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1、LOGO比较亚甲蓝与维拉帕米对家兔肠比较亚甲蓝与维拉帕米对家兔肠道缺血再灌注损伤的保护作用道缺血再灌注损伤的保护作用113200900130021 113200900130021 薛晓东（组长）薛晓东（组长）113200900130002 113200900130002 汪文龙汪文龙113200900130030 113200900130030 赖雪莹赖雪莹 113200900130031 113200900130031 刘云鹭刘云鹭113200900130049 113200900130049 石敏石敏 113200900130051 113200900130051 李睿李睿前言前言实验原理
2、实验原理实验操作实验操作实验结果及总结实验结果及总结比较亚甲蓝与维拉帕米对家兔肠道比较亚甲蓝与维拉帕米对家兔肠道缺血再灌注损伤的保护作用缺血再灌注损伤的保护作用实验目的实验目的前言前言多数情况下，多数情况下，缺血后再灌注缺血后再灌注可使组织器官功能得到可使组织器官功能得到恢复，损伤的结构得到修复，患者病情好转康复；恢复，损伤的结构得到修复，患者病情好转康复；但有时缺血后再灌注不仅不能使组织、器官功能但有时缺血后再灌注不仅不能使组织、器官功能恢复，反而加重组织、器官的功能障碍和结构损伤。恢复，反而加重组织、器官的功能障碍和结构损伤。缺血再灌注的损伤主要通过缺血再灌注的损伤主要通过活性氧活性氧的作
3、用与的作用与钙超载钙超载两种途径，而两种途径，而亚甲蓝亚甲蓝与与维拉帕米维拉帕米的作用机制分别是的作用机制分别是抑制自由基抑制自由基的细胞毒性作用与的细胞毒性作用与拮抗钙离子拮抗钙离子进入细胞，进入细胞，因此通过这两种药物，可以有效地减小缺血再灌注因此通过这两种药物，可以有效地减小缺血再灌注损伤，本实验旨在以这两种机制为切入点，探究以损伤，本实验旨在以这两种机制为切入点，探究以及比较亚甲蓝与维拉帕米这两种药物的保护作用。及比较亚甲蓝与维拉帕米这两种药物的保护作用。前言前言实验原理实验原理实验操作实验操作实验结果及总结实验结果及总结比较亚甲蓝与维拉帕米对家兔肠道缺血再比较亚甲蓝与维拉帕米对家兔肠
4、道缺血再灌注损伤的保护作用灌注损伤的保护作用实验目的实验目的实验目的实验目的1.1.验证亚甲蓝在缺血再灌注损伤中的保护验证亚甲蓝在缺血再灌注损伤中的保护作用作用2.2.验证维拉帕米在缺血再灌注损伤中的保验证维拉帕米在缺血再灌注损伤中的保护作用护作用3.3.比较亚甲蓝、维拉帕米这两种药物对于比较亚甲蓝、维拉帕米这两种药物对于小肠缺血小肠缺血-再灌注损伤的保护作用再灌注损伤的保护作用前言前言实验原理实验原理实验操作实验操作实验结果及总结实验结果及总结比较亚甲蓝与维拉帕米对家兔肠道缺血再比较亚甲蓝与维拉帕米对家兔肠道缺血再灌注损伤的保护作用灌注损伤的保护作用实验目的实验目的活性氧机制：再灌注后，肠组
5、织产生大量活性氧，活性氧机制：再灌注后，肠组织产生大量活性氧，活性氧攻击活性氧攻击细胞膜细胞膜，攻击蛋白质分子使，攻击蛋白质分子使蛋白质分子蛋白质分子氧化而发生变性，还可以攻击氧化而发生变性，还可以攻击核酸核酸，造成细胞功能，造成细胞功能障碍。障碍。钙超载机制钙超载机制：1.1.损伤损伤线粒体线粒体2.2.激活钙离子依赖性磷脂酶，损伤激活钙离子依赖性磷脂酶，损伤生物膜生物膜3.3.促进促进氧自由基氧自由基生成生成实验原理实验原理-缺血再灌注缺血再灌注损伤损伤的原理的原理实验原理实验原理缺血缺血-再灌注损伤再灌注损伤的保护的保护维拉帕米为钙维拉帕米为钙离子阻滞剂，离子阻滞剂，可减少钙内流可减少钙
6、内流对细胞造成的对细胞造成的损伤损伤亚甲蓝具有亚甲蓝具有还原作用，还原作用，可减少氧自可减少氧自由基的细胞由基的细胞毒性作用毒性作用产生产生MDAMDA比较两者作用后产比较两者作用后产生的生的MDAMDA的量的量操作原理操作原理 肠肠缺缺血血-再再灌灌注注后后，自自由由基基的的大大量量产产生生使使脂脂质质发发生生过过氧氧化化反反应应，氧氧化化终终产产物物为为丙丙二二醛醛，会会引引起起蛋蛋白白质质、核核酸酸等等生生命命大大分分子子的的交交联联聚聚合合，且且具具有有细细胞胞毒毒性性，丙丙二二醛醛数数值值的的增增加加反反应应细细胞胞膜膜性性结结构构破破坏坏的的程程度度,因因此此，以以丙丙二二醛醛的的
7、数数值值变变化化来来反反映映家家兔兔肠肠缺缺血血-再灌注损伤程度再灌注损伤程度。前言前言实验原理实验原理实验操作实验操作实验结果及总结实验结果及总结比较亚甲蓝与维拉帕米对家兔肠道缺血再比较亚甲蓝与维拉帕米对家兔肠道缺血再灌注损伤的保护作用灌注损伤的保护作用实验目的实验目的实验操作实验操作123兔急性肠道兔急性肠道缺血再灌注缺血再灌注损伤模型的损伤模型的建立及正常建立及正常家兔血液标家兔血液标本采集本采集实验动物的实验动物的处理处理 标本采集及指标本采集及指标观察标观察 实验操作材料实验操作材料设备：设备：光学显微镜、石蜡切片机、低速离心机、试管光学显微镜、石蜡切片机、低速离心机、试管（1212
8、）、一次性医用注射器（）、一次性医用注射器（1515）、分光光度计、常用）、分光光度计、常用手术器材、小血管夹手术器材、小血管夹材料与试剂：材料与试剂：材料：材料：实验家兔（实验家兔（6 6）试剂：试剂：生理盐水、水合氯醛溶液、葡萄糖氯化钠注射液、维拉生理盐水、水合氯醛溶液、葡萄糖氯化钠注射液、维拉帕米、亚甲蓝溶液、苏木精染液、伊红染液、固体石蜡、甲帕米、亚甲蓝溶液、苏木精染液、伊红染液、固体石蜡、甲醛溶液、醛溶液、LpH7.4 LpH7.4 的的 PBS PBS、梯度乙醇、二甲苯、梯度乙醇、二甲苯、MDAMDA检测试检测试剂盒剂盒兔急性肠道缺血再灌注损伤模型的兔急性肠道缺血再灌注损伤模型的建
9、立及正常家兔血液标本采集建立及正常家兔血液标本采集分组：分组：选用健康家兔选用健康家兔6 6只只,雌雄不限，分为甲乙丙三组，雌雄不限，分为甲乙丙三组，每组每组2 2只分别编号为甲只分别编号为甲A A、B B，乙，乙A A、B B，丙，丙A A、B B。所有家兔术。所有家兔术前前 12 h 12 h 禁食禁食 ,自由进水自由进水。处理：处理：100 g/L 水合氯醛水合氯醛(3 mL/kg)腹腔内注射麻醉腹腔内注射麻醉 耳缘静脉补充耳缘静脉补充 50 g/L葡萄糖葡萄糖氯化钠注射液氯化钠注射液(50 mL/kg)下腔静脉穿刺取血下腔静脉穿刺取血5 mL于于6支试管中支试管中 静置静置30 min
10、,3 000 r/min 离心离心 15 min后后-20 保存保存阻断肠系阻断肠系膜上动脉膜上动脉实验动物的处理实验动物的处理甲组家兔缺血甲组家兔缺血30min，于家兔耳缘静脉注射于家兔耳缘静脉注射生理盐水生理盐水5mL，30min后恢复血流。后恢复血流。对照组家兔的对照组家兔的实验处理实验处理维拉帕米对兔小肠缺维拉帕米对兔小肠缺血再灌注损伤的保护血再灌注损伤的保护作用作用亚甲蓝对兔小肠缺血亚甲蓝对兔小肠缺血再灌注损伤的保护作再灌注损伤的保护作用用乙乙组家兔缺血家兔缺血30min，以，以2mg/kg剂量的量的维拉帕米配制成拉帕米配制成5mL注注射液于家兔耳射液于家兔耳缘静脉静脉注射，注射，3
11、0min后恢复后恢复血流。血流。丙丙组家兔缺血家兔缺血30min，以以5mg/kg剂量的量的亚甲甲蓝配制成配制成5mL注射液注射液于家兔耳于家兔耳缘静脉注射，静脉注射，30min后恢复血流。后恢复血流。标本采集及指标观察标本采集及指标观察 100 g/L 100 g/L 水合氯醛水合氯醛(3(3 mL/kg)mL/kg)腹腔内注射麻醉腹腔内注射麻醉 耳缘静脉补充耳缘静脉补充 50 g/L50 g/L葡萄糖葡萄糖氯化钠注射液氯化钠注射液(50 mL/kg)(50 mL/kg)下腔静脉穿刺取血下腔静脉穿刺取血5 mL5 mL于于6 6支试管中支试管中 静置静置30 min,3 000 30 min
12、,3 000 r/min r/min 离心离心 15 min15 min后后 -20 -20 保存保存采用采用 MDA MDA 测定试剂盒检测测定试剂盒检测血清中血清中 MDA MDA 含量的变化含量的变化 各组实验终点，动物处死前，每组家兔于再灌注各组实验终点，动物处死前，每组家兔于再灌注2 h2 h后沿原切后沿原切口入腹口入腹 前言前言实验原理实验原理实验操作实验操作实验结果及总结实验结果及总结比较亚甲蓝与维拉帕米对家兔肠道缺血再比较亚甲蓝与维拉帕米对家兔肠道缺血再灌注损伤的保护作用灌注损伤的保护作用实验目的实验目的实验结果及总结实验结果及总结一、家兔实验前后血标本一、家兔实验前后血标本M
13、DAMDA测量值测量值 1.1.仪器值：于波长仪器值：于波长450nm450nm的酶标仪上读取各孔的的酶标仪上读取各孔的ODOD值值 2.2.以吸光度以吸光度ODOD值为纵坐标值为纵坐标(Y)(Y)，相应的，相应的MDAMDA标准品浓标准品浓度为横坐标度为横坐标(X)(X)，做得相应的曲线，样品的，做得相应的曲线，样品的MDAMDA含量含量可根据其可根据其ODOD值由标准曲线换算出相应的浓度。值由标准曲线换算出相应的浓度。3.3.检测值范围：检测值范围：0-80umol/L0-80umol/L 4.4.敏感度：敏感度：0.1 umol/L0.1 umol/L实验结果及总结实验结果及总结实验前后血标本实验前后血标本MDAMDA测量值（单位：测量值（单位：nmol/Lnmol/L）甲组甲组 乙组乙组 丙组丙组实验结果及总结实验结果及总结二、家兔实验后小肠黏膜组织病理检查评分二、家兔实验后小肠黏膜组织病理检查评分实验后小肠黏膜组织病理检查评分实验后小肠黏膜组织病理检查评分甲组甲组 乙组乙组 丙组丙组ABLOGO113200900130021 薛晓东（组长）薛晓东（组长）113200900130002 汪文龙汪文龙113200900130030 赖雪莹赖雪莹 113200900130031 刘云鹭刘云鹭113200900130049 石敏石敏 113200900130051 李睿李睿