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1、6、食品添加剂的检测、食品添加剂的检测1.1.甜味剂的测定（糖精钠）甜味剂的测定（糖精钠）2.2.防腐剂的测定（山梨酸、苯甲酸）防腐剂的测定（山梨酸、苯甲酸）3.3.发色剂的测定（亚硝酸盐、硝酸盐）发色剂的测定（亚硝酸盐、硝酸盐）4.4.漂白剂的测定（二氧化硫及亚硫酸盐）漂白剂的测定（二氧化硫及亚硫酸盐）5.5.抗氧化剂的测定（抗氧化剂的测定（BHABHA、BHTBHT）6.6.合成着色剂的测定合成着色剂的测定6.1 概述食品添加剂定义：食品添加剂定义：食品添加剂定义：食品添加剂定义：所谓食品添加剂是指在食品生产、加工或贮存所谓食品添加剂是指在食品生产、加工或贮存所谓食品添加剂是指在食品生产、
2、加工或贮存所谓食品添加剂是指在食品生产、加工或贮存过程中，添加进去的自然或化学合成的物质。对过程中，添加进去的自然或化学合成的物质。对过程中，添加进去的自然或化学合成的物质。对过程中，添加进去的自然或化学合成的物质。对食品的色、香、味或质量起到确定的作用，本身食品的色、香、味或质量起到确定的作用，本身食品的色、香、味或质量起到确定的作用，本身食品的色、香、味或质量起到确定的作用，本身不作为食用目的，也不确定具有养分价值。不作为食用目的，也不确定具有养分价值。不作为食用目的，也不确定具有养分价值。不作为食用目的，也不确定具有养分价值。特点：无养分性特点：无养分性特点：无养分性特点：无养分性 功能
3、：保持食品养分、防止腐败变质，增加食品功能：保持食品养分、防止腐败变质，增加食品功能：保持食品养分、防止腐败变质，增加食品功能：保持食品养分、防止腐败变质，增加食品 感官性状、满足加工工艺要求，提高食品感官性状、满足加工工艺要求，提高食品感官性状、满足加工工艺要求，提高食品感官性状、满足加工工艺要求，提高食品 质量。质量。质量。质量。食品添加剂分类食品添加剂分类食品添加剂分类食品添加剂分类（1 1 1 1）按来源分为两大类：自然食品添加剂和化学）按来源分为两大类：自然食品添加剂和化学）按来源分为两大类：自然食品添加剂和化学）按来源分为两大类：自然食品添加剂和化学合成添加剂。合成添加剂。合成添加
4、剂。合成添加剂。自然食品添加剂是利用动物与植物组织或分泌物自然食品添加剂是利用动物与植物组织或分泌物自然食品添加剂是利用动物与植物组织或分泌物自然食品添加剂是利用动物与植物组织或分泌物及以微生物的代谢产物为原料，经过提取、加工及以微生物的代谢产物为原料，经过提取、加工及以微生物的代谢产物为原料，经过提取、加工及以微生物的代谢产物为原料，经过提取、加工所得到的物质。如辣椒红色素、番茄红色素等是所得到的物质。如辣椒红色素、番茄红色素等是所得到的物质。如辣椒红色素、番茄红色素等是所得到的物质。如辣椒红色素、番茄红色素等是从植物中提取出来的。自然食品添加剂一般对人从植物中提取出来的。自然食品添加剂一般
5、对人从植物中提取出来的。自然食品添加剂一般对人从植物中提取出来的。自然食品添加剂一般对人体无害。体无害。体无害。体无害。化学合成添加剂是通过一系列化学手段所得到的化学合成添加剂是通过一系列化学手段所得到的化学合成添加剂是通过一系列化学手段所得到的化学合成添加剂是通过一系列化学手段所得到的有机或无机物质，或多或少都有毒性，在剂量上有机或无机物质，或多或少都有毒性，在剂量上有机或无机物质，或多或少都有毒性，在剂量上有机或无机物质，或多或少都有毒性，在剂量上应当严格驾驭。应当严格驾驭。应当严格驾驭。应当严格驾驭。（2)2)按食品添加剂的功能、用途划分，各国分类按食品添加剂的功能、用途划分，各国分类不
6、尽相同，我国食品添加剂运用卫生标准不尽相同，我国食品添加剂运用卫生标准将其分为将其分为2222大类：甜味剂、抗氧化剂、防腐剂、大类：甜味剂、抗氧化剂、防腐剂、着色剂、护色剂、香精香料、酸度调整剂、抗着色剂、护色剂、香精香料、酸度调整剂、抗结剂、消泡剂、漂白剂、膨胀剂、胶姆糖基础结剂、消泡剂、漂白剂、膨胀剂、胶姆糖基础剂、乳化剂、酶制剂、增味剂、面粉处理剂、剂、乳化剂、酶制剂、增味剂、面粉处理剂、被膜剂、水分保持剂、养分强化剂、稳定剂和被膜剂、水分保持剂、养分强化剂、稳定剂和凝固剂、增稠剂和其他类添加剂。凝固剂、增稠剂和其他类添加剂。食品添加剂的平安运用及管理食品添加剂的平安运用及管理WHO/F
7、AO规定了运用食品添加剂的一般原规定了运用食品添加剂的一般原则，就食品添加剂的平安性和维护消费者利则，就食品添加剂的平安性和维护消费者利益方面制定了严格的管理方法，并订出它们的益方面制定了严格的管理方法，并订出它们的ADI 值（成人每天每公斤允许的最大摄入量，值（成人每天每公斤允许的最大摄入量，mg/Kg体重体重.日）日）食品添加剂法典委员会（食品添加剂法典委员会（CCFA）每年定期召）每年定期召开会议，对食品添加剂制定统一的规格和标准，开会议，对食品添加剂制定统一的规格和标准，确定统一的试验方法和评价方法，对食品添加确定统一的试验方法和评价方法，对食品添加剂联合专家委员会（剂联合专家委员会（
8、JECFA）所通过的各种食）所通过的各种食品添加剂的标准、平安性评价方法等进行审议品添加剂的标准、平安性评价方法等进行审议和认可，在提交食品法典委员会（和认可，在提交食品法典委员会（CAC）复）复审后公布。审后公布。我国我国1995年颁布食品卫生法；年颁布食品卫生法；1997年颁布年颁布食品添加剂运用卫生标准（食品添加剂运用卫生标准（GB2760）测定意义测定意义食食品品添添加加剂剂是是食食品品工工业业的的基基础础原原料料，对对食食品品的的生生产产工工艺艺、产产品品质质量量、平平安安卫卫生生都都起起到到至至关关重重要要的的作作用用。但但终终归归不不是是食食品品的的基基本本成成分分，尽尽管管在在
9、用用于于食食品品之之前前已已在在试试验验室室中中进进行行多多次次平平安安性性测测试试，但但违违禁禁、滥滥用用以以及及超超范范围围、超超标标准准运运用用添添加加剂剂，都都会会给给食食品品质质量量、平平安安卫卫生生以以及及消消费费者者的的健健康康带带来来巨巨大大的的损损害害。食食品品添添加加剂剂的的种种类类和和数数量量越越来来越越多多，对对人人们们健健康康的的影影响响也也就就越越来来越越大大。随随着着探探讨讨的的不不断断改改进进和和发发展展，原原来来认认为为无无害害的的添添加加剂剂，近近年年来来发发觉觉还还可可能能存存在在慢慢毒毒性性、致致癌癌作作用用、致致畸畸作作用用及及致致突突变变作作用用等等
10、各各种种潜潜在在的的危危害害，因因而而更加不能忽视。更加不能忽视。食食品品添添加加剂剂的的检检测测，目目的的在在于于监监督督、保保证证和和促促进进正正确确合合理理地地运运用用食食品品添添加加剂剂，确确保保人人民民的的身身体体健健康。康。食品添加剂的检测内容食品添加剂的检测内容食品添加剂的检测内容食品添加剂的检测内容食品添加剂的检测除已列入国家标准的品种外，不断食品添加剂的检测除已列入国家标准的品种外，不断有新的品种、新的卫生标准出现。随着技术的进步，很多有新的品种、新的卫生标准出现。随着技术的进步，很多快速的新检测方法也相继出现。快速的新检测方法也相继出现。1.1.甜味剂的测定（糖精钠）甜味剂
11、的测定（糖精钠）2.2.防腐剂的测定（山梨酸、苯甲酸）防腐剂的测定（山梨酸、苯甲酸）3.3.发色剂的测定（亚硝酸盐、硝酸盐）发色剂的测定（亚硝酸盐、硝酸盐）4.4.漂白剂的测定（二氧化硫及亚硫酸盐）漂白剂的测定（二氧化硫及亚硫酸盐）5.5.抗氧化剂的测定（抗氧化剂的测定（BHABHA、BHTBHT）6.6.合成着色剂的测定合成着色剂的测定6.2.6.2.甜味剂（糖精钠）的测定甜味剂（糖精钠）的测定6.2.16.2.1概述概述定义：甜味剂是指能够赐予食品甜味的食品添定义：甜味剂是指能够赐予食品甜味的食品添加剂。按其来源可分为自然甜味剂和人工合加剂。按其来源可分为自然甜味剂和人工合成甜味剂，按其养
12、分价值可分为养分型与非成甜味剂，按其养分价值可分为养分型与非养分型甜味剂，通常所讲的甜味剂系指人工养分型甜味剂，通常所讲的甜味剂系指人工合成的非养分型甜味剂，如糖精钠、环己氨合成的非养分型甜味剂，如糖精钠、环己氨基磺酸钠基磺酸钠(甜蜜素甜蜜素)、乙酰磺胺酸钾、乙酰磺胺酸钾(安塞蜜安塞蜜)、天冬酰苯丙氨甲酯天冬酰苯丙氨甲酯(甜味素、阿斯巴甜甜味素、阿斯巴甜)等。等。性质：糖精及其钠盐是运用较广的甜味剂之一，糖精性质：糖精及其钠盐是运用较广的甜味剂之一，糖精性质：糖精及其钠盐是运用较广的甜味剂之一，糖精性质：糖精及其钠盐是运用较广的甜味剂之一，糖精为白色结晶或粉状，无臭或微有酸性芳香气，味极甜。为
13、白色结晶或粉状，无臭或微有酸性芳香气，味极甜。为白色结晶或粉状，无臭或微有酸性芳香气，味极甜。为白色结晶或粉状，无臭或微有酸性芳香气，味极甜。对热不稳定，长时间加热失去甜味。在水中溶解度微对热不稳定，长时间加热失去甜味。在水中溶解度微对热不稳定，长时间加热失去甜味。在水中溶解度微对热不稳定，长时间加热失去甜味。在水中溶解度微小，故在食品生产中常用其钠盐，糖精钠为无色结晶，小，故在食品生产中常用其钠盐，糖精钠为无色结晶，小，故在食品生产中常用其钠盐，糖精钠为无色结晶，小，故在食品生产中常用其钠盐，糖精钠为无色结晶，浓度低时呈甜味，浓度高时有苦味，易溶于水。糖精浓度低时呈甜味，浓度高时有苦味，易溶
14、于水。糖精浓度低时呈甜味，浓度高时有苦味，易溶于水。糖精浓度低时呈甜味，浓度高时有苦味，易溶于水。糖精钠是限制运用的甜味剂，进入人体后不分解，不供应钠是限制运用的甜味剂，进入人体后不分解，不供应钠是限制运用的甜味剂，进入人体后不分解，不供应钠是限制运用的甜味剂，进入人体后不分解，不供应热能，无养分价值，对其运用的平安性至今尚未有定热能，无养分价值，对其运用的平安性至今尚未有定热能，无养分价值，对其运用的平安性至今尚未有定热能，无养分价值，对其运用的平安性至今尚未有定论。论。论。论。在凉果、蜜饯等产品的检验过程中，常常会出现其在凉果、蜜饯等产品的检验过程中，常常会出现其在凉果、蜜饯等产品的检验过
15、程中，常常会出现其在凉果、蜜饯等产品的检验过程中，常常会出现其含量超标现象。含量超标现象。含量超标现象。含量超标现象。我国食品添加剂运用卫生标准规定，糖精钠用于饮料、酱菜类、复合调味料、蜜饯、雪糕、配制酒、冰棒、糕点、饼干、面包等食品，最大运用量(以糖精计)为0.15gkg；高糖果汁(果味)饮料按稀释倍数的80%加入，瓜子的最大运用量为1.2gkg；话梅、陈皮等的最大运用量为5.0gkg。6.2.26.2.2糖精钠的测定方法糖精钠的测定方法n n高效液相色谱法高效液相色谱法n n薄层色谱法薄层色谱法6.2.2.16.2.2.1高效液相色谱法高效液相色谱法原理：原理：样品经加温除去二氧化碳和乙醇
16、后，调整样品经加温除去二氧化碳和乙醇后，调整pHpH至近中性，至近中性，过滤后进高效液相色谱仪。经反相色谱柱分别后，依据保留时过滤后进高效液相色谱仪。经反相色谱柱分别后，依据保留时间和峰面积进行定性和定量。间和峰面积进行定性和定量。仪器和试剂仪器和试剂(1)(1)仪器：高效液相色谱仪，带紫外检测器仪器：高效液相色谱仪，带紫外检测器(2)(2)试剂：甲醇试剂：甲醇=+=+水（水（1+11+1）：氨水加等体积的水混合）：氨水加等体积的水混合0.02mol/L0.02mol/L乙酸铵：称取乙酸铵：称取1.54g1.54g乙酸铵加水乙酸铵加水1000mL1000mL溶解溶解,过滤过滤糖精钠标准溶液：国
17、家标物中心购买，无须糖精钠标准溶液：国家标物中心购买，无须自己配制自己配制操作步骤操作步骤操作步骤操作步骤(1)(1)(1)(1)样品处理：样品处理：样品处理：样品处理：汽水和配制酒类：微热搅拌除去二氧化碳和乙醇，再汽水和配制酒类：微热搅拌除去二氧化碳和乙醇，再汽水和配制酒类：微热搅拌除去二氧化碳和乙醇，再汽水和配制酒类：微热搅拌除去二氧化碳和乙醇，再用氨用氨用氨用氨 水水水水(1:1)(1:1)(1:1)(1:1)调调调调 节节节节PHPHPHPH约为约为约为约为7 7 7 7，加水定容，过滤；，加水定容，过滤；，加水定容，过滤；，加水定容，过滤；饮料、果汁类：用氨水饮料、果汁类：用氨水饮料
18、、果汁类：用氨水饮料、果汁类：用氨水(1:1)(1:1)(1:1)(1:1)调整调整调整调整PHPHPHPH约为约为约为约为7 7 7 7，加水定容，加水定容，加水定容，加水定容，离心沉淀，离心沉淀，离心沉淀，离心沉淀，过滤；过滤；过滤；过滤；固体样品：如凉果、蜜饯等，将样品捣碎，称取适量固体样品：如凉果、蜜饯等，将样品捣碎，称取适量固体样品：如凉果、蜜饯等，将样品捣碎，称取适量固体样品：如凉果、蜜饯等，将样品捣碎，称取适量用用用用 温水浸泡，冷却后定容，过滤。温水浸泡，冷却后定容，过滤。温水浸泡，冷却后定容，过滤。温水浸泡，冷却后定容，过滤。(2)(2)(2)(2)高效液相色谱分析参考条件：
19、高效液相色谱分析参考条件：高效液相色谱分析参考条件：高效液相色谱分析参考条件：检测器：紫外检测器检测器：紫外检测器检测器：紫外检测器检测器：紫外检测器 检测波长：检测波长：检测波长：检测波长：230nm230nm230nm230nm 色谱柱：色谱柱：色谱柱：色谱柱：C18C18C18C18柱柱柱柱 流淌相：甲醇流淌相：甲醇流淌相：甲醇流淌相：甲醇+0.02mol/L+0.02mol/L+0.02mol/L+0.02mol/L乙酸铵（乙酸铵（乙酸铵（乙酸铵（5+955+955+955+95）流速：流速：流速：流速：1.0mL/min1.0mL/min1.0mL/min1.0mL/min 进样量：
20、进样量：进样量：进样量：20L20L20L20L(3)(3)(3)(3)测定：仪器稳定后，分别将测定：仪器稳定后，分别将测定：仪器稳定后，分别将测定：仪器稳定后，分别将20L20L20L20L标准溶液和样品溶标准溶液和样品溶标准溶液和样品溶标准溶液和样品溶 液注入色液注入色液注入色液注入色 谱系统，依据保留时间定性，峰面谱系统，依据保留时间定性，峰面谱系统，依据保留时间定性，峰面谱系统，依据保留时间定性，峰面 积定量。积定量。积定量。积定量。结果计算结果计算：A A A A样样样样样品的峰面积样品的峰面积样品的峰面积样品的峰面积A A A A标标标标标样的峰面积标样的峰面积标样的峰面积标样的峰
21、面积C C C C标标标标标样的浓度标样的浓度标样的浓度标样的浓度(ug/mLug/mLug/mLug/mL）V V V V样样样样样品的定容体积（样品的定容体积（样品的定容体积（样品的定容体积（mLmLmLmL）MMMM样样样样样品质量样品质量样品质量样品质量(g)g)g)g)说明：说明：（1 1）本方法国家标准检验方法，适用于各）本方法国家标准检验方法，适用于各类食品中糖精钠含量的测定。另外，本方法类食品中糖精钠含量的测定。另外，本方法可同时测定食品中糖精钠、苯甲酸、山梨酸可同时测定食品中糖精钠、苯甲酸、山梨酸的含量。的含量。2.2.被测溶液的被测溶液的PHPH值对测定和色谱柱运用寿值对测
22、定和色谱柱运用寿命均有影响，命均有影响，PH8 PH8或或PH2PH2时会影响被测组时会影响被测组分的保留时间，对仪器有腐蚀作用，以中性分的保留时间，对仪器有腐蚀作用，以中性为宜。为宜。6.2.2.26.2.2.2薄层色谱法薄层色谱法原理原理样品经处理除去蛋白质、果胶、样品经处理除去蛋白质、果胶、CO2CO2、酒精等杂质、酒精等杂质后，在酸性条件下，用乙醚提取食品样品中的糖精钠，后，在酸性条件下，用乙醚提取食品样品中的糖精钠，经薄层层析分别后用溴甲酚绿一溴甲酚蓝混合指示剂经薄层层析分别后用溴甲酚绿一溴甲酚蓝混合指示剂显色后，与标准样品的斑点进行比较定性。在经薄层显色后，与标准样品的斑点进行比较
23、定性。在经薄层色谱分别、显色后与标准比较，进行半定量测定。色谱分别、显色后与标准比较，进行半定量测定。仪器和试剂仪器和试剂(1)(1)仪器仪器(2)(2)试剂试剂 操作步骤操作步骤(1)(1)样品的提取样品的提取(2)(2)薄层板的制备薄层板的制备(3)(3)点样点样(4)(4)绽开与显色绽开与显色 结果计算结果计算6.2.3 6.2.3 环己氨基磺酸钠（甜蜜素）的测定环己氨基磺酸钠（甜蜜素）的测定原理：在酸性介质中，甜蜜素与亚硝酸钠反应，原理：在酸性介质中，甜蜜素与亚硝酸钠反应，生成环己醇亚硝酸酯，利用气相色谱进行定生成环己醇亚硝酸酯，利用气相色谱进行定量和定性。量和定性。测定步骤测定步骤:
24、样品处理样品处理(液体样品除液体样品除CO2CO2和酒精；固和酒精；固体样品用水浸泡体样品用水浸泡)冰浴中加入亚硝酸钠和硫冰浴中加入亚硝酸钠和硫酸酸,反应反应30min 30min 正己烷萃取正己烷萃取气相色谱分析气相色谱分析,接受标准曲线法定量。接受标准曲线法定量。、乙酰磺胺酸钾（安塞蜜、乙酰磺胺酸钾（安塞蜜、AKAK糖）的测定糖）的测定n n接受液相色谱法接受液相色谱法(GB/T16345-1996)n n样品处理条件同糖精钠。样品处理条件同糖精钠。n n该方法可同时测定糖精钠、咖啡因、阿斯巴甜。该方法可同时测定糖精钠、咖啡因、阿斯巴甜。6.3 6.3 防腐剂（山梨酸、苯甲酸）的测定防腐剂
25、（山梨酸、苯甲酸）的测定6.3.1.6.3.1.6.3.1.6.3.1.概述：概述：概述：概述：定义：防腐剂是指能防止食品腐败、变质，抑制食定义：防腐剂是指能防止食品腐败、变质，抑制食定义：防腐剂是指能防止食品腐败、变质，抑制食定义：防腐剂是指能防止食品腐败、变质，抑制食品中微生物繁殖，延长食品保存期的物质，它是品中微生物繁殖，延长食品保存期的物质，它是品中微生物繁殖，延长食品保存期的物质，它是品中微生物繁殖，延长食品保存期的物质，它是人类运用最悠久、最广泛的食品添加剂。随着食人类运用最悠久、最广泛的食品添加剂。随着食人类运用最悠久、最广泛的食品添加剂。随着食人类运用最悠久、最广泛的食品添加剂
26、。随着食品保藏新工艺、新设备的完善，防腐剂将逐步削品保藏新工艺、新设备的完善，防腐剂将逐步削品保藏新工艺、新设备的完善，防腐剂将逐步削品保藏新工艺、新设备的完善，防腐剂将逐步削减运用，甚至不用。目前，我国允许运用的品种减运用，甚至不用。目前，我国允许运用的品种减运用，甚至不用。目前，我国允许运用的品种减运用，甚至不用。目前，我国允许运用的品种主要有苯甲酸及其钠盐、山梨酸及其钾盐、对羟主要有苯甲酸及其钠盐、山梨酸及其钾盐、对羟主要有苯甲酸及其钠盐、山梨酸及其钾盐、对羟主要有苯甲酸及其钠盐、山梨酸及其钾盐、对羟基苯甲酸乙酯和丙酯、丙酸钠、丙酸钙、脱氢乙基苯甲酸乙酯和丙酯、丙酸钠、丙酸钙、脱氢乙基苯
27、甲酸乙酯和丙酯、丙酸钠、丙酸钙、脱氢乙基苯甲酸乙酯和丙酯、丙酸钠、丙酸钙、脱氢乙酸等。酸等。酸等。酸等。性性质质：（1 1）苯苯甲甲酸酸，为为白白色色有有丝丝光光的的鳞鳞片片或或针针状状结结晶晶，微微溶溶于于水水，易易溶溶于于氯氯仿仿、丙丙酮酮、乙乙醇醇、乙乙醚醚等等有有机机溶溶剂剂，化化学学性性质质较较稳稳定定。苯苯甲甲酸酸钠钠易易溶溶于于水水，难难溶溶于于有有机溶剂，与酸作用生成苯甲酸。机溶剂，与酸作用生成苯甲酸。（2 2）山山梨梨酸酸为为无无色色、无无臭臭的的针针状状结结晶晶，山山梨梨酸酸难难溶溶于于水水，易易溶溶于于乙乙醇醇、乙乙醚醚、氯氯仿仿等等有有机机溶溶剂剂。山山梨梨酸酸钾钾易溶
28、于水，难溶于有机溶剂，与酸作用生成山梨酸。易溶于水，难溶于有机溶剂，与酸作用生成山梨酸。（3 3）苯苯甲甲酸酸与与山山梨梨酸酸两两种种防防腐腐剂剂主主要要用用于于酸酸性性食食品品的的防防腐腐。山山梨梨酸酸是是一一种种不不饱饱和和的的脂脂肪肪酸酸，在在机机体体内内可可参参与与正正常常的的新新陈陈代代谢谢，最最终终被被氧氧化化为为二二氧氧化化碳碳和和水水，因因此此，山梨酸是一种比苯甲酸更平安的防腐剂。山梨酸是一种比苯甲酸更平安的防腐剂。6.3.2 6.3.2 6.3.2 6.3.2 酸碱滴定法测定苯甲酸及苯甲酸钠酸碱滴定法测定苯甲酸及苯甲酸钠酸碱滴定法测定苯甲酸及苯甲酸钠酸碱滴定法测定苯甲酸及苯甲
29、酸钠 原理：原理：原理：原理：试试试试样样样样中中中中加加加加入入入入饱饱饱饱和和和和氯氯氯氯化化化化钠钠钠钠溶溶溶溶液液液液，在在在在碱碱碱碱性性性性条条条条件件件件下下下下进进进进行行行行萃萃萃萃取取取取，分分分分别别别别出出出出蛋蛋蛋蛋白白白白质质质质、脂脂脂脂肪肪肪肪等等等等，然然然然后后后后酸酸酸酸化化化化，用用用用乙乙乙乙醚醚醚醚提提提提取取取取试试试试样样样样中中中中的的的的苯苯苯苯甲甲甲甲酸酸酸酸，再再再再将将将将乙乙乙乙醚醚醚醚蒸蒸蒸蒸去去去去，溶溶溶溶于于于于中中中中性性性性醚醚醚醚醇醇醇醇混混混混合合合合液液液液中中中中，最最最最终以标准碱液滴定。终以标准碱液滴定。终以标
30、准碱液滴定。终以标准碱液滴定。仪器和试剂：仪器和试剂：仪器和试剂：仪器和试剂：中性醚醇混合液中性醚醇混合液中性醚醇混合液中性醚醇混合液 0.05mol/L 0.05mol/L 0.05mol/L 0.05mol/L 氢氧化钠标准滴定溶液氢氧化钠标准滴定溶液氢氧化钠标准滴定溶液氢氧化钠标准滴定溶液 操作步骤操作步骤 ：(1)(1)样品处理样品处理:固体样品：称固体样品：称100g100g样于样于500ml500ml容量瓶中容量瓶中加加200ml200ml水水加加AR NaClAR NaCl直到不溶解为止（降低苯甲直到不溶解为止（降低苯甲酸在水中溶解度，以削减在提取及水洗过程中的酸在水中溶解度，以
31、削减在提取及水洗过程中的损失）损失）用用10%NaOH10%NaOH调为碱性（这时苯甲酸生调为碱性（这时苯甲酸生成苯甲酸钠，并以苯甲酸钠状态存在）成苯甲酸钠，并以苯甲酸钠状态存在）用饱和用饱和NaClNaCl定容定容500ml500ml静置静置2 2小时小时过滤过滤弃去初液弃去初液收集滤液收集滤液 含酒精的样品：吸取含酒精的样品：吸取250mL250mL样品用样品用10%NaOH10%NaOH调调为碱性为碱性水浴蒸发至水浴蒸发至100mL100mL用饱和用饱和NaClNaCl定容定容250ml 250ml 过滤过滤弃去初液弃去初液收集滤液收集滤液 含脂肪多的样品：乙醚除脂肪含脂肪多的样品：乙醚
32、除脂肪 (2)(2)(2)(2)提取及滴定：吸滤液提取及滴定：吸滤液提取及滴定：吸滤液提取及滴定：吸滤液100ml100ml100ml100ml于于于于500ml500ml500ml500ml分液漏斗分液漏斗分液漏斗分液漏斗加加加加1 1 1 11 HCl 5ml1 HCl 5ml1 HCl 5ml1 HCl 5ml酸化酸化酸化酸化用用用用150ml150ml150ml150ml乙醚分三次提取乙醚分三次提取乙醚分三次提取乙醚分三次提取每次振荡每次振荡每次振荡每次振荡不能太激烈以防乳化不能太激烈以防乳化不能太激烈以防乳化不能太激烈以防乳化合并醚层合并醚层合并醚层合并醚层连接蒸馏装置连接蒸馏装置连
33、接蒸馏装置连接蒸馏装置回收回收回收回收乙醚（乙醚（乙醚（乙醚（50505050水浴）水浴）水浴）水浴）用用用用10ml10ml10ml10ml中性醚醇中性醚醇中性醚醇中性醚醇+10ml+10ml+10ml+10ml水溶解残渣水溶解残渣水溶解残渣水溶解残渣加加加加2 2 2 2滴酚酞滴酚酞滴酚酞滴酚酞用用用用0.05mol/L NaOH0.05mol/L NaOH0.05mol/L NaOH0.05mol/L NaOH滴出微红色（同时要滴出微红色（同时要滴出微红色（同时要滴出微红色（同时要求做空白试验）求做空白试验）求做空白试验）求做空白试验）(3)(3)(3)(3)结果计算：样品中苯甲酸钠的含
34、量结果计算：样品中苯甲酸钠的含量结果计算：样品中苯甲酸钠的含量结果计算：样品中苯甲酸钠的含量说明：说明：说明：说明：（1 1 1 1）预处理时用）预处理时用）预处理时用）预处理时用NaClNaClNaClNaCl饱和，作用是除去蛋白质及其饱和，作用是除去蛋白质及其饱和，作用是除去蛋白质及其饱和，作用是除去蛋白质及其水解产物，及降低苯甲酸钠的溶解度降低苯甲酸在水水解产物，及降低苯甲酸钠的溶解度降低苯甲酸在水水解产物，及降低苯甲酸钠的溶解度降低苯甲酸在水水解产物，及降低苯甲酸钠的溶解度降低苯甲酸在水中溶解度，以削减在提取及水洗过程中的损失中溶解度，以削减在提取及水洗过程中的损失中溶解度，以削减在提
35、取及水洗过程中的损失中溶解度，以削减在提取及水洗过程中的损失 （2 2 2 2）接受此方法测苯甲酸及其盐类最大缺点是：样）接受此方法测苯甲酸及其盐类最大缺点是：样）接受此方法测苯甲酸及其盐类最大缺点是：样）接受此方法测苯甲酸及其盐类最大缺点是：样品中有其它有机酸时，乙醚萃取时易带过来，所以此品中有其它有机酸时，乙醚萃取时易带过来，所以此品中有其它有机酸时，乙醚萃取时易带过来，所以此品中有其它有机酸时，乙醚萃取时易带过来，所以此法测定误差较大。法测定误差较大。法测定误差较大。法测定误差较大。（3 3 3 3）适用于样品中苯甲酸含量为）适用于样品中苯甲酸含量为）适用于样品中苯甲酸含量为）适用于样品
36、中苯甲酸含量为0.1%0.1%0.1%0.1%以上的分析。以上的分析。以上的分析。以上的分析。6.3.3气相色谱法测定山梨酸、苯甲酸测定原理（1）气相色谱原理：气相色谱法是接受惰性气体为流淌相（称为载气）的一种色谱法。即载气载着“气化”的试样，通过色谱柱中的固定相，使试样中各组分分别，并先后从柱中流出。其检测流程：被测样品被气化后，在流速保持确定的惰性气体的带动下，进入填有固定相的色谱柱。在色谱柱中样品被分别成一个个单一组分，并以确定的次序从色谱柱中流出，进入检测器，转变为电信号，再经放大后由记录仪记录下来并进行数据处理。定性：依据保留时间定性定性：依据保留时间定性 定量：通常运用标准曲线法。
37、取纯物质配成标定量：通常运用标准曲线法。取纯物质配成标准系列，分别取确定体积注入色谱仪，得到色谱准系列，分别取确定体积注入色谱仪，得到色谱峰，以标准溶液的浓度为横坐标，以峰面积为纵峰，以标准溶液的浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标绘制的关系曲线，即标准曲线。然后在相同坐标绘制的关系曲线，即标准曲线。然后在相同的条件下注入样品处理液，依据色谱图的峰面积的条件下注入样品处理液，依据色谱图的峰面积在标准曲线上查得待测组分的浓度。在标准曲线上查得待测组分的浓度。山梨酸、苯甲酸的气相色谱测定原理：山梨酸、苯甲酸的气相色谱测定原理：山梨酸、苯甲酸的气相色谱测定原理：山梨酸、苯甲酸的气相色谱测定原理：样品经酸化
38、后，用乙醚提取山梨酸和苯甲酸，再用样品经酸化后，用乙醚提取山梨酸和苯甲酸，再用样品经酸化后，用乙醚提取山梨酸和苯甲酸，再用样品经酸化后，用乙醚提取山梨酸和苯甲酸，再用带氢火焰离子化检测器的气相色谱仪进行分别测定，带氢火焰离子化检测器的气相色谱仪进行分别测定，带氢火焰离子化检测器的气相色谱仪进行分别测定，带氢火焰离子化检测器的气相色谱仪进行分别测定，然后与标准系列进行比较定量。然后与标准系列进行比较定量。然后与标准系列进行比较定量。然后与标准系列进行比较定量。仪器和试剂仪器和试剂仪器和试剂仪器和试剂 ：（1 1 1 1）乙醚、石油醚：沸程）乙醚、石油醚：沸程）乙醚、石油醚：沸程）乙醚、石油醚：沸
39、程3030303060 60 60 60（2 2 2 2）山梨酸、苯甲酸标准溶液：用石油醚）山梨酸、苯甲酸标准溶液：用石油醚）山梨酸、苯甲酸标准溶液：用石油醚）山梨酸、苯甲酸标准溶液：用石油醚-乙醚（乙醚（乙醚（乙醚（3 3 3 3：1 1 1 1）混合溶剂配制溶液每毫升相当）混合溶剂配制溶液每毫升相当）混合溶剂配制溶液每毫升相当）混合溶剂配制溶液每毫升相当2mg2mg2mg2mg山梨酸或苯甲酸。山梨酸或苯甲酸。山梨酸或苯甲酸。山梨酸或苯甲酸。（3 3 3 3）山梨酸、苯甲酸标准运用液：吸取适量山梨酸、）山梨酸、苯甲酸标准运用液：吸取适量山梨酸、）山梨酸、苯甲酸标准运用液：吸取适量山梨酸、）山
40、梨酸、苯甲酸标准运用液：吸取适量山梨酸、苯甲酸标准溶液，以石油醚苯甲酸标准溶液，以石油醚苯甲酸标准溶液，以石油醚苯甲酸标准溶液，以石油醚-乙醚（乙醚（乙醚（乙醚（3 3 3 3：1 1 1 1）混合溶剂稀）混合溶剂稀）混合溶剂稀）混合溶剂稀释至每毫升相当于释至每毫升相当于释至每毫升相当于释至每毫升相当于50505050、100100100100、150150150150、200200200200、250g250g250g250g山梨酸或山梨酸或山梨酸或山梨酸或苯甲酸。苯甲酸。苯甲酸。苯甲酸。（4 4 4 4）仪器：气相色谱仪，带氢火焰离子化检测器）仪器：气相色谱仪，带氢火焰离子化检测器）仪器：
41、气相色谱仪，带氢火焰离子化检测器）仪器：气相色谱仪，带氢火焰离子化检测器操作步骤(1)样品的处理：称取2.5g事先混合匀整的样品，置于25mL带塞试管中，加0.5mL6molLHCI酸化，用15、10mL乙醚提取2次，每次振摇1min，将上层醚提取液吸入另一个25mL一带塞试管中，合并乙醚提取液。用3mL4氯化钠酸性溶液洗涤2次，静置15min，用滴管将乙醚层通过无水硫酸钠滤入25mL容量瓶中。加乙醚至刻度，混匀。精确吸取5mL乙醚提取液于5mL带塞刻度试管中，置40水浴上挥干，加入2mL石油醚-乙醚（3：1）混合溶液溶解残渣，备用。思索：用GC法测定山梨酸和苯甲酸的含量时为什么要经过酸化处理
42、？(2)(2)(2)(2)色谱参考条件色谱参考条件色谱参考条件色谱参考条件 色谱柱：玻璃柱，内径色谱柱：玻璃柱，内径色谱柱：玻璃柱，内径色谱柱：玻璃柱，内径3 3 3 3mmmmmmmm，长长长长2m2m2m2m，气流速度：载气、氮气，气流速度：载气、氮气，气流速度：载气、氮气，气流速度：载气、氮气，50505050mLmLmLmLminminminmin（氮气和空气、氮气和空气、氮气和空气、氮气和空气、氢气比按各仪器型号不同选择各自的最氢气比按各仪器型号不同选择各自的最氢气比按各仪器型号不同选择各自的最氢气比按各仪器型号不同选择各自的最 佳比例条件）。佳比例条件）。佳比例条件）。佳比例条件）
43、。温度：进样口温度：进样口温度：进样口温度：进样口 230 230 230 230 ，检测器检测器检测器检测器230 230 230 230 ，柱温柱温柱温柱温170 170 170 170 。（3 3 3 3）测定：）测定：）测定：）测定：进样进样进样进样2L2L2L2L标准系列中各浓度标准运用液于气相色谱仪中，标准系列中各浓度标准运用液于气相色谱仪中，标准系列中各浓度标准运用液于气相色谱仪中，标准系列中各浓度标准运用液于气相色谱仪中，可得不同浓度山梨酸、苯甲酸的峰面积，以浓度为横可得不同浓度山梨酸、苯甲酸的峰面积，以浓度为横可得不同浓度山梨酸、苯甲酸的峰面积，以浓度为横可得不同浓度山梨酸、
44、苯甲酸的峰面积，以浓度为横坐标，相应峰面积值为纵坐标，绘制标准曲线。同时坐标，相应峰面积值为纵坐标，绘制标准曲线。同时坐标，相应峰面积值为纵坐标，绘制标准曲线。同时坐标，相应峰面积值为纵坐标，绘制标准曲线。同时进样进样进样进样2L2L2L2L样品溶液，测得峰面积可从标准曲线相应的山样品溶液，测得峰面积可从标准曲线相应的山样品溶液，测得峰面积可从标准曲线相应的山样品溶液，测得峰面积可从标准曲线相应的山梨酸、苯甲酸的浓度。梨酸、苯甲酸的浓度。梨酸、苯甲酸的浓度。梨酸、苯甲酸的浓度。山梨酸和苯甲酸的标准色谱图如图所示山梨酸和苯甲酸的标准色谱图如图所示山梨酸和苯甲酸的标准色谱图如图所示山梨酸和苯甲酸的
45、标准色谱图如图所示结果计算结果计算结果计算结果计算式中：式中：式中：式中：X X X X样品中山梨酸或苯甲酸的含量，样品中山梨酸或苯甲酸的含量，样品中山梨酸或苯甲酸的含量，样品中山梨酸或苯甲酸的含量，g g g gkgkgkgkg；标准曲线上查得山梨酸或苯甲酸的量，标准曲线上查得山梨酸或苯甲酸的量，标准曲线上查得山梨酸或苯甲酸的量，标准曲线上查得山梨酸或苯甲酸的量，g/mLg/mLg/mLg/mL；V1 V1 V1 V1加入石油醚加入石油醚加入石油醚加入石油醚-乙醚乙醚乙醚乙醚(3+1)(3+1)(3+1)(3+1)混合溶剂的体积，混合溶剂的体积，混合溶剂的体积，混合溶剂的体积，mLmLmLm
46、L：mmmm样品的质量，样品的质量，样品的质量，样品的质量，g g g g；5555测定时吸取乙醚提取液的体积，测定时吸取乙醚提取液的体积，测定时吸取乙醚提取液的体积，测定时吸取乙醚提取液的体积，mLmLmLmL；25252525样品乙醚提取液的总体积，样品乙醚提取液的总体积，样品乙醚提取液的总体积，样品乙醚提取液的总体积，mLmLmLmL。说明及留意事项：说明及留意事项：说明及留意事项：说明及留意事项：1 1 1 1、由测得苯甲酸的量乘以相对分子质量比、由测得苯甲酸的量乘以相对分子质量比、由测得苯甲酸的量乘以相对分子质量比、由测得苯甲酸的量乘以相对分子质量比1.181.181.181.18，
47、即为样，即为样，即为样，即为样品中苯甲酸钠含量。品中苯甲酸钠含量。品中苯甲酸钠含量。品中苯甲酸钠含量。2 2 2 2、由测得山梨酸的量乘以相对分子质量比、由测得山梨酸的量乘以相对分子质量比、由测得山梨酸的量乘以相对分子质量比、由测得山梨酸的量乘以相对分子质量比1.341.341.341.34，即为样，即为样，即为样，即为样品中山梨钾的含量。品中山梨钾的含量。品中山梨钾的含量。品中山梨钾的含量。3 3 3 3、通过无水硫酸钠层过滤后的乙醚提取液应达到去除、通过无水硫酸钠层过滤后的乙醚提取液应达到去除、通过无水硫酸钠层过滤后的乙醚提取液应达到去除、通过无水硫酸钠层过滤后的乙醚提取液应达到去除水分的
48、目的，否则水分的目的，否则水分的目的，否则水分的目的，否则5mL5mL5mL5mL乙醚提取液在乙醚提取液在乙醚提取液在乙醚提取液在40 40 40 40 挥去乙醚后仍挥去乙醚后仍挥去乙醚后仍挥去乙醚后仍残留少量水分会影响残留少量水分会影响残留少量水分会影响残留少量水分会影响l l l l测定结果，这时必需将残留水分挥测定结果，这时必需将残留水分挥测定结果，这时必需将残留水分挥测定结果，这时必需将残留水分挥干，但会析出极少量白色氯化钠，当出现此状况时应搅干，但会析出极少量白色氯化钠，当出现此状况时应搅干，但会析出极少量白色氯化钠，当出现此状况时应搅干，但会析出极少量白色氯化钠，当出现此状况时应搅
49、松残留的无机盐后加入石油醚松残留的无机盐后加入石油醚松残留的无机盐后加入石油醚松残留的无机盐后加入石油醚-乙醚（乙醚（乙醚（乙醚（3 3 3 3：1 1 1 1）振摇，取）振摇，取）振摇，取）振摇，取上清液进样，否则氯化钠覆盖了部分山梨酸、苯甲酸，上清液进样，否则氯化钠覆盖了部分山梨酸、苯甲酸，上清液进样，否则氯化钠覆盖了部分山梨酸、苯甲酸，上清液进样，否则氯化钠覆盖了部分山梨酸、苯甲酸，使定结果偏低。使定结果偏低。使定结果偏低。使定结果偏低。6.3.4 6.3.4高效液相色谱法测定山梨酸、苯甲酸高效液相色谱法测定山梨酸、苯甲酸高效液相色谱法测定山梨酸、苯甲酸高效液相色谱法测定山梨酸、苯甲酸
50、可同时用于苯甲酸及山梨酸的测定。可同时用于苯甲酸及山梨酸的测定。可同时用于苯甲酸及山梨酸的测定。可同时用于苯甲酸及山梨酸的测定。原理原理原理原理样品加温除去二氧化碳和乙醇，调样品加温除去二氧化碳和乙醇，调样品加温除去二氧化碳和乙醇，调样品加温除去二氧化碳和乙醇，调pHpH至近中性，过滤后进高效液相色谱仪，至近中性，过滤后进高效液相色谱仪，至近中性，过滤后进高效液相色谱仪，至近中性，过滤后进高效液相色谱仪，经反相色谱分别后，依据保留时间和峰面积进行定性和定量。经反相色谱分别后，依据保留时间和峰面积进行定性和定量。经反相色谱分别后，依据保留时间和峰面积进行定性和定量。经反相色谱分别后，依据保留时间