猪瘟ELISA抗体检测试剂盒说明书(共2页).doc

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1、精选优质文档-倾情为你奉上猪瘟ELISA抗体检测试剂盒猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒使用说明书【简介】试剂盒由抗原包被的微孔板,酶标羊抗猪IgG及其它试剂制成,应用间接ELISA原理检测猪血清中抗猪瘟病毒抗体。【用途】猪瘟ELISA诊断试剂盒用于检测猪血清中猪瘟病毒抗体。评估猪场猪瘟疫苗免疫状况,感染猪的血清学诊断。【原理】本试剂盒是采用猪瘟抗原包被微孔板,在试验中,加入稀释的对照血清和待检血清,经温育后,若样品中含有抗猪瘟病毒的特异性抗体,则将与检测板上抗原结合,经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后;再加入酶标二抗,与检测板上抗原抗体复合物发生特异性结合;再经洗涤除去未结合的酶结合物,在孔中

2、加TMB底物液,与酶反应形成蓝色产物,加入HF溶液终止反应后,用酶标仪630nm波长测定各反应孔中的OD值。【试剂盒主要成分】 1 包被抗原的微孔板 2块 (96孔/块)2 阴、阳性对照血清 各1管 (0.5ml/管)3 羊抗猪酶标二抗 1瓶 (20ml/瓶)4 20倍浓缩洗涤液 1瓶 (30ml/瓶)5 底物A液、B液 各1瓶 (10ml/瓶)6 终止液 1瓶 (10ml/瓶)7 样品稀释液 1瓶 (50ml/瓶)8 血清稀释板 2块 (96孔/块)9 说明书 1张【样品制备】取动物全血,按常规方法制备血清,要求血清清亮,无溶血。【洗涤液配制】使用前,浓缩的洗涤液应恢复至室温(25左右),并

3、摇动使沉淀的盐溶解(最好在37水中加热5-10min),然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释(例如:每板用20 ml浓缩液加上380ml水),稀释好的洗涤液在4可以存放7天。【样品稀释】在血清稀释板中按1:40的体积稀释待检血清(195l样品稀释液中加5l待检血清)。注意:阳性对照和阴性对照1:40稀释,(234l样品稀释液中加6l对照血清)。【注意事项】1 试剂盒使用前各试剂应平衡至室温,使用后放回2-8。2 不同批号试剂盒的试剂组分不得混用,使用试剂时应防止试剂污染。3 不要用口移液。4 TMB(底物液B)不要暴露于强光,避免接触氧化剂。 5 检测板拆封后避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加

4、干燥剂放于自封袋中,应尽快置于4)。6 待检血清样品数量较多时,应先使用血清稀释板稀释完所有要检测血清,再将稀释好的血清转移到检测板,使反应时间一致。7 浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水稀释,如果发现有结晶加热使其溶解后再使用。8 严格按照操作说明书可以获得最好的结果,操作过程中移液,定时和洗涤等的全过程必须精确。【操作步骤】 1 取预包被的检测板(根据样品多少,可拆开分次使用),将稀释好的待检血清取100l加入到检测板孔中。阴性对照和阳性对照各设2孔,每孔100l。轻轻振匀孔中样品(勿溢出),置37温育30分钟。2 甩掉板孔中的溶液,用洗涤液洗板5次,200l/孔,每次静置3分钟倒掉,再在干净吸

5、水纸上拍干。3 每孔加羊抗猪酶标二抗100l,置37温育30分钟。4 洗涤5次, 方法同2。切记每次在干净吸水纸上拍干。5 每孔先加底物液A一滴(50l)、再加底物液B一滴(50l),混匀,室温(18-25)避光显色10分钟。6 每孔加终止液1滴(50l),10分钟内测定结果(测定前在震荡器上轻轻震动一下)。【结果判定】 在酶标仪上测各孔OD630值。试验成立的条件是阳性对照孔平均OD630值大于或等于1.0,阴性对照孔平均OD630值必须小于0.3。 样品OD630值大于0.35,判为阳性;样品OD630值小于0.35,判为阴性。注意:用620 650纳米波长测定结果均有效。【贮 存】2-8避光保存 【有 效 期】6个月专心-专注-专业

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