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1、抗生素微生物检定法抗生素药品的特点纯度一般较化学药品低发酵类产品通常为多组分且活性组分易发生变异稳定性一般较化学药品差结构较一般化学药品复杂抗生素检测技术与方法高效液相色谱法高效毛细管电泳法气相色谱法高分子杂质测定法抗生素微生物检定法溶出度不溶性微粒澄清度溶液颜色抗生素微生物检定法定义：抗生素微生物检定法是利用抗生素在低微浓度下有选择地抑制或杀死微生物的特点，以微生物的抗菌活性为指标，来衡量抗生素中的有效成分效力的方法。方法：本法是在适宜的条件下，根据量反应平行原理设计，通过检测抗生素对微生物的一直作用，计算抗生素活性（效价）的方法。量反应平行原理琼脂球面扩散动力学公式：奠定了管碟法量反应直线
2、公式的基础抗生素微生物检定法的概况微生物检定法的特点1.微生物检定法可直观、特异性地反映出抗生素药品的抗菌活性，显示临床的特点；2.多组分抗生素由于不同活性组分生物活性的差异，化学测定结果难以准确表征组分组成、寒冷和活性的关系；3.许多抗生素品种由于各种原因目前没有适当的分析方法测定其效价；4.同时微生物法所需仪器设备简单，成本较低。微生物检定法的局限性本法测定的是有抑菌作用物质的总效价，测定结果不能反映药品的纯度，不能排除其他组分或活性杂质的干扰。对复方制剂产品的检验，微生物检定法选择性差，效价测定受其他成分的影响。如：妥布霉素滴眼液，配方中含苯扎溴胺作为防腐剂，苯扎溴胺具有抑菌作用，使样品
3、的抑菌圈增大，导致标准品和样品的剂量反应曲线偏离，无法测准妥布霉素的含量。抗生素微生物检定法分类1.稀释法2.浊度法3.琼脂扩散法（管碟法和打孔法）2010版药典采用管碟法和浊度法来测定抗生素的效价抗生素微生物检定方法比较稀释法浊度法琼脂扩散法相同点标准品、供试品抗菌效力的比较不同点等量的试验菌菌液在不同浓度的抗生素液体培养基中的生长情况不同浓度的抗生素溶液在含有试验菌固体培养基中的扩散情况含不同浓度抗生素的液体培养基中有无细菌生长用光度法测定含不同浓度的抗生素的液体培养基的浊度测定不同浓度的抗生素溶液在固体培养基表面产生的抑菌圈的大小目的抗生素最低抑菌浓度（MIC）的测定抗生素抑菌效力的测定
4、应用用于新药研制及临床药敏试验等方面抗生素效力的测定方法抗生素微生物检定法包括管碟法和浊度法管碟法：利用抗生素在摊布特定试验菌的固体培养基内成球面形扩散，形成含一定浓度抗生素球形区，抑制了试验菌的繁殖而呈现出透明的抑菌圈。根据抗生素在一定浓度范围内，对数剂量与抑菌圈直径（面积）呈直线关系而设计，通过检测抗生素对微生物的抑制作用，比较标准品与供试品产生抑菌圈的大小，计算出供试品的效价。抗生素微生物检定法包括管碟法和浊度法比浊法：通过监测等量的试验菌菌液在不同浓度的抗生素液体培养基中的生长情况，利用分光光度法测定含不同浓度的抗生素的液体培养基的浊度，从而衡量抗生素抑菌效力的发疯，可用于抗生素药物的
5、含量（效价）测定。浊度法与管碟法方法比较比浊法管碟法相同点标准品、供试品抗菌效力的比较不同点等量试验菌菌液在不同浓度的抗生素液体培养基中的生长情况不同浓度的抗生素在含有试验菌固体培养基中的扩散情况用光度法测定不同浓度的抗生素的液体培养基的浊度测定不同浓度的抗生素溶液在固体培养基表面产生的抑菌圈的大小速度快，试验过程3-4小时，可在当天获得结果速度慢，试验过程16-20小时，第二天才能获取结果易于操作，比浊仪在线培养和测定，具有客观、精密便于自动化操作的优点操作繁琐，多为手工操作，不易掌握采用液体培养基，无扩散因素的影响，试验的灵敏度高，结果的精密度和正确度都较扩散法好管碟法应用范围广，培养条件
6、要求较宽，但实验过程长，试验结果易受琼脂扩散性的影响浊度法优点：速度快，试验过程3-4小时，可在当天获得结果易于操作，比浊仪在线培养和测定，具有客观、精密便于自动化操作的优点采用液体培养基，无扩散因素的影响，试验的灵敏度高，结果的精密度和正确度都较扩散法好浊度法缺点：对试验仪器的性能及试验器具的要求较高，如培养温度要求一致，比色管的清洁等任何影响液体培养基内微生物生长的因素都会影响抗生素效价的测定管碟法利用抗生素在固体培养基中的平面扩散作用，依据量反应平行原理并采用交叉实验设计方法。在相同的试验条件下通过比较标准品（已知效价）和供试品两者对所接种试验菌产生的抑菌圈（直径或面积）的大小来测定供试
7、品效价的一种方法管碟法管碟法的操作步骤 预试验 试验准备 底层的制备 供试品、标准品溶液的制备 菌层的制备 加钢圈 滴加抗生素溶液 培养 抑菌圈的测量 结果的可靠性检验及效价测定 管碟法的操作步骤预试验 确定最佳的试验条件：调整试验菌的浓度、使用量、抗生素终浓度、培养基等，使抑菌圈的大小符合规定：一剂量法中心点的抑菌圈直径应在1617.5cm，二剂量法高剂量浓度标准品溶液所致的抑菌圈直径在1822cm，三剂量法中间剂量浓度标准品溶液所致的抑菌圈直径在1518cm。试验准备试验准备管碟法的操作步骤培养基的制备管碟法的操作步骤底层的制备：每碟加底层培养基20ml，待培养基凝固后，盖上陶瓦盖，置35
8、37培养箱中，待用。菌层的制备：加入约含1%浓度菌悬液的培养基5ml作为菌层管碟法的操作步骤加钢圈滴加抗生素溶液培养温度：一般为3637时间：一般为1618h结果计算及判断结果计算及判断抑菌圈的测量以及结果的可靠性检验及效价测定 多功能微生物自动测量分析仪结果可靠性分析试品间（F1）：供试品的估计效价是否合适。P0.05回归（F2）：剂量反应关系是否成立。P0.01偏离平行（F3）：量反应直线的斜率是否有显著差异。P0.05剂间（F6）：不同浓度间的差异是否显著。P0.01碟间（F7）：同一浓度间差异是否显著。P0.05结果计算及判断重试判定抑菌圈大小的要求可靠性检验：符合可靠性检验的各项规定
9、可信限率：供试品效价测定结果（PT）的可信限率除特殊规定外，不得大于5%。实测效价与估计效价：应在90110%之间，否则结果仅作为初试，应予以重试。效价测定结果不符合规定时，需换人加倍复试。二剂量法计算结果计算及判断检定的影响因素标准品与供试品的同质性抑菌圈质量的控制直线斜率的控制直线截距的控制抑菌圈的形状 试验中抑菌圈常有破裂、不远、甚至无圈的现象：在滴加抗生素溶液时药液溅出、碰到钢管壁引起漏液，导致不圆双碟、钢管等残留抗生素或清洁液试验菌菌龄过老、检定菌被烫死等缓冲盐的Ph值和盐浓度影响扩散抑菌圈的大小当抗生素浓度不变时，体积的对数与抑菌圈的直径或面积呈直线关系，故钢管中滴加抗生素的体积应一致。所以钢管的大小（包括：重量、直径、高度）应该严格控制。抑菌圈的大小受时间增减的影响，故预先延长抗生素的扩散时间可使抑菌圈变大。加液时间的差异的影响抑菌圈边缘的清晰度扩散系数不一致试验菌的生长周期不一致，对抗生素的敏感度不同，培养基的材料、成分、质量、Ph值、盐浓度及培养时间多组分抗生素中，各组份的抗菌活性不同，扩散系数不同、以及交叉作用的影响谢谢！祝大家：新年快乐！万事如意！身体健康！此课件下载可自行编辑修改，仅供参考！此课件下载可自行编辑修改，仅供参考！感谢您的支持，我们努力做得更好！谢谢感谢您的支持，我们努力做得更好！谢谢