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1、基因工程习题集一、名词解释Southern blotting；Cosmid；cDNA library；RACE；RT-PCR；MCS ；cDNA；插入失活；反义RNA；PCR，mRNA差异显示技术；巢式PCR；实时荧光定量PCR；基因文库；星号活性；载体；转化；转染二、 填空题1.基因工程的四大要素是 、 、 、 2.在基因工程中，切割载体和含有目的基因的DNA片段中，一般需使用 酶3.用冷的氯化钙处理对数生长期的大肠杆菌细胞，可以诱导细胞进入称为 态的生理状态进行遗传转化。4.写出在质粒载体图谱上下列符号表示的含义：Amp , LacZ , ori ,MCS 。5. PCR包括三个步骤_ ，
2、 ， 。6. 限制性内切酶酶切DNA片断后通常有两类末端： 、 。7. 目的基因与噬菌体DNA进行重组时，可采用 重组方式，也可采用 重组方式。 8. 柯斯质粒是一类人工构建的质粒-噬菌体杂合载体，它的复制子来自 ，cos位点序列来自 9分离目的基因常采用 从基因组DNA中扩增含目的具有的DNA片断，或者用分子杂交等方法从构建的 或 中获得含目的基因的克隆子。10. 在 的作用下，将含目的基因的DNA片断与克隆载体连接成为重组DNA分子11. 载体根据功能可以分为 和 12. 常用的DNA连接酶有 和 ，前者即可以连接粘性末端又可以连接平末端，后者只可以连接粘性末端。13.据图回答：图中基因组
3、文库 （填“小于”、“等于”或“大于”）cDNA文库。B过程需要的酶是 ；A、C过程中 （填“可以”或“不可以”）使用同一种探针筛选含目的基因的菌株。目的基因和除从构建的文库中分离外，还可以分别利用图中 和 为模板直接进行PCR扩增，该过程中所用酶的显著特点是 。二、选择题1.基因工程的设计操作是在什么水平进行的（ ）A.细胞 B.分子 C.细胞器 D.原子2.基因工程的单元操作顺序是（ ）A 增，转，检，切，接B 切，接，转，增，检C 接，转，增，检，切D 切，接，增，转，检 3.分离纯化基因组DNA应保证核酸一级结构的完整性，下列哪些因素可能导致一级结构被破坏（ ）A. PH 8.0 B.
4、EDTA C.PH 14 D.70%乙醇4.分离纯化基因组DNA应尽量去除蛋白质的污染，实验过程中我们通常采用什么方法去除与DNA结合的蛋白质（ ）A.等电点沉淀法 B.盐析法 C.有机溶剂变性法 D.强酸强碱法5.分离纯化基因组DNA时，我们通常选用以下哪种试剂来沉淀基因组DNA（ ）A.水 B.乙醇 C.氯仿 D.苯酚6.关于不同构象的质粒DNA的电泳速率，下列排列顺序正确的是 ( )A ocDNA lDNAscDNA B scDNA ocDNA lDNAC ocDNA scDNA lDNA D scDNA lDNAocDNA7.PCR技术的操作步骤依次是 （ ）A高温变性、中温延伸、低温
5、复性 B高温变性、低温复性、中温延伸C中温延伸、高温变性、低温复性D中温延伸、低温复性、高温变性8. PCR的主要步骤不包括（ ）A. 设计一对特异性引物B. 高温使模板DNA变性C. 降温到合适的温度使模板DNA与引物杂交D. 加热使DNA聚合酶失活9.PCR反应体系不包括（ )A.DNA模板 B.引物 C.dNTP D.NTP10.核酸分子杂交实验不能用于（ ）A. 单链DNA分子之间杂交B. 单链RNA分子之间杂交C. 单链DNA分子与RNA之间的杂交D. 抗原与抗体分子之间的杂交11.用作探针的DNA分子必须（ ）A. 在杂交前变性B. 在杂交前复性C. 是双链分子D. 能形成颈环结构
6、12.Southern blotting是 （ ）A. 将DNA转移到膜上所进行的杂交B. 将RNA转移到膜上所进行的杂交C. 将蛋白质转移到膜上所进行的杂交D. 将多糖转移到膜上所进行的杂交13.确切地讲，cDNA文库包含（ ）A. 一个物种的全部基因信息B. 一个物种的全部RNA信息C. 一个生物体组织或细胞的全部基因信息D. 一个生物体组织或细胞所表达的mRNA信息14.要了解某一基因在某组织细胞中的mRNA表达水平时，采用哪种方法最合适A. Southern blottin B.Northern blotting C.Western blotting D.Eastern blottin
7、g15.DNA序列自动化测序中不正确的描述是（ ）A. 测序原理与手工测序基本相同B. 不需要引物C. 需要模板D. 需要四种荧光染料标记的ddNTP16.Sanger双脱氧末端终止法中不需要（ ）A. dNTP B.ddNTP C.DNA聚合酶 D.DNA连接酶17.cDNA文库的建立不需要（ ）A. 逆转录酶 B.DNA模板 C.mRNA模板 D.依赖于RNA的DNA聚合酶18.下列哪项不是基因工程中经常使用的用来运载目的基因的载体 A.细菌质粒 B.噬菌体 C.动植物病毒 D.细菌核区的DNA19.下列哪项叙述不是运载体必须具备的条件A.具有某些标记基因 B.决定宿主细胞的生存 C.能够
8、在宿主细胞中复制 D.有一个或多个限制酶切点 20.下列有关基因的叙述，错误的是（ ）A蛋白质是基因表达的唯一产物 B 基因是 DNA 链上具有编码功能的片段C 基因也可以是 RNA D 基因突变不一定导致其表达产物改变结构21.下列各组专业术语中，含义最为接近的是 （ ）A 终止子与终止密码子 B 基因表达与基因转译C DNA 退火与 DNA 复性 D 重组子与转化子22.下列有关连接反应的叙述，错误的是（ ）A 连接反应的最佳温度为 37 B 连接反应缓冲体系的甘油浓度应低于 10%C 连接反应缓冲体系的 ATP 浓度不能高于 1mMD 连接酶通常应过量 2-5 倍23.下列各常用载体的装
9、载量排列顺序，正确的是 （ ）A Cosmid -DNA Plasmid B -DNA Cosmid PlasmidC Plasmid -DNA Cosmid D Cosmid Plasmid -DNA24.质粒是基因工程最常用的运载体，它的主要特点是：能自主复制不能自主复制结构很小蛋白质环状RNA 环状DNA 能“友好”地“借居”A ：B ： C ：D ：25下列黏性末端属于同一种限制酶切割而成的是：A B C D26下列平末端属于同一种限制酶切割而成的是A. B. C. D.27作为基因的运输工具运载体，必须具备的条件之一及理由是A.能够在宿主细胞中稳定地保存下来并大量复制，以便提供大量的
10、目的基因B.具有多个限制酶切点，以便于目的基因的表达C.具有某些标记基因，以使目的基因能够与其结合D.对宿主细胞无伤害，以便于重组DNA的鉴定和选择28.限制性内切核酸酶的星活性是指： A 在非常规条件下，识别和切割序列也不发生变化的活性。 B 活性大大提高 C 切割速度大大加快 D识别序列与原来的完全不同29.下列五个 DNA 片段中含有回文结构的是 A. GAAACTGCTTTGAC B. GAAACTGGAAACTG C. GAAACTGGTCAAAG D. GAAACTGCAGTTTC30.DNA 连接酶是通过形成磷酸二酯键将两段 DNA 片段连接在一起，其底物的关键基团是A. 2 -
11、OH 和 5 PB. 2 -OH 和 3 -PC. 3 -OH 和 5 PD. 5 -OH 和 3 -P31.下列哪种克隆载体对外源DNA的容载量最大? A质粒 B黏粒 C酵母人工染色体(YAC) D噬菌体32.考斯质粒（cosmid）是一种 A. 容量最大的一种载体 B. 由 -DNA 的 cos 区与一质粒重组而成的载体 C.是一种单链DNA环状载体 D. 不能在受体细胞内复制，但可以表达34.细菌抗药性基因存在于 A核DNA B质粒 CRNA D小的直线型DNA35.某科学工作者把兔子的血红蛋白的信使RNA加入到大肠杆菌的提取液中，在这个细胞的合成系统中能合成兔子的血红蛋白，这个事实说明
12、A蛋白质合成是在核糖体上进行的 B各种生物共用一套遗传密码C兔子和大肠杆菌的基因发生了重组 D兔子的基因发生了突变36.下列不属于获取目的基因的方法是A.“鸟枪法” B.转录法C.反转录法 D.根据已知氨基酸序列合成法37基因工程中常作为基因的运载体的一组结构是A质粒、线粒体、噬菌体 B染色体、叶绿体、线粒体C质粒、噬菌体、动植物病毒 D细菌、噬菌体、动植物病毒38.RT-PCR中，以Oligo(dT)为引物合成cDNA第一条链的模板是（ ）A.tRNA B.rRNA C.mRNA D.snRNA39下列不是Southern 印迹步骤的是（ ）A. 用限制性内切酶消化DNAB. DNA与载体的
13、连接C. 用凝胶电泳分离DNA片段D. DNA转移到硝酸纤维素膜上40.现有一长度为1000个碱基对（bp）的DNA分子，用限制性内切酶EcoRI单独酶切后得到的DNA分子仍为1000bp，用限制性内切酶KpnI单独酶切后得到400bp和600bp两种长度的DNA分子，用EcoRI和KpnI同时酶切后得到200bp和600bp的两种长度的DNA分子，该DNA分子的酶切图谱正确的是（ ）41下列有关基因工程中常用的限制性内切酶的描述，错误的是（ ）A. 有特定的识别序列B. 限制性内切酶的活性受温度的影响C. 限制性内切酶能识别和切割RNAD. 限制性内切酶可以从原核生物中提取。42.根据基因工
14、程的定义，下列各名词中不能替代基因工程的是（ ）A. 基因诱变 B.分子克隆 C.DNA重组 D.遗传工程43. 利用基因工程实现分子克隆是通过（ ）A. SD序列的存在 B.启动子的存在 C.载体自主复制 D.增强子的作用44. 下列五个DNA片段，最有可能含有II型限制内切酶SstI酶切位点的是（ ）A. GGAGAGCTCT B.GAGCACATCT CCTGTGGGA D.AACCTTGGAA45. 下列关于质粒的叙述，错误的是（ ）A. 质粒是共价闭合环状的双链DNA分子。B. 质粒在宿主细胞内能独立于染色体DNA自主复制。C. 基因工程中使用的质粒载体通常是紧密控制型D. 质粒在细
15、菌内一般以超螺旋形式存在。46. 实现基因工程必须用到的工具及其作用描述正确的是（ ）A限制性内切酶-切割DNA分子，只在获得目的基因时候用到BDNA连接酶-连接粘性末端或者平末端，即恢复两个核苷酸之间的磷酸二酯键C质粒-将目的基因运输到宿主细胞后，即解体死亡DDNA聚合酶-分子的“缝合针”47.对解旋酶、DNA连接酶、DNA聚合酶作用的部位理解正确的是（ ）A解旋酶是将DNA的双螺旋展开，但不能打开两条链碱基对之间的氢键BDNA连接酶连接的是粘性末端或者平末端的磷酸二酯键和碱基对的氢键CDNA聚合酶需要模板，脱氧核苷酸之间脱水后形成磷酸二酯键DDNA连接酶和DNA聚合酶都形成磷酸二酯键，因此
16、功能一样48.下列关于DNA连接酶叙述错误的是（ ）AEcoliDNA连接酶来自大肠杆菌，只能连接粘性末端BT4DNA连接酶来自T4噬菌体，既能连接粘性末端，也能连接平末端CT4DNA连接酶连接平末端和粘性末端效率一样DDNA连接酶是“分子缝合针”49.下列不可做基因进入受体细胞的运载体的是（ ）A质粒B动植物病毒C噬菌体D线粒体50.下列对质粒的理解正确的是（ ）质粒是环状的DNA分子 质粒上的标记基因可以没有质粒必须有一至多个限制酶切点 质粒必须能自我复制或者整合到DNA上 天然质粒都可直接使用 质粒能将目的基因运输到宿主细胞中ABCD51.在目的基因和质粒结合的时候，由于使用了相同的限制
17、酶，因此在两者结合的过程中不可能出现下列哪种情况()A形成环状的外源DNAB可能形成环状的载体DNAC可能出现重组DNAD只出现重组DNA52甲、乙两图表示从细菌细胞中获取目的基因的两种方法，以下说法中错误的是（）A甲方法可建立该细菌的基因组文库 B乙方法可建立该细菌的cDNA文库C甲方法要以脱氧核苷酸为原料 D乙方法需要逆转录酶参与三、 判断题1.质粒的构型中，线性L型是最简单的构型，因而电泳时泳动的速度最快。( )2.转化子就是重组子。( )3.只要目的基因进入了受体细胞就能成功实现表达。( )4.载体自主复制是基因工程扩增基因的依据。( )5.对于5kb、10kb和15kb的目的基因在T
18、BE缓冲液的琼脂糖凝胶中电泳，30分钟后最接近 负极的是5kb的目的基因。6.基因是不可分割的最小的重组单位和突变单位。（ ）7.cDNA文库不包含内含子。（ ）8.有一些来源不同的限制性内切酶识别的是同样的核苷酸序列，这类酶称为同裂酶。9.cDNA是以DNA为起始材料，经过复制得到的互补DNA。（ ）10.DNA的复制是全保留不连续复制。（ ）11.Western杂交可以检测外源DNA的导入与否。（ ）12.只有含粘性末端的DNA才可以被连接起来（ ）13.E.coli DNA连接酶只能催化双链DNA片断互补黏性末端之间的连接。（ ）14.质粒DNA进行电泳时，其三种构型中，开环DNA跑的最
19、快，共价闭环形DNA跑得最慢。（ ）15.一个基因表达载体的组成包括目的基因、启动子、终止子、标记基因等（ ）16.真核基因表达的调控在多个水平上进行：DNA水平的调控、转录水平调控、转录后水平调控、翻译水平调控、蛋白质加工水平的调控（ ）17.S1核酸酶可以降解双链DNA和RNA四、问答题1.根据识别切割序列的特点，限制性核酸内切酶可以分为哪几种类型，简述II型限制性核酸内切酶在基因工程实验中的重要意义。2. 一个理想的载体应具备那些条件？3.简述蓝白斑筛选的原理4.试述5RACE技术原理和方法。5.限制性核酸内切酶的活性受哪些因素影响？6.在序列5-CGAACATATGGAGT-3中含有一
20、个6bp的类限制性内切核酸酶的识别序列，该序列可能是什么? 并说明其原因？7.某一质粒载体具有Tetr和Kanr的表型，在Kan抗性基因内有一Bgl I的切点。现用Bgl I切割该载体进行基因克隆，问：(1)转化后涂皿时应加什么样的抗生素? (2)培养后长出的菌落具有什么样的抗性基因型? (3)如何利用抗性变化筛选到含有插入片段的重组体?8.DNA凝胶电泳中影响电泳迁移率的因素主要有哪些？9.简述PCR的原理和主要反应过程，并分析影响PCR扩增的影响因素。10.碱裂解法提取质粒DNA的原理，分析影响试验结果的各种可能因素。11.什么是星活性，产生星活性的因素可能有哪些？12.重组体分子的选择方法主要有哪些？并简单阐述其原理。13.以gt11构建cDNA文库，包装的噬菌体感染大肠杆菌后形成蓝色和无色的两种噬菌斑，请解释其原因。14.简述基因工程基本流程15.DNA末端修饰后在连接有哪些方法16.设计一个实验：让猪的生长激素基因在大肠杆菌中表达。第 15 页