《乙肝病毒检测的方法学评价教案资料.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《乙肝病毒检测的方法学评价教案资料.ppt（34页珍藏版）》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。
1、乙肝病毒检测乙肝病毒检测(ji(ji n n c)c)方法学评价(pngji)第一页，共34页。乙肝病毒结构(jigu)第二页，共34页。（一）乙型肝炎病毒结构(jigu)特点HBsAg：是HBV感染的主要标志HBsAb：保护性抗体HBcAg：仅存于感染的肝细胞核内，一般(ybn)不存在于血循环中HBcAb:非保护性抗体，HBcAb-IgM提示HBV处于复制状态HBeAg：HBV复制及强感染性的指标HBeAb：有一定的保护作用，预后良好第三页，共34页。患者血清患者血清(xuqng)中存在三种中存在三种基本形态基本形态大球型颗粒大球型颗粒(kl)，又称，又称Dane颗粒颗粒(kl)；小球型颗粒
2、；小球型颗粒(kl)；管型颗粒；管型颗粒(kl)小球型颗粒小球型颗粒(kl)；管型颗粒；管型颗粒(kl)管型颗粒管型颗粒(kl)第四页，共34页。乙型肝炎病毒(bngd)的实验室诊断（一）血清学检查（一）血清学检查(jinch)（二）生化学检查（二）生化学检查(jinch)（三）（三）HBV DNA、基因型和变异检查、基因型和变异检查(jinch)第五页，共34页。血清学检查(jinch)项目项目(xingm)：HBsAg、抗、抗-HBs、HBeAg、抗、抗-HBe、抗、抗-HBc以及抗以及抗-HBc IgM方法方法ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay
3、，最常用，定性，最常用，定性)第六页，共34页。HBsAg 感染的标志感染的标志Anti-HBs 既往感染既往感染/接种疫苗接种疫苗Anti-HBc IgM 急性感染标志急性感染标志Anti-HBc IgG 既往或慢性感染既往或慢性感染HBeAg 急性病毒急性病毒(bngd)复制，有传染性复制，有传染性 Anti-HBe 病毒病毒(bngd)不再复制不再复制HBV-DNA 急急性性病病毒毒(bngd)复复制制，比比HBeAg更准确；主要用于监测治疗反应更准确；主要用于监测治疗反应第七页，共34页。HBV血清学标志物的临床意义感染模式感染模式HBsAgHBeAgHBc(IgM)抗抗HBc(IgG
4、)抗抗HBe抗抗HBs临床意义临床意义1+-急性乙肝潜伏期后期，携带者。2+-急性乙肝早期或潜伏期3+-急性乙肝早期4+-+-急性乙肝后期5+-+-急性或慢性乙肝，有HBV复制6+-+-+-急性或慢性乙肝。急性期或无症状携带者7+-+-+-阴性慢性乙肝8+-+-慢性乙肝，无或低度HBV复制，乙肝恢复期，既往感染，隐匿性9-+-+乙肝恢复期，既往感染，隐匿性10-+慢性乙肝，接种过乙肝疫苗。第八页，共34页。两对半的意义两对半的意义(yy)乙型肝炎的诊断乙型肝炎的诊断(zhndun)判断传染性判断传染性 判断预后判断预后 筛查献血员筛查献血员 流行病学调查流行病学调查第九页，共34页。乙肝三系定
5、性检查是用来(yn li)判断是否感染乙肝或粗略估计病毒复制水平的初步检查，对患者病情程度的评估参考性不大，所以乙肝患者在做乙肝三系定性检查的时候，应结合肝功能检查、乙肝病毒DNA检查、B超检查等来判定病情的轻重，第十页，共34页。ELISAELISA检测灵敏低的原因检测灵敏低的原因(yunyn)(yunyn)及局限及局限ELISAELISA法受其自身敏感性和特异性的限制法受其自身敏感性和特异性的限制;HBV SHBV S和前和前C C基因区出现基因区出现(chxin)(chxin)位点突变导致位点突变导致HBsAgHBsAg和和HBeAgHBeAg表达缺陷。表达缺陷。影响因素多影响因素多,如
6、加样时间如加样时间,试剂平衡时间试剂平衡时间,样本溶血样本溶血程度等等。特别是低浓度样本易导致假阴性结果程度等等。特别是低浓度样本易导致假阴性结果,使弱阳性样本漏检。使弱阳性样本漏检。急性感染的窗口期急性感染的窗口期;HBsAg;HBsAg检测方法灵敏度不足检测方法灵敏度不足;血清亚型的漏检等。血清亚型的漏检等。标本中病毒颗粒少标本中病毒颗粒少;第十一页，共34页。血清学检测(jin c)的局限性HBV具有具有“检测窗口期检测窗口期假阴性结果假阴性结果无法无法(wf)检测突变株及抗体检测突变株及抗体第十二页，共34页。乙肝病毒的定量(dngling)检测1、乙肝表面抗原（HBsAg）定量检测：
7、1）参考值：0-0.05IU/mL2）临床意义：（1）可作为HBV携带者乙肝病毒复制的参考指标（2）评价拉美呋定的治疗效果（3）监测应用alpha-干扰素治疗病人(bngrn)的乙肝病毒复制（4）确定肝移植病人(bngrn)免疫球蛋白的使用剂量第十三页，共34页。2.乙肝表面(biomin)抗体（抗-HBs）定量测定：是HBsAg刺激机体产生(chnshng)的特异性抗体，是一种保护性抗体，能中和HBV。（1）抗-HBs含量在0-10mIU/ml，表示不具有保护性，需要注射乙肝疫苗（3针：0-1-6方案）。（2）抗-HBs含量在10-100mIU/ml，表示具有保护性，但较弱，需要乙肝疫苗强化
8、注射（1针）。（3）抗-HBs含量大于100mIU/ml，表示具有很强的保护性，不需要注射乙肝疫苗。第十四页，共34页。3、乙肝病毒e抗原（HBeAg）HBeAg增高说明病毒复制，具有很强的传染性。4、乙肝病毒e抗体(kngt)（抗-HBe）抗-HBe阳性说明病毒复制减少，传染性弱，但并非没有传染性。抗HBe不是保护性抗体(kngt)。第十五页，共34页。5、乙肝病毒核心抗体（抗-HBc）抗-HBc：不是中和抗体，有IgG和IgM两种形式(xngsh)。IgM在早期出现，而IgG在恢复期出现，可持续多年或终身存在。第十六页，共34页。乙肝五项定量检测(jin c)的优点由于乙肝病毒容易(rng
9、y)发生变异，再加上乙肝定性检测方法的局限性，会出现假阴性结果，导致不能及时发现乙肝的感染，也就不能得到及时的治疗，对医护人员和其他患者也存在着被感染的威胁。乙肝五项定量应用目前最先进的化学发光法检测，避免了假阴性和漏检的问题，而且准确，尤其对乙肝病人的疗效观察提供了依据，这是检验发展的趋势。第十七页，共34页。两对半定量检测极大地提高了检测的灵敏度，LiCa技术检测HBsAg灵敏度可达05ng/ml，而ELISA检测HBsAg达到2ng/ml时才会阳性。急性乙肝早期定量能及早检出HBsAg，确证HBV感染，几乎能与PreSi同时检测，在病程观察中大大缩短了“窗口期”，而酶标检测在乙肝早期往往
10、HBsAg呈阴性。慢性乙肝一些患者由于机体常缺乏对HBV包膜蛋白的免疫应答，HBsAg表达较低，酶标检测可出现HBsAg和HBsAb均阴性的情况，而定量检测则可避免这些情况的出现，为正确判断病情(bngqng)提供依据。灵敏度如病毒发生变异后，表达量较低，常规ELISA测不出抗原，而定量检测具有极高的灵敏度，可发现极有可能同时检测出HBsAg和HBsAb，血清中HBsAg含量与病人对HBsAg细胞免疫成反比关系，而肝功能改变则与此种细胞免疫成正比。定量HBsAg是反映这一关系的唯一手段。可发现低浓度的HBsAg携带者，特别是一些群体如医务工作者及病人家属等。第十八页，共34页。定量(dngli
11、ng)检测意义l监测疾病发展l评估药物疗效(lioxio)l指导疫苗接种第十九页，共34页。国内疫苗(ymio)评价标准l无应答无应答(yngd)(yngd)者者:无抗体产生无抗体产生(5%)-(5%)-加强计量复加强计量复种种l低应答低应答(yngd)(yngd)者者:10 IU/L(10%)-:100 IU/L(20%)-:100 IU/L(20%)-无须复种无须复种第二十页，共34页。PCR技术在乙肝方面(fngmin)的应用乙型肝炎病毒(bngd)属嗜肝DNA病毒(bngd)科（hepadnaviridae），基因组长度3.2kb 目前感染人类最小的DNA病毒(bngd)部分双链环状D
12、NA。第二十一页，共34页。定量(dngling)PCR的特点可定量结果，准确可定量结果，准确(zhnqu)灵敏地反应灵敏地反应了病原体的感染和治疗恢复情况了病原体的感染和治疗恢复情况光谱分析仪直读结果，自动分析，光谱分析仪直读结果，自动分析，增强增强了灵敏性和客观性。了灵敏性和客观性。第二十二页，共34页。第二十三页，共34页。HBV基基 因因 及及 编编 码码 蛋蛋 白白第二十四页，共34页。HBV-DNA定量检测(jin c)的临床应用慢性乙肝诊断(zhndun)治疗监测和疗效评价跟踪随访预后判断第二十五页，共34页。（二）HBV-DNA与“两对半”1.“两对半”：机体的免疫反应状态；F
13、Q-PCR：检测的是HBV本身(bnshn)的遗传物质DNA，是 病毒存在和复制的最可靠、最直接的指标。2.“携带者”、“大三阳”、“小三阳”等免疫学指标不能 反应体内病毒复制水平与感染程度。第二十六页，共34页。3.血清学指标()不能排除HBV感染(gnrn)。4.也可能出现HBsAg()，HBV-DNA()。5.HBsAb()、HBcAb()、HBeAb()三抗体阳性 与HBV DNA 2.5 103 copy/ml 结果解释。第二十七页，共34页。HBV-DNA检测(jin c)的临床意义 诊断方面诊断方面诊断方面诊断方面(fngmin)(fngmin)：HBV DNA HBV DNA是
14、是是是HBVHBV存在最直接的依据存在最直接的依据存在最直接的依据存在最直接的依据 HBV DNA HBV DNA是是是是HBVHBV复制的标志复制的标志复制的标志复制的标志 HBV DNA HBV DNA是患者具有传染性的标志是患者具有传染性的标志是患者具有传染性的标志是患者具有传染性的标志 对对对对HBV-MHBV-M起补充作用：起补充作用：起补充作用：起补充作用：HBeAg(HBeAg()/)/抗抗抗抗HBe(HBe()乙型肝炎乙型肝炎乙型肝炎乙型肝炎 （前（前（前（前C C区变异）区变异）区变异）区变异）HBsAg(HBsAg()乙型肝炎乙型肝炎乙型肝炎乙型肝炎 （S S区变异）区变异
15、）区变异）区变异）低水平感染低水平感染低水平感染低水平感染 单项抗单项抗单项抗单项抗HBc(HBc()乙型肝炎乙型肝炎乙型肝炎乙型肝炎 第二十八页，共34页。疗效判断：疗效判断：HBV DNA是目前判断乙肝抗病毒药是目前判断乙肝抗病毒药物物(yow)疗效最敏感的指标疗效最敏感的指标 预后判断预后判断 HBV DNA水平与病情有一定的关系水平与病情有一定的关系第二十九页，共34页。一、乙肝病毒DNA检查可检查乙肝病毒的复制状况。如乙肝病毒DNA测定值1000copies/ml，就提示乙肝病毒有复制，而且病毒数量的高低与病毒复制的程度成正相关。若结果阴性(ynxng)，则表明病毒处于不活跃阶段，病
16、情比较平稳。二、乙肝病毒DNA检查还是判断乙肝病毒传染性的重要指标。如果乙肝病毒DNA测定值1000copies/ml，常提示具有传染性，且检测值越高就说明乙肝病毒复制越活跃，传染性越强。第三十页，共34页。三、乙肝病毒DNA检查可以作为肝病患者确诊病情的主要依据。乙肝病毒DNA阳性者，即使肝功能正常，必要时也应考虑进行抗病毒治疗。乙肝抗病毒治疗的标准就是乙肝病毒DNA1000copies/ml，且患者转氨酶超过正常值两倍，此时是肝病患者抗病毒治疗的最佳时机。四、乙肝病毒DNA检查结果还可以在一定程度上辅助判断乙肝病毒是否产生了变异，如在治疗过程中乙肝病毒DNA检测结果由阴性转为阳性时，则提示
17、病毒已发生(fshng)变异，应结合具体病情重新选择抗病毒药物。第三十一页，共34页。基因基因(jyn)检测在乙肝诊疗各阶段的检测在乙肝诊疗各阶段的应用应用药物治疗方案药物治疗方案(fng n)的确定的确定（用药：干扰素、拉米夫定、（用药：干扰素、拉米夫定、阿德福韦、恩替卡韦）阿德福韦、恩替卡韦）药物药物(yow)治疗治疗（疗效评价）（疗效评价）前前C C区区18961896位点突变检测位点突变检测跟踪随访跟踪随访乙乙 肝肝 病病 毒毒 定定 量检测量检测确确诊诊病毒学病毒学分析分析乙肝病毒分型检测乙肝病毒分型检测拉米夫定耐药检测拉米夫定耐药检测阿德福韦耐药检测阿德福韦耐药检测共价闭合环状共价
18、闭合环状DNA(cccDNA)检测检测恩替卡韦耐药检测恩替卡韦耐药检测第三十二页，共34页。FQ-PCR检测(jin c)的优势灵敏度高可以达到灵敏度高可以达到 pg pg 级而级而 ELISA ELISA 只能检测只能检测 ng ng级，可级，可以检测包括乳汁的其他低含量的标本以检测包括乳汁的其他低含量的标本;不受病毒变异影响，而前不受病毒变异影响，而前C C和和S S变异后变异后ELISAELISA难以检测难以检测;荧光定量荧光定量PCR PCR 技术技术(jsh)(jsh)采用闭管检测采用闭管检测,无须凝胶电泳无须凝胶电泳,避免了交叉污染避免了交叉污染,实现了对实现了对HBV DNA HBV DNA 的定量测定的定量测定,其实时其实时监测技术监测技术(jsh)(jsh)使药物选择和疗效观察成为可能使药物选择和疗效观察成为可能;漏检率低。漏检率低。第三十三页，共34页。第三十四页，共34页。