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1、中药抗肝纤维化的实验研究概况 Still waters run deep.流静水深流静水深,人静心深人静心深 Where there is life,there is hope。有生命必有希望。有生命必有希望 肝纤维化是慢性肝损伤进展为肝硬化的一个重要阶段，主要特征是细胞外基质在肝内过度沉积。目前普遍认为，在这个阶段，肝脏的病变是可逆的，而肝硬化、原发性肝癌则不可逆转，因此，如何有效地防治肝纤维化，阻断其进展，已经成为国内外研究的热点。近年来中药治疗肝纤维化在临床研究和实验研究方面均取得了令人瞩目的进展，显示出了特有的优势。1、单味中药及单体有效成分单味中药及单体有效成分 氧化苦参碱：又名苦参
2、素，是从中药苦豆子或苦参根中提取的一种生物碱，具有抗炎、抗病毒、免疫调节等作用。宋健等以NIH3T3成纤维细胞为靶细胞，用噻唑蓝（MTT）法及Northern杂交检测苦参素对NIH3T3成纤维细胞増殖及型原胶原mRAN的表达的影响。结果表明，苦参素能明显抑制成纤维细胞增殖及型原胶原mRAN的表达,并呈剂量依赖性。并采用CCI4制备肝纤维化模型，同时设立苦参素预防组及治疗组，发现苦参素可显著降低肝纤维化大鼠血清型前胶原（PC）、层粘连蛋白（LN）及透明质酸（HA）水平，并能明显改善肝脏功能，血清丙氨酸转氨酶（ALT）、血清白蛋白（ALB）、血清总胆红素（TB）等各项指标均改善，与模型组比较差异具
3、有显著性（P0.01)。组织学检查显示，苦参素能降低肝纤维化程度，具有明显的防治纤维化作用。杨文卓等参照Jonker的方法复制了大鼠半乳糖胺诱导肝纤维化模型，设立苦参碱预防观察组及治疗观察组，发现苦参碱可明显降低肝粉的羟脯氨酸含量，改善肝功能，组织学观察到预防用药组肝细胞变性轻，汇管区纤维间隔纤细，型、型胶原的沉积减少，治疗组病理改变也 较自然恢复组轻，得出结论：苦参碱对半乳糖胺诱导的肝纤维化具有明显的预防及治疗作用。王俊学等发现氧化苦参碱可阻断撤除苯巴比妥钠（PB）诱导的小鼠肝细胞的凋亡。据以上推测，氧化苦参碱可能通过以下环节达到抗纤维化作用：（1）抑制炎症的发生；（2）抑制肝星状细胞激活及
4、成纤维细胞增殖。川芎嗪：别名四甲基吡嗪，在伞形科植物川芎根茎及姜科植物温莪术等植物中存在，为一种提纯的生物碱。它具有改善微循环，増加冠状动脉血流量的作用。王红等应用50%CCI4油剂腹腔注射6周诱导出大鼠肝纤维化模型的同时，予川芎嗪溶液20mg/kg腹腔注射，每日1次，每周6次，共6周，结果川芎嗪治疗组的动物血清ALT水平，HA、PC及肝组织中丙二醛（MDA）含量均较对照组明显降低（P0.01），而肝组织超氧化物歧化酶（SOD）的活性则明显增加（P0.05），同时病理组织学检查可见肝细胞变性坏死及胶原纤维增生程度均显著减轻，免疫组织化学染色示肝组织星状细胞数量明显减少，表明川芎嗪具有保护肝细胞
5、、抗脂质过氧化及抗纤维化的作用。对于体外培养的成纤维细胞，川芎嗪能使成纤维细胞发生显著的形态改变，并能依制细胞的核分裂和増殖。丹参及丹酚酸B：是近年来研究较多的抗肝维化药物。河北医科大学肝病研究所研究了丹参对肝纤维化大鼠肝组织匀浆和离体线粒体的抗脂质过氧化作用，结果表明，丹参可有效地抑制肝纤维化大鼠抗脂质过氧化产物MDA地产生，并增强SOD的活性，且两者均呈剂量及时间依赖性。采用MTT法测定丹参素对肝星状细胞的增殖抑制作用并检测细胞周期，发现丹参素作用后肝星状细胞的生长受到明显抑制，且抑制作用随药物浓度的增加而增强。流式细胞仪分析结果表明，随着丹参浓度的增加，凋亡的星状细胞明显增多。镁一丹酚酸
6、B是上世纪80年代后期从丹参中分离出来的一种水溶性成分，为含儿茶酚结构的化合物。现有研究发现，丹酚酸B能抑制体外传代培养的贮脂细胞的增殖，减少其胶原合成与分泌，从细胞水平证实了丹酚酸B具有抗纤维化的作用和部分机理。胡义杨等采用CCI4法及DMN法制备两种大鼠肝纤维化模型，予丹参提取物（含丹酚酸B75%）治疗，发现丹酚酸B可显著提高ALB含量并降低肝组织MDA含量及羟脯氨酸（Hyp）含量，病理学染色标本及免疫组化结果表明，丹酚酸B治疗组减轻了肝脏的炎症活动度，降低了肝纤维化程度，并推测其抗纤维化的作用机制与抗脂质过氧化作用有关。牛磺酸：是从中药牛黄中提取的有效成分，具有多种细胞保护作用。李宝刚采
7、用牛血清白蛋白静脉注射复制大鼠肝纤维化模型，并预防性使用牛磺酸，结果牛磺酸组动物的肝Hyp含量和肌成纤维细胞数量明显低于模型组，肝切片中胶原沉积明显减轻。陈岳祥对CCI4诱导的大鼠实验性肝纤维化的研究表明，牛磺酸能明显降低肝Hyp和、型前胶原mRNA含量，降低HA和LN水平，改善肝功能和肝组织学的病理变化。其它：甘草酸可降低由CCI4联合乙醇所致的不同阶段的肝纤维化大鼠星状细胞、型前胶原mRNA表达，减少肝脏、型胶原沉积，尤以早期、中期明显。体外试验中，已证实灯盏细辛黄酮及木樨草素具有抗纤维化作用。2 2、活血化淤中药复方、活血化淤中药复方 活血化瘀中药复方能改善血液微循环及血管通透性，保护肝
8、细胞，促进炎症病灶的消退及增生性病变的软化和吸收，改善机体免疫功能。复方861合剂：包括丹参、黄芪、陈皮、香附、鸡血藤在内共10味中药。给予免疫损伤性肝纤维化大鼠复方861灌胃3个月，病理学观察结果表明，861治疗可使纤维化肝脏的纤维吸收消散，紊乱的肝血窦等血管结构得到改建恢复，肝纤维化得到阻断和逆转。作用机理研究证实，复方861合剂除抑制胶原合成外，还可通过提高胶原酶活性、降低基质金属蛋白酶的抑制因子的表达来减少基质金属蛋白酶抑制因子对金属蛋白酶的抑制，增加胶原的降解，从而逆转肝纤维化。对于胆管阻塞性肝纤维化大鼠也得到同样结果。体外试验研究表明，复方861可能通过减少肝星状细胞分泌内皮素1，
9、从而抑制内皮素1对星状细胞的收缩作用，肝窦阻力降低，对预防、治疗肝纤维化及早期门静脉高压有重要意义。益肝康：在益肝冲剂基础上改进而成。研究发现，益肝康能改善肝脏炎症损伤积分，减轻、型胶原的沉积，并对CCI4和免疫损伤性两种肝纤维化模型均有明显的防治作用，表现在假小叶和纤维隔数目明显减少，纤维间隔变薄。汉丹肝乐：是以活血化淤，通络养肝为基本治则的复方中药制剂。临床及实验研究已证实，可通过减轻肝细胞脂质过氧化，保护肝细胞，抑制肝星状细胞增殖及胶原合成，提高胶原酶活性，促进胶原蛋白降解等多种作用来发挥抗肝纤维化效应，同时还从分子水平上观察到汉丹肝乐对肝纤维化大鼠的结缔组织生长因子（CTGF）mRNA
10、和TGF1mRNA的增高表达具有抑制作用，一定程度上延缓了肝纤维化的形成和发展。其他：柔肝冲剂（主要为黄芪、丹参、郁金）用于治疗二甲基亚硝胺（DMN）诱导的肝纤维化大鼠，并以秋水仙碱作为对照，结果表明，柔肝冲剂能减轻肝脏炎症反应，保护肝细胞，同时可降低肝脏型、型、型前胶原mRNA的含量,减少胶原的生成,抑制肝纤维花的发展。王健等采用益气活血方药(桃仁黄芪等5味中药)予免疫损伤性肝纤维化大鼠灌胃,结果显示出较好的抗纤维化作用,其含药大鼠血清具有抑制内毒素脂多糖体外诱导的肝星状细胞增殖的作用.3 3、扶正化瘀类复方、扶正化瘀类复方 王丽春等采用温阳法(主药为干姜、桂枝、附子)治疗CCI4中毒性肝纤
11、维化大鼠，结果治疗组的肝Hyp含量较对照组明显下降，肠系膜微循环得到改善，病理学观察到纤维增生程度降低。刘成海等将扶正化瘀方（319方，由丹参、桃仁、虫草菌丝等组成）的全方及拆方予二甲基亚硝胺所致的肝纤维化大鼠治疗，发现全方及拆方均可降低肝组织羟脯氨酸含量及胶原沉积，全方较拆房综合效果更好。体外实验也证实，将319方拆方的含药血清作用于培养的大鼠肝星状细胞，发现319方全方及其拆方均可抑制星状细胞的活化、增殖，抑制其胶原、TGF1的基因表达与蛋白合成，一定程度上揭示了其作用机理。4 4、疏肝健脾类复方、疏肝健脾类复方 山东中医药大学从疏肝理气、健脾化瘀入手研制了肝脾舒合剂，由柴胡、白术、丹参、
12、大腹皮、紫河车、生黄芪、白芍、鳖甲、女贞子、汉防己等药物组成，用猪血清腹腔注射复制出肝纤维化模型，予肝脾舒合剂灌胃，结果治疗组的肝功能明显优于对照组（P0.05）,肝组织Hyp含量明显低于对照组（P0.01）,病理改变显示肝纤维化程度明显下降。5 5、结语、结语 中医药抗实验性肝纤维化的研究，经过20余年的努力探索，已发现了一些中草药及其有效成分具有较好的抗肝纤维化作用，初步阐明了重要抗肝纤维化的作用机制，为中医药防治肝纤维化展现了广阔的前景，为今后更深层次的研究打下了基础。总的来说，中药抗肝纤维化的作用机制主要有：（1）保护肝细胞，抑制炎症损伤；（2）调节免疫功能；（3）抑制胶原合成，促进胶
13、原降解。就目前的研究现状而言，还存在以下一些问题：（1）目前仍缺乏理想的肝纤维化模型，人类肝纤维化的病因与病毒复制、免疫调控、遗传等因素相关，而目前采用的模型多位单一因素制造，模型的病理进展变化与人类肝纤维化病理过程存在一定差异，而能结合中医病因病机理论造模的更少，对中医治则、方剂药物的研究有很大的局限，同时动物自愈较人类明显，造成实验结果与临床应用不仅吻合；（2）研究思路欠广，从现有文献看，主要集中在具有活血化瘀、补气补阴等功效的方药上，这是远远不够的；（3）在细胞和分子水平上进行系统而深入研究的较少，实验设计欠科学，缺乏系统化研究，从而影响疗效的判断，导致其研究结果难以令人信服。针对以上问
14、题，在今后的工作中应加强动物模型的研究，开展多因素造模，建立能真实客观反映人类肝纤维化发病机理、并结合中医理论探寻符合“证”本质的动物模型，拓展思路，努力从众多的中草药中有目的、有计划地进行筛选、发掘，对有苗头的药物进行系统深入的研究，实验设计应严谨、合理，做到科学化、规范化。今后抗肝纤维化研究的重点可能是寻找针对性强，全面作用于以上三个机制的药物。此外，从中药中寻找特异性的有效单体，与对应的单克隆抗体偶联进行生物治疗，也是值得尝试的一个领域。肝纤维化的发生机制复杂，环节较多，而中药复方具有多项调节作用，在肝纤维化的治疗中具有独特的优势，因而应充分发掘中医药抗纤维化的潜力，结合中医理论与临床特点合理组方，筛选出更有效的中药。谢谢大家！谢谢大家！Thanks!