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1、化学药品中杂质控制及测定方法 Still waters run deep.流静水深流静水深,人静心深人静心深 Where there is life,there is hope。有生命必有希望。有生命必有希望2内容提要内容提要n n一、杂质控制的方法n n二、杂质对照品的使用n n三、药品质量标准中杂质的命名n n四、复方制剂杂质控制3一、杂质控制的方法n n1、杂质的检测方法n n2、杂质限度的确定41、杂质的检测方法、杂质的检测方法n n一般的物理或化学方法、光谱法、生物检定法、一般的物理或化学方法、光谱法、生物检定法、色谱法。色谱法。n n检测方法需要做到专属、灵敏、准确、简捷。检测方法
2、需要做到专属、灵敏、准确、简捷。n n由于各种分析方法均具有一定的局限性，因此在由于各种分析方法均具有一定的局限性，因此在进行杂质分析时，应注意不同原理的分析方法间进行杂质分析时，应注意不同原理的分析方法间的相互验证。的相互验证。n n单一方法不能满足多个杂质的检测时，可采用两单一方法不能满足多个杂质的检测时，可采用两种或两种以上的方法互为补充，控制杂质。种或两种以上的方法互为补充，控制杂质。5HPLC法法n n具有专属、灵敏、准确、简捷优点具有专属、灵敏、准确、简捷优点n n峰面积归一法峰面积归一法 简便、快捷、重现（可产生较大误差）：简便、快捷、重现（可产生较大误差）：全部出峰、完全分离、
3、响应一致；各杂质响应因子不一定相同；全部出峰、完全分离、响应一致；各杂质响应因子不一定相同；杂质量与主成分量不一定在同一线性范围内；仪器对微量杂质杂质量与主成分量不一定在同一线性范围内；仪器对微量杂质和常量主成分的积分精度及准确度不相同等因素；在质量标准和常量主成分的积分精度及准确度不相同等因素；在质量标准中采用有一定的局限性中采用有一定的局限性n n 不加校正因子的主成分自身对照法不加校正因子的主成分自身对照法 可用于未知杂质（有可用于未知杂质（有一定误差）一定误差）n n 加校正因子的主成分自身对照法加校正因子的主成分自身对照法 定量准确（已知杂质，定量准确（已知杂质，定位）定位）n n
4、杂质对照法杂质对照法 定位、定量准确（已知杂质，需用杂质对照定位、定量准确（已知杂质，需用杂质对照品）品）62、杂质限度的确定、杂质限度的确定n n完全除去杂质既不可能也没必要，而是控制在安全、合理的范围内，完全除去杂质既不可能也没必要，而是控制在安全、合理的范围内，这个允许的范围就是杂质限度。这个允许的范围就是杂质限度。n n通过系统、全面的研究，最终确定杂质限度的基本原则是：尽可能通过系统、全面的研究，最终确定杂质限度的基本原则是：尽可能的低，行得通的低。的低，行得通的低。n n考虑的基本因素：杂质的特性（毒性、生物活性）；安全性实验和考虑的基本因素：杂质的特性（毒性、生物活性）；安全性实
5、验和临床研究用样品的杂质情况及其表现；药品本身的稳定性；适当考临床研究用样品的杂质情况及其表现；药品本身的稳定性；适当考虑大生产的可行性及批间的正常波动（虑大生产的可行性及批间的正常波动（GMPGMP控制）；检测方法的重控制）；检测方法的重现性。现性。n n来源于原料药的杂质，如果不是其降解产物，且限度已在原料药标来源于原料药的杂质，如果不是其降解产物，且限度已在原料药标准中控制，则制剂中可不作控制，重点控制降解产物。准中控制，则制剂中可不作控制，重点控制降解产物。n n具体国家标准参见杂质研究的技术指导原则中的规定。（报告限度、具体国家标准参见杂质研究的技术指导原则中的规定。（报告限度、鉴定
6、限度和质控限度）鉴定限度和质控限度）72、杂质限度的确定、杂质限度的确定仿制药仿制药仿制药仿制药n n仿制仿制已有国家标准已有国家标准已有国家标准已有国家标准（仿国外的也一样）（仿国外的也一样）的药品：在进行仿的药品：在进行仿制药品杂质研究时，要对已上市的同品种产品的质量进行制药品杂质研究时，要对已上市的同品种产品的质量进行详细研究（首选原发厂效期内产品），分析其杂质的种类详细研究（首选原发厂效期内产品），分析其杂质的种类与含量，与在研产品进行全面的质量对比。与含量，与在研产品进行全面的质量对比。n n如果杂质谱一致根据已有国家标准制订相应的杂质限度，或适当如果杂质谱一致根据已有国家标准制订相
7、应的杂质限度，或适当提高标准；提高标准；n n如果杂质谱不一致，新杂质的含量高于表中规定的合理限度，或如果杂质谱不一致，新杂质的含量高于表中规定的合理限度，或在研产品的杂质含量高于已上市的同品种产品的杂质实测值在研产品的杂质含量高于已上市的同品种产品的杂质实测值n n应考虑优化产品的处方与制备工艺，将杂质的含量降到规定的限度应考虑优化产品的处方与制备工艺，将杂质的含量降到规定的限度以内，以内，n n不能达到要求，则应做必要的安全性研究。不能达到要求，则应做必要的安全性研究。8杂质研究具有阶段性杂质研究具有阶段性n n杂质研究是药物研究的重要环节，贯穿于整个药物研究的杂质研究是药物研究的重要环节
8、，贯穿于整个药物研究的始终。始终。n n在申报临床研究前，应对已有批次产品的杂质进行比较全面的检在申报临床研究前，应对已有批次产品的杂质进行比较全面的检测，根据安全性研究用样品的杂质含量情况，来证明临床研究用测，根据安全性研究用样品的杂质含量情况，来证明临床研究用药品是安全的。药品是安全的。n n随着研究的深入，可对杂质分析方法做相应的改进。随着研究的深入，可对杂质分析方法做相应的改进。n n创新药物杂质限度的最终确定需要根据临床研究结果综合权衡，创新药物杂质限度的最终确定需要根据临床研究结果综合权衡，申报临床研究时，只能对杂质限度做一初步规定申报临床研究时，只能对杂质限度做一初步规定n n如
9、因生产规模放大产生了新的杂质，或已有杂质含量超出原有限如因生产规模放大产生了新的杂质，或已有杂质含量超出原有限度时，应根据度时，应根据ICHICH中对原料药和制剂的杂质限度规定来判断该杂质中对原料药和制剂的杂质限度规定来判断该杂质含量是否合理，如不合理，应考虑进一步的研究工作。含量是否合理，如不合理，应考虑进一步的研究工作。9杂质控制的方法杂质控制的方法n n重点：n n关注杂质检测方法的选择与验证。关注杂质检测方法的选择与验证。n n注意研究过程中所有批次样品（包括各种生注意研究过程中所有批次样品（包括各种生产规模）中的杂质进行完整的记录，为制订杂产规模）中的杂质进行完整的记录，为制订杂质限
10、度提供重要的依据。质限度提供重要的依据。n n确定杂质限度时，要综合考虑杂质的安全性、确定杂质限度时，要综合考虑杂质的安全性、生产的可行性、合理性与产品的稳定性。确定生产的可行性、合理性与产品的稳定性。确定仿制药品杂质限度时，要注意与已上市产品的仿制药品杂质限度时，要注意与已上市产品的质量对比研究，以充分保证安全性。质量对比研究，以充分保证安全性。10二、杂质对照品的使用二、杂质对照品的使用 n n贯穿研发整个过程，涵盖注册标准、统一标准和药典标准。贯穿研发整个过程，涵盖注册标准、统一标准和药典标准。n n质量标准中是否采用已知杂质对照品应慎重选择，并不是质量标准中是否采用已知杂质对照品应慎重
11、选择，并不是在标准中引入已知杂质对照品就意味着标准质量的提高。在标准中引入已知杂质对照品就意味着标准质量的提高。在国家药品标准中引入杂质对照品应满足下述条件之一。在国家药品标准中引入杂质对照品应满足下述条件之一。n n1 1、色谱系统适用性试验需要，即分离度需要。可弥补只规定理论、色谱系统适用性试验需要，即分离度需要。可弥补只规定理论板数的不足，既可以是已知的板数的不足，既可以是已知的“有关物质有关物质”，也可以是与主成分，也可以是与主成分或或“已知杂质已知杂质”结构相近的指示性物质。结构相近的指示性物质。n n2 2、该杂质与主成分的相对响应因子差异较大（超出、该杂质与主成分的相对响应因子差
12、异较大（超出0.50.52.02.0）时，）时，加校正因子自身对照法怕不够准确反映杂质的真实含量。特别是加校正因子自身对照法怕不够准确反映杂质的真实含量。特别是响应因子较小的杂质，怕低估其杂质含量。响应因子较小的杂质，怕低估其杂质含量。n n3 3、该杂质的毒性较大，需要专门严格控制。、该杂质的毒性较大，需要专门严格控制。n n4 4、杂质定位需要。、杂质定位需要。11三、药品质量标准中杂质的命名三、药品质量标准中杂质的命名 n n1.存在需要：杂质检查HPLC法、TLC法和GC等各种色谱方法，过去采用主成分自身对照法，现在越来越多的标准中采用已知结构的化学。或用于系统适用性试验、或用于杂质定
13、位、或用于外标法测定该杂质的含量。需要对药品标准中涉及到的结构已知的杂质进行命名。12三、药品质量标准中杂质的命名三、药品质量标准中杂质的命名n n2 2、命名原则、命名原则n n通用名称，如果该杂质也是一个药物，可能已有药品通通用名称，如果该杂质也是一个药物，可能已有药品通用名称，应直接采用该药品的通用名称（比如氯乙酰左卡用名称，应直接采用该药品的通用名称（比如氯乙酰左卡尼汀的一个已知杂质为左卡尼汀，在质量标准中该杂质名尼汀的一个已知杂质为左卡尼汀，在质量标准中该杂质名称即为称即为“左卡尼汀左卡尼汀”）n n化学名称，一般情况，杂质没有药品通用名称，但如果化学名称，一般情况，杂质没有药品通用
14、名称，但如果化学名称比较简单，可根据化学名称比较简单，可根据有机化学命名原则有机化学命名原则直接采直接采用化学名称。（如盐酸乙胺丁醇中的杂质（）用化学名称。（如盐酸乙胺丁醇中的杂质（）-2-2-氨基丁氨基丁醇）醇）n n“某某杂质某某杂质A A、某某杂质、某某杂质B”B”的命名方式的命名方式 （如格列本脲的（如格列本脲的两个杂质在质量标准中分别命名为格列本脲杂质两个杂质在质量标准中分别命名为格列本脲杂质A A、格列、格列本脲杂质本脲杂质B B，这种命名方式需要在标准后提供详细结构式，这种命名方式需要在标准后提供详细结构式和化学名称）和化学名称）13三、药品质量标准中杂质的命名三、药品质量标准中
15、杂质的命名n n注意：注意：n n当只有一个已知杂质时，需要特别强调的是当只有一当只有一个已知杂质时，需要特别强调的是当只有一个已知杂质时，仍然应该以个已知杂质时，仍然应该以“某某杂质某某杂质A”A”命名，不能命名，不能只是只是“某某杂质某某杂质”，否则，当将来标准中需要增加已，否则，当将来标准中需要增加已知杂质时，命名会出现困难或混乱知杂质时，命名会出现困难或混乱 。n n“某某（待测药品的活性组分）杂质某某（待测药品的活性组分）杂质*（如（如A A）对照品）对照品格格列本脲杂质列本脲杂质A A”给出杂质对照品的全称，在同一质量标准中给出杂质对照品的全称，在同一质量标准中 再次提到该杂质名称
16、时可简称再次提到该杂质名称时可简称杂质杂质A A。n n某某（待测药品的活性组分）杂质某某（待测药品的活性组分）杂质*（如（如A A）对照品：）对照品：以盐酸比哌立登为例，在其质量标准中，其杂质对照以盐酸比哌立登为例，在其质量标准中，其杂质对照品的名称是品的名称是“比哌立登杂质比哌立登杂质A A对照品，而不是对照品，而不是“盐酸比盐酸比哌立登杂质哌立登杂质A A对照品对照品”。酸基亦然。酸基亦然 。14三、药品质量标准中杂质的命名三、药品质量标准中杂质的命名n n注意：n n如果如果B B品种中采用的化学对照品在品种中采用的化学对照品在A A品种中已经出现，应品种中已经出现，应使用使用A A品
17、种中已经出现的对照品全称，同时，还应在括号品种中已经出现的对照品全称，同时，还应在括号中给出该杂质在中给出该杂质在B B品种中的命名品种中的命名 。如甲氧氯普胺杂质如甲氧氯普胺杂质E E和硫必利和硫必利杂质杂质C C是同一物质，在盐酸硫必利杂质是同一物质，在盐酸硫必利杂质C C检查项下检查项下“取取20.0mg20.0mg甲氧氯普胺杂质甲氧氯普胺杂质E E对照品（硫必利杂质对照品（硫必利杂质C C），用），用溶解溶解”n n如果一个品种项下有多个杂质，而且除了取代基团的差如果一个品种项下有多个杂质，而且除了取代基团的差异外，这些杂质都有共同的母核或化学结构，可以用一异外，这些杂质都有共同的母核
18、或化学结构，可以用一个通用的化学结构表述，取代基用个通用的化学结构表述，取代基用R1R1、R2 R2 表示表示 n n如果该杂质有如果该杂质有CASCAS号的话，可给出号的话，可给出CAS CAS 号。号。15四、复方制剂杂质控制n n目前现有国家质量标准中多数复方制剂没有相应目前现有国家质量标准中多数复方制剂没有相应有关物质控制。或者虽有控制，但没有考虑复方有关物质控制。或者虽有控制，但没有考虑复方制剂的特点，研究思路制剂的特点，研究思路 与单方制剂一般没有明显与单方制剂一般没有明显区别。此外存在方法专属性欠佳，杂质归属控制区别。此外存在方法专属性欠佳，杂质归属控制少，笼统控制为主的现象。少
19、，笼统控制为主的现象。n n 20102010年版药典的起草修订工作过程中注重了杂质年版药典的起草修订工作过程中注重了杂质研究和控制方法的制定。因此今后研制新的复方研究和控制方法的制定。因此今后研制新的复方制剂时必须注重杂质的研究和控制。制剂时必须注重杂质的研究和控制。n n难题：在已公布的国内外杂质研究技术指导原则难题：在已公布的国内外杂质研究技术指导原则中没有关于复方制剂杂质研究的专门说明。中没有关于复方制剂杂质研究的专门说明。16复方制剂杂质控制主要内容复方制剂杂质控制主要内容n n一、复方制剂杂质控制的主要难点 n n二、复方制剂杂质控制的思考 n n三、质量标准中杂质控制的具体方法
20、17一、复方制剂杂质控制的主要难点一、复方制剂杂质控制的主要难点n n1、相对复杂。n n2、准确定量困难。建立简单有效的分析方法，同时分离、检出所有的杂质并准确定量更加困难。n n3、更要使用杂质对照品。由于归属和定量方面的复杂性，不可避免的要用到较多的杂质对照品。18二、复方制剂杂质控制的思考二、复方制剂杂质控制的思考 n n复方制剂杂质研究与单方制剂一样，它包括选择合适的分析方法、杂质的定性和定量、方法验证并综合药学、毒理及临床研究的结果确定杂质的合理限度。n n复方制剂进行杂质研究，可以根据制剂的实际情况，确定首要研究对象，然后采用适当的方法，分析确定相应杂质的来源，对杂质进行定性研究
21、和归属确定。19复方制剂杂质控制的思考内容复方制剂杂质控制的思考内容n n（一）首要研究对象的确定n n（二）复方制剂杂质来源归属研究20（一）首要研究对象的确定（一）首要研究对象的确定n n1 1、复方制剂中各药物稳定性均较好，但含量相差较大，、复方制剂中各药物稳定性均较好，但含量相差较大，可主要针对含量较大的药物进行杂质研究可主要针对含量较大的药物进行杂质研究（不推荐采用）（不推荐采用）。采用该方法研究应有明确文献支持小组分不会产生。采用该方法研究应有明确文献支持小组分不会产生毒毒 性的杂质，如产生毒性杂质，应对该毒性杂质进行性的杂质，如产生毒性杂质，应对该毒性杂质进行定性研定性研 究并制
22、定合理的限度予以控制。究并制定合理的限度予以控制。n n2 2、复方制剂中各药物结构差异可能较大，其稳定性亦、复方制剂中各药物结构差异可能较大，其稳定性亦不尽相同，稳定性相差较大时，在经过严格的实验验不尽相同，稳定性相差较大时，在经过严格的实验验证或有明确的文献资料支持下，可主要针对不稳定药证或有明确的文献资料支持下，可主要针对不稳定药物的杂质进行研究。物的杂质进行研究。n n3 3、复方制剂中各药物的稳定性均较差，或者各药物含、复方制剂中各药物的稳定性均较差，或者各药物含量相近、稳定性亦相近的复方制剂，建议均进行相应量相近、稳定性亦相近的复方制剂，建议均进行相应杂质的研究。杂质的研究。21（
23、一）首要研究对象的确定（一）首要研究对象的确定n n4 4、对组分较多的复方制剂，如复方氨基酸，多种维生素、对组分较多的复方制剂，如复方氨基酸，多种维生素等复方制剂，应详细分析各组分的稳定性情况，有针对等复方制剂，应详细分析各组分的稳定性情况，有针对性地进行杂质研究。性地进行杂质研究。n n5 5、其他情况，如对双层或多层片但不同片层仅含单一组、其他情况，如对双层或多层片但不同片层仅含单一组分的复方片剂，或多种色泽分的复方片剂，或多种色泽/形状颗粒且不同色泽形状颗粒且不同色泽/形状形状颗粒仅含单一组分的胶囊颗粒仅含单一组分的胶囊/颗粒剂等固体复方制剂，如能颗粒剂等固体复方制剂，如能采用物理手段
24、采用物理手段 （如小心切开、分拣等）将不同药物组分（如小心切开、分拣等）将不同药物组分简单地分离，可参照各药物单方制剂的杂质检查方法分简单地分离，可参照各药物单方制剂的杂质检查方法分别进行研究。这些特殊剂型采用该方法时应注意药物之别进行研究。这些特殊剂型采用该方法时应注意药物之间有无迁移现象。间有无迁移现象。22（二）（二）复方制剂杂质来源归属研究复方制剂杂质来源归属研究 n n复方制剂的杂质研究，肯定是在对相应原料药及各自单复方制剂的杂质研究，肯定是在对相应原料药及各自单方制剂研究的已有基础上的，因此，自然要借鉴已有的方制剂研究的已有基础上的，因此，自然要借鉴已有的杂质研究成果。如果已有的杂
25、质研究结果不充分，那么杂质研究成果。如果已有的杂质研究结果不充分，那么首先应研究其各自杂质的来源和特点。首先应研究其各自杂质的来源和特点。n n复方中杂质结构差异较大时，应注意不同原理的分析方复方中杂质结构差异较大时，应注意不同原理的分析方法间的相互补充与验证法间的相互补充与验证 由于复方制剂杂质数目多及来源的多样性，由于复方制剂杂质数目多及来源的多样性，HPLCHPLC法应该是最常用或者说是首选的杂质检查方法。在采用法应该是最常用或者说是首选的杂质检查方法。在采用紫外检测器时，使用二极管阵列检测器有着重要的意义紫外检测器时，使用二极管阵列检测器有着重要的意义，通过该检测器可获得各杂质的紫外光
26、谱信息，有助于，通过该检测器可获得各杂质的紫外光谱信息，有助于判断杂质检测波长选择的合理性，避免杂质的漏检，同判断杂质检测波长选择的合理性，避免杂质的漏检，同时还可以进行峰纯度的检查。时还可以进行峰纯度的检查。23（二）（二）复方制剂杂质来源归属研究复方制剂杂质来源归属研究n n建立了初步的色谱方法，对复方制剂中各药物、杂质、辅建立了初步的色谱方法，对复方制剂中各药物、杂质、辅料能够有效分离检出之后，可采用以下方法对杂质进行分料能够有效分离检出之后，可采用以下方法对杂质进行分步归属研究：步归属研究：n n1 1、确定各自原料带入杂质在复方制剂测定方法中的归属，方法为、确定各自原料带入杂质在复方
27、制剂测定方法中的归属，方法为分别测定各原料药、原料药按处方比例混合物、辅料、原辅料混分别测定各原料药、原料药按处方比例混合物、辅料、原辅料混合物、制剂样品在确定的杂质检查色谱条件下的合物、制剂样品在确定的杂质检查色谱条件下的HPLCHPLC图谱，对上图谱，对上述图谱进行对比研究，以确定制剂色谱图中辅料峰、由各原料药述图谱进行对比研究，以确定制剂色谱图中辅料峰、由各原料药引入的杂质峰。另外，可通过比较各原料药的引入的杂质峰。另外，可通过比较各原料药的HPLCHPLC图谱与原料药图谱与原料药混合物的混合物的HPLCHPLC图谱初步确定原料药之间是否有相互作用；通过比图谱初步确定原料药之间是否有相互
28、作用；通过比较原料药混合物的较原料药混合物的HPLCHPLC图谱、辅料的图谱、辅料的HPLCHPLC图谱以及原辅料混合图谱以及原辅料混合物的物的HPLCHPLC图谱，可初步确定原辅料之间是否有相互作用；通过比图谱，可初步确定原辅料之间是否有相互作用；通过比较原辅料混合物的较原辅料混合物的HPLCHPLC图谱与制剂的图谱与制剂的HPLCHPLC图谱，可初步确定制图谱，可初步确定制剂过程是否引起主药的降解和杂质的增加。剂过程是否引起主药的降解和杂质的增加。n n（电子刊物，化学药物复方制剂杂质来源归属研究的基本思路，张玉（电子刊物，化学药物复方制剂杂质来源归属研究的基本思路，张玉琥）琥）24（二）
29、（二）复方制剂杂质来源归属研究复方制剂杂质来源归属研究n n2 2、确定制剂工艺中新增杂质的归属，确定是辅料峰还、确定制剂工艺中新增杂质的归属，确定是辅料峰还是制剂过程的分解产物，方法为对各原料药、原料药是制剂过程的分解产物，方法为对各原料药、原料药按处方比例混合物、辅料、原辅料混合物、制剂分别按处方比例混合物、辅料、原辅料混合物、制剂分别进行光、热、湿影响因素试验，测定试验前后样品的进行光、热、湿影响因素试验，测定试验前后样品的HPLCHPLC图谱并进行比较分析，可明确制剂中各药物在强图谱并进行比较分析，可明确制剂中各药物在强光、高温、高湿条件下的主要降解产物，对复方制剂光、高温、高湿条件下
30、的主要降解产物，对复方制剂中的降解产物进行归属，并可通过上述比较研究，基中的降解产物进行归属，并可通过上述比较研究，基本确定药物与药物之间、药物与辅料之间在剧烈条件本确定药物与药物之间、药物与辅料之间在剧烈条件下是否存在相互作用，是否产生新的杂质。下是否存在相互作用，是否产生新的杂质。25（二）（二）复方制剂杂质来源归属研究复方制剂杂质来源归属研究n n3 3、贮藏期（或加速实验）新增杂质的归属。方法为对、贮藏期（或加速实验）新增杂质的归属。方法为对各原料药、原料药混合物、辅料、原辅料混合物、制各原料药、原料药混合物、辅料、原辅料混合物、制剂分别进行稳定性加速试验，测定不同时间样品的剂分别进行
31、稳定性加速试验，测定不同时间样品的HPLCHPLC图谱并进行比较分析，并与制剂长期留样试验样图谱并进行比较分析，并与制剂长期留样试验样品的测定结果进行比较。通过这些研究工作，可进一品的测定结果进行比较。通过这些研究工作，可进一步明确复方制剂中各杂质的归属，明确各药物在加速步明确复方制剂中各杂质的归属，明确各药物在加速试验条件下及一般贮藏条件下的主要降解产物，为确试验条件下及一般贮藏条件下的主要降解产物，为确定贮藏条件及质量控制重点建立基础。定贮藏条件及质量控制重点建立基础。n n4 4、多种分析方法（几种色谱方式）、多种检测手段、多种分析方法（几种色谱方式）、多种检测手段（包括多种检测器、多波
32、长），特别是（包括多种检测器、多波长），特别是HPLC-MSHPLC-MS联用联用技术在杂质研究和归属方面以及色谱峰中有无叠加方技术在杂质研究和归属方面以及色谱峰中有无叠加方面能起重要作用。面能起重要作用。26三、质量标准中杂质控制的具体方三、质量标准中杂质控制的具体方法法 n n对复方中杂质的充分、全面研究，最终要科学、合理地体现到质量控制中，应落实到质量标准中，方法建立包括：n n（一）分离和检测方法的确定（一）分离和检测方法的确定 n n（二）杂质定量方法（二）杂质定量方法 n n（三）方法学验证（三）方法学验证 n n（四）杂质限度的确定（四）杂质限度的确定 27（一）分离和检测方法的
33、确定（一）分离和检测方法的确定 n n质量标准中，今后采用的杂质检测方法主要为：n n高效液相色谱法。高效液相色谱法。国家局现在的审评标准是有单位采用梯国家局现在的审评标准是有单位采用梯度洗脱检测的，不再批准采用等度方法检测的申请度洗脱检测的，不再批准采用等度方法检测的申请。n n薄层色谱法。薄层色谱法。HPLCHPLC法不是万能的，欧洲药典、美国药典或法不是万能的，欧洲药典、美国药典或者日本药典如采用薄层色谱法的，不建议更改，并要作充分的对者日本药典如采用薄层色谱法的，不建议更改，并要作充分的对比试验。比试验。n n气相色谱法。气相色谱法。n n毛细管电泳法毛细管电泳法 。28（二）杂质定量
34、方法（二）杂质定量方法 n n以以HPLCHPLC法为例，其他色谱方法也基本相同。法为例，其他色谱方法也基本相同。n n与单方制剂的有关物质一样，一般采用峰面积法，具体定量方法与单方制剂的有关物质一样，一般采用峰面积法，具体定量方法有有外标法（杂质对照品法）、外标法（杂质对照品法）、加校正因子的主成分自身对照加校正因子的主成分自身对照法、法、不加校正因子的主成分自身对照法。不加校正因子的主成分自身对照法。n n具体可以按如下层次分步考虑：具体可以按如下层次分步考虑：n n（1 1）复方制剂中的已知毒性杂质和易于获得对照品的杂质适于采用）复方制剂中的已知毒性杂质和易于获得对照品的杂质适于采用杂质
35、对照品法。杂质对照品法。n n（2 2）若采用加或不加校正因子的某主成分自身对照法，应考察不同）若采用加或不加校正因子的某主成分自身对照法，应考察不同色谱柱、色谱条件的一定变化对相对保留时间的波动，一般只有色谱色谱柱、色谱条件的一定变化对相对保留时间的波动，一般只有色谱条件耐用并杂质个数较少时，方可适用。条件耐用并杂质个数较少时，方可适用。n n（3 3）采用一个系统适用性溶液或混合杂质对照品溶液，外加对照图）采用一个系统适用性溶液或混合杂质对照品溶液，外加对照图谱，标明杂质位置，然后采用加或不加校正因子的相应主成分自身对谱，标明杂质位置，然后采用加或不加校正因子的相应主成分自身对照法。照法。
36、29（二）杂质定量方法（二）杂质定量方法 n n（4 4）对于未能明确指定归属的，同时量又较少的杂质，建议）对于未能明确指定归属的，同时量又较少的杂质，建议与含量较少（或者响应较弱）的主成分进行对照。与含量较少（或者响应较弱）的主成分进行对照。n n（5 5）药物含量（或响应）和所有杂质响应均接近时，杂质定）药物含量（或响应）和所有杂质响应均接近时，杂质定量可与复方制剂中药物峰面积之和的平均值比较。量可与复方制剂中药物峰面积之和的平均值比较。n n （6 6）药物含量相近、杂质响应相差较大，或药物含量相差较）药物含量相近、杂质响应相差较大，或药物含量相差较大、杂质响应相差较小，或药物含量和杂质
37、响应均相差较大，大、杂质响应相差较小，或药物含量和杂质响应均相差较大，又没有建立成上述的质控方法时，或无法建立单一色谱方法，又没有建立成上述的质控方法时，或无法建立单一色谱方法，建议选用两种色谱条件分别针对一个药物的杂质进行检查，此建议选用两种色谱条件分别针对一个药物的杂质进行检查，此时杂质可与相应的药物（杂质来源的药物）峰面积进行比较。时杂质可与相应的药物（杂质来源的药物）峰面积进行比较。30（二）杂质定量方法（二）杂质定量方法n n需要强调的是：n n由原料药制备过程引入的杂质（如残留的反应由原料药制备过程引入的杂质（如残留的反应原料、中间体、副反应产物等）是制剂中杂质原料、中间体、副反应
38、产物等）是制剂中杂质的来源之一。如在复方的杂质控制中进行了归的来源之一。如在复方的杂质控制中进行了归属，若在制剂贮藏期间未见明显增加，且这部属，若在制剂贮藏期间未见明显增加，且这部分杂质在原料药质量标准中已有相应的控制方分杂质在原料药质量标准中已有相应的控制方法，可以不在制剂质量标准中控制。法，可以不在制剂质量标准中控制。31（三）方法学验证（三）方法学验证 n n杂质检测方法的验证重点在于专属性和灵敏度的验证。n n复方制剂杂质检查方法专属性应在单方制剂杂复方制剂杂质检查方法专属性应在单方制剂杂质检查方法专属性基础上，作进一步要求。重质检查方法专属性基础上，作进一步要求。重点考察各组杂质间、
39、杂质与溶剂、辅料、各药点考察各组杂质间、杂质与溶剂、辅料、各药物成分间的有效分离。物成分间的有效分离。n n鉴于复方制剂杂质的复杂性，可以采用不同的鉴于复方制剂杂质的复杂性，可以采用不同的方法对复方制剂中的杂质进行对比研究，以验方法对复方制剂中的杂质进行对比研究，以验证复方制剂中杂质已被有效检测证复方制剂中杂质已被有效检测 。32（四）杂质限度的确定（四）杂质限度的确定 n n对于已上市品种，或者说已有国家标准的品种，可参考各对于已上市品种，或者说已有国家标准的品种，可参考各组分相同给药途径单方制剂的杂质限度作综合考虑，即在组分相同给药途径单方制剂的杂质限度作综合考虑，即在明确杂质归属后，杂质
40、限度可参考相同给药途径单方制剂明确杂质归属后，杂质限度可参考相同给药途径单方制剂的杂质限度分别确定。的杂质限度分别确定。由于工艺或处方的不同导致与已上市相同给药途径单由于工艺或处方的不同导致与已上市相同给药途径单方制剂的杂质种类不同，或杂质含量明显高于已上市的相方制剂的杂质种类不同，或杂质含量明显高于已上市的相同给药途径单方制剂的杂质实测值，为了保证产品的安全同给药途径单方制剂的杂质实测值，为了保证产品的安全性，应考虑优化产品的处方与制备工艺，将杂质的含量降性，应考虑优化产品的处方与制备工艺，将杂质的含量降到规定的质控限度以内。如仍不能达到要求，则必须对此到规定的质控限度以内。如仍不能达到要求，则必须对此产品作再评价，考虑处方的合理性，或做必要的安全性研产品作再评价，考虑处方的合理性，或做必要的安全性研究究