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1、 动物(dngw)分子育种研究进展汇报人：第一页，共31页。目录(ml)CONTENTS壹育种(y zhng)基本概念贰分子(fnz)遗传标记叁国内外研究进展第二页，共31页。壹第三页，共31页。通过创造遗传变异、改良(giling)遗传特性，以培育优良动植物新品种的技术。一种从遗传上逐代改进家畜群体重要(zhngyo)性状从而提高经济效益的技术和方法。依据分子遗传学和分子数量遗传学原理，在 DNA 水平上利用分子标记对生物群体(qnt)进行遗传改良。指可追踪染色体、染色体某一节段或某个基因座在家系中传递的任何一种遗传特性，是表示遗传多样性的手段。育种基本概念壹育种家畜育种分子育种遗传标记第四
2、页，共31页。DNA RNA Protein Phenotype育种工作的关键：如何提高选择效率 传统育种一般(ybn)是首先通过各种途径创造遗传变异，然后从分离群体的后代中进行优化选择和评价，这种选择是建立在表型基础之上的，这就要求育种家必须具有丰富的实践经验。育种基本概念壹古代(gdi)育种 近代育种 现代育种第五页，共31页。123分子技术育种表型和表型值选种(xun zhng)技术育种DNA重组(zhn z)技术育种转基因育种(y zhng)基因组育种育种基本概念壹第六页，共31页。动物(dngw)转基因技术2006年4月美国(mi u)密苏里-哥伦比亚大学的赖良学等获得了转线虫fat
3、-1基因(-3去饱和酶基因)的体细胞克隆猪，其体内表达的外源基因可以将猪体内的-6系饱和脂肪酸转化为-3系不饱和脂肪酸，提高了-3系脂肪酸含量，降低-6/-3的比例，显著提高了猪肉的营养价值。Lai L,Nat Biotechnol,2006.将外源基因整合到动物受体体细胞基因组上，并在受体动物体内稳定表达(biod)出相应的生物学表型的一种技术，其包括转基因重组子构建技术、重组子导入动物体内的转化技术、转基因在受体动物染色体上稳定整合及可控性表达(biod)技术等。育种基本概念壹第七页，共31页。2000年12月中国农业大学成功获得了我国首例转有人1-抗胰蛋白酶(y dn bi mi)基因的
4、转基因羊。非常规性转基因育种是将人类(rnli)药用蛋白基因或工业用酶基因导入畜禽基因组，使畜禽生产非常规性畜牧产品的技术。其将畜禽变为高效生产药用蛋白或工业用酶的化工厂，因此可称为动物生物反应器。育种基本概念壹非常规性转基因育种(y zhng)第八页，共31页。是分子育种在高通量测序时代的产物，即利用(lyng)高通量测序技术对群体进行研究、定位到控制某个目标性状的基因，然后通过序列辅助筛选或者转基因的方法来选育新的品种。育种基本概念壹基因组育种(y zhng)基因组育种是通过(tnggu)DNA标记技术来对某些重要生产性状基因座位直接进行选择改良,也可以同时考虑到多个生产性状座位,甚至是动
5、物个体的整个基因组，因此也可称为基因组扫描选择。第九页，共31页。贰第十页，共31页。动物分子育种研究的内容重点是主效数量(shling)性状基因座（Quantitative Trait Loci，QTL）育种，即定位动物数量(shling)性状位点中主效基因并直接进行改良或发现与之相连锁的DNA标记进行标记辅助选择（Marker Assisted Selection，MAS）育种。分子遗传标记贰第十一页，共31页。指在一个群体内的各个体间表现(bioxin)为连续变异的性状，如动植物的高度或长度等。数量性状较易受环境的影响。数量性状在生物全部性状中占有很大的比重，一些极为重要的经济性状（如作
6、物产量、生育期、籽粒重、乳牛泌乳量、羊毛长度等）都是数量性状。分子遗传标记贰第十二页，共31页。主效 QTL 育种除具有常规育种技术(jsh)的优点（能有效利用具有加性效应的基因座）外，还能利用具有互作效应和上位效应的基因座来改良动物重要生产性状。从理论上讲，任何一个可观察的 QTL 在连锁图谱中都可找到一个与之连锁的DNA 标记。主效 QTL 育种(y zhng)分子遗传标记贰第十三页，共31页。MAS 是指由于某些容易识别的 DNA 标记与某一数量性状基因座存在相关性或连锁关系，通过判断标记的基因型对种畜进行选择的方法，对数量性状进行直接选择或与之相锁的 DNA 进行标记辅助选择来改良动物
7、生产性状，从而提高动物生产效率和经济效益。可做出早期选种，减少了繁琐的性能测定；缩短世代间隔，提高选择的准确性、降低育种成本，加快遗传进展，特别对于遗传力低的性状、晚期表现性状，以及活体难于(nny)度量的性状更具有价值。MAS 育种(y zhng)分子遗传标记贰第十四页，共31页。遗传标记：可以稳定遗传的，易于(yy)识别的特殊的遗传多态性形式。在经典遗传学中，遗传多态性是指等位基因的变（差）异；在现代遗传学中，遗传多态性是指基因组中任何座位上的相对差异或者是DNA序列的差异。分子遗传标记贰第十五页，共31页。分子遗传标记贰同一物种的两个个体存在DNA序列(xli)差异的位点，这些位点用遗传
8、标记就称为分子遗传标记或DNA标记。分子遗传标记是以分子遗传学和分子数量遗传学为理论，利用分子生物学技术来改良(giling)畜禽品种的一种方法。RFLP、SSR、ISSR、RAPD、AFLP和SNP等。分子遗传(ychun)标记 第十六页，共31页。分子遗传标记贰 特点直接以DNA的形式表现，表现稳定。数量多（理论上遍及整个基因组）多态性高表现为中性，不影响目标性状(xngzhung)的表达；许多标记表现为共显性的特点，能区别纯合体和杂合体。成本不太高第十七页，共31页。分子遗传标记贰 显性标记显性标记(dominant markers)(dominant markers)：指：指F1F1的
9、多态性片段与的多态性片段与其亲本之一完全相同。如其亲本之一完全相同。如RAPDRAPD、AFLPAFLP、ISSRISSR等。等。共显性标记共显性标记(co-dominant markers)(co-dominant markers)：指双亲的两个：指双亲的两个(lin)(lin)以上分子量不同的多态性片段均在以上分子量不同的多态性片段均在F1F1中表现。中表现。如如RFLPRFLP、SSRSSR、SCARSCAR等。等。AA BB AB共显性标记，2倍体10 01 11 显性标记第十八页，共31页。分子遗传标记贰分子标记以分子杂交为基础的DNA标记技术（RFLP标记）以PCR技术为核心的DN
10、A标记技术（RAPD标记、SSR标记、SSLP标记、SCAR标记、AFLP标记、STS标记）以测序为基础的新型的分子标记（SNP标记、EST标记）第十九页，共31页。标记名称标记名称RFLPRFLPRAPDRAPDAFLPAFLPSSRSSRISSRISSRSCARSCARSTSSTSCAPsCAPs主要原理主要原理限制酶切限制酶切SouthernSouthern杂交杂交随机随机PCRPCR扩扩增增限制性酶切结合限制性酶切结合PCRPCR扩增扩增PCRPCR扩增扩增随机随机PCRPCR扩扩增增特异特异PCRPCR扩增扩增特异特异PCRPCR扩增扩增PCRPCR扩增产物扩增产物限制性酶切限制性酶
11、切多态性水平多态性水平中等中等较高较高非常高非常高高高高高中等中等检测基因组检测基因组区域区域单单/低拷贝区低拷贝区整个基因整个基因组组整个基因组整个基因组重复序列重复序列重复序列重复序列间隔的单间隔的单拷贝区拷贝区整个基因整个基因组组单拷贝区单拷贝区整个基因组整个基因组可靠性可靠性高高中中高高高高高高高高高高高高遗传特性遗传特性共显性共显性显性显性/共显共显性性共显性共显性/显性显性共显性共显性显性显性/共显共显性性共显性共显性显性显性/共显性共显性共显性共显性DNADNA质量要求质量要求高，高，5-305-30g g中，中，10-10-100ng100ng很高，很高，50-50-100ng
12、100ng中，中，10-10-100ng100ng中，中，2-2-50ng50ng中，中，5-5-10ng10ng高，高，50-50-100ng100ng实验周期实验周期长长短短较长较长短短短短短短短短短短开发成本开发成本高高低低高高高高低低高高高高高高第二十页，共31页。叁OfficePLUS第二十一页，共31页。全基因组关联分析(genome-wide association study,GWAS)是在关联分析的基础上对全基因组范围内的遗传标记进行检测、以研究复杂疾病和性状遗传的一种有效方法。随着高通量测序技术的发展以及猪、牛等主要畜禽高密度芯片的推出，为畜禽基因组育种提供了便利条件。通过
13、 GWAS 在基因组范围内筛选与目标性状相关联的变异位点成为可能。育种工作者通过GWAS 研究鉴定了大量(dling)与畜禽经济性状相关联的候选 SNP 位点和基因。国内外研究进展叁第二十二页，共31页。200920112012Liu 等（2011）利用 Chicken60K 芯片进行产蛋及蛋品质性状 GWAS，在白来杭(White leg-horn)和矮小(ixio)型褐壳蛋鸡(Brown-egg dwarf layers)群体中得到8个全基因组水平显著相关的SNP位点。Liu W B,et al.,PLoS One,2011.Luo 等(2012)利用SNP60芯片对大约克夏(Large
14、white)和民猪(Minzhu)杂交F2群体肌内脂肪、大理石纹和肉色等 7 项肉质相关指标(zhbio)进行 GWAS，得到 45 个显著的 SNP，仅在 12 号染色体上就有 36个 显 著 的 SNP 位 点。Luo W Z,et al.,International Journal of Biological Sciences,2012.Settles 等（2009）针 对 牛 副 结 核 病，利 用 SNP50芯片分别在4和9号染色体上发现了与副结核感染(gnrn)高度关联的2个区域。Settles M,et al.,Animal Genetics,2009.国内外研究进展叁第二十三页
15、，共31页。Reported 196 SNPs in Canadian Holstein bulls with significant associations with traits dscribing the size and shape of cows.Kolbehdari,D.et al.Dairy Sci.,2008.国内外研究进展叁Michael E.Goddard,Nature reviews genetics,2009.Mapping genes for complex traits in domestic animals and their use in breeding p
16、rogrammes第二十四页，共31页。第二十五页，共31页。国内外研究进展叁2013 年，由华南农业大学和广东温氏食品集团(jtun)组建的国家生猪种业工程技术研究中心完成的我国首例采用全基因组选择技术选育出的杜洛克特级种公猪，实现了对候选个体从表型选择到基因选择的突破，解决了动物个体肉质和抗性等性状难以选育的技术障碍，降低了早期选择的成本。中国农业大学承担研发的中国奶牛基因组选择技术体系建立表明，我国奶牛育种已步入全基因组选择时代(shdi)，建立起规模在 5 000 头以上的中国自主的参考群体，提高了公牛选择的准确性，大幅度缩短了公牛的世代间隔，加快了群体遗传进展。第二十六页，共31页。
17、西北农林科技大学张涌教授团队通过基因(jyn)定点整合和精确编辑技术与体细胞高效克隆技术有效结合。首次研制出人-防御素3基因(jyn)定点插入抗乳腺炎奶牛、溶葡萄球菌素基因(jyn)打靶抗乳腺炎奶牛 Liu X et al.,Nature Communications,2013.人溶菌酶基因打靶抗乳腺炎奶牛(nini)Liu X et al.,Proceedings Biological Sciences,2014.Ipr1 基因定点敲入抗结核克隆奶牛 Wu H et al.,Proceedings of the National Academy of Sciences of the USA,
18、2015.人-防御素 3 基因定点插入抗结核奶牛5个抗病育种材料和人血清白蛋白基因定点插入奶牛、人乳铁蛋白定点敲入奶山羊(Capra hircus)2 种乳腺生物反应器育种材料Cui C et al.,Scientific Reports,2015.国内外研究进展叁第二十七页，共31页。国内外研究进展叁第二十八页，共31页。国内外研究进展叁第二十九页，共31页。展 望(z h n w n g)我国动物种业研发能力不足，我国重要农业动物商用品种原种(yunzhng)进口依赖程度高的现状，需加强育种数据采集与性状测定新技术研究，只有育种数据的准确采集和性状的科学测定，才能保障动物重要经济性状的主效基因和分子标记开发的准确性。基因组学、转录组学、蛋白组学、代谢组学及宏基因组学等高通量的分子生物学技术应该广泛运用于功能基因鉴定和分子标记发掘，提高分子育种工作的效率。第三十页，共31页。THANKYOU请各位批评指正第三十一页，共31页。