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1、生化别离技术实验教学大纲一、说明：生化别离技术是生物技术专业的必修课，是一门研究生化物质的各种别离纯化技术 的专业课，是生物工程学科的重要组成局部，该课程是本专业学生必须掌握的一门课程。通 过实验使学生能掌握生化别离中重要别离技术的原理和方法。（一）教学目的和要求：1、在本实验课程中培养和提高学生运用生物别离技术的原理的能力。2、掌握生物别离技术的基本方法和技能，培养学生正确记录实验数据和现象、正确处理实 验数据和分析实验结果的能力。3、培养学生严谨认真、实事求是的科学态度和良好的实验作风。4、在教学中，教师要向学生讲明该实验课的性质、任务，并使学生明确实验课的地位和作 用，提高学生学习的主动
2、性。5、学生实验前，必须预习实验内容，了解每个实验的目的、原理和方法。6、实验过程中，要求学生操作要规范、做好实验原始记录、爱惜仪器、节约药品、遵守安 全制度、使学生养成良好的实验习惯，树立良好的学风。7、要求学生实验后按时完成实验报告。（二）教学重点和难点本课程教学重点为沉淀方法原理和适用性；膜别离机理的两种模型，常用的浓差极化和 膜污染的特征解决方法；溶剂萃取法的分配定律的灵活运用；离子交换法机理；吸附法；色 层别离原理和适用范围；常用的色层别离技术理论；结晶技术理论等。本课程教学难点为1.各种生化别离方法的原理；2.生化别离技术在生产及科研实践中 的应用。（三）教学方法和改革措施（1）通
3、过本课程的课堂讲授与课外自学；（2）内容求精求新，以培养兴趣、增长知识、鼓励创新为目的，以说明基本原理和研究设 计思路为重点，结合实例简单介绍基本工艺，不断补充该学科最新进展。重点章节发放英文 研究论文资料，鼓励学生自学讨论。（四）总学时12学时（五）学分1学分（六）开课学期三年级上学期二、大纲内容和学时分配（一）教学内容实验一盐析沉淀一、实验学时：2二、实验目的：（1）掌握研析的原理与方法；（2）利用盐析法别离不同蛋白质（本实验中 别离球蛋白与清蛋白）。三、实验内容：盐析法别离蛋清中的球蛋白和清蛋白；四、实验要求：（1）掌握盐析的原理与方法；（2）学习设计别离不同蛋白的实验步骤。五、实验所需
4、仪器设备仪器类：试管，烧杯，量筒，玻棒，离心机，天平，牛角匙，电炉，铁架台等。化学试剂类：1.蛋白质溶液：5%卵清蛋白溶液或鸡蛋清水溶液（新鲜鸡蛋清：水二L 9）；2.硫酸钱。实验二去细胞壁的枯草芽胞杆菌液体培养一、实验学时：2学时二、实验目的：（1） 了解无菌操作的要求；（2）学会细菌接种、培养方法；（3）学会用 氨茉青霉素或溶菌酶去革兰氏阳性菌细胞壁的方法。三、实验内容：枯草芽胞杆菌液体培养，氨年青霉素或溶菌酶去细胞壁。四、实验要求：（1） 了解无菌操作的要求（2）学会细菌接种方法（3）学会用氨茉青霉素 或溶菌酶去革兰氏阳性菌细胞壁的方法。五、实验所需材料及仪器设备：实验仪器及耗材：接种针
5、，接种环，酒精灯或煤气灯，消毒酒精棉球，镜子，试管架，标签纸，培养箱（37）电子天平，pH计，微波炉，超净工作台实验材料:（1）菌种:枯草芽泡杆菌（Bacillus subtil is）（2）培养基试剂：葡萄糖（或蔗糖），蛋白陈，氯化钠，牛肉膏，琼脂，氨茉青霉素，溶 菌酶。实验三 选择变性剂沉淀法去除DNA中的蛋白质杂质一、实验学时：2学时二、实验目的：1.了解酚氯仿法破碎细胞的原理。2 .了解酚氯仿法去除DNA中的杂蛋白的原理。3 .学习DNA的纯化技术。三、实验内容：酚氯仿破碎细胞，酚氯仿去除杂蛋白，DNA的纯化。四、实验要求：掌握酚氯仿破碎细胞的原理和技术，掌握酚氯仿异戊醇去除杂蛋白的原
6、理与 方法，掌握选择变性沉淀的原理，了解DNA纯化的基本技术。五、实验所需材料及仪器设备：1 .活材料:枯草芽抱杆菌（Bacillus, subtilis）.培养基：牛肉膏蛋白陈培养基（牛肉膏，蛋白陈，NaCL琼脂）。2 .试剂：苯酚，氯仿，异戊醇，乙醇.实验用品：三角瓶，接种环，酒精灯，试管，接种针，离心机等。实验四硅胶层析法别离提纯红豆杉中的紫杉醇一、实验学时：4学时二、实验目的：（1）掌握硅胶层析的方法，（2）掌握紫杉醇别离纯化方法。三、实验内容：（1）红豆杉树皮树叶的有机溶剂浸提；（2）硅胶层析法别离浸提物中的紫 杉醇。四、实验要求：1 .掌握有机溶剂浸提萃取紫杉醇的原理与方法；2.掌
7、握硅胶层析法的原理及 其在紫杉醇提取中的实际应用。五、实验所需仪器设备仪器类：烧杯、量筒、电子天秤（精确度0.0001g）、磁力搅拌器、离心机（50ml X4, 5000 RPM）,透析膜，液相色谱仪等。化学试剂类：红豆杉浸膏，层析用硅胶，苯酚，氯仿，二氯甲烷，乙酸乙酯，甲醇，乙醇, CMC 等。实验五茶叶产物的提取及别离一、实验学时：6学时二、实验目的：使用溶剂萃取技术和离子沉淀方法提取茶叶中的多酚类化合物。三、实验内容：茶叶中含有大量的茶多酚、茶多糖等物质，它们具有抗氧化、提高免疫力等 生理功能。茶多酚是一种小分子酚酸类物质，主要以儿茶素、表儿茶素的形式存在，可通过 大吸附树脂、离子沉淀等
8、技术进行提取。茶多糖是一种糖缀合物，主要与酚类及蛋白质结合, 可通过乙醇沉淀进行提取别离。四、实验要求：了解不同茶叶产物的性质和提取工艺，掌握溶剂萃取技术和离子沉淀方法。 五、实验所需材料及仪器设备：1.材料：茶叶2,仪器设备：小型万能粉碎机，搅拌器，水浴锅，离心机，旋转蒸发仪，分液漏斗，pH齐I, 容量瓶。3.试剂：乙酸乙酯，无水硫酸钠。实验六 从番茄中萃取番茄红素和8胡萝卜素一、实验学时：4学时二、实验目的：1 ,了解有机溶剂萃取的原理与方法。2.掌握有机溶剂提取番茄红素和B 胡萝卜素的方法。3.了解番茄红素与B 一胡萝卜素别离的方法（层析柱别离）。三、实验内容：用有机溶剂提取番茄中的番茄
9、红素和B胡萝卜素的混合物。四、实验要求：理解有机溶剂萃取的原理与方法，掌握萃取的实验操作技术。五、实验所需仪器设备：1 .试剂：乙醇，二氯甲烷，石油酸，氯仿，环己烷，氯化钠，硫酸钠。2 .仪器设备：圆底烧瓶，水浴锅，分液漏斗，三角漏斗，锥形瓶，（氧化铝，层析柱，硅胶 G,视情况可选择不做柱层析别离及硅胶检测，不做那么不需准备括号内的仪器试剂）。（二”课时分配表实验序号实验一实验二实验三实验四实验五实验六合计课时22246420三、教材及参考书目：（一）教材：生化别离技术第二版，于文国、卞进发主编，化学工业出版社，2010（二）参考书目：生物工业下游技术，毛忠贵主编，轻工出版社，1999新生物工艺学（下），俞俊棠主编，化学工业出版社，2002生物工程下游技术，刘国诠等编著，化学工业出版社，1994生物别离工，程孙彦编著，化学工业出版社，1999