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1、细菌标本的收集、转运和处理 Still waters run deep.流静水深流静水深,人静心深人静心深 Where there is life,there is hope。有生命必有希望。有生命必有希望 概述概述目的目的 按照正确的说明采集和稳妥地运转标本以保证结果的按照正确的说明采集和稳妥地运转标本以保证结果的正确。正确。质量差的标本：误诊、错误的抗生素治疗质量差的标本：误诊、错误的抗生素治疗实验室责任实验室责任1.提供标本采集和运转手册提供标本采集和运转手册(正确的说明正确的说明)2.与临床医生交流：正确地选择微生物试验，解释结果与临床医生交流：正确地选择微生物试验，解释结果3.检验医
2、师：查房、会诊、选择试验、解释结果检验医师：查房、会诊、选择试验、解释结果 标本采集标本采集 细菌学培养的标本应在疾病发作之后，抗生素开始细菌学培养的标本应在疾病发作之后，抗生素开始治疗之前尽可能快地进行收集。需要采第二份标本是因治疗之前尽可能快地进行收集。需要采第二份标本是因为第一份标本质量差或运转条件不适当，但对诊断一种为第一份标本质量差或运转条件不适当，但对诊断一种急性传染病来讲，其它情况很少要求第二份标本。例外急性传染病来讲，其它情况很少要求第二份标本。例外的情况包括多次收集血标本培养和诊断苛养菌或最初没的情况包括多次收集血标本培养和诊断苛养菌或最初没有怀疑的不常见的病原菌。有怀疑的不
3、常见的病原菌。标本的选择和收集的一般原则标本的选择和收集的一般原则 1选择合适的解剖部位收集标本。选择合适的解剖部位收集标本。2避免固有菌群污染。正常菌群的细菌生长和报告会使避免固有菌群污染。正常菌群的细菌生长和报告会使 医生和保健机构错误地认为它们引起感染的发生。另医生和保健机构错误地认为它们引起感染的发生。另 外，正常菌群的过度生长会掩盖真正的病原。外，正常菌群的过度生长会掩盖真正的病原。3抽吸及抽吸后用无菌盐水冲洗和组织活检是怀疑厌氧抽吸及抽吸后用无菌盐水冲洗和组织活检是怀疑厌氧 菌感染时正确的标本采集方法菌感染时正确的标本采集方法(表表2)。用拭子采集标本。用拭子采集标本 最少考虑，因
4、为拭子取样标本量相对较少且容易被邻最少考虑，因为拭子取样标本量相对较少且容易被邻 近的正常菌群污染。培养厌氧菌的标本应储存于室近的正常菌群污染。培养厌氧菌的标本应储存于室 温，不能放冰箱，因为氧较容易扩散到冷的标本中去。温，不能放冰箱，因为氧较容易扩散到冷的标本中去。一、标本的选择和收集一、标本的选择和收集4收集足够量的标本，使所要求的所有试验都能满意收集足够量的标本，使所要求的所有试验都能满意 地完成。标本量不足可产生假阴性结果。地完成。标本量不足可产生假阴性结果。5每份标本都要标明患者姓名、识别号码、标本来每份标本都要标明患者姓名、识别号码、标本来 源、采集日期和时间、采集者的姓名。源、采
5、集日期和时间、采集者的姓名。6盛标本的容器要有助于病原菌的存活，无泄漏，在盛标本的容器要有助于病原菌的存活，无泄漏，在 运送和处理期间安全。运送和处理期间安全。表表1 用于细菌培养的常见临床标本的选择用于细菌培养的常见临床标本的选择 解剖部位解剖部位临临 床床 标标 本本正正 确确不不 正正 确确下呼吸道下呼吸道咳出的新咳出的新鲜鲜粘液和炎性粘液和炎性细细胞胞(脓脓)，痰，痰唾液、口咽分泌物、从鼻咽部唾液、口咽分泌物、从鼻咽部窦窦内内排出物排出物窦窦直接从直接从窦窦内抽取或灌洗的分泌物，用内内抽取或灌洗的分泌物，用内窥镜检查时窥镜检查时刮取的或活刮取的或活检标检标本本鼻或鼻咽拭子、鼻咽分泌物、
6、痰，鼻或鼻咽拭子、鼻咽分泌物、痰，唾液唾液泌尿道泌尿道中段尿，用中段尿，用“直的直的”插入插入导导管收集的尿，管收集的尿，耻骨上穿刺尿，抽吸，膀胱耻骨上穿刺尿，抽吸，膀胱镜检查镜检查或其或其它外科它外科检查进检查进收集的收集的标标本本FoleyFoley导导尿管收集袋中的尿尿管收集袋中的尿浅表浅表伤伤抽取的抽取的脓脓或局部清洗液或局部清洗液(无菌无菌盐盐水水)，源自，源自真皮下的真皮下的脓脓拭子拭子表面物拭子或由于表面物表面物拭子或由于表面物污污染的拭染的拭子，用含有防腐子，用含有防腐剂剂的的盐盐水清洗液水清洗液深部深部伤伤浓浓性物，坏死性物，坏死组织组织，或从深部取的，或从深部取的组织组织表
7、面物表面物质污质污染的染的标标本本胃胃肠肠道道新新鲜鲜排出的排出的粪粪便，内便，内窥镜检查时窥镜检查时收集的收集的洗液或洗液或粪粪便便直直肠肠拭子，如果病人入院拭子，如果病人入院33天后天后发发展成腹泻，用于展成腹泻，用于细细菌培养菌培养静脉血静脉血在抗生素在抗生素庆庆用之前，从不同部位静脉穿用之前，从不同部位静脉穿刺收集刺收集2 23 3份份标标本，本，对对9090磅的人每份血磅的人每份血大大约约20ml20ml；用含碘化合物或洗必汰消毒；用含碘化合物或洗必汰消毒凝固的血，在凝固的血，在24h24h内抽内抽1 1份或份或33份血份血标标本，每份培养本，每份培养20ml2g)(2g)无菌、防漏
8、、无菌、防漏、宽宽口器口器;5ml;5ml无菌、防漏、无菌、防漏、宽宽口容器或口容器或Cary-Cary-BlairBlair培基培基(2g)(2g)无菌、防漏、无菌、防漏、宽宽口容器或用口容器或用10%10%福福尔尔马马林和林和/或或PVA;2mlPVA;2ml拭子拭子转转运运未防腐未防腐:1h,RT1h,RT运运转转培养基培养基24h,RT24h,RT21h,RT21h,RT1h,RT1h,RT1 124h,24h,4,24h,4,24h,-20-20或更冷或更冷未防腐未防腐:1h,RT1h,RT拭子拭子转转运系运系统统24h,RT24h,RT或或44未防腐未防腐1h,RT1h,RT福福尔
9、尔马马林林/PVA/PVA时间时间无限定无限定,RTRT2h,RT2h,RT24h24h4448h48hRTRT或或44培养培养:2d,:2d,443d43d4或更或更长时间长时间-70-70用于用于毒素毒素检测检测24h,24h,4448h48hRTRT24h,24h,44时间时间无限定无限定,RT,RT24h,24h,RTRT1/d1/d1 1或或2d2d标标本可本可测测出出低水平毒低水平毒素素1/d1/d1/d1/d1/d1/d住院超住院超过过3d3d或入院或入院诊诊断不断不是胃是胃肠肠炎的患者未炎的患者未经经医医师师会会诊诊不做常不做常规粪规粪便培养。便培养。对这对这些患者些患者应应考
10、考虑进虑进行行艰艰难难梭菌的梭菌的检测检测。除除婴婴儿外不推荐用拭子做儿外不推荐用拭子做常常规规病原病原检测检测患者患者应应是每是每24h24h排泄液体或排泄液体或软软大便大便55次的患者。成形次的患者。成形或硬大便，不推荐。或硬大便，不推荐。-20-20或以上冷或以上冷冻冻易于使易于使细细胞毒胞毒素活性快速素活性快速丢丢失失有腹部有腹部痉挛痉挛的患者在的患者在发发病病6d6d内采集到的血或液状便内采集到的血或液状便的阳性率最高，所有的阳性率最高，所有EHECEHEC血清型血清型检测检测志志贺贺毒素比毒素比仅仅用于山梨醇用于山梨醇MacConkeyMacConkey培养培养O157:H7O15
11、7:H7好。好。该该步步骤骤不鼓励使用，因不鼓励使用，因为为它提供不了什么它提供不了什么临临床价床价值值，且易且易误导误导。革。革兰兰或或简单简单的的亚亚甲基甲基蓝蓝染色可用于染色可用于观观察察白白细细胞。也有一些商胞。也有一些商业检业检测测方法方法对对淋球菌、志淋球菌、志贺贺氏菌、弯氏菌、弯曲菌、曲菌、单纯单纯疱疹病毒、及疱疹病毒、及肛肛门门携携带带的的B B群群链链球菌或球菌或别别的溶血的溶血链链球菌的球菌的检测检测，或，或不能留不能留样样的患者，是保留的患者，是保留方法方法表表3 细菌标本收集、运输和储藏指南细菌标本收集、运输和储藏指南瘘管瘘管见脓肿见脓肿液体：腹液体：腹部的、羊部的、羊
12、膜的、腹膜的、腹水、胆汁、水、胆汁、关关节节穿刺穿刺液、心包液、心包的、腹膜的、腹膜的、胸膜的、胸膜的、滑膜的、滑膜的、胸腔的、胸腔穿刺液穿刺液1.1.用碘酊充分消毒皮用碘酊充分消毒皮肤肤2.2.经经穿刺抽吸或外科穿刺抽吸或外科获获取取标标本本3.3.立即立即转转运运实验实验室室4.4.尽量多呈送液体；尽量多呈送液体；不要将拭子浸入液体不要将拭子浸入液体内内转转运运用于用于细细菌和酵菌和酵母的血培养瓶母的血培养瓶或无菌旋帽管或无菌旋帽管或或厌厌氧氧转转运系运系统统细细菌菌1ml1ml真菌真菌10ml10ml分枝杆菌分枝杆菌10ml10ml15min,15min,RTRT24h24h，RTRT心
13、包液心包液或用于真或用于真菌培养的菌培养的液体，液体，24h,24h,44无无羊水和后穹隆穿刺液羊水和后穹隆穿刺液应应用用厌厌氧系氧系统统送送检检，革，革兰兰染色前不需离心。其他染色前不需离心。其他液体液体检测检测最好用最好用细细胞离胞离心制心制备备法做革法做革兰兰染色染色坏疽坏疽组织组织见脓肿见脓肿胃的洗液胃的洗液或灌洗液或灌洗液检测检测分枝分枝杆菌杆菌幽幽门门螺杆螺杆菌活菌活检组检组织织患者早晨未患者早晨未进进食，并食，并卧床，采卧床，采样样1.1.用鼻胃管用鼻胃管进进入胃入胃2.2.用用25-50ml25-50ml冷却的冷却的无菌蒸无菌蒸馏馏水灌洗水灌洗3.3.获获得得标标本并放入到本并
14、放入到防漏无菌容器防漏无菌容器4.4.在去除管子之前，在去除管子之前，停止抽吸，并停止抽吸，并钳紧钳紧由消化科由消化科专专家用内家用内镜镜采采样样无菌、防漏容无菌、防漏容器器运运输输培基无菌培基无菌管管15min,15min,RTRT或在采集或在采集1h1h内中和内中和1h,RT1h,RT24h,24h,4424h,24h,441/d1/d1/d1/d标标本必本必须须立即立即处处理，因理，因为为分枝杆菌在胃灌洗中分枝杆菌在胃灌洗中死亡很快。当运死亡很快。当运转转达达1h1h时时用碳酸用碳酸氢钠氢钠中和中和为为抗菌抗菌试验试验可能需培养可能需培养表表3 细菌标本收集、运输和储藏指南细菌标本收集、
15、运输和储藏指南生殖器生殖器:女女性，羊水性，羊水1.1.经经羊膜穿刺或剖腹羊膜穿刺或剖腹产产厌厌氧氧转转运系运系统统,1ml1ml2h,RT2h,RT24h,24h,RTRT无无不能接受用拭子采集或不能接受用拭子采集或抽吸的阴道分泌物抽吸的阴道分泌物标标本，本，因因为为有潜在的阴道共生有潜在的阴道共生菌群的菌群的污污染染前庭大腺前庭大腺分泌物分泌物1.1.用碘制用碘制剂剂消毒皮肤消毒皮肤2.2.由由导导管抽吸液体管抽吸液体厌厌氧氧转转运系运系统统,1ml1ml2h,RT2h,RT24h,24h,RTRT1/d1/d宫颈宫颈分泌分泌物物1.1.用无用无润润滑滑剂剂的的扩扩阴阴器使器使宫颈宫颈可可
16、见见2.2.用拭子从用拭子从宫颈宫颈上拭上拭去粘液和分泌物，去粘液和分泌物，丢丢掉拭子掉拭子3.3.用新的无菌拭子用新的无菌拭子紧紧贴宫颈贴宫颈内道内道稳稳固地但固地但轻轻轻轻地采地采样样拭子拭子转转运运2h,RT2h,RT24h,24h,RTRT1/d1/d参参阅阅关于关于针对针对衣原体和衣原体和淋球菌采集和淋球菌采集和转转运的教运的教村村后穹隆液后穹隆液送抽吸物或液送抽吸物或液厌厌氧培养系氧培养系统统1ml1ml2h,RT2h,RT24h,24h,RTRT1/d1/d子子宫宫内膜内膜组织组织和分和分泌物泌物1.1.通通过过望望远镜导远镜导管管经经宫颈宫颈采采样样2.2.将将样样本全量本全量
17、转转入入厌厌氧氧转转运系运系统统厌厌氧培养系氧培养系统统1ml1ml2h,RT2h,RT24h,24h,RTRT1/d1/d表表3 细菌标本收集、运输和储藏指南细菌标本收集、运输和储藏指南妊娠妊娠产产物物1.1.将将组织组织的一部分送入的一部分送入无菌容器无菌容器2.2.如果从剖如果从剖宫产获宫产获得得,立即立即转转入入厌厌氧氧转转运系运系统统无菌管或无菌管或厌厌氧氧转转运运系系统统2h,RT2h,RT24h,24h,RTRT1/d1/d不要不要处处理理恶恶露，露，该标该标本本的培养，可能会有的培养，可能会有误导误导作用作用尿道分泌物尿道分泌物患者排尿至少患者排尿至少1h1h后采集后采集1.1
18、.拭去尿道口的渗出物拭去尿道口的渗出物2.2.用拭子按摩尿道，采用拭子按摩尿道，采集排泄物，集排泄物，对对女性病人女性病人通通过过阴道靠着耻骨阴道靠着耻骨联联合合按摩尿道按摩尿道拭子拭子转转运运2h,RT2h,RT24h,24h,RTRT1/d1/d如未如未获获得排泄物，用得排泄物，用BetadineBetadine皂洗外尿道，皂洗外尿道，并用水冲洗，用泌尿生并用水冲洗，用泌尿生殖道拭子插入尿道殖道拭子插入尿道2-4cm2-4cm，旋，旋转转拭子，至少放置拭子，至少放置2s2s抽出，以便吸收抽出，以便吸收阴道分泌物阴道分泌物1.1.擦除擦除过过多的分泌物和多的分泌物和排出液排出液2.2.用无菌
19、拭子或吸管从用无菌拭子或吸管从阴道穹隆部粘膜阴道穹隆部粘膜处获处获取取分泌物分泌物3.3.如果需要涂片，再用如果需要涂片，再用一个拭子一个拭子拭子拭子转转运运2h,RT2h,RT24h,24h,RTRT1/d1/d对对于子于子宫宫内装置，将全内装置，将全装置放入无菌容器并室装置放入无菌容器并室温温转转运。推荐用革运。推荐用革兰兰染染色方法而不是培养，色方法而不是培养，诊诊断断细细菌性阴道病菌性阴道病生殖生殖:女性女性或男性，或男性，损损伤伤1.1.用无菌用无菌盐盐水清洗水清洗损伤损伤处处，用解剖刀刃切去，用解剖刀刃切去损损伤伤表面表面2.2.使渗出液使渗出液积积聚聚3.3.按按压损伤压损伤底部
20、，用无底部，用无菌拭子用力擦底部采渗菌拭子用力擦底部采渗出液出液拭子拭子转转运运2h,RT2h,RT24h,24h,RTRT1/d1/d用暗用暗视视野野检查检查来辨来辨认认梅梅毒螺旋体，用毒螺旋体，用载载玻片接玻片接触渗出液，加盖玻片，触渗出液，加盖玻片，放在保湿盒里，放在保湿盒里，(平皿用平皿用湿湿纱纱布布)，立即，立即转转运到运到实实验验室，梅毒不能用人工室，梅毒不能用人工培基培养培基培养表表3 细菌标本收集、运输和储藏指南细菌标本收集、运输和储藏指南生殖生殖:男性男性前列腺前列腺尿道尿道1.1.用肥皂和水清洗阴茎用肥皂和水清洗阴茎头头2.2.通通过过直直肠肠按摩前列腺按摩前列腺3.3.用
21、无菌拭子收集液体用无菌拭子收集液体或使液体或使液体进进入无菌管内入无菌管内用泌尿生殖道拭子插入用泌尿生殖道拭子插入尿道腔尿道腔2-4cm2-4cm，旋，旋转转拭拭子，至少停留子，至少停留2s2s，而使，而使之容易吸收之容易吸收拭子拭子转转运或无菌运或无菌管管拭子拭子转转运运2h,RT2h,RT2h,RT2h,RT24h,24h,RTRT24h,24h,RTRT1/d1/d1/d1/d前列腺分泌物的病原菌可前列腺分泌物的病原菌可通通过过按摩前后的尿按摩前后的尿标标本定本定量培养量培养鉴鉴定。精液也可以定。精液也可以培养培养下呼吸道下呼吸道下支气管下支气管肺泡灌洗、肺泡灌洗、支气管刷支气管刷或洗液
22、、或洗液、气管抽吸气管抽吸物物痰，咳出痰，咳出痰，痰，诱导诱导性性1.1.将抽吸物或洗出物放将抽吸物或洗出物放入痰采集器入痰采集器2.2.将刷出物放入有将刷出物放入有1ml1ml盐盐水的无菌容器内水的无菌容器内1.1.在医生或在医生或护护士的直接士的直接监视监视下采集下采集标标本本2.2.让让患者清洗或漱口患者清洗或漱口,去除口腔去除口腔过过多菌群多菌群3.3.指指导导患者深咳，患者深咳，产产生生下呼吸道下呼吸道标标本本(非鼻后非鼻后液液)。采集到无菌容器。采集到无菌容器内内1.1.刷完牙刷完牙龈龈和舌和舌头头后后让让患得用水漱口患得用水漱口2.2.借助借助喷雾喷雾器使患者吸器使患者吸入入约约
23、25ml 3%-10%25ml 3%-10%的无的无菌菌盐盐水水3.3.采集采集诱导诱导的痰到无菌的痰到无菌容器内容器内无菌容器无菌容器1ml1ml无菌溶器无菌溶器1ml1ml最最小量小量:细细菌菌,1ml1ml无菌容器无菌容器1ml1ml2h,RT2h,RT2h,RT2h,RT2h,RT2h,RT24h,RT24h,RT24h,RT24h,RT24h,RT24h,RT1/d1/d1/d1/d1/d1/d定量分析需定量分析需40-80ml40-80ml液体量，液体量，做刷出物的定量分析，可做刷出物的定量分析，可将刷出物放入将刷出物放入1ml1ml盐盐水中水中对对于不能于不能产产生生标标本的儿科
24、本的儿科患者，呼吸道治患者，呼吸道治疗师应经疗师应经抽吸抽吸获获得得标标本，最好的本，最好的标标本本应应1010个个鳞鳞状状细细胞胞/100/100视视野野(10(10物物镜镜和和1010目目镜镜)同上同上表表3 细菌标本收集、运输和储藏指南细菌标本收集、运输和储藏指南上呼吸道上呼吸道鼻鼻鼻咽鼻咽喉或咽喉或咽1.1.用拭子拭去用拭子拭去损伤损伤表面表面的分泌物和碎片，并的分泌物和碎片，并丢丢弃弃2.2.用第二个拭子用力在用第二个拭子用力在损伤处损伤处采采样样，避免接触，避免接触正常正常组织组织1.1.用用预预先被无菌先被无菌盐盐水湿水湿润润的拭子插入鼻孔的拭子插入鼻孔约约1-1-2cm2cm2
25、.2.对对着鼻粘膜用力旋着鼻粘膜用力旋转转1.1.用藻酸用藻酸钙钙拭子拭子经经鼻鼻轻轻轻轻插入鼻咽后部插入鼻咽后部2.2.慢慢旋慢慢旋转转拭子拭子5s5s以吸以吸收分泌物收分泌物3.3.移去拭子，在床移去拭子，在床边边或或检查检查桌上接种培养基，桌上接种培养基，或将拭子或将拭子转转入入转转运培养运培养基基1.1.用用压压舌板舌板压压舌舌2.2.用无菌拭子从咽后、用无菌拭子从咽后、扁桃体和扁桃体和发发炎区域采炎区域采样样拭子拭子转转运运拭子拭子转转运运直接培养基接种直接培养基接种或拭子或拭子转转运运拭子拭子转转运运2h,RT2h,RT2h,RT2h,RT平皿平皿:15min,RT15min,RT
26、拭子拭子:2h,:2h,RTRT2h,RT2h,RT24h,RT24h,RT24h,RT24h,RT24h,RT24h,RT24h,RT24h,RT1/d1/d1/d1/d1/d1/d1/d1/d对细对细菌学菌学评评价，不能采表浅价，不能采表浅组织组织，应选择组织应选择组织活活检标检标本本或或针针抽吸物抽吸物先前的鼻培养先前的鼻培养应应保存，以用保存，以用于于链链球菌和球菌和链链球菌携球菌携带带者或者或鼻鼻损伤损伤的的检测检测喉拭子培养不能用于会喉拭子培养不能用于会厌发厌发炎的患者，炎的患者，检测检测淋球菌的拭淋球菌的拭子子应应放入含碳的放入含碳的转转运培养基，运培养基，采集后采集后12h12
27、h内接种平皿。内接种平皿。JEMBECJEMBEC、BiobagsBiobags、GonoPakGonoPak宜于室温下宜于室温下转转运运组织组织外科手外科手术术或皮肤活或皮肤活检检程程序收集序收集厌厌氧氧转转运系运系统统或或无菌旋帽瓶，需无菌旋帽瓶，需要加几滴要加几滴盐盐水保水保持持组织组织潮湿潮湿15min,RT15min,RT24h,24h,RTRT无无呈送呈送组织组织的量尽可能多，如的量尽可能多，如可能在可能在-70-70保存一定量的外保存一定量的外科科组织组织以以应进应进一步研究之需，一步研究之需，不要呈送在表面不要呈送在表面简单简单磨擦的磨擦的拭子，拭子，对对于定量研究于定量研究1
28、cm1cm3 3的的样样本是适宜的本是适宜的表表3 细菌标本收集、运输和储藏指南细菌标本收集、运输和储藏指南尿尿女性女性,中中段段男性，中男性，中段段直直导导管管导导管内管内1.1.用肥皂和水完全清洗用肥皂和水完全清洗尿道区域尿道区域2.2.用湿用湿纱纱布布垫垫漂洗漂洗3.3.分开阴唇，开始排泄分开阴唇，开始排泄4.4.排出几毫升后，不停排出几毫升后，不停止尿流，采集中段尿止尿流，采集中段尿1.1.用肥皂和水清洗阴茎用肥皂和水清洗阴茎头头2.2.用湿用湿纱纱布布垫垫漂洗漂洗3.3.回回缩缩包皮，开始排泄包皮，开始排泄4.4.排出几毫升后，不停排出几毫升后，不停止尿流，采集中段尿，止尿流，采集中
29、段尿，用于用于细细菌培养菌培养1.1.用肥皂和水完全清洗用肥皂和水完全清洗尿道区域尿道区域2.2.用湿用湿纱纱布布垫垫漂洗漂洗3.3.将将导导管无菌插入膀胱管无菌插入膀胱4.4.流流过过15ml15ml尿之后，采尿之后，采集尿入无菌容器内集尿入无菌容器内1.1.用用70%70%乙醇消毒乙醇消毒导导管管采集部分采集部分2.2.用用针头针头和注射器无菌和注射器无菌采集采集5-10ml5-10ml尿尿3.3.转转入无菌管或容器内入无菌管或容器内无菌广口容无菌广口容器，器，1ml1ml，或尿或尿转转运运试试剂剂盒盒无菌无菌宽宽口容口容器器,1ml,1ml，或尿或尿转转运运试试剂剂盒盒无菌防漏容无菌防漏
30、容器器无菌防漏容无菌防漏容器器未防腐未防腐:2h,RT2h,RT防腐：防腐：24h,RT24h,RT未防腐未防腐:2h,RT2h,RT防腐：防腐：24h,RT24h,RT未防腐未防腐:2h,RT2h,RT防腐：防腐：24h,RT24h,RT未防腐未防腐:2h,RT2h,RT防腐：防腐：24h,RT24h,RT24h 24h 4424h 24h 4424h 24h 4424h 24h 441/d1/d1/d1/d1/d1/d1/d1/d女性尿中的衣原体抗原女性尿中的衣原体抗原检测检测的敏感性可能的敏感性可能较较男男性低。尿性低。尿对细对细胞系有毒，胞系有毒，因而不能用于衣原体培因而不能用于衣原体
31、培养之养之标标本。中段尿部分本。中段尿部分用于用于细细菌培养菌培养首段尿用于衣原体的探首段尿用于衣原体的探针针和抗原和抗原检测检测。收集探。收集探针针和抗原和抗原检测检测的的标标本待本待最后一次排尿至少最后一次排尿至少2h2h后后该该程序可能程序可能导导致尿道菌致尿道菌落落进进入膀胱并增加医源入膀胱并增加医源性感染的危性感染的危险险留管的病人膀胱内留管的病人膀胱内总总是是有有细细菌的。除非他菌的。除非他们们有有症状，不要从症状，不要从这这些病人些病人收集尿收集尿标标本本伤伤口口见脓肿见脓肿AFB：抗酸杆菌；：抗酸杆菌；BAP：血琼脂平板；：血琼脂平板；BHI：心脑浸液；：心脑浸液；CHOC：巧
32、克力琼脂；：巧克力琼脂；CSF：脑脊液；：脑脊液；CVP：中心静脉压；：中心静脉压；EtOH：乙醇；：乙醇；I.V：静脉内；：静脉内；PVA：聚乙烯乙醇固定液；：聚乙烯乙醇固定液；RT：室温：室温 表表3 细菌标本收集、运输和储藏指南细菌标本收集、运输和储藏指南二、标本的转运二、标本的转运 用用于于细细菌菌培培养养的的标标本本应应立立即即转转运运至至实实验验室室。过过度度延延长长或或将将标标本本暴暴露露于于极极端端温温度度会会危危及及结结果果，必必须须避避免免。转转运运一一般原则如下：般原则如下：1标本必须及时送至实验室。如果运送时间大于标本必须及时送至实验室。如果运送时间大于2h，需用特殊运
33、送培养基或要求冷藏温度需用特殊运送培养基或要求冷藏温度(表表3)。2细菌培养标本储存不要超过细菌培养标本储存不要超过24h，即使合适的运送培，即使合适的运送培 基或冷藏温度。基或冷藏温度。3用于细菌学培养的临床标本转运最合适的时间取决于获得的用于细菌学培养的临床标本转运最合适的时间取决于获得的 材料的体积。小体积的液体材料的体积。小体积的液体(1ml)或组织或组织(1cm3)应在应在15 30min内提交，以避免蒸发、干燥或暴露于周围条件下。大体内提交，以避免蒸发、干燥或暴露于周围条件下。大体 积和在运送培基内的标本可储存长至积和在运送培基内的标本可储存长至24h。4对周围条件特别敏感的细菌包
34、括志贺菌、淋病奈瑟菌、脑膜对周围条件特别敏感的细菌包括志贺菌、淋病奈瑟菌、脑膜 炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌、肺炎链球菌和厌氧菌。通过培养炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌、肺炎链球菌和厌氧菌。通过培养 进行志贺菌的可靠检测要求及时进行。流感嗜血杆菌对低温进行志贺菌的可靠检测要求及时进行。流感嗜血杆菌对低温 敏感。决不能冷冻脑脊液、生殖器、眼或中耳标本。敏感。决不能冷冻脑脊液、生殖器、眼或中耳标本。5从一个实验室到另一个实验室转运临床标本和传染性物质，从一个实验室到另一个实验室转运临床标本和传染性物质，不管距离远近，都要严格注意标本包装和标记说明。运送期不管距离远近，都要严格注意标本包装和标记说明。运送期 间，
35、被运送的物质必需适当地标记、包装和保护。间，被运送的物质必需适当地标记、包装和保护。特殊标本运送指南见表特殊标本运送指南见表3。三、不常见细菌标本三、不常见细菌标本 某某些些引引起起传传染染病病的的细细菌菌很很少少碰碰到到，要要求求特特殊殊运运送送条条件件或或运运送送培培养养基基。在在许许多多情情况况下下，这这些些标标本本需需要要送送到到参参考考实实验验室室，则则需需要要相相对对长长的的时时间间。表表4列列出出了了这些标本和这些细菌的转运条件。这些标本和这些细菌的转运条件。表表4 不常见菌的标本处理不常见菌的标本处理 细细菌菌(疾病疾病)标标本本选择选择转转运条件运条件注注 释释巴通体属巴通体
36、属(猫抓猫抓热热)血、血、组织组织、淋巴、淋巴结结抽出物抽出物4141周，周，-70-70长长期期用用GiemsaGiemsa染色可在染色可在红细红细胞内或上看胞内或上看见见菌体。菌体。组织组织用用Warthin-StarryWarthin-Starry银银染色。染色。SPSSPS有毒性有毒性伯氏疏螺旋体伯氏疏螺旋体(莱姆病莱姆病)皮皮损损周周围围活活检检，血、，血、CSFCSF保持保持组织组织潮湿和无菌；如潮湿和无菌；如果可能果可能亲亲自送到自送到实验实验室室除培养外，考除培养外，考虑虑PCRPCR，培养阳性率低。，培养阳性率低。Warthin-Warthin-StarryStarry银银染
37、染组织组织。AOAO和和GiemsaGiemsa染色用于血液和染色用于血液和CSFCSF回回归热归热螺旋体螺旋体(回回归热归热)血涂片血涂片(血血)如可能如可能亲亲自送交自送交实验实验室室盐盐水湿片直接用暗水湿片直接用暗视视野野显显微微镜观镜观察。用察。用WrighrsWrighrs或或GiemsaGiemsa染色。血培养不可靠染色。血培养不可靠布氏杆菌布氏杆菌血、骨髓血、骨髓室温运送；儿科溶解室温运送；儿科溶解-离心离心试试管有帮助管有帮助如如维维持持3030天可用常天可用常规规血培养瓶。可能需盲血培养瓶。可能需盲传传。关。关节节炎用关炎用关节节液培养。液培养。怀怀疑布氏菌病通知疑布氏菌病通
38、知实验实验室室克雷伯肉芽克雷伯肉芽肿肿杆菌杆菌(腹股腹股沟肉芽沟肉芽肿肿；杜；杜诺诺凡肉芽凡肉芽肿肿)组织组织、表面下刮片、表面下刮片室温运送室温运送主要是一种主要是一种热带热带疾病，疾病，WrightWrights s或或GiemsaGiemsa染色。染色。仅仅上皮是不上皮是不够够的，的，细细菌不能培养菌不能培养柯克斯体柯克斯体(Q(Q热热)立克次体立克次体(斑点斑点热热、斑疹、斑疹伤伤寒寒)血清、血液、血清、血液、组织组织血液和血液和组织组织冷冷冻冻于于-70-70直直到运送到运送分离送参考分离送参考实验实验室，室，优优先先选择选择血清学血清学诊诊断断埃立克体属埃立克体属血涂片，皮肤活血涂
39、片，皮肤活检检，血液，血液(用肝素或用肝素或EDTAEDTA抗凝抗凝)，CSFCSF，血清，血清培养材料在冰上运送；保培养材料在冰上运送；保持持组织组织湿湿润润和无菌，保存和无菌，保存于于4 42020直到直到检测检测或或-7070运送；运送；PCRPCR检测检测需在冰需在冰上或冷上或冷冻冻运送运送优优先先选择选择血清学血清学诊诊断，用甲醇固定涂片，用断，用甲醇固定涂片，用FAFA或或GimenezGimenez染色，分离送参考染色，分离送参考实验实验室。室。CSFCSF直接直接检测检测或或PCRPCR弗朗西斯菌属弗朗西斯菌属(土拉土拉热热)淋巴淋巴结结抽吸物、刮片，病抽吸物、刮片，病损损活、
40、血液、痰活、血液、痰迅速迅速转转送送实验实验室或冷室或冷冻冻；在干冰上运送在干冰上运送送参考送参考实验实验室，血清学室，血清学实验实验帮助。帮助。组织组织GramGram染色无染色无效。效。IFAIFA可用。当可用。当时时培养有效性培养有效性10%10%钩钩端螺旋体属端螺旋体属血清，血液血清，血液(枸枸橼橼酸酸盐盐抗凝抗凝剂剂不能用不能用)，CSF(CSF(第第1 1周周)，尿尿(1(1周后周后)血血1h1h；尿；尿1h1h或用或用1%1%牛血牛血清白蛋白清白蛋白1:101:10稀稀释储释储存于存于4 42020，或用碳，或用碳氢钠氢钠中和中和血清学血清学试验试验最有帮助。酸性尿有害。暗最有帮
41、助。酸性尿有害。暗视视野野显显微微镜镜和直接和直接FAFA可用。可用。组织组织用用Warthin-StarryWarthin-Starry银银染色染色链链杆菌属杆菌属(鼠咬鼠咬热热哈佛希哈佛希尔尔热热)血、抽取关血、抽取关节节液液优选优选高容量瓶高容量瓶不能冷不能冷冻冻。生。生长长需血、血清或腹水。禁用需血、血清或腹水。禁用SPSSPS。AOAO染染色有帮助色有帮助 AO吖啶橙吖啶橙;SPS：多聚茴者脑黄酸钠：多聚茴者脑黄酸钠 四、标本的处理四、标本的处理(检测检测)细菌标本的检测包括：染色，培养，免疫学细菌标本的检测包括：染色，培养，免疫学方法检测抗原和分子生物学技术检测核酸序列。方法检测抗
42、原和分子生物学技术检测核酸序列。推荐方法见表推荐方法见表5.(一一)常见细菌标本革兰染色和接种培养基的建议常见细菌标本革兰染色和接种培养基的建议 见表见表5表表5 细菌学标本革兰染色和接种培养基的建议细菌学标本革兰染色和接种培养基的建议 标标本或微生物本或微生物革革兰兰染色染色需氧培养基需氧培养基厌厌氧培养基氧培养基备备 注注 体腔液体腔液脑脑脊液脊液(常常规规)脑脑脊液脊液(分流分流)心包心包胸腔胸腔腹腔腹腔慢性非卧床腹膜透析慢性非卧床腹膜透析滑液滑液骨髓骨髓导导管管头头外耳液外耳液/拭子拭子内耳液内耳液眼眼X XX XX XX XX XX XX XX XX XX XX XB CB CB C
43、 ThB C ThB CB CB C MacB C MacB CB CB C ThB C ThB CB CB CB CB BB C MacB C MacB CB CB CB CBBABBABBABBABBA LKV BBE CANBBA LKV BBE CANBBABBABBABBABBABBA可使用血液培养瓶培养所有体可使用血液培养瓶培养所有体腔液大体腔液大体积标积标本液本液消化道消化道粪粪便便直直肠肠拭子拭子泌尿生殖道泌尿生殖道阴道阴道/宫颈宫颈尿道尿道/阴茎阴茎其它其它X XX XB Mac HE Ca EBB Mac HE Ca EBB Mac HE Ca EBB Mac HE Ca
44、EBEBEBB TMB TMB C Mac TM B C Mac TM BBA LKV BBE CANBBA LKV BBE CAN对对所有消化道所有消化道标标本，空本，空/大大肠肠弯弯曲菌在曲菌在5%O5%O2 2-10%CO-10%CO2 2-85%N2-85%N2，4242培养培养B B组链组链球菌球菌筛选筛选选择选择肉肉汤传汤传代培养代培养到到B B下呼吸道下呼吸道痰痰气管吸出物气管吸出物支气管肺泡灌洗液支气管肺泡灌洗液支气管支气管镜镜刷清洗液刷清洗液X XX XX XX XB C MacB C MacB C MacB C MacB C MacB C MacB C MacB C Mac
45、BBA LKV BBE CANBBA LKV BBE CAN进进行行厌厌氧培养要求氧培养要求对对支气管支气管镜镜刷保刷保护护组织组织X XB C MacThB C MacThBBA LKV BBE CANBBA LKV BBE CAN上呼吸道上呼吸道鼻咽鼻咽鼻鼻喉喉B CB CB BB B或或SSASSA会会厌厌需要增加巧克力需要增加巧克力琼琼脂脂尿液尿液B MacB Mac伤伤口或口或脓肿脓肿拭子拭子吸取物吸取物X XX XB C MacB C MacB C MacB C MacBBA LKV BBE CANBBA LKV BBE CAN拭子不推荐拭子不推荐厌厌氧培养氧培养百日咳和副百日咳博
46、百日咳和副百日咳博德特氏菌德特氏菌Regan LoweRegan Lowe布布鲁鲁氏菌氏菌B CB C白喉杆菌白喉杆菌胱氨酸胱氨酸-亚亚碲酸碲酸盐盐或或吕吕氟勒血清氟勒血清艰难艰难梭菌梭菌CCFACCFA大大肠肠杆菌杆菌O157:H7O157:H7山梨醇山梨醇-Mac-Mac志志贺贺毒素毒素EIAEIA比比较较敏感敏感土拉土拉热热弗朗西弗朗西丝丝氏菌氏菌C C或或BCYEBCYE表表5 细菌学标本革兰染色和接种培养基的建议细菌学标本革兰染色和接种培养基的建议B B型群型群链链球菌球菌LIMLIM肉肉汤汤革革兰兰染色象染色象”鱼鱼群群”杜克莱氏嗜血杆菌杜克莱氏嗜血杆菌C+C+万古霉素万古霉素(3
47、g/mll)(3g/mll)幽幽门门螺杆菌螺杆菌X XB B弯曲菌气体弯曲菌气体环环境境35353737军团军团菌菌BCYEBCYE钩钩端螺旋体端螺旋体FletcherFletchers s培养培养基或基或EMJHEMJH3030培养至培养至13WK13WK淋球菌淋球菌TMTM弧菌弧菌TCBSTCBS耶耶尔尔森氏菌属森氏菌属CINCINB：血液琼脂平板；：血液琼脂平板；C：巧克力琼脂平板；：巧克力琼脂平板；Mac：麦康凯琼脂；：麦康凯琼脂；Th：巯基乙酸培养基；：巯基乙酸培养基；Ca：弯曲菌琼脂；：弯曲菌琼脂；HE：Hektoen氏培养基；氏培养基；EB：增菌：增菌肉汤；肉汤；SSA：A型链球
48、菌选择性琼脂平板；型链球菌选择性琼脂平板；TM：Thayer-Martin;BCYE：平衡活性炭酵母抽提物；：平衡活性炭酵母抽提物；TCBS：硫代硫酸：硫代硫酸-柠檬酸柠檬酸-胆盐蔗糖琼脂；胆盐蔗糖琼脂；CIN：cefsulodin-irgasan-novobiocin;BBA：布鲁氏菌血琼脂；：布鲁氏菌血琼脂；LKV：含卡那霉素和万古霉素的可溶羊血；：含卡那霉素和万古霉素的可溶羊血；BBE：拟杆菌胆汁七叶苷：拟杆菌胆汁七叶苷(bacteroides bile esculin)；CAN：厌氧性多粘菌素：厌氧性多粘菌素E-萘啶酸；萘啶酸；CCFA：环丝氨酸：环丝氨酸-头孢噻吩头孢噻吩-果糖琼脂；
49、果糖琼脂；CAPD：慢性非卧床腹膜透析体液：慢性非卧床腹膜透析体液如果标本采集正确，根据需要进行厌氧培养。如果标本采集正确，根据需要进行厌氧培养。表表5 细菌学标本革兰染色和接种培养基的建议细菌学标本革兰染色和接种培养基的建议革兰染色无论何时都推荐：革兰染色无论何时都推荐：快速染色结果对病人防治是需要的；快速染色结果对病人防治是需要的；细胞组成分析用于决定标本是否适当；细胞组成分析用于决定标本是否适当；结果有助于解释培养结果。结果有助于解释培养结果。厌厌氧氧菌菌培培养养应应仅仅仅仅包包括括规规定定好好的的合合适适的的标标本本来来源源(表表2)和和无无氧氧容容器器运运转转并并没没有有被被皮皮肤肤
50、粘粘膜膜正正常常菌菌群群污污染染的的标本。标本。(二二)标本处理一般原则标本处理一般原则 1安全安全2及时送往实验室，要求见表及时送往实验室，要求见表33标本标记和试验医嘱要求标本标记和试验医嘱要求 (1)记录标本到达实验室的时间记录标本到达实验室的时间 (2)记录标本接种的时间记录标本接种的时间 (3)接受标本时仔细检查标本和申请；接受标本时仔细检查标本和申请；标标本本标标签签上上必必须须有有病病人人的的姓姓名名和和标标本本来来源源，申申请请单单上上必必须须有有：病病人人姓姓名名、年年龄龄、性性别别、鉴鉴定定身身份份的的号号码码(如如社社会会保保险险号号或或唯唯一一的的挂挂号号号号码码、账账