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1、九流式细胞仪原理及应用九流式细胞仪原理及应用CD4绝对计数的原理方法和质量控绝对计数的原理方法和质量控制制HIV感染中CD4+、CD8+T细胞测定的临床意义淋巴细胞淋巴细胞B B淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞CD19+CD19+NKNK细胞细胞细胞细胞CD3-CD16+56+CD3-CD16+56+T T淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞CD3+CD3+T T辅助辅助辅助辅助/诱导细胞诱导细胞诱导细胞诱导细胞CD3+CD4+CD3+CD4+T T抑制抑制抑制抑制/细胞毒性细胞细胞毒性细胞细胞毒性细胞细胞毒性细胞CD3+CD8+CD3+CD8+vv外外外外周周周周血血血血中中中中CD4+TCD4
2、+TCD4+TCD4+T淋淋淋淋巴巴巴巴细细细细胞胞胞胞的的的的数数数数量量量量是是是是HIVHIVHIVHIV感感感感染染染染疾疾疾疾病病病病分分分分期期期期、预预预预测测测测疾疾疾疾病病病病进进进进程程程程、制制制制定定定定抗抗抗抗病病病病毒毒毒毒治治治治疗疗疗疗和和和和预预预预防防防防机机机机会会会会性性性性感感感感染染染染方方方方案以及案以及案以及案以及评价治疗效果评价治疗效果评价治疗效果评价治疗效果的实验室标准指标。的实验室标准指标。的实验室标准指标。的实验室标准指标。2-6 weeksmean of 10 yearsAsymptomatic phaseFlu-likeDisease
3、Symptom-atic phaseAIDS10005002000CD4 T cells/m mlInfectionSeroconversionDeathCD4 T cell depletionHAARTCD4+TCD4+T细胞细胞细胞细胞临床阶段临床阶段临床阶段临床阶段A A 无症状或急性无症状或急性无症状或急性无症状或急性HIVHIV感感感感染或持续性全身淋巴结染或持续性全身淋巴结染或持续性全身淋巴结染或持续性全身淋巴结肿大肿大肿大肿大B B 出现症状，出现症状，出现症状，出现症状，不是不是不是不是A A或或或或C CC C 艾滋病指针性症艾滋病指针性症艾滋病指针性症艾滋病指针性症状状状状
4、500/ul500/ul（2929%）A1A1B1B1C1C1200-499/ul200-499/ul（14-28%14-28%）A2A2B2B2C2C2200/ul200/ul（1414%）A3A3B3B3C3C3 成人及青少年艾滋病分期标准（成人及青少年艾滋病分期标准（CDC，美国，美国，1993年）年）CD4200/ulCD4200/ul和和/或或出出现现艾艾滋滋病病指指针针性性症症状状（如如卡卡氏氏肺肺囊囊虫虫肺肺炎炎等等）时，就可定义为进入艾滋病期。如表中时，就可定义为进入艾滋病期。如表中A3A3，B3B3，C1-3C1-3期。期。判断判断判断判断HIVHIVHIVHIV感染者发生临
5、床合并症的可能性并进行预防感染者发生临床合并症的可能性并进行预防感染者发生临床合并症的可能性并进行预防感染者发生临床合并症的可能性并进行预防艾滋病诊断与治疗指导方案艾滋病诊断与治疗指导方案艾滋病诊断与治疗指导方案艾滋病诊断与治疗指导方案（试行，（试行，（试行，（试行，20022002年）年）年）年）CD4CD4计数（计数（/ul/ul）主要机会性感染的预防主要机会性感染的预防任意值任意值结核（皮试阳性）结核（皮试阳性）200200PCPPCP100100弓形体病（抗体阳性）弓形体病（抗体阳性）7575MACMAC5050CMVCMV（抗体阳性或血培养）隐球菌病（抗体阳性或血培养）隐球菌病组织胞
6、浆菌病球孢子菌病组织胞浆菌病球孢子菌病确定抗确定抗确定抗确定抗HIVHIVHIVHIV药物治疗开展的时机及进行疗效评价药物治疗开展的时机及进行疗效评价药物治疗开展的时机及进行疗效评价药物治疗开展的时机及进行疗效评价艾滋病诊断与治疗指导方案艾滋病诊断与治疗指导方案艾滋病诊断与治疗指导方案艾滋病诊断与治疗指导方案（试行，（试行，（试行，（试行，20022002年）年）年）年）病程病程CD4+TCD4+T淋巴细淋巴细胞胞病毒载量病毒载量建议建议症状期症状期任何值任何值任何值任何值治疗治疗无症状期无症状期CD4+TCD4+T细胞细胞200/mm3200/mm3200/mm3，但，但350/mm3300
7、0030000（bDNAbDNA）或）或55000(RT-PCR)55000(RT-PCR)建议治疗。另外还要根据建议治疗。另外还要根据CD4+TCD4+T细胞下降率和患者的细胞下降率和患者的愿望愿望无症状期无症状期CD4+TCD4+T细胞细胞350/mm3350/mm33000030000（bDNAbDNA）或）或55000(RT-PCR)55000(RT-PCR)建议延迟治疗观察。未经治建议延迟治疗观察。未经治疗者疗者3 3年发展至年发展至AIDS15%.AIDS15%.虽然虽然CD4+TCD4+T细胞计数是监测细胞计数是监测HIVHIV病程的评价工具，但是病程的评价工具，但是单独的单独的
8、CD4+TCD4+T细胞数减少不是细胞数减少不是HIVHIV感染的诊断检验。其它的感染的诊断检验。其它的免疫缺陷状况也可以有辅助性免疫缺陷状况也可以有辅助性T-T-淋巴细胞数量减少的结果淋巴细胞数量减少的结果:-丙球蛋白缺乏症丙球蛋白缺乏症-胸腺发育不全胸腺发育不全(DiGeorge(DiGeorge氏综合症氏综合症)-严重的联合免疫缺陷严重的联合免疫缺陷提提 示示CD4+T细细胞胞计计数的方法数的方法非非FCM 技技术术FCM 技技术术-自自动动化方法化方法-可靠性高可靠性高(变变异系数低异系数低)-精密度、准确度和可重复性高精密度、准确度和可重复性高-高通量高通量-金金标标准技准技术术优优
9、点点-设备设备昂昂贵贵-试剂试剂昂昂贵贵-需要熟需要熟练练技技术术人人员员操作操作缺点缺点-简单简单-低廉低廉优优点点-低通量低通量-难难于于质质控控缺点缺点仪器的选择仪器的选择1 1、中央级、省级、研究所、高校、医院：流式细胞、中央级、省级、研究所、高校、医院：流式细胞仪（仪（FACSCaliburFACSCalibur、Coulter)Coulter)2 2、地区级及示范区：专门的流式细胞计数仪（、地区级及示范区：专门的流式细胞计数仪（FACSCountFACSCount、Guava)Guava)3 3、现场及乡镇卫生院：（手工方法：如、现场及乡镇卫生院：（手工方法：如 Dynabeads
10、Dynabeads）4 4、除此之外，在不具备、除此之外，在不具备CD4CD4检测的实验室，检测的实验室，WHOWHO建议建议用总淋巴细胞来代替。（当总淋巴细胞小于用总淋巴细胞来代替。（当总淋巴细胞小于1000/ul1000/ul时，强烈预示时，强烈预示CD4CD4细胞小于细胞小于200/ul200/ul。非流式细胞技术非流式细胞技术n n免疫聚合磁珠免疫聚合磁珠 Dynabeads Dynabeads（利用光镜和免利用光镜和免疫荧光染色）疫荧光染色）n n细胞球细胞球 Cytosphere Cytosphere（利用计数板和光镜）利用计数板和光镜）Dynabeads技术计数技术计数CD4细胞
11、细胞n n原理原理n n用抗用抗CD4CD4单克隆抗体单克隆抗体(mAbs)(mAbs)包被的磁化粒子捕获与分包被的磁化粒子捕获与分离全血中离全血中CD4TCD4T淋巴细胞淋巴细胞n n方法方法n n将将125125 l l新鲜血液，放入新鲜血液，放入EDTAEDTA管，加管，加350350 lPBSlPBS，再，再加入加入2525 l l mAbsmAbs磁化悬浮粒子，在摇床磁化悬浮粒子，在摇床(Dynal(Dynal Mechnical Rotator)Mechnical Rotator)上置室温上置室温1010分钟混和，以便去掉血分钟混和，以便去掉血液中的单核细胞。磁化粒子用专门的磁性浓
12、度计分离，液中的单核细胞。磁化粒子用专门的磁性浓度计分离，并用并用PBSPBS洗涤洗涤2 2次，加入次，加入5050 l Lysingl Lysing溶液，着色，用溶液，着色，用epifluorescentepifluorescent显微镜计数。显微镜计数。n n价格：价格：3 3美元美元/人份人份流式细胞流式细胞术术（flow cytometry,FCM）流式细胞仪流式细胞仪BD FACSVantageBD-Calibur 对单个细胞理化特性进行多参数定量分析和分选 FCMFCM的的特点特点 n n保持细胞及细胞器或微粒的结构及功能不被破坏n n从分子水平获取多种信号n n对细胞进行定量分析
13、或纯化分选n n功能特点 （1 1）多参数定量分析每一个细胞多参数定量分析每一个细胞；（2 2）细胞分选；细胞分选；高纯度：高纯度：99%99%以上；以上；可分析小于可分析小于1/100001/10000比例的稀有细胞群；比例的稀有细胞群；单细胞克隆等。单细胞克隆等。（3）高通量（分析分选）分析150，000个/秒 分选100，000个/秒 流式细胞仪内部结构光学系统光学系统 激光光源激光光源激光光源激光光源光收集系统光收集系统光收集系统光收集系统液流系统液流系统流动室流动室流动室流动室 液流驱动系统液流驱动系统液流驱动系统液流驱动系统电子系统电子系统光电转换光电转换光电转换光电转换数据处理系
14、统数据处理系统数据处理系统数据处理系统细胞分选系统细胞分选系统流体动力学聚焦流动室激光聚焦1、液流系统包裹样本流使之位于喷嘴中心二色镜 1 2 3带通滤波片光电倍增管激光束细胞收集透镜前向散射光侧向散射光，荧光 光信号分离，导向，各探测通道PMT接收并转化为电信号。2、光学系统：激光光源、分色反光镜、光束成形器、透镜组、滤片、光电倍增管数据处理数据处理系统系统FSC SSC FL1 FL2 FL3对数对数 线性线性 线性线性 线性线性 对数对数脉冲处理，模数转换光信号电信号记录数据，显示结果（面积，峰高，宽度）基本工作原理基本工作原理n n非荧光信号颗粒度细胞大小散射光的测定散射光的测定散射光
15、信号区分裂解后的外周血细胞群荧光测量荧光测量荧光染料被激发而发射的光信号 多荧光标记胞内多种组分，实现多参数测量线性放大：信号强度变化范围较少、生物学线性过程对数放大：信号强度变化范围较大、光谱信号复杂自发荧光特异荧光特异荧光数据的显示与分析数据的显示与分析参数n nFSn nSSn nFL单参数直方图单参数直方图n n一维参数（荧光或散射光）一维参数（荧光或散射光）与颗粒技术（与颗粒技术（CountCount）构成，）构成，反映同样荧光强度的颗粒反映同样荧光强度的颗粒数量的多少数量的多少n n横坐标：光信号波长相对横坐标：光信号波长相对值（信道）值（信道）n n纵坐标：被测细胞的相对纵坐标：
16、被测细胞的相对数量数量数据显示方式数据显示方式n n双参数直方图双参数直方图n n点图点图n n二维等高图二维等高图：等高：等高线连接相同细胞数线连接相同细胞数的点的点n n密度图密度图n n假三维等高图假三维等高图三参数直方图三参数直方图流式细胞仪的多参数分析流式细胞仪的多参数分析n nRegionRegion设置设置 指在同指在同一张单参数或双参数一张单参数或双参数直方图上根据信号的直方图上根据信号的强弱划定分析区域，强弱划定分析区域，从而计算分析区域内从而计算分析区域内的细胞数量。的细胞数量。CD45 FITC(log)CD14 PE(log)G2n nGate设置 是指在某一张选定参数
17、的直方图上根据该图的细胞群分布选定其中想要分析的特定细胞群，并要求该样本所有其他参数组合的直方图只体现这群细胞的分布情况。双平台法：双平台法：单平台法：单平台法：流式细胞技术检测流式细胞技术检测CD4+T细胞细胞流式流式流式流式细细细细胞技胞技胞技胞技术术术术传统传统传统传统的的的的FCM:FCM:双平台法双平台法双平台法双平台法-需要两台需要两台仪仪器器-需要几个制需要几个制备备和分析步和分析步骤骤-分析能力低分析能力低-结结果受多个因素影响果受多个因素影响-昂昂贵贵传统传统的的FCM:单单平台法平台法-只需一台只需一台仪仪器器-较较少的制少的制备备和分析步和分析步骤骤-非常昂非常昂贵贵美国
18、美国美国美国CDC CDC 推荐推荐推荐推荐(2003)(2003)单平台测定CD4+T 细胞绝对数指南-FDA 批准的商批准的商业荧业荧光微球光微球计计数数试剂试剂-以以 CD45 设门设门-三或四色流式三或四色流式细细胞胞仪仪三色三色组组合合 1)CD3/CD4/CD452)CD3/CD8/CD453)CD3/CD19/CD45四色四色组组合合 1)CD45/CD3/CD4/CD82)CD45/CD3/CD19/CD16 和和/或或 CD56FACSCaliburTM 系系统统选选配配BDB Tritest/TruCOUNTTM 试试管管WWW.BDBIOSCIENCES.COM样本制备(
19、Lyse/No-wash 技术)50 L 抗凝全血抗凝全血 涡旋室温避光孵育15分钟获获取和分析取和分析20 L TriTEST 试剂试剂450 L FACS溶血液溶血液(1x)TruCOUNT TM 试试管管TriTEST 试剂试剂:a)CD3/CD4/CD45,b)CD3/CD8/CD45室温避光孵育15分钟 细胞亚群的细胞获取数 Beads 总量 细胞亚群的 X =Beads获取数 样本量(l)绝对数（细胞数/l）CD45 PerCPSSCBDB MultiSETTM 软软件件MMWR,2003:52(RR02);1-13CD4绝对计数结果绝对计数结果内置微处理器实现数据自动分析自动打印
20、质控与病人的检测结果简单易用的系统控制面板配套的样本制备工作台简捷的样本制备方法，避免细胞损失BDB FACSCountTM 系系统统仪器性能n n样本稳定性n n制备后室温(2025 0C)储存48小时n n全血稳定性n n采集后室温(2025 0C)储存48小时仪器性能范围n nCD4+:50-2000个细胞/uLn nCD8+:100-2000个细胞/uL n nCD3+:100-3500个细胞/uL检测试剂盒组成（50人份/盒）n n荧光试剂n n2个组合/人份n nCD4PE/CD3PE-CY5CD4PE/CD3PE-CY5n nCD8PE/CD3PE-CY5CD8PE/CD3PE-
21、CY5n n固定液n n效期 28 0C储存6个月n n质控试剂盒（50人份/盒）n n零，低，中，高 4种靶值微球n n效期 28 0C储存1个月使用简单方便n n安装简便，一体式设计，无需外源计算机n n即开即用，无需调试校准n n全自动软件自动识别分析淋巴细胞群体n n自动错误报警实验报告n nCD3CD3n nCD4CD4n nCD8CD8n nCD4/CD8CD4/CD8n nCD4/CD3CD4/CD3n nCD8/CD3CD8/CD3报告项目自动设定分析区域自动设定分析区域CD3 SizeCD3 CD4内参微球内参微球设定分析群体设定分析群体CD3 CD4CD3 CD8CD8 管
22、分析管分析绝对计数公式绝对计数公式CD4 细胞数细胞数内参微球数内参微球数X#获取微球数获取微球数 m mL 全血体积全血体积=CD4 细胞细胞m mL 全血全血举例举例#2#1X#获取微球数获取微球数 m mL 全血全血=CD4 细胞细胞m mL 全血全血CD3 CD4绝对计数计算绝对计数计算CD4质控微球质控微球绝对计数计算绝对计数计算CD4+T细胞检测的质量控制质量控制质量控制是指在每一次实验过程中为确保实验工作是指在每一次实验过程中为确保实验工作正常进行而必须采取的各种措施。正常进行而必须采取的各种措施。n n实验前质量控制采集标本前病人的准备；采集标本前病人的准备；正确的标本采集方法
23、；正确的标本采集方法；准确及时的运送标本；准确及时的运送标本；实验前正确地处理和保存标本。实验前正确地处理和保存标本。n n实验中质量控制质控品的准备；质控品的准备；试剂的评价选择试剂的评价选择 仪器的校准仪器的校准 开展开展Levey-Jennings Levey-Jennings 质控图质控（或质控图质控（或“即刻法即刻法”质控）。质控）。n n实验后质量控制实验后准确填写检验结果；实验后准确填写检验结果；及时发出报告；及时发出报告；正确地解释检验结果的临床意义正确地解释检验结果的临床意义 文件管理文件管理 实验前质量控制实验前质量控制特别注意n n运输温度：室温n n运输时间：双平台6小
24、时，单平台24小时n n样品处理：专人，及时，规范。实验中质量控制实验中质量控制n n质控品：质量和价格，长期使用n n试剂选择：不推荐混用不同厂家的试剂n n仪器校准：厂家定期，实验室n n质控图：每天要做淋巴淋巴细细胞免疫分型的胞免疫分型的质质控品控品室间质评室内质控International Program for Quality Assessment ProgramType of sampleNumber of participationsSendouts per yearSpecimens per sendoutCostStandardization for Lymphocyte I
25、mmunophenotypingandWhole blood HIV-Whole blood HIV-(some CD4 depleted)Whole blood HIV-(some CD4 depleted)Whole blood HIV-,HIV+UKNEQASQASICAPNIAID DAIDS1630064223515070080$820No cost$650No cost我我 国国全国CD4+T淋巴细胞检测实验室能力验证使用使用稳稳定的人血定的人血对对照作照作为为淋巴淋巴细细胞免疫分型的内部胞免疫分型的内部质质量量监监控控产品名类型已知检测范围制造商Multi-Check全血YesB
26、DBCD-Chex Plus全血YesStreck LaboratoriesCD-Chex全血YesStreck Laboratories(BDB)(BDB)FluoroTrol全血YesBioErgonomicStatusFlow全血YesR&DCyto-Trol单核细胞(冻干)YesCoulterTruCOUNT controlsn n对整个绝对计数过程的质控，结果超出标对整个绝对计数过程的质控，结果超出标准值的时候，提示吸样过程、绝对计数珠、准值的时候，提示吸样过程、绝对计数珠、仪器等出现问题。仪器等出现问题。流式细胞术检测的质控图流式细胞术检测的质控图试剂选择试剂选择n n不同厂家的试
27、剂在抗原决定族的特异性(F/P和蛋白纯度)是不同的,不建议使用组合不同厂家的试剂.仪器校准校准仪器校准校准n n移液器校准：n n流式细胞仪校准：移液器校准 时间：一年至少应该标定或校准二次时间：一年至少应该标定或校准二次 方法：吸取有色溶液进行光谱分析、方法：吸取有色溶液进行光谱分析、*吸取蒸馏水称量校准、吸取蒸馏水称量校准、吸取放射性同位素计数校准吸取放射性同位素计数校准 使用配套校准盒等等。使用配套校准盒等等。设备维修与校准移液器规格移液器规格标定使用蒸馏水量标定使用蒸馏水量要求重量范围要求重量范围 0.5-10 0.5-10 l l 2 2 l l 1.75-2.25 mg1.75-2
28、.25 mg 5-40 5-40 l l 10 10 l l 9.8-10.2 mg9.8-10.2 mg 40-200 40-200 l l 70 70 l l 69.4-70.6 mg 69.4-70.6 mg 200-1000 200-1000 l l 300 300 l l 298.0-302.0 mg298.0-302.0 mg 1-5 ml1-5 ml 2000 2000 l l 1990.0-2010.0 mg1990.0-2010.0 mg 2-10 ml2-10 ml 3500 3500 l l 3485.0-3515.0 mg3485.0-3515.0 mg*吸取蒸馏水称量
29、v 仪仪器参数可以由器参数可以由FACSComp 和和CaliBRITE TM 微球微球,仪仪器器调调控控软软件自件自动设动设置置.FACSCalibur校准校准 流式细胞术检测的质控图流式细胞术检测的质控图流式细胞术检测的质控图流式细胞术检测的质控图实验后质量控制实验后质量控制n n实验者填写报告实验者填写报告n n负责人审阅报告负责人审阅报告n n结果报告备案结果报告备案n n正确解释结果正确解释结果n n操作者的技术操作者的技术实验后质量控制实验后质量控制n n保留所有原始、最终、和修正后报告n n定期做计算机备份n n定期抽检检验申请和结果报告n n定期考核检测人员能力实验后质量控制实
30、验后质量控制n n培训提高人员能力n n实验人员实验人员实验人员实验人员应该具有应该具有HIVHIV以及以及AIDSAIDS的相关知识。要定期培的相关知识。要定期培训提高专业能力。训提高专业能力。n n实验室管理人员实验室管理人员实验室管理人员实验室管理人员 对实验室检验人员定期作出评价，包对实验室检验人员定期作出评价，包括工作的准确性、工作效率、操作的安全性和职业道德括工作的准确性、工作效率、操作的安全性和职业道德n n不建议经常更换操作人员。不建议经常更换操作人员。实验后质量控制实验后质量控制实验记录和文件管理实验记录和文件管理 记录详细记录详细如：记录实验室温度、试剂厂名称和批号。如：记
31、录实验室温度、试剂厂名称和批号。详细的记录是分析、统计、总结的基础。详细的记录是分析、统计、总结的基础。文件和试验记录存档文件和试验记录存档时间：时间：一般一般3 35 5年年保存：按一定方式编号，保存：按一定方式编号，建立借阅制度，建立借阅制度，专人保管专人保管 完整资料将为科研和法律诉讼提供可靠的证据。完整资料将为科研和法律诉讼提供可靠的证据。CD4T细胞检测文件和文件管理（1 1）标准操作程序文件）标准操作程序文件(SOP)(SOP)（2 2）实验原始记录表）实验原始记录表 （3 3）CD4 T CD4 T 细胞检测程序细胞检测程序（4 4）填写检测结果表）填写检测结果表 （5 5）标本
32、的登记记录）标本的登记记录 除除按按照照HIVHIV检检测测规规范范要要求求外外，CD4TCD4T淋淋巴巴细细胞胞检检测测要要记记录录采采血血时时间间和和使使用用抗抗凝凝剂剂的的名名称称，运运输输温度等。温度等。CD4T细胞检测文件和文件管理（6 6 6 6）建立实验室安全措施）建立实验室安全措施）建立实验室安全措施）建立实验室安全措施 参见参见规范规范（7 7 7 7）文件存档）文件存档）文件存档）文件存档 原始记录，原始记录，热敏打印结果不易保留，可复印一份保留。热敏打印结果不易保留，可复印一份保留。计算机保留计算机保留 仪器设备维修和校准记录仪器设备维修和校准记录 重要记录都应该妥善存档
33、保存重要记录都应该妥善存档保存1515年以上。年以上。n nCD4CD4绝对数产生误差的可能性绝对数产生误差的可能性13%(CD4200/ul13%(CD4200/uln n血球记数仪血球记数仪WBCWBC变异系数变异系数(CV)9.3%-17.6).(CV)9.3%-17.6).自动记数淋巴细胞自动记数淋巴细胞CV 1.9%-5.3%CV 1.9%-5.3%n n正常样品正常样品 CD4+TCD4+T细胞百分比率和绝对值细胞百分比率和绝对值5.1%7.0%5.1%7.0%流式细胞术检测流式细胞术检测CD4CD4和和CD8TCD8T细胞的经验细胞的经验流式细胞仪维护流式细胞仪维护n n日常维护
34、、月维护日常维护、月维护异常细胞群体分析异常细胞群体分析染料量染料量CD4+T细胞实验室检测技术n n培训目的培训目的n n掌握应用流式细胞仪进行掌握应用流式细胞仪进行CD4+TCD4+T细胞检测的原理、细胞检测的原理、操作及结果分析。操作及结果分析。n n掌握应用流式细胞仪进行掌握应用流式细胞仪进行CD4+TCD4+T细胞检测的生物安细胞检测的生物安全保障措施。全保障措施。n n掌握应用流式细胞仪进行掌握应用流式细胞仪进行CD4+TCD4+T细胞检测的质量保细胞检测的质量保障措施。障措施。n n熟悉流式细胞仪的仪器校准。熟悉流式细胞仪的仪器校准。培训应用仪器培训应用仪器FACSCountFA
35、CSCalibur谢 谢！进入夏天，少不了一个热字当头，电扇空调陆续登场，每逢此时，总会想起进入夏天，少不了一个热字当头，电扇空调陆续登场，每逢此时，总会想起那一把蒲扇。蒲扇，是记忆中的农村，夏季经常用的一件物品。记忆中的故那一把蒲扇。蒲扇，是记忆中的农村，夏季经常用的一件物品。记忆中的故乡，每逢进入夏天，集市上最常见的便是蒲扇、凉席，不论男女老少，个个手持乡，每逢进入夏天，集市上最常见的便是蒲扇、凉席，不论男女老少，个个手持一把，忽闪忽闪个不停，嘴里叨叨着一把，忽闪忽闪个不停，嘴里叨叨着“怎么这么热怎么这么热”，于是三五成群，聚在大树，于是三五成群，聚在大树下，或站着，或随即坐在石头上，手持
36、那把扇子，边唠嗑边乘凉。孩子们却在周下，或站着，或随即坐在石头上，手持那把扇子，边唠嗑边乘凉。孩子们却在周围跑跑跳跳，热得满头大汗，不时听到围跑跑跳跳，热得满头大汗，不时听到“强子，别跑了，快来我给你扇扇强子，别跑了，快来我给你扇扇”。孩。孩子们才不听这一套，跑个没完，直到累气喘吁吁，这才一跑一踮地围过了，这时子们才不听这一套，跑个没完，直到累气喘吁吁，这才一跑一踮地围过了，这时母亲总是，好似生气的样子，边扇边训，母亲总是，好似生气的样子，边扇边训，“你看热的，跑什么？你看热的，跑什么？”此时这把蒲扇，此时这把蒲扇，是那么凉快，那么的温馨幸福，有母亲的味道！蒲扇是中国传统工艺品，在是那么凉快，
37、那么的温馨幸福，有母亲的味道！蒲扇是中国传统工艺品，在我国已有三千年多年的历史。取材于棕榈树，制作简单，方便携带，且蒲扇的表我国已有三千年多年的历史。取材于棕榈树，制作简单，方便携带，且蒲扇的表面光滑，因而，古人常会在上面作画。古有棕扇、葵扇、蒲扇、蕉扇诸名，实即面光滑，因而，古人常会在上面作画。古有棕扇、葵扇、蒲扇、蕉扇诸名，实即今日的蒲扇，江浙称之为芭蕉扇。六七十年代，人们最常用的就是这种，似圆非今日的蒲扇，江浙称之为芭蕉扇。六七十年代，人们最常用的就是这种，似圆非圆，轻巧又便宜的蒲扇。蒲扇流传至今，我的记忆中，它跨越了半个世纪，圆，轻巧又便宜的蒲扇。蒲扇流传至今，我的记忆中，它跨越了半个世纪，也走过了我们的半个人生的轨迹，携带着特有的念想，一年年，一天天，流向长也走过了我们的半个人生的轨迹，携带着特有的念想，一年年，一天天，流向长长的时间隧道，袅长的时间隧道，袅结束