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1、实验一a酵母菌的形态观察 Still waters run deep.流静水深流静水深,人静心深人静心深 Where there is life,there is hope。有生命必有希望。有生命必有希望 美蓝是一种无毒的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型。因此，具有还原能力的酵母活细胞是无色的，而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色，借此即可对酵母菌的死活细胞进行鉴别。Scanning electron micrograph of the common bakers an
2、d brewers yeast Saccharomyces cerevisiae.Note the budding division and previous bud scars.三 材料与器材l菌种：斯达油脂酵母（Lipomyces starkeyi）2.1390.l 培养基和试剂：麦芽汗琼脂培养基，0.05 和0.1 吕氏碱性美蓝染色液，革兰氏染色用碘液.l显微镜，玻片等.四四 操作步骤操作步骤 1、菌种活化将酵母移种至新鲜的麦芽汁琼脂斜面上，2528培养48 h左右备用。2、美蓝镜片的观察1）在载玻片中央加一滴0.1%吕氏碱性美蓝染色掖，然后按无菌操作用接种环挑取少量酵母菌苔放在染液中，
3、混合均匀。2）用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上。3）将制片放置约3min后镜检，先用低倍镜然后用高倍镜观察酵母的形态和出芽情况，并根据颜色来区别死活细胞。4）染色约0.5h后再次进行观察，注意死活细胞数量是否增加。5）用0.05%吕氏碱性美蓝染液重复上述操作。3、水一碘液镜片的观察在载玻片中央加一小滴革兰氏染色用碘液，然后在其上加3小滴水，取少许酵母菌苔放在水一碘液中混匀，盖上盖玻片后镜检。五注意事项1、加染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量气泡而影响观察。2、盖玻片不宜平着放下，以免产生气泡影响观察。六 思考题1、吕氏碱性美
4、蓝染液浓度和作用时间的不同，对酵母菌死细胞数量有何影响？试分析其原因。2、在显微镜下，酵母菌有哪些突出的特征区别于一般细菌？实验一实验一 b 酵母菌子囊孢子的观察酵母菌子囊孢子的观察 一 教学要求 学习并掌握酵母菌子囊孢子的观察方法。二、二、基本原理 子囊孢子是子囊菌类真菌有性生殖产生的有性孢子。在酵母菌中，能否形成子囊孢子及其形态是酵母菌分类鉴定的重要依据之一。酵母菌形成子囊孢子需要一定的条件，所以对不同种属的酵母要选择适合形成子囊孢子的培养基。Sexual sporeslAscosporeFormed in a sac(ascus)三 材料与器材l菌种：同前.l试剂：5孔雀绿水溶液，0.5
5、番红水溶液，95乙醇.l显微镜，玻片等.四四 操作步骤操作步骤1、菌种活化将酵母移种至新鲜的麦芽汁琼脂斜面上，2528培养24h左右，然后再转种23次。2、产孢培养将经活化的菌种转接到麦氏琼脂斜面上，2528培养约1周。3、制片取经产孢培养的酵母斜面培养物，在净洁载玻片上按常规涂片、干燥、固定。4、染色滴加5%孔雀绿染色1min。5、脱色用95%乙醇脱色30s，水洗。6、复染用0.5%番红复染30s，水洗，用吸水纸吸干。7、镜检干后用油镜观察（子囊孢子呈绿色，菌体和子囊呈粉红 色）。五 注意事项 菌种活化时，要采用新配制、表面湿润的斜面培养基。六 思考题 如何区别酵母菌的营养细胞和释放出子囊外的子囊孢子？