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1、实验实验4 4、质粒、质粒DNADNA的转化的转化 一一一一 实验目的实验目的实验目的实验目的 二二二二 实验原理实验原理实验原理实验原理 三三三三 材料仪器材料仪器材料仪器材料仪器 四四四四 实验步骤实验步骤实验步骤实验步骤 五五五五 实验结果图实验结果图实验结果图实验结果图 六六六六 结果讨论结果讨论结果讨论结果讨论 七七七七 思考题思考题思考题思考题Evaluation only.Created with Aspose.Slides for.NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.Evaluati
2、on only.Created with Aspose.Slides for.NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.Evaluation only.Created with Aspose.Slides for.NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.涂布棒的使用涂布棒的使用1 1 1 1、使用前，浸入、使用前，浸入、使用前，浸入、使用前，浸入75%75%75%75%酒精中；酒精中；酒精中；酒精中；2 2 2 2
3、、在酒精灯上引燃涂布棒上的酒精、在酒精灯上引燃涂布棒上的酒精、在酒精灯上引燃涂布棒上的酒精、在酒精灯上引燃涂布棒上的酒精（不要烧到手）；（不要烧到手）；（不要烧到手）；（不要烧到手）；3 3 3 3、等酒精烧完后，让涂布棒在空气中冷却；、等酒精烧完后，让涂布棒在空气中冷却；、等酒精烧完后，让涂布棒在空气中冷却；、等酒精烧完后，让涂布棒在空气中冷却；4 4 4 4、涂布均匀；、涂布均匀；、涂布均匀；、涂布均匀；5 5 5 5、将涂布棒重新除菌以备下一次使用；、将涂布棒重新除菌以备下一次使用；、将涂布棒重新除菌以备下一次使用；、将涂布棒重新除菌以备下一次使用；6 6 6 6、阴性对照与重组、阴性对
4、照与重组、阴性对照与重组、阴性对照与重组DNADNADNADNA的涂布棒区别使用，避免的涂布棒区别使用，避免的涂布棒区别使用，避免的涂布棒区别使用，避免DNADNADNADNA污染。污染。污染。污染。Evaluation only.Created with Aspose.Slides for.NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.A(A(对照对照-Amp+Kan):100ul-Amp+Kan):100ul菌液涂布于菌液涂布于LB+Amp+KanLB+Amp+Kan培养基，菌落生长情况培养基，菌落生长情
5、况;B(B(转化转化-Amp+Kan):100ul-Amp+Kan):100ul菌液涂布于菌液涂布于LB+Amp+KanLB+Amp+Kan培养基，菌落生长情况培养基，菌落生长情况;C(C(对照对照-无无):100ul):100ul菌液涂布于菌液涂布于LBLB培养基，菌落生长情况培养基，菌落生长情况;BCA五、实验结果图五、实验结果图Evaluation only.Created with Aspose.Slides for.NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.六、结果讨论六、结果讨论转化过程中的影
6、响因素转化过程中的影响因素1 1受体细胞的生长状态和密度受体细胞的生长状态和密度 细胞生长密度以每毫升培养液中的细胞数在细胞生长密度以每毫升培养液中的细胞数在5510107 7个左个左右为佳。即应用对数期或对数生长前期的细菌，可通过测右为佳。即应用对数期或对数生长前期的细菌，可通过测定培养液的定培养液的A A600600控制。控制。Evaluation only.Created with Aspose.Slides for.NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.2 2质粒质粒DNADNA的质量和浓度的
7、质量和浓度 用于转化的质粒用于转化的质粒DNADNA应主要是超螺旋态的，转化率与应主要是超螺旋态的，转化率与外源外源DNADNA的浓度在一定范围内成正比，但外源的浓度在一定范围内成正比，但外源DNADNA的量过多的量过多时，则会使转化率下降。一般来讲，时，则会使转化率下降。一般来讲，DNADNA溶液的体积不应溶液的体积不应超过感受态细胞体积的超过感受态细胞体积的5%5%，1ng1ng的超螺旋的超螺旋DNADNA即可使即可使50 l50 l的感受态细胞达到饱和。对于以质粒为载体的重组分子而的感受态细胞达到饱和。对于以质粒为载体的重组分子而言，分子量大的转化效率低。此外，重组言，分子量大的转化效率
8、低。此外，重组DNADNA分子的构型分子的构型与转化效率也密切相关，环状重组质粒的转化率较分子量与转化效率也密切相关，环状重组质粒的转化率较分子量相同的线性重组质粒高相同的线性重组质粒高10-10010-100倍。倍。Evaluation only.Created with Aspose.Slides for.NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.3 3试剂的质量试剂的质量 化合物及无机离子的影响：所用的化合物及无机离子的影响：所用的CaCl2CaCl2等试剂均需是等试剂均需是最高纯度的，并用最纯净的
9、水配制，分装保存于最高纯度的，并用最纯净的水配制，分装保存于44。在。在Ca2+Ca2+的基础上联合其他二价金属离子（如的基础上联合其他二价金属离子（如Mn2+Mn2+或或Co2+Co2+）、）、DMSODMSO或还原剂等物质处理细菌，可使转化效率大大提高。或还原剂等物质处理细菌，可使转化效率大大提高。4 4防止杂菌和杂防止杂菌和杂DNADNA的污染的污染 整个操作过程均应在无菌条件下进行，所用器皿，如离整个操作过程均应在无菌条件下进行，所用器皿，如离心管，移液枪头等最好是新的，并经高压灭菌处理。所有的心管，移液枪头等最好是新的，并经高压灭菌处理。所有的试剂都要灭菌，且注意防止被其它试剂、试剂
10、都要灭菌，且注意防止被其它试剂、DNADNA酶或杂酶或杂DNADNA所污所污染，否则均会影响转化效率或杂染，否则均会影响转化效率或杂DNADNA的转入。的转入。5 5整个操作均需在冰上进行，不能离开冰浴，否则细胞转化整个操作均需在冰上进行，不能离开冰浴，否则细胞转化率将会降低。率将会降低。Evaluation only.Created with Aspose.Slides for.NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.七、思七、思 考考 题题1 1 1 1、制备感受态细胞的关键是什么？、制备感受态细胞
11、的关键是什么？、制备感受态细胞的关键是什么？、制备感受态细胞的关键是什么？2 2 2 2、如果、如果、如果、如果DNADNADNADNA转化后，没有得到转化子或者转化子很转化后，没有得到转化子或者转化子很转化后，没有得到转化子或者转化子很转化后，没有得到转化子或者转化子很少，分析原因。少，分析原因。少，分析原因。少，分析原因。3 3 3 3、如何提高转化效率？、如何提高转化效率？、如何提高转化效率？、如何提高转化效率？Evaluation only.Created with Aspose.Slides for.NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.Evaluation only.Created with Aspose.Slides for.NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.结束语结束语谢谢大家聆听！谢谢大家聆听！18