中药制剂的含量分析.ppt

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1、P63楼一层楼一层第四章 中药制剂的含量测定1 含量测定的目的和意义w反映其制剂中有效成分或者毒性成分的含量w衡量其制剂工艺的稳定性和中药材的质量优劣 2 样品的处理样品处理的主要作用样品处理的主要作用释放被测组分，制成稳定试样除去杂质，纯化浓缩试样形式符合测定的要求样品的粉碎样品的粉碎n目的取样均匀，提取完全n粉碎设备粉碎机、研钵、匀浆机 粒度大小合适 防止污染或损失2 样品的处理样品的提取样品的提取 n关键关键提取完全提取完全n溶剂的选择溶剂的选择w水、酸水、碱水水、酸水、碱水w亲水性的有机溶剂：亲水性的有机溶剂：乙醇（酒精）、甲醇（木精）、丙酮w亲亲脂性的有机溶脂性的有机溶剂剂：石油醚、

2、苯、氯仿、乙醚、乙酸乙酯、二氯乙烷n冷浸法冷浸法 部分测定法 全部测定法w优点优点：操作简单，适于热不稳定的样品，且提取杂质少w缺点缺点：费时（12-24 h）、费溶剂（10-50倍）灵宝护心丹（牛黄、麝香等）中胆酸的含量测定灵宝护心丹（牛黄、麝香等）中胆酸的含量测定 取本品适量，研细，取约取本品适量，研细，取约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加石油醚，精密称定，置具塞锥形瓶中，加石油醚（60-90）4ml，浸泡，浸泡1小时，滤过，滤渣及滤纸挥去溶剂，放回锥形小时，滤过，滤渣及滤纸挥去溶剂，放回锥形瓶中，精密加入冰醋酸无水乙醇溶液（瓶中，精密加入冰醋酸无水乙醇溶液（1 10）15ml，摇匀

3、，密塞，摇匀，密塞，称定重量，浸泡称定重量，浸泡12小时，再称定重量，用冰醋酸无水乙醇溶液（小时，再称定重量，用冰醋酸无水乙醇溶液（1 10）补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。2 样品的处理样品的提取样品的提取 n回流提取法回流提取法n连续回流提取法连续回流提取法三黄片（黄连等）中盐酸小檗碱测定三黄片（黄连等）中盐酸小檗碱测定+HCl-70%乙醇溶液，加热回流1h保和丸（陈皮等）中橙皮甙测定保和丸（陈皮等）中橙皮甙测定+甲醇，加热回流至提取液无色为止2 样品的处理样品的提取样品的提取 n超声提取法超声提取法w原理原理：超声波

4、的助溶作用w优点优点：操作简便，提取速度快 需对超声频率、提取时间、提取溶媒等进行考察 超声波可能引起供试品成分的改变保济丸（厚扑等）中厚扑酚测定保济丸（厚扑等）中厚扑酚测定+石油醚（石油醚（30-60），超声处理（功率，超声处理（功率500W，频率，频率33kHz）2次，每次次，每次30min2 样品的处理样品的提取 n超临界流体提取法（Supercritical-fluid extraction，SFE）w超临界流体特殊的物质状态n密度 d 液体 溶解能力强溶解能力强n粘度 气体 传质快，有利于待测组分的扩散传质快，有利于待测组分的扩散n表面张力几乎为 0 浸润性能好浸润性能好n密度受压力

5、、温度的影响大 改变对溶质的溶解能力改变对溶质的溶解能力n加入甲醇、氯仿、苯等改变极性 提取不同极性的成分提取不同极性的成分w优点优点：速度快、萃取效率高、方法准确度高、选择性较高、节省溶剂、易于自动化，而且可避免使用易燃，有毒 的有机溶剂，能与色谱和光谱等分析仪器直接联用 2 样品的处理样品的分离纯化样品的分离纯化 n沉淀法沉淀法复方益母草口服液中水复方益母草口服液中水苏苏碱的含量碱的含量测测定定利用雷氏盐（硫氰酸铬铵）作沉淀剂，在酸性介质中可与大部利用雷氏盐（硫氰酸铬铵）作沉淀剂，在酸性介质中可与大部分有机碱生成难溶于水的配合物与其它杂质分离。分有机碱生成难溶于水的配合物与其它杂质分离。蛇

6、胆糖蛇胆糖浆浆口服液口服液含有大量糖，可用无水乙醇回流样品，冷后过含有大量糖，可用无水乙醇回流样品，冷后过滤，除糖以消除其干扰。滤，除糖以消除其干扰。2 样品的处理样品的分离纯化样品的分离纯化 n蒸馏法蒸馏法w适用于具挥发性的待测组分，如挥发油、小分子的生物碱、丹皮酚等w最常用水蒸气蒸馏法n共水蒸馏法n通水蒸气蒸馏法n水上蒸馏法w利用盐析作用，提高蒸馏效果2 样品的处理样品的分离纯化样品的分离纯化 n液液-液萃取法液萃取法w直接萃取法直接萃取法n萃取剂的选择萃取剂的选择 亲脂性有机溶剂，如苯、氯仿或乙醚 弱亲脂性的溶剂，如乙酸乙酯、正丁醇等n多次萃取（多次萃取（3-43-4次）次）n调整水相酸

7、度，提取有机酸、有机碱调整水相酸度，提取有机酸、有机碱n利用盐析作用，提高提取率利用盐析作用，提高提取率2 样品的处理样品的分离纯化样品的分离纯化 n液液-液萃取法液萃取法w离子对萃取法离子对萃取法BH+（水相）+In-(水相)BH+In-（水相）BH+In-（有机相）n适合于高度电离的有机酸、碱化合物的萃取适合于高度电离的有机酸、碱化合物的萃取 水相酸度的控制 离子对试剂的选择2 样品的处理样品的分离纯化样品的分离纯化 n色谱法（层析法）色谱法（层析法）w分离的原理：吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱、分离的原理：吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱、凝胶色谱凝胶色谱w按操作方式：柱色谱、薄层色谱

8、、纸色谱按操作方式：柱色谱、薄层色谱、纸色谱w装柱方法：湿法装柱、干法装柱装柱方法：湿法装柱、干法装柱w微柱色谱（固相萃取）微柱色谱（固相萃取）n柱的大小：柱的大小：长长5 515cm15cm，内径，内径0.50.51cm1cm n柱填料：柱填料：硅胶、氧化铝、氧化镁、活性炭、聚酰胺、大孔树脂、硅胶、氧化铝、氧化镁、活性炭、聚酰胺、大孔树脂、硅藻土、硅藻土、离子交换树脂、键合相硅胶离子交换树脂、键合相硅胶C C8 8、C C1818等等 2 样品的处理样品的分离纯化样品的分离纯化 n色谱法（层析法）色谱法（层析法）w硅胶：硅胶：酸性吸附剂，适用于中性或酸性成分的层析，强烈保 留碱性化合物n洗脱

9、洗脱顺序：顺序：极性小极性小大大w氧化铝：氧化铝：带有碱性，分离一些碱性中草药成分，不宜用于醛、酮、醋、内酯等类型的化合物分离 中性氧化铝、酸性氧化铝中性氧化铝、酸性氧化铝：适用于酸性成分的分离w键合相硅胶（键合相硅胶（C C1818或或ODSODS）：分开脂溶性和水溶性成分n操作程序操作程序：柱的活化；上样；清洗；洗脱。n洗脱洗脱顺序：顺序：极性极性大大小小2 样品的处理样品的分离纯化样品的分离纯化 n色谱法（层析法）色谱法（层析法）w大孔树脂大孔树脂n分为极性分为极性(丙丙烯酰烯酰胺聚合物胺聚合物)和非极性和非极性(苯乙苯乙烯烯和二乙和二乙烯烯苯的共聚物苯的共聚物)型型n非极性型（非极性型

10、（XAD-2XAD-2等）：等）：分开脂溶性和水溶性成分 使用前需要用有机溶剂除去杂质，有时还需用酸、碱清洗 w聚聚酰酰胺胺：与溶质形成氢键而产生吸附作用，常用于含酚、酸、醌 类药物样品液的净化分离w硅藻土、硅藻土、纤维纤维素素：以水基质液作为固定相，与水不混溶的有机溶剂为流动相的分配色谱n洗脱洗脱顺序：顺序：极性小大2 样品的处理样品的分离纯化样品的分离纯化 n色谱法（层析法）色谱法（层析法）w离子交离子交换树换树脂：脂：用于除去样品中的离子及萃取可离解化合物 (弱酸、弱碱药物)w活性炭活性炭：非极性吸附剂n使用前需要先用稀盐酸洗涤，其次用乙醇洗，再以水洗净，于80干燥n分开水溶性芳香族物质

11、与脂肪族物质，单糖与多糖，氨基酸与多肽2 样品的处理样品的分离纯化样品的分离纯化 n消化法消化法测定中药制剂中的无机元素测定中药制剂中的无机元素w湿法消化湿法消化n硝酸硝酸高高氯氯酸法：酸法：适用于血，尿、组织等生物样品和含动植物药制剂的破坏 对含氮杂环类有机物破坏不够完全。n硝酸硝酸硫酸法硫酸法 与硫酸形成不溶性硫酸盐的金属离子的测定，不宜采有此法。n硫酸硫酸硫酸硫酸盐盐法：法：常用于含砷或锑的有机样品的破坏，破坏后得到三价砷或锑。2 样品的处理样品的分离纯化样品的分离纯化 n消化法消化法测定中药制剂中的无机元素测定中药制剂中的无机元素w干干法消化法消化 供试品供试品 灰分灰分 控制温度在4

12、20以下不适用于含易挥发性金属（如汞、砷等，）有机样品的破坏。灼烧灰化(+NaCO3/MgO)3 中药制剂各剂型样品的预处理中药制剂各剂型样品的预处理 剂型繁多，干扰大剂型繁多，干扰大具体具体“剂型剂型”具体分析具体分析 应根据应根据制备工艺与剂型的不同制备工艺与剂型的不同、赋形剂的特点赋形剂的特点、被测、被测成分的理化性质和存在状态以及各类成分之间干扰的程度成分的理化性质和存在状态以及各类成分之间干扰的程度等进行综合考虑。等进行综合考虑。固体中药制剂包括丸剂、片剂、散剂、颗粒剂、栓剂、滴固体中药制剂包括丸剂、片剂、散剂、颗粒剂、栓剂、滴丸剂等丸剂等 半固体中药制剂包括流浸膏剂、浸膏剂、糖浆剂

13、和煎膏剂半固体中药制剂包括流浸膏剂、浸膏剂、糖浆剂和煎膏剂液体中药制剂包括合剂、口服液、酒剂、酊剂、注射剂等液体中药制剂包括合剂、口服液、酒剂、酊剂、注射剂等 3 中药制剂各剂型样品的预处理中药制剂各剂型样品的预处理固体中药制剂的预处理n丸剂预处理w蜜丸的处理 逍遥丸（大蜜丸）中炙甘草的测定逍遥丸（大蜜丸）中炙甘草的测定 取本品取本品18g，加硅藻土，加硅藻土10g，研匀，加乙醇，研匀，加乙醇60ml，超声处理，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加水，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml使溶解，用乙醚振使溶解，用乙醚振摇提取摇提取2次，每次次，每次10ml，弃去乙醚液，用水饱和的正丁醇振摇，

14、弃去乙醚液，用水饱和的正丁醇振摇提取提取3次，每次次，每次30ml，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的水洗涤，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的水洗涤3次，每次次，每次20ml，弃去水洗液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇，弃去水洗液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。使溶解，作为供试品溶液。3 中药制剂各剂型样品的预处理中药制剂各剂型样品的预处理固体中药制剂的预处理n片剂预处理w赋形剂（淀粉、糊精、糖粉、硫酸钙等）的影响 结果以每片中含被测成分的重量来表示。复方丹参片中丹参酮复方丹参片中丹参酮IIAIIA的的TLCTLC测定测定 取本品取本品20片，精密称定重量，研细，精密称出细粉适量（约相

15、片，精密称定重量，研细，精密称出细粉适量（约相当当10片的重量），置片的重量），置100ml索氏提取器中，加乙醚索氏提取器中，加乙醚100ml，置，置50C水浴中回流提取水浴中回流提取3h，提取液在水浴上蒸干，残渣用乙醇，提取液在水浴上蒸干，残渣用乙醇溶解并移至溶解并移至5ml容量瓶中，用乙醇稀释至刻度，摇匀，作为供试容量瓶中，用乙醇稀释至刻度，摇匀，作为供试液。液。3 中药制剂各剂型样品的预处理中药制剂各剂型样品的预处理固体中药制剂的预处理n颗粒剂预处理w糖、糊精等辅料的影响板蓝根冲剂中靛玉红的板蓝根冲剂中靛玉红的TLCTLC测定测定 取研匀的冲剂样品取研匀的冲剂样品35g，精密称定，置烧瓶

16、内，加氯仿置水浴中，精密称定，置烧瓶内，加氯仿置水浴中回流提取回流提取3次（次（50，25，25ml），合并滤液于蒸发皿中，蒸干，），合并滤液于蒸发皿中，蒸干，残留物用氯仿定容至残留物用氯仿定容至2ml，备用。，备用。3 中药制剂各剂型样品的预处理中药制剂各剂型样品的预处理固体中药制剂的预处理n散剂预处理w药材粉末入药，而且分布也不均匀 注意取样的代表性九分散中士的宁的含量测定九分散中士的宁的含量测定 取本品取本品10包，混合均匀。取约包，混合均匀。取约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加氯仿精密加氯仿20ml与浓氨试液与浓氨试液1ml，轻轻摇匀，称重，于室温放置，

17、轻轻摇匀，称重，于室温放置24小时，再称重，补足氯仿减失的重量，充分振摇，滤过。精密小时，再称重，补足氯仿减失的重量，充分振摇，滤过。精密量取续滤液量取续滤液10ml，用硫酸溶液（，用硫酸溶液（3100）分次提取，至生物碱）分次提取，至生物碱提尽，合并硫酸液，置另一分液漏斗中，加浓氨试液使呈碱性，提尽，合并硫酸液，置另一分液漏斗中，加浓氨试液使呈碱性，用氯仿分次提取，合并氯仿液，蒸干，放冷，残渣中精密加氯仿用氯仿分次提取，合并氯仿液，蒸干，放冷，残渣中精密加氯仿5ml使溶解，作为供试品溶液。使溶解，作为供试品溶液。每包九分散按每包九分散按2.5g计，含士的宁应为。计，含士的宁应为。3 中药制剂

18、各剂型样品的预处理中药制剂各剂型样品的预处理固体中药制剂的预处理n栓剂预处理w基质（油脂性基质和亲水性基质）的干扰双黄连栓（小儿消炎栓）中绿原酸、黄芩甙的测定双黄连栓（小儿消炎栓）中绿原酸、黄芩甙的测定 取本品取本品1粒粒,加水加水20ml,置温水浴中，用置温水浴中，用10%的氢氧的氢氧化钠溶液调节化钠溶液调节pH值至值至7.07.5，使熔化，置冷处使基使熔化，置冷处使基质凝固，滤过，取滤液质凝固，滤过，取滤液10ml，加无水乙醇，加无水乙醇4ml，至，至水浴中振摇数分钟，放置，取上清液作为供试品溶液。水浴中振摇数分钟，放置，取上清液作为供试品溶液。3 中药制剂各剂型样品的预处理中药制剂各剂型

19、样品的预处理固体中药制剂的预处理n滴丸剂预处理w基质（水溶性基质和水不溶性基质）存在引起的干扰复方丹参滴丸中三七的测定复方丹参滴丸中三七的测定 取本品取本品40丸，加甲醇丸，加甲醇10ml，振摇，振摇10分钟，于分钟，于4放放置置24小时，使聚乙二醇析出完全，滤过，取滤液作为小时，使聚乙二醇析出完全，滤过，取滤液作为供试品溶液供试品溶液 3 中药制剂各剂型样品的预处理中药制剂各剂型样品的预处理半固体中药制剂的预处理n糖浆剂、煎膏剂预处理w萃取法、柱层析法、蒸馏法、加惰性材料（硅藻土、纤维素等）处理，再用溶剂提取 健儿糖浆中总黄酮的定量分析健儿糖浆中总黄酮的定量分析将糖浆用盐酸调节将糖浆用盐酸调

20、节pH至至12，再用醋酸乙酯萃取后，再用醋酸乙酯萃取后测定。测定。止咳糖浆中盐酸麻黄碱的含量测定止咳糖浆中盐酸麻黄碱的含量测定取一定量糖浆，加氢氧化钠碱化，进行蒸馏，收集取一定量糖浆，加氢氧化钠碱化，进行蒸馏，收集馏出液作为供试品溶液。馏出液作为供试品溶液。3 中药制剂各剂型样品的预处理中药制剂各剂型样品的预处理液体中药制剂的预处理摇匀后再取样n合剂与口服液（水性液体制剂）的预处理w合剂含杂质量较大，直接分析困难w口服液杂质含量相对较少，可直接进行分析或经净化分离后分析西洋参精口服液中人参总皂甙的含量测定（西洋参精口服液中人参总皂甙的含量测定（TLCTLC）精密移取待测样品精密移取待测样品10

21、ml，加入到处理好的大孔树脂柱上，加蒸馏，加入到处理好的大孔树脂柱上，加蒸馏水水80ml洗柱，洗液弃去，再用洗柱，洗液弃去，再用70%乙醇乙醇100ml洗柱，收集洗脱洗柱，收集洗脱液，于液，于80C低温水浴上蒸干，残留物用甲醇定容于低温水浴上蒸干，残留物用甲醇定容于10ml容量瓶容量瓶中。中。3 中药制剂各剂型样品的预处理中药制剂各剂型样品的预处理液体中药制剂的预处理n酒剂与酊剂（醇性液体制剂）的预处理w杂质较少，前处理较简单 w常用的净化方法：加热蒸去乙醇，然后再用有机溶剂萃取或柱层析。远志酊中远志皂甙元的含量测定（远志酊中远志皂甙元的含量测定（TLCTLC）精密吸取本品精密吸取本品25ml

22、，置，置100ml标准磨口烧瓶中，减压蒸去溶剂，标准磨口烧瓶中，减压蒸去溶剂，放冷，加放冷，加50ml甲醇，密塞后超声振荡甲醇，密塞后超声振荡20min，放置过夜。精密，放置过夜。精密吸取上清液吸取上清液20ml，加入，加入5倍量乙醚，放置使其沉淀完全。倾去上倍量乙醚，放置使其沉淀完全。倾去上清液，于沉淀中加入清液，于沉淀中加入10%盐酸盐酸50ml，沸水浴中回流，沸水浴中回流2h，过滤得，过滤得沉淀。将沉淀定量转入沉淀。将沉淀定量转入50ml容量瓶，用甲醇溶解并稀释至刻度。容量瓶，用甲醇溶解并稀释至刻度。3 中药制剂各剂型样品的预处理中药制剂各剂型样品的预处理液体中药制剂的预处理n注射剂（水

23、性液体制剂）的预处理w液-液萃取法、或柱色谱法等 w注射用无菌粉末：可直接取样，用合适的溶剂溶解，直接进行测定。清开灵注射液中总胆酸的含量测定（比色法）清开灵注射液中总胆酸的含量测定（比色法）精密称取本品精密称取本品1ml，置离心管中，滴加，置离心管中，滴加6mol/l盐酸盐酸1滴，搅拌使滴，搅拌使胆酸沉淀完全，离心分离，弃去上清液，沉淀用胆酸沉淀完全，离心分离，弃去上清液，沉淀用0.2mol/l盐酸盐酸10滴洗滴洗2次，离心，洗液弃去，沉淀用冰醋酸次，离心，洗液弃去，沉淀用冰醋酸15滴溶解，定量转滴溶解，定量转移于己于移于己于10ml容量瓶中，再用少量冰醋酸洗涤离心管理容量瓶中，再用少量冰醋

24、酸洗涤离心管理3-4次，次，洗液移入量瓶中，再加冰醋酸至刻度，摇匀。洗液移入量瓶中，再加冰醋酸至刻度，摇匀。3 中药制剂各剂型样品的预处理中药制剂各剂型样品的预处理外用中药制剂的预处理n软膏剂的预处理w基质材料、防腐剂、抗氧化剂等杂质的干扰 w滤除基质测定法：滤除基质测定法：加入适当溶剂，加热使软膏液化，再放冷，待基质凝固后，与上清夜分开w提取分离法：提取分离法：在适宜的酸性或碱性基质中，用不混溶的有机溶剂将基质提取后除去。或用有机溶剂将样品溶解，再用酸或碱性水溶液进行萃取分离后测定。w灼烧法：灼烧法：将样品灼烧，使基质分解除尽，然后对灼烧后的无机化合物进行测定。w离心法：离心法：取样品加适宜

25、的溶剂，混匀，再进行离心，分取上清液w乳剂型软膏乳剂型软膏：可采用加热、加电解质、加相反类型乳化剂使乳剂破裂，再进行提取3 中药制剂各剂型样品的预处理中药制剂各剂型样品的预处理外用中药制剂的预处理n膏药的预处理w消除基质（食用植物油）影响w橡胶膏剂组成复杂，主药含量又少，要注意被测成分与基质（橡胶、凡士林、羊毛脂、氧化锌和松香等）的分离麝香活血化瘀膏中三七的测定麝香活血化瘀膏中三七的测定取麝香活血化瘀膏取麝香活血化瘀膏4片，撕去盖面，剪成小碎片，置片，撕去盖面，剪成小碎片，置烧杯中加入烧杯中加入25ml氯仿浸泡氯仿浸泡5分钟，倾去氯仿液，在搅分钟，倾去氯仿液，在搅拌下慢慢加入乙醇拌下慢慢加入乙

26、醇75ml，静置倾去上层液，过滤。，静置倾去上层液，过滤。滤液蒸干，残渣转溶于乙醇中，过滤。滤液蒸干用氯滤液蒸干，残渣转溶于乙醇中，过滤。滤液蒸干用氯仿仿1ml洗涤残渣洗涤残渣1次，弃去氯仿，转溶于蒸馏水中，次，弃去氯仿，转溶于蒸馏水中，过滤，滤液蒸干，转溶于过滤，滤液蒸干，转溶于1ml乙醇中作为供试品溶液。乙醇中作为供试品溶液。兵含麝香酮成分的橡皮膏剂含量测定含麝香酮成分的橡皮膏剂含量测定在橡皮膏的乙醚提取液中缓缓加入无水乙醇，可使提取在橡皮膏的乙醚提取液中缓缓加入无水乙醇，可使提取液中的橡胶形成絮状沉淀，分离后，测定。液中的橡胶形成絮状沉淀，分离后，测定。3 中药制剂各剂型样品的预处理中药

27、制剂各剂型样品的预处理外用中药制剂的预处理n巴布膏剂的预处理w亲水性基质（聚丙烯酸钠、羧甲基纤维素钠、山梨糖醇、聚乙烯醇、明胶、甘油等）的影响w用极性溶剂将基质和药物与盖衬先分离 4 4 常用定量分析方法常用定量分析方法化学分析法n适用于含量较高的成分及无机成分的测定n包括：重量分析和滴定分析n重量分析w挥发法：如水分测定w萃取法：如冰片散中冰片的含量测定w沉淀法：如苦参片中苦参总碱的含量测定4 4 常用定量分析方法常用定量分析方法化学分析法化学分析法n滴定分析滴定分析w酸碱滴定法酸碱滴定法：测定生物碱、有机酸、内酯类 w沉淀滴定法沉淀滴定法n银量法：生物碱的氢卤酸盐及有机卤化物n四苯硼钠法：

28、+生物碱白色沉淀白色沉淀n亚铁氰化钾法w配位滴定法配位滴定法（EDTA法和硫氰酸铵法）：测定鞣质、生物碱及含Ca2+、Mg2+、Fe3+、Hg2+等矿物类制剂的含量w氧化还原滴定法氧化还原滴定法：酚类、糖类及矿物药中Fe、As等万氏牛黄清心丸中朱砂的含量测定万氏牛黄清心丸中朱砂的含量测定硫氰酸铵法硫氰酸铵法本品剪碎，取本品剪碎，取5g，精密称定，置，精密称定，置250ml凯氏烧瓶中，加硫酸凯氏烧瓶中，加硫酸30ml与硝酸钾与硝酸钾8g，加热俟溶液至近无色，放冷，转入，加热俟溶液至近无色，放冷，转入250ml锥形瓶中，用水锥形瓶中，用水50ml分次洗涤烧瓶，洗液并入溶液中，加分次洗涤烧瓶，洗液并

29、入溶液中，加1%高锰酸钾溶液至显粉红色，两分种内不消失，再滴加高锰酸钾溶液至显粉红色，两分种内不消失，再滴加2%硫酸硫酸亚铁溶液至红色消失后，加硫酸铁铵指示液亚铁溶液至红色消失后，加硫酸铁铵指示液2ml，用硫氰酸铵，用硫氰酸铵滴定液（滴定液（0.1mol/L）滴定。）滴定。本品按干燥品计算，每丸含朱砂以硫化汞（本品按干燥品计算，每丸含朱砂以硫化汞（HgS）计，小丸应为）计，小丸应为6990mg；大丸应为；大丸应为138180mg。4 4 常用定量分析方法常用定量分析方法紫外可见分光光度法紫外可见分光光度法n对照品比照法对照品比照法对照品溶液浓度应与供试品浓度接近（10010）n吸收系数法吸收系

30、数法A=ECLn计算分光光度法计算分光光度法w等吸收点法，系数倍率法，三波长法，导数光谱法cf.标准曲线法标准曲线法4 4 常用定量分析方法常用定量分析方法紫外可见分光光度法，标准曲线法紫外可见分光光度法，标准曲线法排石颗粒中总黄酮的含量测定排石颗粒中总黄酮的含量测定 含量测定含量测定 对照品溶液的制备对照品溶液的制备 取120干燥至恒重的芦丁对照品20mg，精密称定，置100ml量瓶中，加50%甲醇适量，振摇使溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml含无水芦丁0.2mg）。标准曲线的制备标准曲线的制备 精密量取对照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml，分别置10ml量瓶中，各加50%

31、甲醇至5ml，加5%亚硝酸钠溶液0.3ml，摇匀，放置6分钟，加10%硝酸铝溶液0.3ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液4ml，再加50%甲醇至刻度，摇匀。以相应的溶液为空白。照紫外-可见分光光度法（附录V A），在510nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。测定法测定法 取装量差异下的本品，研细，（甲醇超声提取）。精密量取2ml，置10ml量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，作为空白对照。另精密量取2ml，置10ml量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加50%甲醇至5ml”起，依法立即测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中无水芦丁的量，计算，即得。本品每

32、袋含总黄酮以无水芦丁（C27H30H16）计，不得少于0.12g。4 4 常用定量分析方法常用定量分析方法紫外可见分光光度法，吸收系数法紫外可见分光光度法，吸收系数法戊己丸中总生物碱的含量测定戊己丸中总生物碱的含量测定 含量测定含量测定 取本品粉末（过三号筛）0.70.9g，精密称定，置索氏提取器中，加盐酸-甲醇（1:100）适量，加热回流至提取液无色，提取液浓缩后移至25ml量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀，照柱色谱法（附录VI C）试验，精密量取5ml，置氧化铝柱（内径约0.9cm，中性氧化铝5g，湿法装柱，用乙醇30ml预洗）上，用乙醇洗脱，收集洗脱液，置50ml量瓶中，加乙醇稀释至刻度，

33、摇匀，精密量取2ml，置50ml量瓶中，用0.05mol/L硫酸溶液稀释至刻度，摇匀。照紫外-可见分光光度法（附录V A），在345nm的波长测定吸光度，按盐酸小檗碱（C20H18Cl16NO4）的吸收系数（E1%1cm）为728计算，即得。本品按干燥品计算，每1g含总生物碱以盐酸小檗碱（C20H18Cl16NO4）计，不得少于30mg。4 4 常用定量分析方法常用定量分析方法w荧光分析法荧光分析法n基本原理基本原理n适用于：胺类、甾体、蛋白质、适用于：胺类、甾体、蛋白质、氨基酸、酶氨基酸、酶n测定方法测定方法w直接荧光法、制备荧光法、化学直接荧光法、制备荧光法、化学引导荧光法、荧光淬灭法、胶

34、束引导荧光法、荧光淬灭法、胶束增敏荧光法增敏荧光法n优缺点：优缺点：灵敏度高（灵敏度高（10101012g/ml），选择性好，干扰因素），选择性好，干扰因素多，应用范围有限。多，应用范围有限。S1S0激发光荧光振动弛豫4 4 常用定量分析方法常用定量分析方法薄层色谱扫描法薄层色谱扫描法n薄层吸收扫描法薄层吸收扫描法w光源：氘灯光源：氘灯(190-340nm)和和W灯灯(340-900nmw 薄层板引起的散射现象（散射系数SX）标准曲线（Kubella-Munk曲线）弯曲校正（曲线校直法和计算机回归法）n薄层荧光扫描法薄层荧光扫描法w光源：汞灯光源：汞灯(250-580nm)w直线式扫描，无需曲

35、线校直直线式扫描，无需曲线校直4 4 常用定量分析方法常用定量分析方法薄层色谱扫描法薄层色谱扫描法n系统适应性试验系统适应性试验w检测灵敏度检测灵敏度w分离度分离度 R=2(d1-d2)/(W1+W2)R1.0w重复性，相对标准偏差重复性，相对标准偏差RSD3.0 显色后测定，显色后测定，RSD5.0 4 4 常用定量分析方法常用定量分析方法健脾丸中熊果酸的含量测定健脾丸中熊果酸的含量测定取小蜜丸或重量差异项下的大蜜丸，剪碎，混匀，取约4g，精密称定，加水30ml，放置使溶散，滤过，残渣用水30ml洗涤，在室温干燥至呈松软粉末状或低温干燥后研细，连同滤纸一并置索氏提取器内，加乙醚适量，加热回流

36、提取4小时，提取液回收乙醚至干，残渣用石油醚（3060）浸泡两次，每次10ml（浸泡约2分钟），倾去石油醚，残渣加适量三氯甲烷-无水乙醇（2:3）混合液使溶解，转移至2ml量瓶内，并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另取熊果酸对照品适量，精密称定，加无水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（附录VI B）试验，精密吸取供试品溶液4l与6l，对照品溶液2l 与4l，分别交叉点于同一硅胶G薄层板上，以环已烷-三氯甲烷-乙酸乙酯-冰醋酸(20:5:8:0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105加热至斑点显色清晰，取出，在薄层板上覆盖同样大小的玻璃

37、板，周围用胶布固定，进行扫描，波长：S=540nm，R=700nm，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得。本品含山楂以熊果酸(C30H48O3)计，小蜜丸每1g不得少于0.10mg；大蜜丸每丸不得少于0.90mg。4 4 常用定量分析方法常用定量分析方法气相色谱法气相色谱法n适用于测定适用于测定 挥发油及其它挥发性组分：冰片、桉叶素、樟脑、丁香酚、龙脑等挥发油及其它挥发性组分：冰片、桉叶素、樟脑、丁香酚、龙脑等 中药制剂含任何小分子量成分中药制剂含任何小分子量成分 中药制剂含水量、含醇量中药制剂含水量、含醇量n系统适应性试验系统适应性试验w理论塔板数理论塔板数 n5.54(t

38、R/W1/2)2最小理论塔板数，柱长，柱填充、载体性能等有影响w分离度分离度 R=2(tR1-tR2)/(W1+W2)R1.5（两峰完全分离）w重复性，相对标准偏差重复性，相对标准偏差RSD2.0(n=5)w拖尾因子拖尾因子T=W0.05h/2d1 (d1峰极大至峰前沿之间的距离峰极大至峰前沿之间的距离)1.05T0.954 4 常用定量分析方法常用定量分析方法w气相色谱法气相色谱法n实验条件的选择实验条件的选择w固定相的选择固定相的选择气固色谱硅胶、石墨、化学键合相、高分子多孔微球等气液色谱烃类、硅氧烷类、醇类、酯类，特殊固定液（高温、手性）w柱温的选择柱温的选择样品沸点范围柱温固定液用量（

39、固定液:载体）300400 200250 15%200300 150180 510%100200 各组分的平均沸点2/3左右 1015%气体等低沸点样品 室温或50下 1525%4 4 常用定量分析方法常用定量分析方法w气相色谱法气相色谱法n实验条件的选择实验条件的选择w载气的选择载气的选择 H2，He：流速大，柱长，热导检测器 N2：流速小，氢焰检测器，电子捕获检测器 流速：2080ml/minw其它条件的选择其它条件的选择n进样方式：直接进样、顶空进样（兼有分离分析作用）进样方式：直接进样、顶空进样（兼有分离分析作用）n进样口（汽化室）温度：进样口（汽化室）温度：样品的沸点或稍高于沸点，3

40、0/30/50+T柱T汽 50+T沸点n检测室温度：检测室温度：30+T柱T检T汽4 4 常用定量分析方法常用定量分析方法w气相色谱法气相色谱法n实验条件的选择实验条件的选择w其它条件的选择其它条件的选择n进样时间：进样时间：1秒以内n进样量进样量n理论允许最大进样量使下降的塔板数不超过10。n气体0.11ml；液体0.1-1 ln分流器分流进样，1/101/100w检测器：器：TCD,FID,NPD,ECD4 4 常用定量分析方法常用定量分析方法w气相色谱法气相色谱法n毛细管柱毛细管柱柱长柱长内径内径其它毛细管柱5-60m0.25mm，0.32mm，0.53mm固定液厚度0.1-0.5m填充

41、柱2-4m2-4mm粒径为0.125-0.25mm4 4 常用定量分析方法常用定量分析方法w气相色谱法气相色谱法n测定法测定法w内标法加校正因子内标法加校正因子 n求算校正因子求算校正因子n待测组分含量测定待测组分含量测定w外标法外标法w面积归一化法面积归一化法w标准溶液加入法标准溶液加入法4 4 常用定量分析方法常用定量分析方法w气相色谱法气相色谱法川贝枇杷糖浆中薄荷脑的含量测定川贝枇杷糖浆中薄荷脑的含量测定 含量测定含量测定 照气相色谱（附录VI E）测定。色色谱谱条条件件与与系系统统适适用用性性试试验验 改良聚乙二醇毛细管柱（柱长30m，内径0.32mm，膜厚度0.25um），柱温110

42、；进样口温度为250；检测器温度为250；分流比为25:1。理论板数按萘峰计算应不低于5000。校校正正因因子子测测定定 精密称取萘适量，加环已烷制成每1ml含15mg的溶液，作为内标溶液。另取薄荷脑对照品75mg，精密称定，置5ml量瓶中，加环已烷稀释至刻度，摇匀。精密量取1ml，置20ml量瓶中，精密加入内标溶液1ml，加环已烷至刻度，摇匀。吸取1l，注入气相色谱仪，计算校正因子。测测定定法法 精密量取本品50ml，照挥发油测定法（附录X D）试验，(加环已烷回流提取），合并环已烷液，置20ml量瓶中，精密加入内标溶液1ml，加环已烷至刻度，摇匀。吸取1l，注入气相色谱仪，测定，即得。本品

43、每1ml含薄荷脑（C10H20O）应不得少于0.20mg。4 4 常用定量分析方法常用定量分析方法高效液相色谱法高效液相色谱法分离效能高、分析速度快及应用范围广分离效能高、分析速度快及应用范围广 n适用于测定适用于测定挥发性低、热稳定性差、分子量大的高分子化合物及离子型化合物，如蛋白质、氨基酸、生物碱、甾体、类脂、核酸、维生素及无机盐类 n系统适应性试验系统适应性试验4 4 常用定量分析方法常用定量分析方法w高效液相色谱法高效液相色谱法n实验条件的选择实验条件的选择w色谱柱的选择色谱柱的选择 w流动相的选择流动相的选择优质纯或光谱纯，脱气，过滤（0.45m）n部分含水溶剂：部分含水溶剂：适用于

44、分离中等极性、弱极性药物 n非水溶剂：非水溶剂：分离疏水性物质 n缓冲溶液：缓冲溶液：适用于可溶于水并具可解离特性的化合物，如蛋白质、肽及弱酸、弱碱类化合物。w洗脱方式：洗脱方式：等度洗脱与梯度洗脱 w检测器：器：UVD(紫外),FD(荧光),ELSD(蒸发光散射),ECD(电化学),RID(示差折光)4 4 常用定量分析方法常用定量分析方法w高效液相色谱法高效液相色谱法双黄连口服液的含量测定双黄连口服液的含量测定（反相（反相HPLC外标一点法）外标一点法）含量测定含量测定 黄芩黄芩 照高效液相色谱法（附录VI D）测定。色色谱谱条条件件与与系系统统适适用用性性试试验验 以十八烷基硅烷键合硅胶

45、为填充剂；以甲醇-水-冰醋酸（50:50:1）为流动相；检测波长为274nm。理论板数按黄芩苷峰计算应不低于1500。对对照照品品溶溶液液的的制制备备 取黄芩苷对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。供供试试品品溶溶液液的的制制备备 精密量取本品1ml，置50ml量瓶中，加50%甲醇适量，超声处理20分钟，放置至室温，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。测测定定法法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5ul，注入液相色谱仪，测定，即得。本品每1ml含黄芩按黄芩苷（C21H18O11）计，不得少于8.0mg。金银花金银花 照高效液相色谱法（附录VI D）测定。4

46、 4 常用定量分析方法常用定量分析方法原子吸收分光光度法原子吸收分光光度法工作原理工作原理1）各种元素的原子结构和外层电子排布不同，基态第一激发态:跃迁吸收能量不同具有特征性2）各种元素的基态第一激发态 最易发生，吸收最强，最灵敏线。特征谱线(共振线)。3）利用待测元素的原子蒸气中基态原子与共振线吸收之间的关系来定量分析。4 4 常用定量分析方法常用定量分析方法n原子化系统原子化系统将试样中离子转变成原子蒸气。w原子化方法原子化方法n火焰法n无火焰法电热高温石墨管，激光n冷原子化法n单色器（色散元件（棱镜、光栅），凹凸镜、狭缝等）n检测系统（光电池、光电倍增管、光敏晶体管原子吸收光谱仪原子吸收

47、光谱仪n锐线光源锐线光源空心阴极灯4 4 常用定量分析方法常用定量分析方法优缺点优缺点n优点优点：原子化程度高，试样用量少（1 1100L100L），），可测固体及粘稠试样，灵敏度高，检测限1010-12-12 g/L g/L。n缺点缺点：精密度差，测定速度慢，操作不够简便，装置复杂。5 5 含量测定的方法学考察含量测定的方法学考察w提取条件的考察提取条件的考察n提取方式、浸泡时间、提取时间等提取方式、浸泡时间、提取时间等w分析方法的选择分析方法的选择 半月清散剂中红粉（半月清散剂中红粉（HgOHgO）的含量测定）的含量测定nF F检验检验精密度精密度nt t检验检验准确度准确度w对照品的处理

48、及标化对照品的处理及标化n含量测定用含量测定用n定性鉴别用定性鉴别用用两种洗脱系统进行含量标化，归一化法计算n自制对照品自制对照品纯度检查、含量测定、结构确认等w测定条件的选择测定条件的选择AASNH4SCN滴定5 5 含量测定的方法学考察含量测定的方法学考察w工作曲线工作曲线n确定确定线性化范围线性化范围(回归方程回归方程)n相关系数相关系数r（HPLC法法0.9990.999；TLC法法0.9950.995）w稳定性稳定性试验试验确定最佳的测定时间确定最佳的测定时间w精密度精密度考察考察n相同方法对同一试样多次测定相同方法对同一试样多次测定 RSDw重复性试验重复性试验n同一分析者在同一条

49、件下对同一批样品的多次测定（n=5）w再现性试验再现性试验n不同分析者或不同实验室在不同实验条件下对同一批样品的多次测定5 5 含量测定的方法学考察含量测定的方法学考察w灵敏度灵敏度w检测限检测限 orw空白试验空白试验w准确度考察（准确度考察（回收率回收率）w样品含量测定及数据处理样品含量测定及数据处理*习题：作用发到：1、前处理的一般步骤是什么？2、样品的提取有哪些方法？3、中药制剂含量测定的定义是什么？其测定方法可分为哪几类？4、中药制剂显微鉴别的定义是什么？哪些中药制剂适合用显微鉴别方法？5、分别简述一般化学反应法的定义和特点。6、什么是中药炮制？*注注：作用发到：下节课的内容：中药制剂中各类化学成分分析中药制剂中各类化学成分分析再 见RSD即即Relative Standard Deviation.叫叫相对标准偏差相对标准偏差，也称变异系数，也称变异系数(CV)。RSD=标准差标准差/平均值平均值*100%常用它表示精密度常用它表示精密度 返回软膏剂（霜剂）基质处方硬脂酸、十八醇和白凡士林各3克；司盘-60：0.8克；吐温-80：2.2克；液体石蜡：5克；甘油：10克；水：25克