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1、实验实验66可溶性蛋白质可溶性蛋白质的测定的测定2.适用范围与特点适用范围与特点 该法是该法是1976年年Bradford建立，试剂配制简单，建立，试剂配制简单，操作简便快捷，反应非常灵敏，灵敏度比操作简便快捷，反应非常灵敏，灵敏度比Lowry法（劳里法）还高法（劳里法）还高4倍，可测定微克级蛋白质含量，倍，可测定微克级蛋白质含量，测定蛋白质浓度范围为测定蛋白质浓度范围为01000g/mL，是一种常，是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。用的微量蛋白质快速测定方法。该法的不足是当蛋白质含量过高时，线性关该法的不足是当蛋白质含量过高时，线性关系较差，重复性也较差，同时染料很容易结合到系较差，重复性
2、也较差，同时染料很容易结合到比色皿上，给实验结果造成一定误差。比色皿上，给实验结果造成一定误差。5.结果计算结果计算 蛋白质含量（蛋白质含量（%）=CV2V0 mV1 100式中：式中：C从标准曲线上查得的蛋白质浓度，从标准曲线上查得的蛋白质浓度，g/mL V0样品溶液的总体积，样品溶液的总体积，mL V1测定时加样量，测定时加样量，mL V2测定时定容体积，测定时定容体积，mL m 样品的质量，样品的质量，g6.注意事项注意事项 （1）考马斯亮蓝和皮肤中蛋白质通过范德）考马斯亮蓝和皮肤中蛋白质通过范德华力结合，反应快速，并且稳定，无法用华力结合，反应快速，并且稳定，无法用普通试剂洗掉。待一两
3、周左右，皮屑细胞普通试剂洗掉。待一两周左右，皮屑细胞自然衰老脱落即可无碍。自然衰老脱落即可无碍。（2）考马斯亮蓝有考马斯亮蓝有G-250和和R-250两种。两种。蛋白质与考马斯亮蓝蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在结合在2min左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速，左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速，其结合物在室温下其结合物在室温下1h内保持稳定。内保持稳定。考马斯亮蓝考马斯亮蓝R-250与蛋白质反应虽然比与蛋白质反应虽然比较缓慢，但可以被洗脱下去，所以可用来对较缓慢，但可以被洗脱下去，所以可用来对电泳条带染色。电泳条带染色。（3）不可使用石英比色皿（因不易洗去染）不可使用石英比色皿（因不易洗去染色），可用玻璃比色皿，使用后立即用少色），可用玻璃比色皿，使用后立即用少量量95%的乙醇荡洗，以洗去染色。的乙醇荡洗，以洗去染色。（4）H+浓度是影响线性关系的主要因素，浓度是影响线性关系的主要因素，控制好显色液的控制好显色液的H+浓度就能使被测液的吸浓度就能使被测液的吸光度与蛋白质浓度之间保持较好的线性关光度与蛋白质浓度之间保持较好的线性关系，用系，用HCl-NaCl缓冲液代替磷酸缓冲液也缓冲液代替磷酸缓冲液也能改善标准曲线的线性关系。能改善标准曲线的线性关系。结束语结束语谢谢大家聆听！谢谢大家聆听！13