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1、第七章第七章临床专用自动生化分析仪分析技术临床专用自动生化分析仪分析技术江苏大学基础医学与医学技术学院江苏大学基础医学与医学技术学院 姜旭淦姜旭淦全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）1全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第八章临床专用自动生化分析仪分析技术第八章临床专用自动生化分析仪分析技术目目 录录浊度自动化分析技术浊度自动化分析技术1电解质自动化分析技术电解质自动化分析技术2血气自动化分析技术血气自动化分析技
2、术3电泳自动化分析技术电泳自动化分析技术42全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第八章临床专用自动生化分析仪分析技术第八章临床专用自动生化分析仪分析技术第一节第一节浊度自动化分析技术浊度自动化分析技术3全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第八章临床专用自动生化分析仪分析技术第八章临床专用自动生化分析仪分析技术基本概念基本概念y浊度分析浊度分析通过检测溶液浊度通过检测溶液浊度,对物质含量进行分析的方法。对物质含量进
3、行分析的方法。临床上多用于特定蛋白的分析。临床上多用于特定蛋白的分析。y特定蛋白（特定蛋白（special protein）在机体内具有某种生理功能，疾病状态时又有着特在机体内具有某种生理功能，疾病状态时又有着特定的病理生理意义的蛋白质定的病理生理意义的蛋白质。4全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第八章临床专用自动生化分析仪分析技术第八章临床专用自动生化分析仪分析技术一、浊度分析的基本原理和方法一、浊度分析的基本原理和方法5全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床
4、生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第八章临床专用自动生化分析仪分析技术第八章临床专用自动生化分析仪分析技术（一）浊度分析的基础理论（一）浊度分析的基础理论y1.1.胶体溶液胶体溶液粒子对光具有反射、折射、粒子对光具有反射、折射、散射和吸收散射和吸收等作用。等作用。y2.2.光透射理论光透射理论朗伯朗伯-比尔（比尔（Lambert-Beer）定律：）定律：6全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第八章临床专用自动生化分析仪分析技术第八章临床专用自动生化分析仪分析技术3.3.3.3.光散射理论
5、光散射理论光散射理论光散射理论当入射光通过悬浮在反应溶液固体或胶体粒子时：当入射光通过悬浮在反应溶液固体或胶体粒子时：（1）颗粒直径比入射光的波长小，则散射光比较均匀的分布于）颗粒直径比入射光的波长小，则散射光比较均匀的分布于颗粒的四周，称为颗粒的四周，称为Rayleigh散射。散射。（2）颗粒直径大大地大于入射光的波长（）颗粒直径大大地大于入射光的波长（d），则散射光的），则散射光的分布呈明显不均匀分布呈明显不均匀,即前向散射光为主，称为即前向散射光为主，称为Mile散射。散射。Rayleigh散射散射Mile散射散射7全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材
6、 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第八章临床专用自动生化分析仪分析技术第八章临床专用自动生化分析仪分析技术 颗粒直径颗粒直径1/10 Rayleigh 散射散射1/10颗粒直径颗粒直径 Debye 散射散射 颗粒直径颗粒直径 Mile 散射散射8全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第八章临床专用自动生化分析仪分析技术第八章临床专用自动生化分析仪分析技术雷莱（雷莱（Rayleigh）公式：）公式：该公式来自气溶胶悬浮微粒，用于溶液时需进行校正。该公式来自气溶胶悬浮微粒，用于溶液时需进
7、行校正。当使用高强度光源（如激光）时，液相悬浮颗粒与非偏振光源的当使用高强度光源（如激光）时，液相悬浮颗粒与非偏振光源的散射作用公式为：散射作用公式为：Is为与入射光成为与入射光成角处散射光强度；角处散射光强度；和和I0为入射光的波长和强度；为入射光的波长和强度；dn/dc为校正因子，反映了溶液折射指数和颗粒浓度的变化；为校正因子，反映了溶液折射指数和颗粒浓度的变化；M为颗粒为颗粒分子量；分子量；c为浓度；为浓度；N为阿佛加德指数；为阿佛加德指数；为颗粒到检测器的距离；为颗粒到检测器的距离；为为散射光与入射光的夹角（散射夹角）。散射光与入射光的夹角（散射夹角）。散射光强度与颗粒的浓度和分子量有
8、关散射光强度与颗粒的浓度和分子量有关。9全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第八章临床专用自动生化分析仪分析技术第八章临床专用自动生化分析仪分析技术y4.4.免疫浊度分析免疫浊度分析在一定条件下，可溶性抗原与抗体在液相中特异在一定条件下，可溶性抗原与抗体在液相中特异结合，形成有一定大小的抗原结合，形成有一定大小的抗原-抗体免疫复合物抗体免疫复合物颗粒，使反应液出现浊度；颗粒，使反应液出现浊度；当光线通过介质中的复合物颗粒时，可形成光的当光线通过介质中的复合物颗粒时，可形成光的吸收、透射、散射和折射；吸收
9、、透射、散射和折射；通过测量透射光或散射光信号强弱，从而推算出通过测量透射光或散射光信号强弱，从而推算出被测物的量。被测物的量。10全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第八章临床专用自动生化分析仪分析技术第八章临床专用自动生化分析仪分析技术（二）浊度分析的基本方法（二）浊度分析的基本方法y浊度分析方法的分类浊度分析方法的分类根据检测器的位置及其接收光信号的性质：根据检测器的位置及其接收光信号的性质：v透射免疫浊度法（透射免疫浊度法（turbidimetry immunoassay）v散射免疫浊度法（散射
10、免疫浊度法（nephelometry immunoassay）根据复合物形成速度和测定方式：根据复合物形成速度和测定方式：v终点浊度法终点浊度法v速率浊度法速率浊度法根据根据浊度形成的原理浊度形成的原理：v沉淀反应免疫浊度法沉淀反应免疫浊度法：灵敏度低：灵敏度低v胶乳凝集比浊法（或粒子强化免疫浊度法）：灵敏度高胶乳凝集比浊法（或粒子强化免疫浊度法）：灵敏度高11全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第八章临床专用自动生化分析仪分析技术第八章临床专用自动生化分析仪分析技术y1.1.透射免疫浊度法透射免疫浊度
11、法在光源的光路在光源的光路0o角方向上测量透射光强度，并研角方向上测量透射光强度，并研究其与被检测溶液微粒浓度关系的方法。究其与被检测溶液微粒浓度关系的方法。y2.2.散射免疫浊度法散射免疫浊度法在光路的在光路的5o90o角的方向上测量散射光强度，并角的方向上测量散射光强度，并研究其与被测溶液中微粒浓度关系的方法。研究其与被测溶液中微粒浓度关系的方法。12全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第八章临床专用自动生化分析仪分析技术第八章临床专用自动生化分析仪分析技术1.1.透射免疫浊度法透射免疫浊度法（tu
12、rbidimetric immunoassayturbidimetric immunoassay）y（1）沉淀反应免疫透射浊度法）沉淀反应免疫透射浊度法：抗原抗体在特殊缓冲液中：抗原抗体在特殊缓冲液中快速形成免疫复合物，使反应液出现浊度。快速形成免疫复合物，使反应液出现浊度。免疫复合物的形成有时限性，即当抗原抗体相遇后立即结合免疫复合物的形成有时限性，即当抗原抗体相遇后立即结合成小复合物，几分钟到数小时才形成可见的复合物。为了提成小复合物，几分钟到数小时才形成可见的复合物。为了提高复合物形成速度，加入促聚剂，如高复合物形成速度，加入促聚剂，如4%聚乙二醇（聚乙二醇（MW 60008000），可
13、使免疫复合物形成在），可使免疫复合物形成在3 minl0min完成。完成。y（2）粒子强化免疫浊度法）粒子强化免疫浊度法：选择一种大小适中、均匀一致：选择一种大小适中、均匀一致的胶乳颗粒，吸附或交联抗体；当遇到相应抗原时，则发生的胶乳颗粒，吸附或交联抗体；当遇到相应抗原时，则发生聚集。单个胶乳颗粒在入射光波长之内，光线可透过。当两聚集。单个胶乳颗粒在入射光波长之内，光线可透过。当两个或更多胶乳颗粒凝聚时，透过光减少，光减少的程度与胶个或更多胶乳颗粒凝聚时，透过光减少，光减少的程度与胶乳凝集量成正比。乳凝集量成正比。13全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临
14、床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第八章临床专用自动生化分析仪分析技术第八章临床专用自动生化分析仪分析技术免疫胶乳比浊法免疫胶乳比浊法 用抗体致敏的大小适中、均匀一致的胶乳颗粒用抗体致敏的大小适中、均匀一致的胶乳颗粒（一般为0.2 m），在遇到相应抗原时，胶乳颗粒上的抗体与抗原特异结在遇到相应抗原时，胶乳颗粒上的抗体与抗原特异结合，引起胶乳颗粒凝聚合，引起胶乳颗粒凝聚，使，使透射光和散射光即出现显著变化。透射光和散射光即出现显著变化。14全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第八章临床专
15、用自动生化分析仪分析技术第八章临床专用自动生化分析仪分析技术透射免疫比浊法yy溶液中形成的复合物分子应溶液中形成的复合物分子应溶液中形成的复合物分子应溶液中形成的复合物分子应足够大足够大足够大足够大(35-100nm)(35-100nm)yy 溶液中形成的复合物分子要溶液中形成的复合物分子要溶液中形成的复合物分子要溶液中形成的复合物分子要足够多足够多足够多足够多yy 控制抗原抗体反应的控制抗原抗体反应的控制抗原抗体反应的控制抗原抗体反应的温度和时间温度和时间温度和时间温度和时间yy 加加加加增敏剂增敏剂增敏剂增敏剂，提高复合物形成速度，缩短检测时间，提高复合物形成速度，缩短检测时间，提高复合物
16、形成速度，缩短检测时间，提高复合物形成速度，缩短检测时间yy 应选择亲和力好、效价高的抗体，保证应选择亲和力好、效价高的抗体，保证应选择亲和力好、效价高的抗体，保证应选择亲和力好、效价高的抗体，保证抗体过量抗体过量抗体过量抗体过量yy 将标准品稀释至少将标准品稀释至少将标准品稀释至少将标准品稀释至少5 5个浓度测定，以吸光度值个浓度测定，以吸光度值个浓度测定，以吸光度值个浓度测定，以吸光度值(A)(A)为纵坐标，为纵坐标，为纵坐标，为纵坐标，浓度为横坐标，在半对数纸上绘出标准曲线浓度为横坐标，在半对数纸上绘出标准曲线浓度为横坐标，在半对数纸上绘出标准曲线浓度为横坐标，在半对数纸上绘出标准曲线反
17、应要求反应要求15全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第八章临床专用自动生化分析仪分析技术第八章临床专用自动生化分析仪分析技术2.2.散射免疫浊度法散射免疫浊度法16全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第八章临床专用自动生化分析仪分析技术第八章临床专用自动生化分析仪分析技术（1）终点散射比浊法）终点散射比浊法（end-point nephelomtry assay）抗原和抗体反应达到平衡时，免疫复合物形成抗原和抗
18、体反应达到平衡时，免疫复合物形成的量不再增加，反应体系的浊度不再变化的量不再增加，反应体系的浊度不再变化（需要十分钟以上）检测形成的抗原抗体（需要十分钟以上）检测形成的抗原抗体复合物的总量。复合物的总量。y终点散射比浊法可以实现自动化检测，但反应终点散射比浊法可以实现自动化检测，但反应时间较长，且检测灵敏度低于速率散射比浊法时间较长，且检测灵敏度低于速率散射比浊法的检测水平（的检测水平（g/L水平）。水平）。17全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第八章临床专用自动生化分析仪分析技术第八章临床专用自动生
19、化分析仪分析技术（2）定时散射比浊法）定时散射比浊法（fixed-time nephelometric assay）抗原抗体相遇后沉淀反应立即开始，在反应初期极短时间内反应体抗原抗体相遇后沉淀反应立即开始，在反应初期极短时间内反应体系检测到的散射光强度变化极不稳定，定时散射比浊法选择的检测系检测到的散射光强度变化极不稳定，定时散射比浊法选择的检测时间避开抗原抗体反应初期的不稳定阶段，在抗原抗体反应趋于稳时间避开抗原抗体反应初期的不稳定阶段，在抗原抗体反应趋于稳定的某一时间开始测定，这样可以较少系统误差。定的某一时间开始测定，这样可以较少系统误差。y技术要点：检测过程分两个时间点进行。在抗原抗体
20、反应的初始阶段，技术要点：检测过程分两个时间点进行。在抗原抗体反应的初始阶段，加入少量标本与抗体反应，几秒钟后检测第一次散射光信号，然后加加入少量标本与抗体反应，几秒钟后检测第一次散射光信号，然后加入所有需要的标本，几分钟后检测第二次散射光信号，以第二次散射入所有需要的标本，几分钟后检测第二次散射光信号，以第二次散射光信号减去第一次散射光信号，获得待测抗原与抗体反应而形成的免光信号减去第一次散射光信号，获得待测抗原与抗体反应而形成的免疫复合物对入射光的散射信号峰值，通过标准曲线即可换算出待测抗疫复合物对入射光的散射信号峰值，通过标准曲线即可换算出待测抗原的值。原的值。y与终点散射比浊法比较，反
21、应时间缩短，但检测与终点散射比浊法比较，反应时间缩短，但检测 灵敏度（灵敏度（g/L水平）水平）依然不及速率散射比浊法，且需要扣除本底。依然不及速率散射比浊法，且需要扣除本底。18全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第八章临床专用自动生化分析仪分析技术第八章临床专用自动生化分析仪分析技术（3）速率散射比浊法）速率散射比浊法（rate nephelomtry assay）y所谓速率是指抗原抗体反应在所谓速率是指抗原抗体反应在单位时间单位时间内形成免疫内形成免疫复合物的速度（不是免疫复合物累积的量）。复合物
22、的速度（不是免疫复合物累积的量）。y连续测定各单位时间内复合物形成的速率与其产生连续测定各单位时间内复合物形成的速率与其产生的散射光信号联系在一起，形成动态的速率散射比的散射光信号联系在一起，形成动态的速率散射比浊法，每项检测仅浊法，每项检测仅1 min2 min即可完成。即可完成。19全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第八章临床专用自动生化分析仪分析技术第八章临床专用自动生化分析仪分析技术抗原抗体复合物形成的时间与速率抗原抗体复合物形成的时间与速率 20全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医
23、药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第八章临床专用自动生化分析仪分析技术第八章临床专用自动生化分析仪分析技术21全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第八章临床专用自动生化分析仪分析技术第八章临床专用自动生化分析仪分析技术22全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第八章临床专用自动生化分析仪分析技术第八章临床专用自动生化分析仪分析技术（4）速率抑制免疫浊度测定法）速率抑制
24、免疫浊度测定法（rate inhibition immunoturbidimetry）y主要用于药物、激素以及毒物等半抗原或小分子的主要用于药物、激素以及毒物等半抗原或小分子的定量检测。定量检测。y原理：将一定量的已知半抗原原理：将一定量的已知半抗原-载体与限量的特异性载体与限量的特异性抗体反应，生成的抗体抗体反应，生成的抗体-半抗原半抗原-载体可形成一定的载体可形成一定的速率散射峰值。当反应体系中加入待检标本，其中速率散射峰值。当反应体系中加入待检标本，其中所含的半抗原与已知半抗原所含的半抗原与已知半抗原-载体竞争结合抗体，使载体竞争结合抗体，使抗体抗体-半抗原半抗原-载体复合物的形成受到抑
25、制，速率散载体复合物的形成受到抑制，速率散射峰值降低，降低的程度与标本中待测半抗原的浓射峰值降低，降低的程度与标本中待测半抗原的浓度呈正相关，根据标准曲线可推算出标本中待测半度呈正相关，根据标准曲线可推算出标本中待测半抗原的含量。抗原的含量。23全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第八章临床专用自动生化分析仪分析技术第八章临床专用自动生化分析仪分析技术二、浊度分析仪的分类和基本结构二、浊度分析仪的分类和基本结构24全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验
26、临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第八章临床专用自动生化分析仪分析技术第八章临床专用自动生化分析仪分析技术（一）浊度分析仪分类（一）浊度分析仪分类y1.1.分光光度仪分光光度仪采用终点法作免疫浊度分析的测定仪。采用终点法作免疫浊度分析的测定仪。y2.2.自动生化分析仪自动生化分析仪大型多通道自动生化分析仪多专门编有或可自编大型多通道自动生化分析仪多专门编有或可自编透射浊度分析程序。透射浊度分析程序。y3.3.散射浊度分析仪（散射浊度分析仪（特种蛋白分析仪特种蛋白分析仪）固定时间散射分析仪、速率散射分析仪和双光路固定时间散射分析仪、速率散射分析仪和双光路自动免疫浊度分析仪。自动免疫浊度分析仪
27、。25全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第八章临床专用自动生化分析仪分析技术第八章临床专用自动生化分析仪分析技术（二）自动散射浊度分析仪的结构（二）自动散射浊度分析仪的结构y主要由分析系统、计算机系统组成。主要由分析系统、计算机系统组成。分析系统分析系统v用于加样、稀释、保温和测试等；用于加样、稀释、保温和测试等；v包括散射测浊仪、加液系统、试剂转盘、样品转盘、包括散射测浊仪、加液系统、试剂转盘、样品转盘、卡片阅读器以及软盘驱动器等；卡片阅读器以及软盘驱动器等；计算机系统计算机系统v用于输入病人数据、
28、选择程序菜单、计算参考曲线和用于输入病人数据、选择程序菜单、计算参考曲线和储存测试结果；储存测试结果；v包括计算机主机、包括计算机主机、CRT显示屏和键盘等。显示屏和键盘等。26全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第八章临床专用自动生化分析仪分析技术第八章临床专用自动生化分析仪分析技术三、浊度分析仪的保养（自学）三、浊度分析仪的保养（自学）27全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第八章临床专用自动生化分析仪分析技
29、术第八章临床专用自动生化分析仪分析技术四、浊度分析的质量控制四、浊度分析的质量控制28全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第八章临床专用自动生化分析仪分析技术第八章临床专用自动生化分析仪分析技术（一）抗原过剩校正（一）抗原过剩校正y免疫浊度分析的基本要求：免疫浊度分析的基本要求：始终保持反应体系中抗体适量过剩。始终保持反应体系中抗体适量过剩。y抗原过剩的检测方法：抗原过剩的检测方法：连续监测抗原抗体反应曲线，当抗原过剩时，连续监测抗原抗体反应曲线，当抗原过剩时，反应曲线呈现异常。反应曲线呈现异常。反应体
30、系中追加抗体，如果浊度继续增大则提反应体系中追加抗体，如果浊度继续增大则提示抗原过剩。示抗原过剩。待测标本用两种稀释度测定，浓度高的样本浊待测标本用两种稀释度测定，浓度高的样本浊度反而降低则提示抗原过剩。度反而降低则提示抗原过剩。29全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第八章临床专用自动生化分析仪分析技术第八章临床专用自动生化分析仪分析技术抗原抗体结合的剂量关系抗原抗体结合的剂量关系 30全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版
31、）（第二版）第八章临床专用自动生化分析仪分析技术第八章临床专用自动生化分析仪分析技术定时散射比浊法测定原理示意图定时散射比浊法测定原理示意图 31全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第八章临床专用自动生化分析仪分析技术第八章临床专用自动生化分析仪分析技术（二）减少伪浊度（二）减少伪浊度y伪浊度：伪浊度：在反应体系中，除待测抗原抗体免疫复合物产生在反应体系中，除待测抗原抗体免疫复合物产生的浊度外，其它可引起透射光或散射光发生变化的浊度外，其它可引起透射光或散射光发生变化的浊度都称为伪浊度。的浊度都称为伪浊
32、度。y减少产生伪浊度的方法：减少产生伪浊度的方法：标本：采用新鲜、合格标本。标本：采用新鲜、合格标本。检测体系：保持比色杯和稀释杯清洁。检测体系：保持比色杯和稀释杯清洁。试剂：使用合格的抗体试剂。试剂：使用合格的抗体试剂。增浊剂浓度：严格控制增浊剂的浓度。增浊剂浓度：严格控制增浊剂的浓度。32全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第八章临床专用自动生化分析仪分析技术第八章临床专用自动生化分析仪分析技术（三）选择合适的入射光波长（三）选择合适的入射光波长y无论是散射比浊还是透射比浊，入射光波长的选择无论是散
33、射比浊还是透射比浊，入射光波长的选择原则：原则：除了抗原抗体免疫复合物外，反应体系中的其他除了抗原抗体免疫复合物外，反应体系中的其他成分对入射光的干扰应为最小，因为如果反应体成分对入射光的干扰应为最小，因为如果反应体系中其他成分吸收了部分入射光，透射比浊法测系中其他成分吸收了部分入射光，透射比浊法测定结果将使抗原浓度偏高，而散射比浊法测定将定结果将使抗原浓度偏高，而散射比浊法测定将使抗原浓度偏低。使抗原浓度偏低。33全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第八章临床专用自动生化分析仪分析技术第八章临床专用自
34、动生化分析仪分析技术（四）抗原抗体反应条件（四）抗原抗体反应条件ypH值：值：反应体系中反应体系中pH值的变化可影响抗原抗体的值的变化可影响抗原抗体的亲和力，从而影响抗原抗体复合物的形成。过高或亲和力，从而影响抗原抗体复合物的形成。过高或过低的过低的pH值均可使反应体系中包括抗体、待测抗原值均可使反应体系中包括抗体、待测抗原以及待测标本中其它蛋白质变性而形成伪浊度以及待测标本中其它蛋白质变性而形成伪浊度。y电解质：电解质：一定浓度的电解质可促进抗原抗体复合物一定浓度的电解质可促进抗原抗体复合物的形成，但离子浓度太高可导致蛋白质盐析，也可的形成，但离子浓度太高可导致蛋白质盐析，也可形成伪浊度。另
35、外，不同的离子也可影响抗原抗体形成伪浊度。另外，不同的离子也可影响抗原抗体复合物的形成，通常免疫浊度测定采用磷酸盐溶液复合物的形成，通常免疫浊度测定采用磷酸盐溶液作为缓冲液。作为缓冲液。34全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第八章临床专用自动生化分析仪分析技术第八章临床专用自动生化分析仪分析技术（五）仪器校正（五）仪器校正y1.1.选择合适的校准品选择合适的校准品y2.2.校准曲线的绘制校准曲线的绘制多推荐多推荐5 5点或点或6 6点定标。点定标。选择适当的数学方法进行曲线拟合。选择适当的数学方法进行
36、曲线拟合。35全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第八章临床专用自动生化分析仪分析技术第八章临床专用自动生化分析仪分析技术36全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第八章临床专用自动生化分析仪分析技术第八章临床专用自动生化分析仪分析技术五、特定蛋白浊度分析的五、特定蛋白浊度分析的临床应用临床应用37全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）
37、（第二版）第八章临床专用自动生化分析仪分析技术第八章临床专用自动生化分析仪分析技术特定蛋白临床常规项目特定蛋白临床常规项目38全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第八章临床专用自动生化分析仪分析技术第八章临床专用自动生化分析仪分析技术第二节第二节电解质自动化分析技术电解质自动化分析技术39全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第八章临床专用自动生化分析仪分析技术第八章临床专用自动生化分析仪分析技术基基 本本 概概
38、念念y电解质电解质在溶液中能解离成带电离子而具有导电性能的一类物质。在溶液中能解离成带电离子而具有导电性能的一类物质。主要指体液中最主要指体液中最常测定的常测定的Na+、K+、Cl-、Ca2+、Mg2+、HCO3-和无机磷等。和无机磷等。y电解质分析仪（电解质分析仪（electrolyte analyzer）采用采用ISE或其他部件来测量溶液中离子浓度的仪器。或其他部件来测量溶液中离子浓度的仪器。40全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第八章临床专用自动生化分析仪分析技术第八章临床专用自动生化分析仪分析
39、技术一、电解质分析的原理和方法一、电解质分析的原理和方法41全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第八章临床专用自动生化分析仪分析技术第八章临床专用自动生化分析仪分析技术（一）离子选择电极电位分析理论（一）离子选择电极电位分析理论y离子选择性电极（离子选择性电极（ion selective electrode，ISE）对溶液中某种特定离子具有选择性响应的电化对溶液中某种特定离子具有选择性响应的电化学传感器。学传感器。42全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学
40、检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第八章临床专用自动生化分析仪分析技术第八章临床专用自动生化分析仪分析技术1.1.ISE基本结构基本结构y通常由通常由电极管电极管、内电极内电极、电极内充溶液电极内充溶液和和电极膜电极膜（或称敏感膜）四个部分组成。（或称敏感膜）四个部分组成。43全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第八章临床专用自动生化分析仪分析技术第八章临床专用自动生化分析仪分析技术2.2.电极电位产生电极电位产生y大多数电极膜电位的产生是基于大多数电极膜电位的产生是基于膜材料与溶液界面发生的离
41、膜材料与溶液界面发生的离子交换反应子交换反应。当电极置于溶液中时，由于离子交换和扩散作用，改变当电极置于溶液中时，由于离子交换和扩散作用，改变了二相中原有的电荷分布，因而形成双电层，其间产生了二相中原有的电荷分布，因而形成双电层，其间产生一定的电位差即膜电位。一定的电位差即膜电位。ISE的电位与溶液中特定离子活度的对数呈线性关系。的电位与溶液中特定离子活度的对数呈线性关系。Nernst方程式方程式：阴离子时为，阳离子时为：阴离子时为，阳离子时为 44全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第八章临床专用自动
42、生化分析仪分析技术第八章临床专用自动生化分析仪分析技术3.3.电极电位测量电极电位测量yISE的的EISE值不能直接测定值不能直接测定将将ISE与参比电极共同浸入待测样品中组成一个与参比电极共同浸入待测样品中组成一个原电池原电池，通过测量，通过测量E电池电池来测定来测定E EISEISE值。值。y电池的电动势电池的电动势 在一定条件下，原电池的电动势与被测离子在一定条件下，原电池的电动势与被测离子活度的对数呈线性关系。活度的对数呈线性关系。45全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第八章临床专用自动生化分
43、析仪分析技术第八章临床专用自动生化分析仪分析技术4.ISE法的特点法的特点选择性好选择性好:多数情况下共存离子的干扰小，组成复杂的试样往多数情况下共存离子的干扰小，组成复杂的试样往往不需分离处理即可直接测定。往不需分离处理即可直接测定。灵敏度高灵敏度高：可达：可达10-510-8mmol/L 线性范围宽线性范围宽：Na+为为10-610-1mmol/L K+为为3 10-51mol/L Cl-为为5 10-51mol/L Ca+为为3 10-51mol/L溶血、黄疸不影响测定溶血、黄疸不影响测定，对有色、浑浊溶液都可进行分析。，对有色、浑浊溶液都可进行分析。设备简单，分析速度快，易于自动化，标
44、本用量少，应用范设备简单，分析速度快，易于自动化，标本用量少，应用范围广。围广。46全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第八章临床专用自动生化分析仪分析技术第八章临床专用自动生化分析仪分析技术 5.离子选择性电极法测定的影响因素离子选择性电极法测定的影响因素y（1）离子强度）离子强度：实际测量的是离子的活度，而临床则：实际测量的是离子的活度，而临床则是以离子的浓度报告结果，二者之间的系数则是活度是以离子的浓度报告结果，二者之间的系数则是活度系数，而活度系数又是溶液离子强度的函数，因此，系数，而活度系数又
45、是溶液离子强度的函数，因此，必须保持标准液与标本之间离子强度的一致性。必须保持标准液与标本之间离子强度的一致性。y（2）溶液的）溶液的pH值值：溶液的：溶液的pH值变化可影响待测离子值变化可影响待测离子在溶液中的存在状态，从而影响测定的准确性，如离在溶液中的存在状态，从而影响测定的准确性，如离子钙的测定。子钙的测定。47全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第八章临床专用自动生化分析仪分析技术第八章临床专用自动生化分析仪分析技术y（3）温度）温度：温度的变化对离子选择电极电位的影响称为：温度的变化对离子选
46、择电极电位的影响称为温度效应温度效应。主要表现在：。主要表现在：影响电极的响应斜率、标准电极的截距、溶液待测影响电极的响应斜率、标准电极的截距、溶液待测离子的活度系数以及参比电极电位和液接电位；离子的活度系数以及参比电极电位和液接电位；影响电活性物质的溶解度、检出下限；影响电活性物质的溶解度、检出下限；影响活性平衡的移动以至溶液中待测离子的浓度发影响活性平衡的移动以至溶液中待测离子的浓度发生明显的变化生明显的变化。（温度、温差）（温度、温差）y（4）干扰离子：）干扰离子：溶液中的共存离子影响反应液的离子强溶液中的共存离子影响反应液的离子强度从而影响了被测离子的测定；共存离子还可与待测离度从而影
47、响了被测离子的测定；共存离子还可与待测离子形成络合物或发生氧化还原反应，导致待测离子的数子形成络合物或发生氧化还原反应，导致待测离子的数量减少。量减少。48全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第八章临床专用自动生化分析仪分析技术第八章临床专用自动生化分析仪分析技术（二）（二）ISEISE电位分析方法电位分析方法1.1.定量方法定量方法（1 1）标准比较法（或直读法）标准比较法（或直读法）v在在pH计或离子计上直接读出数值的方法，适用于少量样计或离子计上直接读出数值的方法，适用于少量样本的分析。本的分析。
48、（2 2）标准曲线法标准曲线法v适用于大批量的试样分析。适用于大批量的试样分析。（3 3）标准加入法）标准加入法v当待测溶液组分较复杂，很难控制相同的离子强度时，当待测溶液组分较复杂，很难控制相同的离子强度时，选用标准加入法。选用标准加入法。49全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第八章临床专用自动生化分析仪分析技术第八章临床专用自动生化分析仪分析技术2.2.样本测定方式样本测定方式直接法直接法v样本不经稀释直接由电极测量离子活度；样本不经稀释直接由电极测量离子活度；v优点：可采用全血测定，迅速方便，结
49、果准确，不优点：可采用全血测定，迅速方便，结果准确，不会因血清中水体积所占比例改变而影响结果。会因血清中水体积所占比例改变而影响结果。间接法间接法v样本经一定离子强度缓冲溶液稀释后，由电极测量样本经一定离子强度缓冲溶液稀释后，由电极测量离子活度。离子活度。v优点：样品用量少；样品预稀释，不易堵塞管道；优点：样品用量少；样品预稀释，不易堵塞管道；降低了血脂、不溶性蛋白质对电极的污染，电极寿降低了血脂、不溶性蛋白质对电极的污染，电极寿命延长。命延长。直接法比间接法测定结果高直接法比间接法测定结果高35。50全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临
50、床生物化学检验 （第二版）（第二版）第八章临床专用自动生化分析仪分析技术第八章临床专用自动生化分析仪分析技术二、电解质分析仪分类和结构二、电解质分析仪分类和结构51全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第八章临床专用自动生化分析仪分析技术第八章临床专用自动生化分析仪分析技术（一）电解质分析仪的分类（一）电解质分析仪的分类y1.1.按自动化程度分类按自动化程度分类半自动和全自动电解质分析仪。半自动和全自动电解质分析仪。y2.2.按工作方式分类按工作方式分类湿式和干式电解质分析仪。湿式和干式电解质分析仪。y3