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1、第第四四章章 酶酶学学测测定定技技术术同同工工酶酶一、概念-同工酶（isozyme，isoenzyme）同工酶是能催化相同化学反应，但因编码基因不同而致氨基酸序列不同，并呈现空间构象、理化性质、生物学性质以及器官分布和细胞内定位不同的一类酶。本质同工酶分子组成不同 DNA mRNA Protein 蛋白质蛋白质 结构域相同：功能相似结构域相同：功能相似分子组成不同：理化、生物学性质不同分子组成不同：理化、生物学性质不同 二、同工酶及亚型1.同工酶（isoenzyme）：由不同遗传基因编码的多肽链单体、纯聚体、或杂化体。2.同一基因的mRNA不同剪接本亚型：由同一基因，同一RNA，不同剪接本形成
2、的同工酶亚型3.不同修饰同工酶亚型：由同一基因，同一mRNA翻译生成的酶蛋白，经不同化学修饰形成的同工酶亚型。不同化学修饰：酰胺键水解、磷酸化、二硫键生成、肽键断裂和糖基的添加等。同工酶分类遗传性同工酶：（Genetic Origins of Enzyme Variants）非遗传性同工酶亚型：（Nongenetic Causes of Multiple Forms of Enzymes）三、同工酶及亚型的分析方法（一）电泳法:电荷不同（二）层析法（离子交换，亲和):电荷不同（三）免疫分析法：抗原抗体（四）动力学分析法：酶S,Km,I，最适 pH,热稳定性差异（五）蛋白酶水解法：表表 常用同工
3、酶（或亚型）的分析方法常用同工酶（或亚型）的分析方法方法方法同工酶（或亚型）的性质差异同工酶（或亚型）的性质差异同工酶、亚型同工酶、亚型电泳法电泳法（区带电泳、等电聚焦）（区带电泳、等电聚焦）电荷不同电荷不同所有同工酶、亚型所有同工酶、亚型层析法（离子交换，亲和）层析法（离子交换，亲和）电荷不同电荷不同CK,LD,ALP免疫分析法免疫分析法免疫抑制法免疫抑制法特异性抗体反应性不同特异性抗体反应性不同CK、LD、ACP免疫化学测定法免疫化学测定法（RIA、EIA、FIA、CLIA）特异性抗体反应性不同特异性抗体反应性不同CK、LD、ACP、ALP、AMY动力学分析法动力学分析法 底物特异性分析法
4、底物特异性分析法底物底物Km,亲和力不同亲和力不同ACP,CK,LD（-羟丁酸）羟丁酸）抑制剂分析法抑制剂分析法对小分子对小分子I的特异性抑制不同的特异性抑制不同LD（草酸），（草酸），ACP（L-酒石酸），酒石酸），ALP（尿素和（尿素和L-苯丙氨酸），苯丙氨酸），ChE（氟和可卡（氟和可卡因）因）pH分析法分析法最适最适pH不同不同AST热失活分析法热失活分析法热稳定性不同热稳定性不同ALP正常和几种病理状况时血清正常和几种病理状况时血清LD同工酶的琼脂糖凝同工酶的琼脂糖凝 胶电泳分离图谱胶电泳分离图谱临床常用的同工酶及其亚型检测的临床意义同工酶及其亚型同工酶及其亚型临床意义临床意义CKC
5、K同工酶同工酶急性心肌梗死时血清中急性心肌梗死时血清中CK-MBCK-MB急剧升高急剧升高,进行性进行性肌萎肌萎缩时缩时CK-MMCK-MM升升高高，神经系统疾病时，神经系统疾病时CK-BBCK-BB升高升高ASTAST同工酶同工酶心肌梗死是血清中心肌梗死是血清中ASTmASTm活性显著升高活性显著升高ALPALP同工酶同工酶胆疾病和恶性肿瘤的诊断胆疾病和恶性肿瘤的诊断GGTGGT同工酶同工酶原发性肝癌原发性肝癌时时GGTGGT-II-II显著升高显著升高AMYAMY同工酶同工酶 急性胰腺炎急性胰腺炎时时P-AMYP-AMY显著升高显著升高LDLD同工酶同工酶心肌梗死时心肌梗死时LD1LD1明
6、显增高明显增高,肝功能损伤时肝功能损伤时LD2LD2明显增高某些恶性肿瘤明显增高某些恶性肿瘤 时时,LD,LD亚基有向亚基有向M M亚基移行的趋势亚基移行的趋势ACPACP同工酶同工酶 前列腺疾病和恶性肿瘤的诊断前列腺疾病和恶性肿瘤的诊断糖原磷酸化酶糖原磷酸化酶(GP)(GP)同工同工酶酶 急性心肌梗死时急性心肌梗死时,血清血清GP-BBGP-BB显著升高显著升高芳香基硫酸酯酶芳香基硫酸酯酶(ARS)(ARS)同同工酶工酶 膀胱癌时尿中膀胱癌时尿中ARS-AARS-A和和ARS-BARS-B显著升高显著升高醛缩酶醛缩酶(ALD)(ALD)同工酶同工酶 原发性肝癌和消化道癌原发性肝癌和消化道癌ALD-AALD-A活性显著升高活性显著升高谷胱甘肽转移酶谷胱甘肽转移酶(GST)(GST)同同工酶工酶GSTGST-是肝细胞损伤的指标是肝细胞损伤的指标,GSTGST-对肺癌诊断具有重要价值对肺癌诊断具有重要价值谢 谢！