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1、细胞化学染色2009-2-25 Still waters run deep.流静水深流静水深,人静心深人静心深 Where there is life,there is hope。有生命必有希望。有生命必有希望概述概述 细胞化学细胞化学(组织化学，组化组织化学，组化)染色染色以以形态学为基础并结合化学或生物化学技术，形态学为基础并结合化学或生物化学技术，对细胞内各种化学成分、代谢产物作定位、对细胞内各种化学成分、代谢产物作定位、定性和半定量检查的一门科学。可弥补单纯定性和半定量检查的一门科学。可弥补单纯细胞形态学检查识别的不足。细胞形态学检查识别的不足。细胞化学染色临床意义细胞化学染色临床意义
2、:1.辅助判断急性白血病的类型。辅助判断急性白血病的类型。仅从细胞仅从细胞形态学观察白血病的诊断正确率约形态学观察白血病的诊断正确率约5070%，如结合细胞化学染色则可提到，如结合细胞化学染色则可提到90%以上。以上。2.辅助血液系统等疾病的诊断和鉴别诊断。辅助血液系统等疾病的诊断和鉴别诊断。不同细胞化学染色，染色步骤不同，但不同细胞化学染色，染色步骤不同，但基基本步骤为固定、有色沉淀反应及复染。本步骤为固定、有色沉淀反应及复染。1.1.固定固定 为了保持细胞结构及化学成分的不为了保持细胞结构及化学成分的不变，需对细胞进行固定。根据染色的成分不变，需对细胞进行固定。根据染色的成分不同，选择合适
3、的固定液，使细胞内的蛋白质、同，选择合适的固定液，使细胞内的蛋白质、酶类、糖类等变成不溶性物质。酶类、糖类等变成不溶性物质。固定的方法固定的方法有物理法和化学法，有物理法和化学法，临床上常用的是化学法临床上常用的是化学法固定。固定。物理法包括干燥和火焰固定；物理法包括干燥和火焰固定；化学法化学法包括蒸汽固定和液体固定包括蒸汽固定和液体固定，如甲醛、乙醇、，如甲醛、乙醇、甲醇、丙酮等。甲醇、丙酮等。2.有色沉淀反应有色沉淀反应 通过不同化学反应，使被检测的化学物质最终形通过不同化学反应，使被检测的化学物质最终形成稳定的有色沉淀。列举以下三种化学反应：成稳定的有色沉淀。列举以下三种化学反应：（1）
4、偶氮偶联法：）偶氮偶联法：含萘酚的底物，在相应酶的作用含萘酚的底物，在相应酶的作用下释放出萘酚，萘酚与重氮盐（如坚牢蓝紫酱下释放出萘酚，萘酚与重氮盐（如坚牢蓝紫酱GBC、坚牢蓝坚牢蓝B、六偶氮付品红等）结合，偶氮偶联形成有、六偶氮付品红等）结合，偶氮偶联形成有色沉淀。如色沉淀。如NAP染色、特异性酯酶染色、非特异性酯染色、特异性酯酶染色、非特异性酯酶染色、酶染色、ACP染色等。染色等。（2）普鲁士蓝反应：）普鲁士蓝反应：铁与酸性亚铁氰化钾铁与酸性亚铁氰化钾作用，形成如亚铁氰化铁蓝色沉淀，如铁染作用，形成如亚铁氰化铁蓝色沉淀，如铁染色。色。（3）雪夫反应）雪夫反应:过碘酸氧化细胞内糖类中过碘酸氧
5、化细胞内糖类中的乙二醇基形成乙二醛基，醛基与雪夫试剂的乙二醇基形成乙二醛基，醛基与雪夫试剂作用，使无色品红形成红色沉淀物，如过碘作用，使无色品红形成红色沉淀物，如过碘酸酸雪夫反应。雪夫反应。3.复染 目的目的在于使各种细胞能显示出来便于观察。在于使各种细胞能显示出来便于观察。选择复染液的颜色应与有色沉淀的颜色有明显选择复染液的颜色应与有色沉淀的颜色有明显的对比度，即能使细胞结构显示又能清楚地看的对比度，即能使细胞结构显示又能清楚地看出细胞化学染色结果。如铁染色复染常用中性出细胞化学染色结果。如铁染色复染常用中性红，过碘酸红，过碘酸雪夫反应常用甲基绿。雪夫反应常用甲基绿。对核着色对核着色效果较好
6、效果较好的有中性红、甲基绿、苏木精、核固的有中性红、甲基绿、苏木精、核固红、沙黄等，红、沙黄等，使浆着色较好的有使浆着色较好的有伊红、刚果红、伊红、刚果红、光绿等。光绿等。一、过氧化物酶染色（一、过氧化物酶染色（POX）【原理】【原理】粒细胞和单核细胞的胞浆中含有粒细胞和单核细胞的胞浆中含有髓过氧化物酶（髓过氧化物酶（myeloperoxidase,MPO）,能将底物能将底物H2O2分解，产生新生态分解，产生新生态氧，它能够将四甲基联苯胺氧化为联苯胺氧，它能够将四甲基联苯胺氧化为联苯胺蓝。联苯胺蓝自我脱氢氧化，则显棕色四蓝。联苯胺蓝自我脱氢氧化，则显棕色四甲基苯醌二胺。若加入亚硝基铁氰化钠与甲
7、基苯醌二胺。若加入亚硝基铁氰化钠与联苯胺蓝结合，可形成稳定的蓝色颗粒，联苯胺蓝结合，可形成稳定的蓝色颗粒，定位于细胞浆酶所在部位。定位于细胞浆酶所在部位。骨髓片POX染色骨髓片POX染色APL：呈强阳性反应AML-M4：部分呈阳性反应，部分成弱阳性反应AML-M5：呈弱阳性ALL：呈阴性，3%正常血细胞的染色反应过氧化物酶主要存在于粒细胞和单核细胞中。原粒大多呈阴性反应，部分可出现少量阳性颗粒。自早幼粒细胞起至成熟中性粒细胞均呈阳性反应，并随着细胞的发育成熟阳性反应程度逐渐递增，中性分叶核粒细胞呈强阳性反应。淋巴细胞、幼红细胞、巨核等均呈阴性反应。POX染色临床意义 主要有助于急性白血病类型的
8、鉴别主要有助于急性白血病类型的鉴别（1）急急粒粒其其白白血血病病性性原原粒粒细细胞胞可可呈呈弱弱阳阳性性反反应应，颗颗粒粒粗粗大大，呈呈局局灶灶性性分分布布；急急淋淋其其原原淋淋细细胞胞和和幼幼淋淋均均呈呈阴阴性性反反应应；急急单单时时白白血血病病性性原原单单呈呈阴阴性性反反应应或或弱弱阳性反应，颗粒细小，呈弥散分布。阳性反应，颗粒细小，呈弥散分布。（2）急急单单与与恶恶性性组组织织细细胞胞白白血血病病鉴鉴别别：异异常常组组织织细细胞胞 POX染染色色呈呈阴阴性性反反应应，急急单单白白血血病病细细胞胞呈呈弱弱阳阳性反应。性反应。二、苏丹黑B染色 【原理】【原理】苏丹黑苏丹黑B（Sudan bl
9、ack B，SBB）是一种脂溶性重氮染料，能溶解细）是一种脂溶性重氮染料，能溶解细胞内的含脂结构（如中性脂肪、磷脂、糖胞内的含脂结构（如中性脂肪、磷脂、糖脂和类固醇）中，而使脂类物质显示出来，脂和类固醇）中，而使脂类物质显示出来，呈棕黑色或深黑色。脂类物质在粒细胞中呈棕黑色或深黑色。脂类物质在粒细胞中丰富，单核细胞中也有少量。丰富，单核细胞中也有少量。【正常血细胞的染色反应】结果与POX染色基本一致。【临床意义】本染色临床意义与POX染色基本相似。【方法评价】过氧化物酶染色要求涂片新鲜，保持酶活性，才能得出正确结果，而苏丹黑B染色则无此要求。虽然SB染色临床意义基本同POX染色，但其灵敏度及特
10、异性两者有所不同。SB染色的特异性低于POX染色，POX阳性见于髓系细胞，而SB阳性也可见于淋系细胞；但SB染色的敏感性高于POX染色，例如急性粒细胞白血病POX染色阴性的患者，其SB染色可阳性。三、中性粒细胞三、中性粒细胞NAPNAP染色染色【原原理理】中中性性粒粒细细胞胞胞胞浆浆中中的的碱碱性性磷磷酸酸酶酶能能水水解解磷磷酸酸萘萘酚酚钠钠，释释放放出出萘萘酚酚，后后者者与与重重氮氮盐盐偶偶联联形形成成不不溶溶性的有色沉淀定位于酶活性处。性的有色沉淀定位于酶活性处。中性粒细胞碱性磷酸酶染色（NAP）NAP积积分分 油油镜镜下下计计数数100个个中中性性杆杆状状核核、分分叶叶核核粒粒细细胞胞，
11、分分别别记记录录其其分分级级情情况况，全全部部阳阳性性细细胞胞之之和和即即为为阳阳性性率率。将将得得出出各各种种积分的百分率乘以该积分数，再相加即为积分值。积分的百分率乘以该积分数，再相加即为积分值。例：例：4分分 占占20 4 x 20=80分分 3分分 占占40 3 x 40=120分分 2分分 占占18 2 x 18=36分分 1分分 占占10 1 x 10=10分分 0分分 占占12 0 x 12=0分分 阳性率阳性率88 积分积分=246分分 NAP临床意义临床意义1.细菌与病毒性感染的鉴别：前者增高，后者降低。细菌与病毒性感染的鉴别：前者增高，后者降低。2.类白与慢粒的鉴别：前者增
12、高，后者降低。类白与慢粒的鉴别：前者增高，后者降低。3.急急性性白白血血病病类类型型鉴鉴别别：急急粒粒NAP积积分分值值减减低低，急急淋淋NAP积分值增高。积分值增高。4.PNH与再障鉴别：前者减低，后者增高。与再障鉴别：前者减低，后者增高。5.真真红红增增多多症症与与继继发发性性红红细细胞胞增增多多症症鉴鉴别别：前前者者增增高高，后者无明显变化。后者无明显变化。6.白白血血病病前前期期与与增增生生性性再再障障的的鉴鉴别别：前前者者NAP积积分分减减低，后者增高。低，后者增高。四、酸性磷酸酶染色四、酸性磷酸酶染色【原理】【原理】酸性磷酸酶（酸性磷酸酶（ACP）存在于细）存在于细胞的溶酶体颗粒中
13、，有些细胞中的酸胞的溶酶体颗粒中，有些细胞中的酸性磷酸酶耐酒石酸，故抗酒石酸酸性性磷酸酶耐酒石酸，故抗酒石酸酸性磷酸酶染色有助于某些疾病的诊断及磷酸酶染色有助于某些疾病的诊断及鉴别诊断。染色方法有偶氮偶联法和鉴别诊断。染色方法有偶氮偶联法和Gomori硫化铅法，以前者为常用。硫化铅法，以前者为常用。偶氮偶联法血细胞内的酸性磷酸酶在偶氮偶联法血细胞内的酸性磷酸酶在酸性（酸性（pH5.0）条件下水解基质液中的磷）条件下水解基质液中的磷酸萘酚酸萘酚ASBI，释放出萘酚，释放出萘酚ASBI，后者，后者与基质液中的重氮盐偶联形成不溶性的与基质液中的重氮盐偶联形成不溶性的有色沉淀，定位于细胞质内酶所在的部
14、有色沉淀，定位于细胞质内酶所在的部位。本试验常用的重氮盐为六偶氮付品位。本试验常用的重氮盐为六偶氮付品红，形成红色的沉淀。红，形成红色的沉淀。抗抗酒酒石石酸酸酸酸性性磷磷酸酸酶酶染染色色 用用相相同同方方法法制制备备两两份份基基质质液液，一一份份再再加加入入适适量量的的L酒酒石石酸酸（tartaric acid）,另另一一份份不不加加酒酒石石酸酸。取取两两张张相相同同标标本本的的涂涂片片，分分别别用用这这两两种种不不同同的的基基质质液液做做酸酸性性磷磷酸酸酶酶染染色色。如如果果血血细细胞胞内内的的酸酸性性磷磷酸酸酶酶耐耐L酒酒石石酸酸，两两张张均均呈呈阳阳性性；如如不不耐耐L酒酒石石酸酸，不不
15、加加L酒酒石石酸酸呈呈阳阳性性反反应应，而而加加L酒石酸呈阴性反应。酒石酸呈阴性反应。阳性反应为鲜红色或深红色颗粒，定位于胞浆。阳性反应为鲜红色或深红色颗粒，定位于胞浆。所有血细胞的酸性磷酸酶染色均为阳性，但是单核细所有血细胞的酸性磷酸酶染色均为阳性，但是单核细胞、组织细胞、巨核细胞和毛细胞反应较强。胞、组织细胞、巨核细胞和毛细胞反应较强。抗酒石酸酸性磷酸酶染色：抗酒石酸酸性磷酸酶染色：毛细胞白血病的毛细胞出毛细胞白血病的毛细胞出现强阳性反应。除少数淋巴细胞表现弱阳性反应外，现强阳性反应。除少数淋巴细胞表现弱阳性反应外，粒细胞、单核细胞和巨核细胞皆为阴性。粒细胞、单核细胞和巨核细胞皆为阴性。临
16、床意义：临床意义：帮助诊断多毛细胞白血病：帮助诊断多毛细胞白血病：毛细胞呈阳性（常呈强毛细胞呈阳性（常呈强阳性），阳性反应不被阳性），阳性反应不被L酒石酸抑制。慢性淋巴细酒石酸抑制。慢性淋巴细胞白血病的淋巴细胞和恶性淋巴瘤细胞胞白血病的淋巴细胞和恶性淋巴瘤细胞ACP染色也染色也可呈阳性，但可被可呈阳性，但可被L酒石酸抑制。但酒石酸抑制。但ACP阴性者，阴性者，并不能排除多毛细胞白血病的可能性。并不能排除多毛细胞白血病的可能性。帮助鉴别帮助鉴别T T细胞与细胞与B B细胞：细胞：TLTL（+），），BLBL（-）帮助鉴别帮助鉴别GaucherGaucher病与病与Niemanm-PickNiem
17、anm-Pick病。病。单核、组织、网状、巨核细胞单核、组织、网状、巨核细胞ACPACP染色均呈阳性反应。染色均呈阳性反应。五、过碘酸雪夫反应五、过碘酸雪夫反应【原原理理】细细胞胞内内含含有有乙乙二二醇醇基基的的糖糖基基在在高高碘碘酸酸的的氧氧化化作作用用下下产产生生双双醛醛基基，后后者者与与雪雪夫夫（Schiff）染染料料作作用用，使使无无色色品品红红变变为为紫紫红红色色染染料料沉沉积积，定定位位于于含含有有多多糖糖成成分分的的部部位位。根根据据胞胞质质中中糖糖原原含含量量多多少少，可可呈呈现现粗粗细细不不等等红红色色颗颗粒粒、块块状状物物或或均均匀匀红红色色。在在高高碘碘酸酸氧氧化化前前，
18、用用麦麦芽芽糖糖淀淀粉粉酶酶或或唾唾液液淀淀粉粉酶酶处处理理标标本本，再再作作PAS染染色色，可可鉴鉴别别是是糖糖原原还还是是其其它它多多糖糖类类物物质质，如如被被消消化化则则是是糖糖原原，如如不不被被消消化化则则为为其其它它多多糖糖类类物物质质。亦亦称称糖糖原原染色染色。PAS临床意义临床意义1.红红血血病病、红红白白血血病病及及贫贫血血类类型型的的鉴鉴别别：红红血血病病、红红白白血血病病、重重型型地地贫贫及及缺缺铁铁贫贫以以及及MDS时时幼幼红红细细胞胞呈呈强强阳阳性性，但但极极少少数数红红白白血血病病可可呈呈阴阴性性；溶溶贫贫时时幼幼红红细细胞胞呈呈阴性或弱阳性；再障、巨幼贫时幼红细胞呈
19、阴性。阴性或弱阳性；再障、巨幼贫时幼红细胞呈阴性。2.白白血血病病类类型型的的鉴鉴别别：急急粒粒时时原原粒粒呈呈阴阴性性或或弱弱阳阳性性，以以弥弥漫漫性性为为主主；急急淋淋时时原原、幼幼淋淋多多呈呈块块状状阳阳性性反反应应，少少数数呈呈阴阴性性反反应应；急急单单时时原原、幼幼单单核核细细胞胞呈呈阳阳性性反反应应，其颗粒细小，弥散分布。其颗粒细小，弥散分布。3.巨巨核核细细胞胞与与里里斯斯（ReedSternberg）细细胞胞的的鉴别：前者呈强阳性，后者呈阴性或弱阳性。鉴别：前者呈强阳性，后者呈阴性或弱阳性。4.GaucherGaucher细胞细胞与与Niemanm-PickNiemanm-Pi
20、ck细胞的鉴别：前细胞的鉴别：前者为强阳性，后者为阴性或弱阳性。者为强阳性，后者为阴性或弱阳性。Sternberg六、酯酶染色不同血细胞中所含酯酶的成分不同。根据酯酶特异性高不同血细胞中所含酯酶的成分不同。根据酯酶特异性高低分为低分为特异性酯酶（特异性酯酶（SE）和和非特异性酯酶（非特异性酯酶（NSE）。特异性酯酶就是指氯乙酸特异性酯酶就是指氯乙酸ASD萘酚酯酶染色；萘酚酯酶染色；非特异非特异性酯酶的种类有多种，性酯酶的种类有多种，根据根据pH值不同分为酸性、中性值不同分为酸性、中性和碱性酯酶，包括了酸性非特异性酯酶（即酸性和碱性酯酶，包括了酸性非特异性酯酶（即酸性 醋酸醋酸萘酚酯酶）、碱性非
21、特异性酯酶（即萘酚酯酶）、碱性非特异性酯酶（即丁酸萘酚酯酶）丁酸萘酚酯酶）和中性非特异性酯酶，后者包括和中性非特异性酯酶，后者包括 醋酸萘酚酯酶、醋酸醋酸萘酚酯酶、醋酸ASD萘酚酯酶等。目前显示血细胞中酯酶的方法均采萘酚酯酶等。目前显示血细胞中酯酶的方法均采用偶氮偶联法。用偶氮偶联法。（一）氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色【原理】血细胞内的氯乙酸AS-D萘酚酯酶（naphythol AS-D chloroacetate esterase，NAS-DCE）水解基质液中的氯乙酸AS-D萘酚，产生AS-D萘酚，进而与基质液中的重氮盐偶联形成不溶性的有色沉淀，定位于细胞质内酶所在的部位。本试验常用的重氮盐为
22、坚牢紫酱GBC，形成的有色沉淀为红色。NAS-DCE几乎仅出现在粒细胞、其特异性高，因此又称为“粒细胞酯酶”。1中性成熟粒细胞，中性成熟粒细胞，呈强阳性；呈强阳性；2淋巴细淋巴细胞，呈阴性；胞，呈阴性；4单核单核细胞，呈阴性；细胞，呈阴性；5幼幼红细胞，呈阴性红细胞，呈阴性急粒急粒M1氯乙酸氯乙酸ASD萘酚萘酚酯酶染色图酯酶染色图1原粒呈阳性；其他原始粒原粒呈阳性；其他原始粒细胞均呈阴性细胞均呈阴性【正常血细胞的染色反应】【正常血细胞的染色反应】1.粒系粒系 分化差的原粒呈阴性，分化好的原粒呈阳分化差的原粒呈阴性，分化好的原粒呈阳性，自早幼粒至成熟中性粒均呈阳性，但酶活性性，自早幼粒至成熟中性
23、粒均呈阳性，但酶活性并不随着细胞的成熟而增强。嗜酸性粒细胞呈阴并不随着细胞的成熟而增强。嗜酸性粒细胞呈阴性或弱阳性，嗜碱性粒细胞呈阳性。性或弱阳性，嗜碱性粒细胞呈阳性。2.单核系单核系 绝大多数为阴性，仅个别单核系细胞呈绝大多数为阴性，仅个别单核系细胞呈弱阳性。弱阳性。3.其他细胞其他细胞 如淋巴细胞、浆细胞、巨核细胞、有如淋巴细胞、浆细胞、巨核细胞、有核红细胞、血小板等均呈阴性，肥大细胞阳性。核红细胞、血小板等均呈阴性，肥大细胞阳性。【临床意义】【临床意义】主要用于辅助鉴别急性白血病主要用于辅助鉴别急性白血病细胞类型，是急性白血病的常规细胞化学染色。细胞类型，是急性白血病的常规细胞化学染色。
24、急粒时原粒呈阳性或阴性，所以染色结果为急粒时原粒呈阳性或阴性，所以染色结果为阴性者不能排除急粒可能性；阴性者不能排除急粒可能性；M3时早幼粒时早幼粒细胞呈强阳性；细胞呈强阳性；急单时原单及幼单细胞几乎急单时原单及幼单细胞几乎均呈阴性，个别细胞弱阳性；均呈阴性，个别细胞弱阳性；M4时原粒及时原粒及早幼粒呈阳性，原单及幼单细胞呈阴性；早幼粒呈阳性，原单及幼单细胞呈阴性；急急淋和急性巨核细胞白血病均呈阴性。淋和急性巨核细胞白血病均呈阴性。（二）（二）醋酸萘酚酯酶染色（醋酸萘酚酯酶染色（NAE）【原原理理】该该酶酶主主要要存存在在于于单单核核细细胞胞、粒粒细细胞胞和和淋淋巴巴细细胞胞中中，是是一一种种
25、中中性性非非特特异异性性的的酯酯酶酶。血血细细胞胞内内的的NAE在在pH中中性性条条件件下下，水水解解基基质质液液中中的的 醋醋酸酸萘萘酚酚并并释释放放出出萘萘酚酚，进进而而与与基基质质液液中中的的重重氮氮盐盐偶偶联联形形成成不不溶溶性性有有色色沉沉淀淀，定定位位于于细细胞胞质质内内酶酶所所在在的的部部位位。本本试试验验常常用用的的重重氮氮盐盐为为坚坚牢牢蓝蓝B，形形成成的的有有色色沉沉淀淀为为棕棕黑黑色色或或灰灰黑黑色色。单单核核细细胞胞系系统统的的阳阳性性可可被被氟氟化化钠钠抑抑制制，所以做所以做NAE染色时，通常同时做氟化钠抑制试验。染色时，通常同时做氟化钠抑制试验。【正常血细胞的染色反
26、应】【正常血细胞的染色反应】1.单核系单核系 分化差的原单呈阴性，分化好的原单呈阳分化差的原单呈阴性，分化好的原单呈阳性（常较强），幼单及单核也呈阳性，阳性反应能被性（常较强），幼单及单核也呈阳性，阳性反应能被氟化钠抑制。所谓抑制是指氟化钠试验的抑制率大于氟化钠抑制。所谓抑制是指氟化钠试验的抑制率大于50%。2.粒系粒系 阴性或阳性，但阳性反应不能被氟化钠抑制。阴性或阳性，但阳性反应不能被氟化钠抑制。3.淋系淋系 多数阴性，少数弱阳性，不能被氟化钠抑制。多数阴性，少数弱阳性，不能被氟化钠抑制。4.其他细胞其他细胞 巨核细胞和血小板呈阳性，阳性反应不巨核细胞和血小板呈阳性，阳性反应不能被氟化钠抑
27、制；少数有核红细胞呈弱阳性，阳性反能被氟化钠抑制；少数有核红细胞呈弱阳性，阳性反应不能被氟化钠抑制；浆细胞呈阴性。应不能被氟化钠抑制；浆细胞呈阴性。NAE临床意义1.有有助助于于急急性性白白血血病病类类型型鉴鉴别别：急急性性单单核核细细胞胞白白血血病病时时白白血血病病细细胞胞呈呈强强阳阳性性反反应应，且且能能被被氟氟化化钠钠抑抑制制，故故在在染染色色时时要要同同时时做做氟氟化化钠钠抑抑制制试试验验；急急性性粒粒细细胞胞白白血血病病时时呈呈阴阴性性反反应应或或弱弱阳阳性性反反应应，阳阳性性反反应应不不被被氟氟化化钠钠抑制。抑制。2.红血病和红白血病时异常幼红细胞可呈阳性反应。红血病和红白血病时异
28、常幼红细胞可呈阳性反应。3.巨幼红细胞性贫血时巨幼红细胞也可呈阳性反应。巨幼红细胞性贫血时巨幼红细胞也可呈阳性反应。10、铁染色、铁染色【原原理理】正正常常人人骨骨髓髓中中的的贮贮存存铁铁主主要要存存在在于于骨骨髓髓小小粒粒和和幼幼红红细细胞胞中中。骨骨髓髓中中的的铁铁在在酸酸性性环环境境下下与与亚亚铁铁氰氰化化钾钾作作用用，形形成成普普鲁鲁士士蓝蓝色色的的亚亚铁铁氰氰化化铁铁沉沉淀淀，定定位于含铁的部位。位于含铁的部位。铁铁染染色色（ferric stain）化化学学反反应应过过程如下：程如下：酸性酸性4Fe 3+3K4 Fe（CN）6 Fe4 Fe（CN）6 3+12K+（含铁物质）（含铁
29、物质）（亚铁氰化钾）（亚铁氰化钾）（亚铁氰化铁）（亚铁氰化铁）【结果】【结果】幼红细胞核呈鲜红色，浆呈淡黄红色，铁粒呈蓝绿色。幼红细胞核呈鲜红色，浆呈淡黄红色，铁粒呈蓝绿色。细细胞胞外外铁铁 用用低低倍倍镜镜观观察察涂涂片片，特特别别是是涂涂片片尾尾部部和和髓髓粒粒附附近近，注意翠蓝色颗粒的存在，可分五级标准。注意翠蓝色颗粒的存在，可分五级标准。（）：无颗粒。）：无颗粒。（+）：有有少少数数铁铁颗颗粒粒或或偶偶见见铁铁小小珠珠(颗颗粒粒体体积积大大于于嗜嗜酸酸性性粒粒细胞的颗粒者称为铁珠细胞的颗粒者称为铁珠)。（+）：有较多的铁颗粒和小珠。）：有较多的铁颗粒和小珠。（+）：有很多的铁颗粒、小珠
30、和少数小块状。）：有很多的铁颗粒、小珠和少数小块状。（+）：有极多铁颗粒、小珠，有很多的小块，密集成堆。）：有极多铁颗粒、小珠，有很多的小块，密集成堆。细细胞胞内内铁铁 用用油油镜镜计计数数100个个中中、晚晚幼幼红红细细胞胞，记记录录胞胞浆浆中中含含有有蓝蓝色色铁铁粒粒的的红红细细胞胞(铁铁粒粒幼幼红红细细胞胞)的的百百分分率率。根根据据细细胞胞内内铁铁颗颗粒粒的的数数目目、大大小小、染染色色深深浅浅和颗粒分布的情况，将铁粒幼红细胞分为四型。和颗粒分布的情况，将铁粒幼红细胞分为四型。型：幼红细胞内含铁粒型：幼红细胞内含铁粒12个。个。型：幼红细胞内含铁粒型：幼红细胞内含铁粒35个。个。型：幼
31、红细胞内含铁粒型：幼红细胞内含铁粒610个。个。型：幼红细胞内含铁粒型：幼红细胞内含铁粒11个以上。个以上。环形铁粒幼红细胞环形铁粒幼红细胞 环形铁粒幼红细胞的标准环形铁粒幼红细胞的标准为含铁粒在为含铁粒在6个以上，围绕核周个以上，围绕核周12以上者。以上者。有时成熟红细胞中也出现铁颗粒称为铁粒红有时成熟红细胞中也出现铁颗粒称为铁粒红细胞。细胞。铁染色的临床意义铁染色的临床意义 1、鉴别缺铁性贫血、铁粒幼细胞性贫血及某些溶、鉴别缺铁性贫血、铁粒幼细胞性贫血及某些溶血性贫血血性贫血 缺铁性贫血时骨髓细胞外铁和内铁显缺铁性贫血时骨髓细胞外铁和内铁显著减少或消失，经铁剂治疗后细胞外铁及内铁可著减少或
32、消失，经铁剂治疗后细胞外铁及内铁可迅速增多，此检查是诊断缺铁性贫血及指导铁剂迅速增多，此检查是诊断缺铁性贫血及指导铁剂治疗的一种辅助方法；非缺铁性贫血，如溶血性治疗的一种辅助方法；非缺铁性贫血，如溶血性贫血、巨幼红细胞性贫血等病人的细胞外铁可以贫血、巨幼红细胞性贫血等病人的细胞外铁可以增高，因此有助于鉴别缺铁性贫血与非缺铁性贫增高，因此有助于鉴别缺铁性贫血与非缺铁性贫血。血。2、用于诊断铁粒幼细胞性贫血、用于诊断铁粒幼细胞性贫血 能找到数能找到数量不等的环形铁粒幼细胞，多见粗颗粒的量不等的环形铁粒幼细胞，多见粗颗粒的型与型与型铁粒幼细胞。型铁粒幼细胞。表表表表4-2-10 4-2-10 4-2
33、-10 4-2-10 几种常见急性白血病的细胞化学染色结果几种常见急性白血病的细胞化学染色结果几种常见急性白血病的细胞化学染色结果几种常见急性白血病的细胞化学染色结果急淋急粒急单红白血病POXPOX+视合并的白细胞视合并的白细胞视合并的白细胞视合并的白细胞类型而定类型而定类型而定类型而定SBSB+同上同上同上同上ASD NCEASD NCE+同上同上同上同上NAENAE+同上同上同上同上NAENaFNAENaF不被不被不被不被NaFNaF抑制抑制抑制抑制被被被被NaFNaF抑制抑制抑制抑制同上同上同上同上NAPNAP增加增加增加增加减少减少减少减少正常或增加正常或增加正常或增加正常或增加 同上
34、同上同上同上PASPAS+，粗颗粒，粗颗粒，粗颗粒，粗颗粒状或块状状或块状状或块状状或块状或或或或+，弥，弥，弥，弥漫性淡红色漫性淡红色漫性淡红色漫性淡红色或或或或+，弥，弥，弥，弥漫性淡红色漫性淡红色漫性淡红色漫性淡红色+第三节 骨髓活体组织检查概述概述骨髓活体组织检查骨髓活体组织检查(bone marrow biopsy，BMB)简称骨髓活检骨髓活检，是观察骨髓组织结构和空间定位，补充骨髓涂片检查的一有效方法。能有效反映骨髓组织结构及间质成分的变化，了解骨髓造血组织的结构和细胞之间和组织之间的相互关系，对很多血液系统疾病的诊断都具有重要意义。一、骨髓活检适应症一、骨髓活检适应症 1.骨髓穿
35、刺多次失败（怀疑骨纤、骨髓转移癌、骨髓穿刺多次失败（怀疑骨纤、骨髓转移癌、MM、毛白、某些急、慢白及骨髓硬化症等）。、毛白、某些急、慢白及骨髓硬化症等）。2.血象显示全血细胞减少，反复骨髓穿刺均为血象显示全血细胞减少，反复骨髓穿刺均为“血稀血稀”或骨髓增生低下，病态造血，怀疑再障、或骨髓增生低下，病态造血，怀疑再障、MDS及低增生性白血病的患者。及低增生性白血病的患者。3.某些贫血、原因不明发热、脾或淋巴结肿大、某些贫血、原因不明发热、脾或淋巴结肿大、骨髓涂片检查不能确诊者。骨髓涂片检查不能确诊者。4.对白血病疗效的观察有指导价值。有时骨髓涂对白血病疗效的观察有指导价值。有时骨髓涂片已达到完全
36、缓解，但骨髓活检切片内仍可检出片已达到完全缓解，但骨髓活检切片内仍可检出白血病性原始细胞簇白血病性原始细胞簇。骨髓穿刺骨髓穿刺骨髓活骨髓活检检取材取材方式方式用骨髓穿刺用骨髓穿刺针针抽骨髓液后涂片瑞抽骨髓液后涂片瑞-姬姬染色后染色后备检备检用骨髓活用骨髓活检针检针取得一条骨髓取得一条骨髓组织组织，固，固定包埋切片后行定包埋切片后行姬姬姆姆萨萨等染色后等染色后备备检检优优点点1.操作操作较简较简便便2.涂片中涂片中细细胞分布均匀，胞体舒胞分布均匀，胞体舒展，染色良好，展，染色良好，较较易分辨各易分辨各系原、幼系原、幼细细胞及其微胞及其微细结细结构构3.易于易于识别识别巨型巨型变变，巨幼，巨幼样变
37、样变和和小巨核小巨核细细胞胞4.细细胞化学染色效果好，胞化学染色效果好，结结果可果可量化量化1.保持造血保持造血组织组织的天然的天然结结构，便于判构，便于判断断红红髓和脂肪髓和脂肪组织组织的比例的比例2.级级全面了解骨髓增生程度，有核全面了解骨髓增生程度，有核细细胞密度及其布局胞密度及其布局3.可避免血可避免血窦窦血的稀血的稀释释4.对对骨髓骨髓纤维纤维化、毛化、毛细细胞白血病有确胞白血病有确诊诊作用，能提示骨髓增生异常作用，能提示骨髓增生异常综综合合征向急性粒征向急性粒细细胞白血病的胞白血病的转转化，化，对对“干抽干抽”有有鉴别鉴别作用作用缺点缺点1.造血造血组织组织的天然的天然结结构已遭破
38、坏，构已遭破坏，无法判断无法判断红红髓、黄髓比例髓、黄髓比例2.若抽吸若抽吸过过猛，猛，导导致血致血窦窦血的稀血的稀释释3.若遇若遇“干抽干抽”不能分析不能分析1.有核有核细细胞群集，不易区分原、幼胞群集，不易区分原、幼细细胞的胞的类类型型2.难难以以观观察察细细胞内的微胞内的微细结细结构构3.细细胞化学染色胞化学染色结结果果难难以量化以量化骨髓穿刺与骨髓活检CML 骨髓切片 MDS骨髓切片 骨髓活检的临床意义骨髓活检的临床意义 1可较全面而准确地了解骨髓增生程度，可较全面而准确地了解骨髓增生程度，造血组织，脂肪细胞或纤维组织所占的容造血组织，脂肪细胞或纤维组织所占的容积比例；了解粒积比例；了解粒/红比值及骨髓内铁储存情红比值及骨髓内铁储存情况，对于某些疾病及化疗后骨髓抑制程度况，对于某些疾病及化疗后骨髓抑制程度有明确的诊断价值。有明确的诊断价值。2可以发现骨髓穿刺涂片检查不易发现的可以发现骨髓穿刺涂片检查不易发现的病理变化。病理变化。