农用微生物菌剂(GB20287-2006~).doc

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1、|农用微生物菌剂(GB 20287-2006)前 言本标准的 5.1、5.3 和第 8 章条文为强制性条款,其余为推荐性条款。本标准的附录 A、附录 C 和附录 D 为规范性附录,附录 B 为资料性附录。农用微生物菌剂1 范围本标准规定了农用微生物菌剂(即微生物接种剂)的术语和定义、产品分类、要求、试验方法、检验规则、包装、标识、运输和贮存。本标准适用于农用微生物菌剂类产品。2 规范性引用文件(略)3 术语和定义(略)4 产品分类产品按剂型可分为液体、粉剂、颗粒型;按内含的微生物种类或功能特性可分为根瘤菌菌剂、固氮菌菌剂、解磷类微生物菌剂、硅酸盐微生物菌剂、光合细菌菌剂、有机物料腐熟剂、促生菌

2、剂、菌根菌剂、生物修复菌剂等。5 要求5.1 菌种生产用的微生物菌种应安全、有效。生产者应提供菌种的分类鉴定报告,包括属及种的学名、形态、生理生化特性及鉴定依据等完整资料。生产者应提供菌种安全性评价资料。采用生物工程菌,应具有允许大面积释放的生物安全性有关批文。5.2 产品外观(略)5.3 产品技术指标|5.3.1 农用微生物菌剂产品的技术指标见表 1,其中有机物料腐熟剂产品的技术指标按表 2 执行。表 1 农用微生物菌剂产品的技术指标剂 型项 目液 体 粉 剂 颗 粒有效活菌数(cfu) a ,亿/g(mL) 2.0 2.0 1.0霉菌杂菌数,个/g(mL) 3.0106 3.0106 3.

3、0106杂菌率, % 10.0 20.0 30.0水分,% - 35.0 20.0细度,% - 80 80pH 值 5.08.0 5.58.5 5.58.5保质期 b,月 3 6a 复合菌剂,每一种有效菌的数量不得少于 0.01 亿/g(mL);以单一的胶质芽胞杆菌( Bacillus mucilaginosus)制成的粉剂产品中有效活菌数不少于 1.2 亿/g。b 此项仅在监督部门或仲裁双方认为有必要时检测。表 2 有机物料腐熟剂产品的技术指标剂 型项目液 体 粉 剂 颗 粒有效活菌数(cfu), 亿/g(mL) 1.0 0.50 0.50纤维素酶活 a,U/g(mL) 30.0 30.0

4、30.0蛋白酶活 b,U/g(mL) 15.0 15.0 15.0水 分,% - 35.0 20.0细 度,% - 70 70pH 值 5.08.5 5.58.5 5.58.5保质期 c,月 3 6|a 以农作物秸秆类为腐熟对象测定纤维素酶活。b 以畜禽粪便类为腐熟对象测定蛋白酶活。c 此项仅在监督部门或仲裁双方认为有必要时检测。5.3.2 农用微生物菌剂产品中无害化指标见表 3。表 3 农用微生物菌剂产品的无害化技术指标参数 标准极限粪大肠菌群数,个/g(mL) 100蛔虫卵死亡率,% 95砷及其化合物(以 As 计),mg/kg 75镉及其化合物(以 Cd 计),mg/kg 10铅及其化合

5、物(以 Pb 计),mg/kg 100铬及其化合物(以 Cr 计),mg/kg 150汞及其化合物(以 Hg 计),mg/kg 56 试验方法6.1 仪器设备(略)6.2 试剂(略)6.3 产品参数的检测6.3.1 外观(感官) 的测定取少量样品放到白色搪瓷盘(或白色塑料调色板)中,仔细观察样品的颜色、形状、质地。6.3.2 有效活菌数的测定|采用平板计数法,根据所测微生物的种类选用适宜的培养基。若采用最大可能数(Most Probable Number,MPN)5 管法,遵照附录 C 的规定。6.3.2.1 系列稀释称取样品 10 g(精确到 0.01 g),加入带玻璃珠的 100 mL 的

6、无菌水中(液体菌剂取 l0.0 mL 加入 90 mL 的无菌水中),静置 20 min,在旋转式摇床上 200 r/min 充分振荡 30 min,即成母液菌悬液(基础液)。用无菌移液管分别吸取 5.0mL 上述母液菌悬液加入 45 mL 无菌水中,按1:10 进行系列稀释,分别得到 1:1101,1:110 2,1:110 3,1:110 4稀释的菌悬液(每个稀释度应更换无菌移液管)。6.3.2.2 加样及培养每个样品取 3 个连续适宜的稀释度,用无菌移液管分别吸取不同稀释度菌悬液 0.1 mL,加至预先制备好的固体培养基平板上,分别用无菌玻璃刮刀将不同稀释度的菌悬液均匀地涂于琼脂表面。每

7、一稀释度重复 3 次,同时以无菌水作空白对照,于适宜的条件下培养。6.3.2.3 菌落识别根据所检测菌种的技术资料,每个稀释度取不同类型的代表菌落通过涂片、染色、镜检等技术手段确认有效菌。当空白对照培养皿出现菌落数时,检测结果无效,应重做。6.3.2.4 菌落计数以出现 20300 个菌落数的稀释度的平板为计数标准(丝状真菌为 10150个菌落数),分别统计有效活菌数目和杂菌数目。当只有一个稀释度,其平均菌落数在 20300 个之间时,则以该平均菌落数计算。若有两个稀释度,其平均菌落数均在 20300 个之间时,应按两者菌落总数之比值决定。若其比值小|于等于 2 应计算两者的平均数;若大于 2

8、 则以稀释度小的菌落平均数计算。有效活菌数按式(1)或式(2)计算:nm = xkv1/(m0v2) 10-8 (1)nv = xkv1/(v0v2) 10-8 (2)式中:nm 质量有效活菌数, 亿/gnv 体积有效活菌数, 亿/mLx 菌落平均数, 个k 稀释倍数v1 基础液体积, mLv2 菌悬液加入量, mLv0 样品量, mLm0 样品量, g6.3.3 霉菌杂菌数的测定 采用马丁培养基,测定方法同 6.3.2。6.3.4 杂菌率的测定除样品有效菌外其它的菌均为杂菌。样品中杂菌率按式(3)计算:m = n1/(n1+n)100 (3)式中:m 样品杂菌率, %n1 杂菌数, 亿/g(

9、mL)|n 有效活菌数, 亿/g(mL)6.3.5 水分的测定将空铝盒置于干燥箱中 105 2 烘干 0.5 h,冷却后称量记录空铝盒的质量。然后称取 2 份平行样品(颗粒型样品,应先粉碎过 1.0 mm 试验筛),每份20 g(精确到 0.01 g),分别加入铝盒中并记录质量。将装好样品的铝盒置于干燥箱中 105 2 下烘干 4 h6 h。取出置于干燥器中冷却 20 min 后进行称量。水分含量按式(4)计算(结果为两次测定的平均值):w = (m1- m2)/( m1- m0) 100 (4)式中:w 样品水分含量, %m0 空铝盒的质量, gm1 样品和铝盒的质量, gm2 烘干后样品和

10、铝盒的质量, g6.3.6 细度的测定6.3.6.1 粉剂样品称取样品 50 g(精确到 0.1 g),放入 300 mL 烧杯中,加 200 mL 水浸泡 10 min30 min 后倒入孔径 0.18 mm 的试验筛中,然后用水冲洗,并用刷子轻轻地刷筛面上的样品,直至筛下流出清水为止。将试验筛连同筛上样品放入干燥箱中,在 105 2 烘干 4 h 6 h。冷却后称量筛上样品质量。样品细度按式(5)计算:s =1- m1/ m0(1- w) 100 (5)式中:s 筛下样品质量分数, %|m0 样品质量, gw 样品含水量, %m1 筛上干样品质量, g6.3.6.2 颗粒样品称取样品 50

11、 g(精确到 0.1 g),将两个不同孔径的试验筛(1.0 mm 和 4.75 mm)摞在一起放在底盘上(大孔径试验筛放在上面)。样品倒入大孔径试验筛内筛样品,然后称小孔径试验筛上的样品质量。颗粒细度按式(6)计算:g = m1 /m0 100 (6)式中:g 样品质量分数, %m1 小孔径试验筛上样品质量,gm0 样 品 质 量, g6.3.7 pH 值的测定打开酸度计电源预热 30 min,用标准溶液校准。pH 值的测定,每个样品重复三次,计算三次的平均值。6.3.7.1 液体样品用量筒取 40mL 样品放入 50 mL 的烧杯中,直接用酸度计测定,仪器读数稳定后记录。6.3.7.2 粉剂

12、样品称取样品 15 g,放入 50 mL 的烧杯中,按 1:2(样品 :无离子水)的比例将无离子水加到烧杯中(如果样品含水量低,可根据基质类型按 1:31:5 的比例加无离子水),搅拌均匀。然后静置 30 min,测样品悬液的 pH 值,仪器读数稳定后记录。6.3.7.3 颗粒样品样品先研碎过 1.0 mm 试验筛,按照 6.3.7.2 的方法测定。|6.3.8 粪大肠菌群数的测定应符合 GB/T 19524.1肥料中粪大肠菌群的测定 的规定。6.3.9 蛔虫卵死亡率的测定应符合 GB/T 19524.2肥料中蛔虫卵死亡率的测定 的规定。6.3.10 纤维素酶活、蛋白酶活的测定应符合附录 D

13、的规定。6.3.11 砷、镉、铅、铬、汞的测定应符合 GB 188772002 中的 5.125.17 的规定。6.3.12 保质期的检验在产品说明书标明的保质期前,按 6.3.16.3.11 方法测定产品相应指标。7 检验规则本标准中产品技术指标的数字修约应符合 GB 8170 的规定;产品质量合格判定应符合 GB 1250 中修约值比较法的规定。7.1 抽样按每一发酵罐菌液(或每批固体发酵)加工成的产品为一批,进行抽样检验,抽样过程严格避免杂菌污染。7.1.1 抽样工具无菌塑料袋(瓶) ,金属勺、抽样器、量筒、牛皮纸袋、胶水、抽样封条及抽样单等。7.1.2 抽样方法和数量一般在成品库中抽样

14、,采用随机法抽取。|抽样以件为单位,小包装以每一包装箱为一件。随机抽取 35 件,每件中随机抽取一袋( 瓶) ;若每袋 (瓶) 包装小于 500 g(mL )的产品,应多抽几件。大包装产品以一袋(桶) 为一件,随机抽取 510 件,在无菌条件下,每件取样 500 g(mL),然后将抽取样品混匀,按四分法分装 3 袋(瓶),每袋(瓶)不少于 500 g(mL)。7.2 检验分类(略)7.3 判定规则7.3.1 具下列任何一条款者,均为合格产品a. 检验结果各项技术指标均符合标准要求的产品;b. 在产品的外观、水分、细度、pH 值等检测项目中,有 1 项不符合要求,而其它各项技术指标符合要求的产品

15、。7.3.2 具下列任何一条款者,均为不合格产品a. 有效活菌数不符合技术指标;b. 霉菌杂菌数不符合技术指标;c. 杂菌率不符合技术指标;d. 粪大肠菌群不符合技术指标;e. 蛔虫卵死亡率不符合技术指标;f. 砷、镉、铅、铬、汞中任一含量不符合技术指标;g. 有机物料腐熟剂产品中所测酶活不符合技术指标;h. 在外观、水分、细度、pH 值等检测项目中,有 2 项(含)以上不符合要求。8 包装、标识、运输和贮存参见 NY 885-2004农用微生物产品标识要求|附 录 A 常用检测培养基 参见 NY/T 1114-2004微生物肥料实验用培养基技术条件附 录 B(资料性附录)常用染色剂B.1 革兰氏染色剂B.1.1 结晶紫染色液(Hucker 氏配方)甲液:结晶紫(Crystal violet) 2.0 g乙醇(95%) 20.0 mL乙液:草酸铵(NH 4)2C2O4H2O 0.8g蒸馏水 80.0 mL甲、乙两液相混,过滤,棕色瓶保存。B.1.2 卢哥(Lugol)氏碘液碘(I 2)片 1.0 g碘化钾(KI) 2.0 g蒸馏水 300 mL先溶碘化钾于少量蒸馏水中,再将碘溶于碘化钾溶液中,可稍加热,最后加足蒸馏水,棕色瓶保存。B.1.3 脱色液 95%的乙醇液。B.1.4 复染液 0.5%的番红水溶液(Safranin O)

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