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1、制制药企企业微生物知微生物知识及无菌制及无菌制剂微生微生物物污染染简介v生物科学专业生物科学专业v生物化学与分子生物学生物化学与分子生物学微生物与制药行业息息相关v药品生产药品生产v药品检验药品检验v微生物混入药品中危害人体健康微生物混入药品中危害人体健康v速冻食品中检出金黄色葡萄球菌速冻食品中检出金黄色葡萄球菌新国标新国标v乳制品中黄曲霉素超标乳制品中黄曲霉素超标 目 录v第一章第一章 微生物总论微生物总论v第二章第二章 微生物的类群微生物的类群v第三章第三章 消毒与灭菌消毒与灭菌v第四章第四章 微生物的污染与控制微生物的污染与控制第一章 微生物总论v什么是什么是微生物微生物？v人类是如何人
2、类是如何认识微生物认识微生物的？的？v微生物有什么微生物有什么特点特点？v微生物都微生物都分布分布在哪里？在哪里？v微生物是如何微生物是如何代谢代谢的？的？日常接触到的微生物v日常接触到的微生物日常接触到的微生物食物发霉食物发霉霉菌霉菌肥面（老面或面肥）肥面（老面或面肥）酵母菌酵母菌酸奶酸奶乳酸菌、双歧链杆菌等乳酸菌、双歧链杆菌等流感流感病毒病毒v微生物（微生物（microorganismmicroorganism）是指）是指一些一些个体微小、结构简单个体微小、结构简单、肉眼肉眼看不见看不见只有借助显微镜才能观察只有借助显微镜才能观察到的生物总称到的生物总称。人类对微生物世界的认识过程vv感性
3、认识阶段（史前时期）感性认识阶段（史前时期）vv形态学发展阶段（初创时期）形态学发展阶段（初创时期）vv生理学发展阶段（奠基时期）生理学发展阶段（奠基时期）vv分子生物学发展阶段（成熟时期）分子生物学发展阶段（成熟时期）1.感性认识阶段（史前期）细菌冶金细菌冶金 沤粪肥田沤粪肥田 制曲酿酒制曲酿酒 提倡轮作提倡轮作 种痘防花种痘防花 麦曲治泻麦曲治泻2.形态学发展阶段（初创期）列文虎克发现微生物，为微生物学的发列文虎克发现微生物，为微生物学的发展做出了极大的贡献。展做出了极大的贡献。3.生理学发展阶段（奠基期）v本期特点本期特点建立了建立了研究微生物所必要的方法和技术研究微生物所必要的方法和技
4、术 开创了寻找开创了寻找病原微生物病原微生物的的“黄金时期黄金时期”从形态学推进到从形态学推进到生理学生理学成为成为独立的学科形式独立的学科形式巴斯德v彻底否定了自然发彻底否定了自然发生说生说v证实发酵由微生物证实发酵由微生物引起引起v免疫学免疫学预防接种预防接种v发明发明巴氏消毒法巴氏消毒法代表人物和重要事件巴氏消毒v巴氏灭菌法，亦称低温消毒法，是一种利用较低的温度巴氏灭菌法，亦称低温消毒法，是一种利用较低的温度既可杀死病菌又能保持物品中营养物质风味不变的消毒既可杀死病菌又能保持物品中营养物质风味不变的消毒法。法。v现用的巴氏杀菌方法一般有两种：现用的巴氏杀菌方法一般有两种：一、加热到一、加
5、热到62626565之间，之间，3030分钟；分钟；二、加热到二、加热到75759090摄氏度以上，至少保持摄氏度以上，至少保持1515秒钟。秒钟。v巴氏消毒法所用温度低，故达不到灭菌的程度。但是它巴氏消毒法所用温度低，故达不到灭菌的程度。但是它可以可以使细菌总数减少使细菌总数减少90909595，故能起到减少疾病传故能起到减少疾病传播，延长食品的使用时间的作用。播，延长食品的使用时间的作用。科赫v建立建立微生物学研微生物学研究基本技术究基本技术v证实了疾病的证实了疾病的病病原菌学说原菌学说v提出提出科赫准则科赫准则4.分子生物学发展阶段（成熟期）(沃森),(克里克克里克)发现DNA双螺旋模型
6、 微生物分类：三型八类微生物分类：三型八类：原核细胞型微生物原核细胞型微生物细胞核的分化细胞核的分化较低，仅有原始核，无核膜、核仁。较低，仅有原始核，无核膜、核仁。细胞器很不完善。细胞器很不完善。DNADNA和和RNARNA同时存同时存在。这类微生物众多，有细菌、放线在。这类微生物众多，有细菌、放线菌、支原体、衣原体、立克次体、螺菌、支原体、衣原体、立克次体、螺旋体。旋体。微生物分类：三型八类微生物分类：三型八类：v非细胞型微生物非细胞型微生物是最小的一类微生是最小的一类微生物。无典型的细胞结构，只能在活细胞物。无典型的细胞结构，只能在活细胞内生长繁殖。核酸类型为内生长繁殖。核酸类型为DNAD
7、NA或或RNARNA。病毒属之。病毒属之。微生物分类：三型八类微生物分类：三型八类：v真核细胞型微生物真核细胞型微生物细胞核分化程度细胞核分化程度高，有核膜和核仁，细胞器完整。如真高，有核膜和核仁，细胞器完整。如真菌。菌。大肠杆菌放线菌支原体扫描电镜图片支原体支原体（mycoplasma）以前被认为是最小的能独立存活的原核生物，以前也被认为是地球上迄今为止被发现的最小的细胞生物。全世界90%的猪体内寄生着支原体。酵母菌青霉是种真菌，属于子囊菌。有的能产生青霉素，救了无数人的命。产生无性孢子。爱滋病病毒微生物五大共性微生物五大共性v体积小，面积大；体积小，面积大；v吸收多，转化快；吸收多，转化快
8、；v生长旺，繁殖快；生长旺，繁殖快；v适应强，易变异；适应强，易变异；v分布广，种类多。分布广，种类多。体积小，面积大v微生物大小的单位是微生物大小的单位是mm （1m1m10106 6mm）或）或nmnm（1m1m10109 9nmnm）。）。v物体的表面积和体积之比称为物体的表面积和体积之比称为比表面积比表面积。把。把一定体积的物体分割得越小，它们的总表面一定体积的物体分割得越小，它们的总表面积就越大。如果把人的比表面积值定为积就越大。如果把人的比表面积值定为1 1，则，则大肠杆菌的比表面积值竟高达大肠杆菌的比表面积值竟高达3030万！万！吸收多，转化快v由于微生物的比表面积大，这非常有利
9、于微由于微生物的比表面积大，这非常有利于微生物通过体表吸收营养和排泄废物，就使它生物通过体表吸收营养和排泄废物，就使它们的们的“胃口胃口”十分庞大。十分庞大。v如大肠杆菌在合适条件下，每小时可以消耗如大肠杆菌在合适条件下，每小时可以消耗相当于自身重量相当于自身重量20002000倍的糖，而人要完成这倍的糖，而人要完成这样一个规模则需要样一个规模则需要4040年之久。年之久。生长旺，繁殖快v微生物以惊人的速度“生儿育女”。适应强，易变异v微生物对环境条件尤其是恶劣的微生物对环境条件尤其是恶劣的“极端极端环境环境”具有惊人的适应力，这是高等生具有惊人的适应力，这是高等生物所无法比拟的。物所无法比拟
10、的。v微生物个体微小，与外界环境的接触面微生物个体微小，与外界环境的接触面积大，容易受到环境条件的影响而发生积大，容易受到环境条件的影响而发生性状变化（变异）。性状变化（变异）。分布广，种类多v微生物在地球上几乎无处不有，无孔不入微生物在地球上几乎无处不有，无孔不入,人人类生活在微生物的汪洋大海之中，但常常是类生活在微生物的汪洋大海之中，但常常是“深在菌中不知菌深在菌中不知菌”。v微生物种类繁多。迄今为止，我们所知道的微生物种类繁多。迄今为止，我们所知道的微生物约有微生物约有1010万种，有人估计目前已知的种万种，有人估计目前已知的种只占地球上实际存在的微生物总数的只占地球上实际存在的微生物总
11、数的20%20%，微，微生物很可能是地球上物种最多的一类。生物很可能是地球上物种最多的一类。微生物的“生物界之最”个体最小个体最小 数量最多数量最多 分布最广分布最广形态最简形态最简 变异最易变异最易 起源最早起源最早胃口最大胃口最大 抗性最强抗性最强 发现最晚发现最晚食谱最广食谱最广 休眠最长休眠最长 界级最宽界级最宽繁殖最快繁殖最快 种类最多种类最多微生物的营养要求v微生物生长繁殖所需的营养物质主要有微生物生长繁殖所需的营养物质主要有水、水、碳源、氮源、无机盐和生长因子等。碳源、氮源、无机盐和生长因子等。水：水：水是各种生物细胞必需的。水是良好的水是各种生物细胞必需的。水是良好的溶剂，微生
12、物的新陈代谢过程中的一切生化反溶剂，微生物的新陈代谢过程中的一切生化反应都离不开水的作用。应都离不开水的作用。碳源碳源：碳源是合成菌体成分的原料，也是微：碳源是合成菌体成分的原料，也是微生物获取能量的主要来源。生物获取能量的主要来源。v氮源：氮源：氮源主要是供给合成菌体结构的原料。氮源主要是供给合成菌体结构的原料。v无机盐类：无机盐类：无机盐主要可为微生物提供除碳、无机盐主要可为微生物提供除碳、氮以外的各种重要元素。微生物需要的无机盐氮以外的各种重要元素。微生物需要的无机盐类很多，主要有类很多，主要有P P、S S、K K、NaNa、CaCa、MgMg、FeFe等，等，其主要功能为构成菌体成分
13、；调节渗透压；作其主要功能为构成菌体成分；调节渗透压；作为某些酶的成分，并能激活酶的活性等。为某些酶的成分，并能激活酶的活性等。v生长因子：生长因子：有些微生物虽然供给它适合的碳源有些微生物虽然供给它适合的碳源氮源和无机盐类，仍不能生长，还要供给一定氮源和无机盐类，仍不能生长，还要供给一定量的所谓量的所谓“生长因子生长因子”。其种类很多，主要是。其种类很多，主要是B B族维生素的化合物等。生长因子可以从酵母族维生素的化合物等。生长因子可以从酵母浸出液、血液或血清中获得。浸出液、血液或血清中获得。微生物的生长和繁殖微生物的生长和繁殖细菌的生长曲线 (.延迟期，.对数期，.稳定期，.衰亡期)微生物
14、的生态分布微生物的生态分布v微生物由于结构简单、繁殖快等特点，微生物由于结构简单、繁殖快等特点，因此，它们在地球上分布远比动植物要因此，它们在地球上分布远比动植物要广泛得多。广泛得多。v土土壤壤：土土壤壤是是微微生生物物生生活活的的最最适适环环境境，在在土土壤壤中中分分布着形形色色的微生物类群。土壤中细菌占大多数。布着形形色色的微生物类群。土壤中细菌占大多数。v水水：水水具具有有微微生生物物生生命命活活动动适适宜宜的的温温度度、PHPH、氧氧气气等等。因因此此，水水中中生生长长着着众众多多的的微微生生物物类类群群，90%90%的的微微生生物物为为革革兰兰氏氏阴阴性性菌菌，主主要要有有弧弧菌菌、
15、假假单单胞胞菌菌、黄杆菌等。黄杆菌等。v空气：空气：空气中的微生物主要来源于带有微生物菌体空气中的微生物主要来源于带有微生物菌体及孢子的灰尘。但空气本身缺乏微生物生活所必需及孢子的灰尘。但空气本身缺乏微生物生活所必需的营养物，日光对微生物也具有很强的杀菌作用，的营养物，日光对微生物也具有很强的杀菌作用，另外空气一般是干燥的，因此空气不是微生物生活另外空气一般是干燥的，因此空气不是微生物生活的良好环境。的良好环境。正常人体微生物的分布正常人体微生物的分布 部位部位 主主 要要 微微 生生 物物 的的 种种 类类口腔口腔 白色葡萄球菌、绿色链球菌、类白喉杆菌、梭形杆菌、螺旋白色葡萄球菌、绿色链球菌
16、、类白喉杆菌、梭形杆菌、螺旋体、真菌体、真菌胃胃 一般无菌一般无菌肠肠 大肠杆菌、产气杆菌、变形杆菌、葡萄球菌、粪链球菌、产大肠杆菌、产气杆菌、变形杆菌、葡萄球菌、粪链球菌、产气荚膜杆菌、破伤风杆菌、真菌、腺病毒等气荚膜杆菌、破伤风杆菌、真菌、腺病毒等鼻咽腔鼻咽腔 葡萄球菌、绿色链球菌、类白喉杆菌、卡答儿球菌、绿浓葡萄球菌、绿色链球菌、类白喉杆菌、卡答儿球菌、绿浓杆菌、大肠杆菌、变形杆菌、副大肠杆菌、变形杆菌、腺杆菌、大肠杆菌、变形杆菌、副大肠杆菌、变形杆菌、腺病毒病毒皮肤皮肤 葡萄球菌葡萄球菌 白色葡萄球菌、类白喉杆菌、大肠杆菌、变形杆白色葡萄球菌、类白喉杆菌、大肠杆菌、变形杆菌、真菌菌、真
17、菌外耳道外耳道 葡萄球菌、类白喉杆菌、绿浓杆菌、非病原性抗酸菌葡萄球菌、类白喉杆菌、绿浓杆菌、非病原性抗酸菌第一章 小结v微生物定义：微生物定义：微生物是指一些个体微小、结构简单、肉眼看微生物是指一些个体微小、结构简单、肉眼看不见只有借助显微镜才能观察到的生物总称不见只有借助显微镜才能观察到的生物总称。v人类对微生物认识四个阶段：感性认识阶段、形态学发展阶人类对微生物认识四个阶段：感性认识阶段、形态学发展阶段、生理学发展阶段、分子生物学发展阶段。段、生理学发展阶段、分子生物学发展阶段。v微生物分为原核细胞型、真核细胞型和非细胞型微生物。微生物分为原核细胞型、真核细胞型和非细胞型微生物。v微生物
18、的五大共性是：体积小，面积大；吸收多，转化快；微生物的五大共性是：体积小，面积大；吸收多，转化快；生长旺，繁殖快；适应强，易变异；分布广，种类多。生长旺，繁殖快；适应强，易变异；分布广，种类多。v微生物生长繁殖所需的营养物质主要有水、碳源、氮源、无微生物生长繁殖所需的营养物质主要有水、碳源、氮源、无机盐和生长因子等。机盐和生长因子等。v细菌生长的四个时期是：延迟期、对数期、稳定期、衰亡期。细菌生长的四个时期是：延迟期、对数期、稳定期、衰亡期。第二章微生物的类群v微生物都有哪些类型？v它们有着什么样的结构？v每种结构有什么样的作用？第一节细菌第一节细菌 细菌是一类细菌是一类细胞细而短、结构简单、
19、细细胞细而短、结构简单、细胞壁坚韧胞壁坚韧，以，以二等分裂方式繁殖二等分裂方式繁殖的的原核原核微生物，分布广泛。微生物，分布广泛。光学性质光学性质细菌为半透明体。细菌为半透明体。表面积表面积细菌体积微小，相对表面积大。细菌体积微小，相对表面积大。带电现象带电现象均带负电。其带电现象与染色反应、均带负电。其带电现象与染色反应、凝集反应、抑菌和杀菌作用等密切相关。凝集反应、抑菌和杀菌作用等密切相关。半透性半透性细菌的细胞壁和细胞膜都有半透性。细菌的细胞壁和细胞膜都有半透性。渗透压渗透压菌体内为高渗透压。菌体内为高渗透压。细菌的特点细菌的特点一、细菌的形态与结构v观察细菌常用光学显微镜，其大小用测微
20、观察细菌常用光学显微镜，其大小用测微尺在显微镜下进行测量，以尺在显微镜下进行测量，以微米微米(m)m)为单为单位。位。v细菌按其外形，主要有细菌按其外形，主要有球菌杆菌螺形菌链球菌链球菌球菌葡萄球菌葡萄球菌球菌四联球菌四联球菌球菌八叠球菌八叠球菌球菌杆菌不同杆菌的大小、长短、粗细很不一致。不同杆菌的大小、长短、粗细很不一致。炭疽芽胞杆菌 3-10 m大中大肠埃希菌 2-3 m杆菌的形态多样杆菌的形态多样分枝杆菌分枝杆菌双歧杆菌双歧杆菌杆菌螺形菌弧菌弧菌螺菌螺菌螺杆菌螺杆菌细菌的结构基本结构细胞壁、细胞膜、细胞质、核质特殊结构荚膜、鞭毛、菌毛、芽胞基本结构：基本结构：细胞壁、细胞膜、细胞质、细胞
21、核特殊结构：特殊结构：荚膜、鞭毛、菌毛、芽胞细菌的结构革兰阳性菌革兰阳性菌革兰阴性菌革兰阴性菌革兰染色革兰染色法：革兰染色法：涂片 风干 固定 结晶紫 碘液 95%乙醇 蕃红1min1min脱色革兰氏染色意义v鉴别细菌鉴别细菌 v选择药物选择药物 v与致病性有关与致病性有关革兰氏阳性菌能产生外毒素，革兰氏阴性菌能产革兰氏阳性菌能产生外毒素，革兰氏阴性菌能产生内毒素，两者的致病作用不同。生内毒素，两者的致病作用不同。细菌荚膜v抗吞噬作用抗吞噬作用v黏附作用黏附作用v抗有害物质的损伤作用抗有害物质的损伤作用v抗干燥作用抗干燥作用v当缺乏营养时，荚膜可被利用作碳源和能源，当缺乏营养时，荚膜可被利用作
22、碳源和能源，有的荚膜还可作氮源。有的荚膜还可作氮源。芽孢v某些细菌到一定的发育阶段或当环境条件不适于细菌繁殖某些细菌到一定的发育阶段或当环境条件不适于细菌繁殖时，会在细胞内形成一个圆形或椭圆形的，时，会在细胞内形成一个圆形或椭圆形的，对不良环境对不良环境条件具有高度抵抗力的休眠体，条件具有高度抵抗力的休眠体，叫做芽孢叫做芽孢.v自然界中抗热性最强的自然界中抗热性最强的嗜热脂肪芽孢杆菌嗜热脂肪芽孢杆菌的芽孢需要在的芽孢需要在121121度下度下1212分钟分钟才能杀死。才能杀死。v因此，在日常的消毒灭菌中，均选择芽胞菌作为生物指示因此，在日常的消毒灭菌中，均选择芽胞菌作为生物指示剂。剂。辐照灭菌
23、中，选择短小杆菌芽胞；辐照灭菌中，选择短小杆菌芽胞；热力灭菌中，选择嗜热脂肪杆菌芽胞；热力灭菌中，选择嗜热脂肪杆菌芽胞；环氧乙烷消毒灭菌，选择枯草杆菌黑色变种芽胞。环氧乙烷消毒灭菌，选择枯草杆菌黑色变种芽胞。蜡状芽孢杆菌芽孢细菌内毒素v内毒素：细胞壁外层，属于细胞壁的组成部分（脂质A）一般与细胞结合在一起不分泌到环境中，只有当细菌溶解（裂解）后才释放出来，故称内毒素。v少量内毒素（0.001g）入血即可引起发热反应。内毒素被吞噬细胞吞饮后，细胞释放出内源性致热原，经血流到达下丘脑，体温调节中枢引起发热。v作用特点：没有组织器官的选择性v 肌体发热，腹泻，出血性休克或其他组织损伤v 不能经甲醛脱
24、毒热原v热原系指由微生物产生的能引起恒温动物体温异常升高的致热物质。v特点：耐高温；不具挥发性（重要疏水原理）；易被强酸、强碱破坏；可滤过性；易吸附性；可稀释性（水溶性）。v热原通常是磷脂多醇与蛋白质结合而成的复合物。磷脂多醇是复合物的活性中心，致热作用最强。其化学组成因菌种不同而有所差异。分子量为51045105，分子量越大致热作用也越强。v它包括细菌性热原、内源性高分子热原、内源性低分子热原及化学热原等。这里所指的“热原”，主要是指细菌性热原，是某些细菌的代谢产物、细菌尸体及内毒素。致热能力最强的是革兰氏阴性杆菌的产物，其次是革兰阳性杆菌类，革兰阳性球菌则较弱，霉菌、酵母菌、甚至病毒也能产
25、生热原。细菌的繁殖 二分分裂繁殖二分分裂繁殖菌落u单个或少数细菌细胞生长繁殖后，会形成以母单个或少数细菌细胞生长繁殖后，会形成以母细胞为中心的一堆肉眼可见、有一定形态构造细胞为中心的一堆肉眼可见、有一定形态构造的子细胞集团，这就是菌落。的子细胞集团，这就是菌落。u细菌菌落常表现为湿润、粘稠、光滑、较透明、细菌菌落常表现为湿润、粘稠、光滑、较透明、易挑取、质地均匀以及菌落正反面或边缘与中易挑取、质地均匀以及菌落正反面或边缘与中央部位颜色一致等。央部位颜色一致等。u细菌的菌落特征因种而异。可作为鉴定细菌种细菌的菌落特征因种而异。可作为鉴定细菌种的依据。的依据。粘质沙雷氏菌的菌落特征 沙门氏菌的菌落
26、特征铜绿假单孢菌的菌落特征铜绿假单孢菌的菌落特征 弗氏志贺氏菌的菌落特征第二节放线菌第二节放线菌放线菌的形态、大小和结构v在显微镜下，放线菌呈分枝丝状，我们在显微镜下，放线菌呈分枝丝状，我们把这些细丝一样的结构叫做把这些细丝一样的结构叫做菌丝菌丝，菌丝，菌丝直径与细菌相似，小于直径与细菌相似，小于1 1微米。微米。v根据菌丝形态和功能的不同，放线菌菌根据菌丝形态和功能的不同，放线菌菌丝可分为丝可分为基内菌丝、气生菌丝和孢子丝基内菌丝、气生菌丝和孢子丝三种。三种。放线菌的菌丝 放线菌的繁殖放线菌的繁殖v放线菌主要通过形成放线菌主要通过形成无性孢子方式进行无性繁殖无性孢子方式进行无性繁殖，成熟的分
27、生孢子或孢囊孢子散落在适宜环境里发成熟的分生孢子或孢囊孢子散落在适宜环境里发芽形成新的菌丝体；芽形成新的菌丝体；v另一种方式是菌丝体的无限伸长和分枝，在液体另一种方式是菌丝体的无限伸长和分枝，在液体振荡培养（或工业发酵）中，放线菌每一个脱落振荡培养（或工业发酵）中，放线菌每一个脱落的菌丝片段，在适宜条件下都能长成新的菌丝体，的菌丝片段，在适宜条件下都能长成新的菌丝体，也是一种无性繁殖方式。也是一种无性繁殖方式。第三节第三节 霉菌霉菌v霉菌的霉菌的菌丝菌丝构成霉菌营养体的基本单位。构成霉菌营养体的基本单位。v菌丝是一种管状的细丝，把它放在显微镜下观菌丝是一种管状的细丝，把它放在显微镜下观察，很像
28、一根透明胶管，它的直径一般为察，很像一根透明胶管，它的直径一般为3-103-10微米，比细菌和放线菌的细胞约粗几倍到几十微米，比细菌和放线菌的细胞约粗几倍到几十倍。菌丝可伸长并产生分枝，许多分枝的菌丝倍。菌丝可伸长并产生分枝，许多分枝的菌丝相互交织在一起，就叫相互交织在一起，就叫菌丝体。菌丝体。霉菌的繁殖v霉菌有着极强的繁殖能力，而且繁殖方式也是多霉菌有着极强的繁殖能力，而且繁殖方式也是多种多样的。虽然霉菌菌丝体上任一片段在适宜条种多样的。虽然霉菌菌丝体上任一片段在适宜条件下都能发展成新个体，但在自然界中，霉菌主件下都能发展成新个体，但在自然界中，霉菌主要依靠产生形形色色的无性或有性孢子进行繁
29、殖。要依靠产生形形色色的无性或有性孢子进行繁殖。孢子有点像植物的种子，不过数量特别多，特别孢子有点像植物的种子，不过数量特别多，特别小。小。v霉菌的无性孢子直接由生殖菌丝的分化而形成，霉菌的无性孢子直接由生殖菌丝的分化而形成，常见的有节孢子、厚垣孢子、孢囊孢子和分生孢常见的有节孢子、厚垣孢子、孢囊孢子和分生孢子。子。第四节 酵母菌v酵母菌是单细胞真核微生物。酵母菌细酵母菌是单细胞真核微生物。酵母菌细胞的形态通常有球形、卵圆形、腊肠形、胞的形态通常有球形、卵圆形、腊肠形、椭圆形、柠檬形或藕节形等。比细菌的椭圆形、柠檬形或藕节形等。比细菌的单细胞个体要大得多，一般为单细胞个体要大得多，一般为1-5
30、1-5微米微米5-305-30微米。酵母菌无鞭毛，不能游动。微米。酵母菌无鞭毛，不能游动。酵母菌的细胞形态 酵母菌的细胞形态酵母菌细胞结构的 显微照片酵母菌的芽殖过程 1泡；2小管；3核；4液泡 酵母菌假菌丝的形成 图中1、2、3、4 是出芽的顺序 酵母菌的无性繁殖酵母菌子囊孢子的形成过程 1、2、3、4：两个细胞结合；5：接合子；6、7、8、9：核分裂；10、11：核形成孢子 酵母菌的有性繁殖酵母菌的菌落 v大多数酵母菌的菌落特征与细菌相似，但比细菌菌落大多数酵母菌的菌落特征与细菌相似，但比细菌菌落大而厚，菌落表面光滑、湿润、粘稠，容易挑起，菌大而厚，菌落表面光滑、湿润、粘稠，容易挑起，菌落
31、质地均匀，正反面和边缘、中央部位的颜色都很均落质地均匀，正反面和边缘、中央部位的颜色都很均一，菌落多为乳白色，少数为红色，个别为黑色。一，菌落多为乳白色，少数为红色，个别为黑色。各种酵母菌的菌落啤酒酵母的菌落 红酵母的菌落 第五节病毒第五节病毒形态结构形态结构v病毒的形态基本可归纳为三种：病毒的形态基本可归纳为三种：杆状、球状和这杆状、球状和这两种形态结合的复合型两种形态结合的复合型。v病毒粒子的主要成分是病毒粒子的主要成分是核酸和蛋白质核酸和蛋白质，在宿主细，在宿主细胞协助下，通过胞协助下，通过核酸的复制和核酸蛋白装配核酸的复制和核酸蛋白装配的形的形式进行增殖。式进行增殖。v病毒粒子通常形成
32、病毒粒子通常形成螺旋对称、二十面体对称和复螺旋对称、二十面体对称和复合对称。合对称。噬菌体毒性噬菌体毒性噬菌体噬菌体的应用噬菌体的应用v细菌的鉴定与分类细菌的鉴定与分类v分子生物学研究的重要工具分子生物学研究的重要工具v细菌感染的诊断与治疗细菌感染的诊断与治疗第二章 小结v细菌按外形可划分为：球菌、杆菌和螺旋菌。细菌按外形可划分为：球菌、杆菌和螺旋菌。v细菌菌落常表现为湿润、粘稠、光滑、较透明、易细菌菌落常表现为湿润、粘稠、光滑、较透明、易挑取、质地均匀以及菌落正反面或边缘与中央部位挑取、质地均匀以及菌落正反面或边缘与中央部位颜色一致等。颜色一致等。v革兰氏阳性菌呈紫色、革兰氏阴性菌呈红色。革
33、兰氏阳性菌呈紫色、革兰氏阴性菌呈红色。v细菌的基本结构包括：细胞壁、细胞膜、细胞质和细菌的基本结构包括：细胞壁、细胞膜、细胞质和核质。特殊结构包括：荚膜、鞭毛、菌毛和芽孢。核质。特殊结构包括：荚膜、鞭毛、菌毛和芽孢。v霉菌的基本单位为菌丝。霉菌的基本单位为菌丝。v热力灭菌中选择嗜热脂肪芽孢杆菌作为生物指示剂。热力灭菌中选择嗜热脂肪芽孢杆菌作为生物指示剂。第三章消毒与灭菌第三章消毒与灭菌v什么叫消毒、灭菌和无菌？什么叫消毒、灭菌和无菌？v消毒和灭菌有哪些方法？消毒和灭菌有哪些方法？v这些方法有何特点？这些方法有何特点？第一节 概 述v消毒：消毒：采用物理或化学的方法，清除或杀灭外环境采用物理或化
34、学的方法，清除或杀灭外环境(传播媒介传播媒介)中的病原微生物或其它有害微生物。中的病原微生物或其它有害微生物。v对消毒意义的理解，有两点需要注意，其一是对消毒意义的理解，有两点需要注意，其一是不必不必清除杀灭所有微生物清除杀灭所有微生物，主要是针对病原微生物；其，主要是针对病原微生物；其二二消毒是相对的，不是绝对的，消毒是相对的，不是绝对的，只要将微生物减少只要将微生物减少到无害化的程度。到无害化的程度。v消毒剂：消毒剂：用于杀灭微生物的化学药物。如乙醇、新用于杀灭微生物的化学药物。如乙醇、新洁尔灭等。洁尔灭等。v灭菌：灭菌：用物理和化学的方法用物理和化学的方法杀灭一切活的微杀灭一切活的微生物
35、生物(包括病原微生物和非病原微生物，繁殖包括病原微生物和非病原微生物，繁殖型或芽胞型微生物型或芽胞型微生物)，其概念是绝对的。，其概念是绝对的。v工业化生产的灭菌，允许将灭菌概率标准规工业化生产的灭菌，允许将灭菌概率标准规定为定为1010-6-6，即在，即在100100万个试验对象中，可有万个试验对象中，可有1 1个以下的有菌生长，就可认为该批产品是无个以下的有菌生长，就可认为该批产品是无菌的。菌的。v灭菌剂：灭菌剂：能杀灭一切微生物的药物。如过氧能杀灭一切微生物的药物。如过氧乙酸、甲醛等。乙酸、甲醛等。v消毒与灭菌是两个不同的概念，消消毒与灭菌是两个不同的概念，消毒处理不一定能达到灭菌的程度
36、，毒处理不一定能达到灭菌的程度，而灭菌则一定能达到消毒之目的。而灭菌则一定能达到消毒之目的。灭菌是最彻底的消毒。灭菌是最彻底的消毒。v无菌：无菌：是指物体或任一介质中没有活的微生物的是指物体或任一介质中没有活的微生物的存在，即无论用何种方法，检不出活的微生物。存在，即无论用何种方法，检不出活的微生物。v无菌操作：无菌操作：指在操作中，采用或控制一定条件，指在操作中，采用或控制一定条件，尽量避免产品污染微生物的一种操作方法程序。尽量避免产品污染微生物的一种操作方法程序。为此目的，所用的一切物品、环境，均应事先灭为此目的，所用的一切物品、环境，均应事先灭菌，操作也应在无菌操作室中进行。菌，操作也应
37、在无菌操作室中进行。第二节物理消毒灭菌法第二节物理消毒灭菌法v利用物理因素作用于微生物，将之杀灭或利用物理因素作用于微生物，将之杀灭或清除，称为物理消毒法。清除，称为物理消毒法。v常用的物理法有：机械消毒法、热力消毒常用的物理法有：机械消毒法、热力消毒法、光消毒法、电消毒法、声消毒法及辐法、光消毒法、电消毒法、声消毒法及辐射消毒法。射消毒法。一、机械消毒法v此方法不是真正的杀灭微生物，而只是达到机械排此方法不是真正的杀灭微生物，而只是达到机械排除。如刷、冲洗、擦拭、吸附、过滤等。除。如刷、冲洗、擦拭、吸附、过滤等。v过滤除菌过滤除菌是用物理阻留的方法除去微生物。如用砂是用物理阻留的方法除去微生
38、物。如用砂滤法制备生活饮用水，厂房空气净化设施以及戴口滤法制备生活饮用水，厂房空气净化设施以及戴口罩等，都是利用过滤除菌的有效方法。目前，滤膜罩等，都是利用过滤除菌的有效方法。目前，滤膜器孔径最小可达器孔径最小可达0.01m0.01m，能制取优质的注射用水，能制取优质的注射用水可将空气处理到可将空气处理到100L100L中只有中只有1 1颗颗0.3m0.3m尘粒的超净尘粒的超净水平。水平。v 二、热力消毒法二、热力消毒法v在所有消毒与灭菌的方法中，热力是一种应用在所有消毒与灭菌的方法中，热力是一种应用最早，效果最可靠使用最广泛的方法。最早，效果最可靠使用最广泛的方法。v热杀灭微生物的机理是损伤
39、微生物的细胞壁，热杀灭微生物的机理是损伤微生物的细胞壁，细胞膜、破坏微生物的蛋白质细胞膜、破坏微生物的蛋白质(凝固或变性凝固或变性)从而导致其死亡。从而导致其死亡。v热力消毒与灭菌的方法分为两类：热力消毒与灭菌的方法分为两类：干热和湿热。干热和湿热。vA)A)干热消毒与灭菌干热消毒与灭菌v 1 1灼烧：灼烧：灼烧是直接用火焰灭菌。如微灼烧是直接用火焰灭菌。如微生物实验室接种针、接种环、涂菌捧等不生物实验室接种针、接种环、涂菌捧等不怕热的金属器材的灭菌。灼烧法来菌温度怕热的金属器材的灭菌。灼烧法来菌温度很高，效果可靠，但对器械有破坏性。很高，效果可靠，但对器械有破坏性。v 2 2干烤：干烤：干烤
40、灭菌是在烤箱中进行。适干烤灭菌是在烤箱中进行。适用于高温下不损坏、不变质物品的灭菌。用于高温下不损坏、不变质物品的灭菌。例如玻璃制品：平板、试管、吸管，注射例如玻璃制品：平板、试管、吸管，注射器等均可用此法灭菌，一般在器等均可用此法灭菌，一般在160-180160-180下，下，干烤干烤l l2h2h。v(B)(B)湿热消毒与灭菌湿热消毒与灭菌v湿热灭菌法是指用饱和水蒸气、沸水或流湿热灭菌法是指用饱和水蒸气、沸水或流通蒸汽进行灭菌的方法。通蒸汽进行灭菌的方法。v影响湿热灭菌的主要因素有：微生物的种影响湿热灭菌的主要因素有：微生物的种类与数量、蒸汽的性质、药品性质和灭菌类与数量、蒸汽的性质、药品
41、性质和灭菌时间等。时间等。v 1 1煮沸法：煮沸法消毒是使用最早的消毒煮沸法：煮沸法消毒是使用最早的消毒方法之一。由于其方法简单、方便、经济、方法之一。由于其方法简单、方便、经济、实用效果好，故今仍是一种常用的消毒方法。实用效果好，故今仍是一种常用的消毒方法。v2 2高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌焚烧-最彻底的灭菌方法烧灼-直接用火焰灭菌方法干烤-加热160-1802小时干热灭菌法干热灭菌法湿热灭菌与干热灭菌的比较湿热灭菌与干热灭菌的比较湿热灭菌法湿热灭菌法加压蒸汽灭菌法最有效的灭菌方法1212030分钟煮沸消毒法水煮1005分钟(繁殖体)2小时(芽胞)流通蒸汽消毒法巴氏消毒法间歇蒸汽灭菌法水蒸汽1
42、001530分钟(繁殖体)反复多次流动蒸汽间歇加热灭菌较低的温度杀灭致病菌同一温度下，湿热灭菌比干热灭菌效果好同一温度下，湿热灭菌比干热灭菌效果好原原因因1、湿热中细菌菌体蛋白较易凝固湿热中细菌菌体蛋白较易凝固2、湿热的穿透力比干热大湿热的穿透力比干热大3、湿热的蒸汽有潜热湿热的蒸汽有潜热三、紫外线消毒三、紫外线消毒v紫外线可分为长波段、中波段和短波段紫外线可分为长波段、中波段和短波段3 3组。以短组。以短波段波段2502500 0265.0nm265.0nm的杀菌力最强。的杀菌力最强。一般多以一般多以2532537nm7nm作为紫外线杀菌波长的代表。作为紫外线杀菌波长的代表。v当微生物被照射
43、，此作用可引起细胞内成分，特当微生物被照射，此作用可引起细胞内成分，特别是核酸、原浆蛋白与酶的化学变化，从而使之别是核酸、原浆蛋白与酶的化学变化，从而使之死亡。死亡。v紫外线紫外线穿透力极差穿透力极差，空气中的湿度、尘粒对其均，空气中的湿度、尘粒对其均有影响；在液体中，亦随深度增加而降低。不能有影响；在液体中，亦随深度增加而降低。不能透过固体物质。透过固体物质。四微波灭菌法四微波灭菌法v微波是指频率在微波是指频率在303000MHz303000MHz之间的电磁波。之间的电磁波。水可强烈地吸收微波，使其极性分子转动，分水可强烈地吸收微波，使其极性分子转动，分子间的磨擦而生热，且升温迅速，靠热力而
44、灭子间的磨擦而生热，且升温迅速，靠热力而灭菌。在数十秒至几分钟之内可达菌。在数十秒至几分钟之内可达100100150150，并全部杀死液体中的微生物，适于水溶性注射并全部杀死液体中的微生物，适于水溶性注射液的灭菌。液的灭菌。五、电消毒法五、电消毒法v臭氧是以无声放电法产生的。在一对交臭氧是以无声放电法产生的。在一对交流电极之间隔以介电体，流电极之间隔以介电体，当空气或氧气当空气或氧气通过高压电极通过高压电极(6000(60008000V)8000V)时，在具有时，在具有足够动能的放电电子中，使氧分子电离，足够动能的放电电子中，使氧分子电离，一一 部分氧分子被聚合为臭氧。部分氧分子被聚合为臭氧。
45、臭氧有很臭氧有很强的杀菌力，高效、广谱。有的医用高强的杀菌力，高效、广谱。有的医用高分予器材厂采用臭氧发生器进行了净化分予器材厂采用臭氧发生器进行了净化车间的空气消毒，效果甚为满意。车间的空气消毒，效果甚为满意。六、辐射消毒法六、辐射消毒法v辐射消毒法是采用放射性同位素放射的辐射消毒法是采用放射性同位素放射的 射线射线杀灭微生物和芽孢的方法。杀灭微生物和芽孢的方法。v优点：优点：(1)(1)消毒效果可靠；消毒效果可靠；(2)(2)不引起温度升高，不引起温度升高，是一种是一种“冷处理冷处理”灭菌；灭菌；(3)(3)节约能源；节约能源；(4)(4)不不破坏包装，可长期保存；破坏包装，可长期保存；(
46、5)(5)穿透力强，适用于穿透力强，适用于封装灭菌；封装灭菌；(6)(6)无残留毒性；无残留毒性；(7)(7)处理过程干燥，处理过程干燥，无消毒剂的沾污；无消毒剂的沾污；(8)(8)可连续灭菌；可连续灭菌；(9)(9)无环境无环境污染。污染。v缺点：缺点：(1)(1)一次性投资大；一次性投资大；(2)(2)必须有经过专门必须有经过专门训练的技术人员管理。训练的技术人员管理。第三节第三节 化学消毒灭菌法化学消毒灭菌法v一、一、气体灭菌法气体灭菌法v此法系指用化学试剂的气体或蒸汽对物品此法系指用化学试剂的气体或蒸汽对物品进行的灭菌。常用者为环氧乙烷、甲醛、进行的灭菌。常用者为环氧乙烷、甲醛、过氧乙
47、酸、丙二醇、乳酸、戊二醛等。过氧乙酸、丙二醇、乳酸、戊二醛等。v （一）、环氧乙烷（一）、环氧乙烷v在室温、常压下是无色气体，具醚在室温、常压下是无色气体，具醚样臭，可闻出的气味阈值为样臭，可闻出的气味阈值为700ppm700ppm，沸点为，沸点为101088，当温度低于，当温度低于10.810.8时，气体液化呈无色透明液时，气体液化呈无色透明液体，能溶于水。体，能溶于水。v环氧乙烷具较强的扩散和穿透能力，环氧乙烷具较强的扩散和穿透能力，作用快，对细菌芽胞、真菌和病毒作用快，对细菌芽胞、真菌和病毒等各种微生物均有杀灭作用，属于等各种微生物均有杀灭作用，属于广谱灭菌剂。广谱灭菌剂。v环氧乙烷属烷
48、化剂，它能与微生物的蛋白质、环氧乙烷属烷化剂，它能与微生物的蛋白质、DNADNA等发生非特异性的烷基化作用，对菌体等发生非特异性的烷基化作用，对菌体细菌的代谢产生不可逆性破坏。细菌的代谢产生不可逆性破坏。v注意事项注意事项环氧乙烷具可燃可爆性。环氧乙烷具可燃可爆性。环氧乙烷对塑料、橡胶、纸板等穿透力强，环氧乙烷对塑料、橡胶、纸板等穿透力强，亲和力也强。故灭菌完毕后需通空气或采亲和力也强。故灭菌完毕后需通空气或采用排除毒性气体装置，将被某些材料吸收用排除毒性气体装置，将被某些材料吸收的环氧乙烷降到最低浓度。的环氧乙烷降到最低浓度。v（二）、甲醛熏蒸（二）、甲醛熏蒸v甲醛熏蒸消毒是利用其与高锰酸钾
49、发生氧化甲醛熏蒸消毒是利用其与高锰酸钾发生氧化还原反应过程中产生的大量热还原反应过程中产生的大量热,使甲醛受热挥使甲醛受热挥发发,经一定时间后杀死病原微生物。经一定时间后杀死病原微生物。v此法是目前对消毒常用的方法之一此法是目前对消毒常用的方法之一,具有全面具有全面彻底、省时、省力和消毒效果好等特点。彻底、省时、省力和消毒效果好等特点。v甲醛常用于接种室、培养室、接种箱熏蒸灭甲醛常用于接种室、培养室、接种箱熏蒸灭菌，用量为每立方米菌，用量为每立方米1010毫升。用法是按接种毫升。用法是按接种室体积计算甲醛用量放入特定容器中，再按室体积计算甲醛用量放入特定容器中，再按甲醛毫升数的一半数称取高锰酸
50、钾所需克数甲醛毫升数的一半数称取高锰酸钾所需克数放入玻璃或铁制容器中，将接种室窗户封闭放入玻璃或铁制容器中，将接种室窗户封闭严后，将甲醛倒入高锰酸钾容器内，立即退严后，将甲醛倒入高锰酸钾容器内，立即退出，封闭房门，出，封闭房门，3 31212小时后方可使用。小时后方可使用。v甲醛的危害：甲醛的危害：具有对人体危害性和环境污染性。具有对人体危害性和环境污染性。甲醛既是致癌物又是促癌物甲醛既是致癌物又是促癌物 。甲醛的生殖毒性会引起女性的月经机能的甲醛的生殖毒性会引起女性的月经机能的严重危害。严重危害。长期在空气中含甲醛的工作环境中，人群长期在空气中含甲醛的工作环境中，人群普遍患有嗅觉下降、慢性咽