有较高的效率和实现了自动化操作。经典的液相色谱法：常压，固定相柱效低，分析周期长。现代液相色谱法引用了气相色谱的理论，流动相改为高压输送（最高输送压力可达4.9107Pa）；色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成，从而使柱效大大高于经典液相色谱（每米塔板数可达几万或几十万）；同时柱后连有高灵敏度的检测器，可对流出物进行连续检测。因
4、此，高效液相色谱具有分析速度快、分离效能高、自动化等特点。所以人们称它为高压、高速、高效或现代液相色谱法高压、高速、高效或现代液相色谱法。HPLC system-Principle液相色谱法的分离机理是基于混合物中液相色谱法的分离机理是基于混合物中各组分对两相亲和力的差别。各组分对两相亲和力的差别。分配系数的差异分配系数的差异 反相反相(reverse phase,RP)正相正相(normal phase,NP)等度等度(isocratic)梯度梯度(gradient)定性分析定性分析(qualitative analysis)定量分析定量分析(quantitative analysis)分析
5、型分析型(analytical HPLC)半制备型半制备型(semi-preparative HPLC)制备型制备型(preparative HPLC)工程级工程级(engineering level)液相系统操作高效液相色谱量级分析目的色谱柱HPLC system-Solvents化合物的极性是由分子中所含官能团的种类、数目及排列方式等综合因素决定。常见能团极性强弱顺序是：RCOOHArOHHOHROHNHC=OCH3RNH2RSHRCHORCORRCOORRN(Me)2RNO2ROCH3CH=CHCH2CH2利利用用不不同同组组分分与与固固定定相相（固固定定化化分分子子）的的高高专专属属性
6、性亲和力亲和力进行分离。常用于蛋白质的分离。进行分离。常用于蛋白质的分离。色谱法色谱法色谱法色谱法吸附色谱法吸附色谱法利用组分在固定相（吸附剂）上的利用组分在固定相（吸附剂）上的物理吸附能力的物理吸附能力的差异差异而达到分离的方法而达到分离的方法分配色谱法分配色谱法利用组分在固定相（固定液）中利用组分在固定相（固定液）中溶解度不同溶解度不同而达到而达到分离的方法分离的方法离子交换色谱法离子交换色谱法(IEC)利用组分在固定相（离子交换剂）上的利用组分在固定相（离子交换剂）上的亲和力大小亲和力大小不同不同而达到分离的方法而达到分离的方法凝胶色谱法凝胶色谱法(空间排阻色谱法空间排阻色谱法)利用多孔
7、固定相对利用多孔固定相对不同大小不同大小的分子的排阻作用达到的分子的排阻作用达到分离的方法。包括凝胶过滤色谱（分离的方法。包括凝胶过滤色谱（GFC）和凝胶渗）和凝胶渗透色谱（透色谱（GPC）手性色谱法手性色谱法利用化合物的利用化合物的旋光特性旋光特性达到分离的方法达到分离的方法亲和色谱法亲和色谱法分分分分 离离离离 机机机机 理理理理分离机理分离机理色谱法色谱法色谱法色谱法吸附色谱法吸附色谱法离子交换色谱法离子交换色谱法吸附剂选择吸附剂选择吸附剂选择吸附剂选择硅胶酸性物质氧化铝 碱性物质聚酰胺 可与酚类/酸类等形成氢键活性炭 分离水溶性成分洗脱剂选择洗脱剂选择洗脱剂选择洗脱剂选择二元溶剂三元溶
8、剂阳离子交换树脂-SO3H,-PO3H2,-COOH,Ac-OH阴离子交换树脂-NH2,=NH,-N+(CH3)3OH-酸、碱、盐的水溶液或缓冲溶液凝胶色谱法凝胶色谱法(GPC)(空间排阻色谱法空间排阻色谱法)离子交换色谱法的应用离子交换色谱法的应用1.用于中药有效部位的分离（不同电荷离子的分离）2.用于同类型天然有机物的组分分离（相同电荷离子的分离）3.提纯抗生素4.提取分离生物碱5.分离纯化糖类化合物6.分离纯化核苷酸及核酸7.提取精制胆红素Cation Exchange Chromatography(CEC)Anion Exchange Chromatography(AEC)阴离子交换色
9、谱阳离子交换色谱http:/ system-DetectorQuality ControlWhenyouarehandlingActivePharmaceuticalIngredientswhichwillbeusedforclinicaltrials,itismostimportanttohavededicatedandveryreliablepersonnelinqualitycontrol.RegulationsfortheanalysisofAPIsincreaseyearbyyearsoitisourprivilegetohaveanexperienced and ambitious
10、 team eager tosolvehighlychallenginganalyticalproblems.Thequalitycontrolunitnotonlypossessesalargevarietyofthelatestanalyticalinstrumentsbuthasalsoquickandunlimitedaccess to the vast resources of analyticalequipmentoftheUniversityofZurich.http:/www.lpf.uzh.ch/quality_control.htmlhttp:/www.lpf.uzh.ch
11、/quality_control.html3HPLCinstrumentsforroutineanalysisandmethoddevelopment1HPLCinstrumentforchiralapplicationsonly1GC-FIDinstrumentforroutineanalysis1HPLC/MSinstrument(IonTrap)formassidentificationandstructureelucidation(MS/MS)1Headspace-GCinstrumentforresidualsolventanalysis1FT-IRinstrumentwithATR
12、measurementofsolids,liquids,pastes,etc.1DSCinstrumentFullyequippedlaboratoryfortheanalysisofhighlyactivecompoundsMethoddevelopmentforalltypesofHPLCandGCanalysisFullpaletteofEP/USPanalysisPurityandassaydeterminationImpurityprofilecharacterizationReleaseofchemicalsforGMPproductionandfinalproducts(APIs
13、)CertificatesofAnalysisLongtermstabilitystudiesStructureelucidationThermochemicalanalysisKarlFischertitrationforwaterCombustionelementalanalysisResidueonignitionResidualsolventanalysisAnalysisofhighlyactivecompoundsQCServicesQCEquipmentSolid-Phase Extraction(SPE)http:/ specific interferencesfromyour
14、samplesothattheydonotcauseproblemforthedetectionandquantitationofanalytesofinterest.Three reasons to use SPE2.Youneedtoincrease the concentration of the analyteofinterestintheoriginalsamplessothatitcanbemorereadilydetectedandmoreaccuratelyquantitatedbyyouranalyticaltechnique.3.Youneedtoremove interferencesinyoursamplethat,thoughinvisible,suppressthesignalfortheanalyteofinterestasdetectedbymassspectrometry.此课件下载可自行编辑修改，仅供参考！此课件下载可自行编辑修改，仅供参考！感谢您的支持，我们努力做得更好！谢谢感谢您的支持，我们努力做得更好！谢谢