第七章-自动分析技术微型全分析系统优秀PPT.ppt

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1、7.1导言导言传统的化学分析方法是手工分析,至今仍被广泛应用。手工分析传统的化学分析方法是手工分析,至今仍被广泛应用。手工分析的缺点是手续繁杂、速度慢,分析结果与分析人员的技术水平和的缺点是手续繁杂、速度慢,分析结果与分析人员的技术水平和娴熟程度有关,还不行避开地使分析人员长时间接触化学药品,娴熟程度有关,还不行避开地使分析人员长时间接触化学药品,严峻影响健康。严峻影响健康。为了克服这些缺点,几十年来,人们依据不同的分析要求,模拟为了克服这些缺点,几十年来,人们依据不同的分析要求,模拟手工分析的程序设计了各种各样的机械程序分析装置,用机械操手工分析的程序设计了各种各样的机械程序分析装置,用机械

2、操作代替手工操作,给分析工作者减轻了很多负担,分析速度、准作代替手工操作,给分析工作者减轻了很多负担,分析速度、准确度、精度也有了确定的提高。但这类程序分析器一般只适于分确度、精度也有了确定的提高。但这类程序分析器一般只适于分析一两种特定组分,通用性差。析一两种特定组分,通用性差。1950s,“连续流淌分析连续流淌分析”技术发展起来了。它的基本方法是把各技术发展起来了。它的基本方法是把各种化学分析所要用的试剂和试样按确定的依次和比例用管道和种化学分析所要用的试剂和试样按确定的依次和比例用管道和泵输送到确定的反应区域,进行混合,完成化学反应,最终经检泵输送到确定的反应区域,进行混合,完成化学反应

3、,最终经检测器检测并由记录仪显示分析结果,实现了管道化的自动连续分测器检测并由记录仪显示分析结果,实现了管道化的自动连续分析。但这些分析仍建立在化学平衡的基础上,速度受到限制。析。但这些分析仍建立在化学平衡的基础上,速度受到限制。丹麦技术高校的丹麦技术高校的J.Ruzicka 和和E.H.Hansen于于1975年提出了流淌注年提出了流淌注射分析射分析(Flow Injection Analysis,FIA)的新概念。把试样溶液直的新概念。把试样溶液直接以接以“试样塞试样塞”的形式注入到管道的试剂载流中,不需反应进行完的形式注入到管道的试剂载流中,不需反应进行完全,就可以进行检测。摆脱了传统的

4、必需在稳态条件下操作的观全,就可以进行检测。摆脱了传统的必需在稳态条件下操作的观念,提出化学分析可在非平衡的动态条件下进行,从而大大提高念,提出化学分析可在非平衡的动态条件下进行,从而大大提高了分析速度。一般可达每小时进样了分析速度。一般可达每小时进样100300次。从样品注入到检次。从样品注入到检测器响应的时间间隔一般小于测器响应的时间间隔一般小于1 min。设备较简洁并敏捷,操作简。设备较简洁并敏捷,操作简便,启动和关机时间仅需几分钟,因此便,启动和关机时间仅需几分钟,因此FIA技术不仅适于大批量技术不仅适于大批量的常规分析,也适于少量特别规样品的自动测定。的常规分析,也适于少量特别规样品

5、的自动测定。FIA是一种良好的微量分析技术,一般每次测定仅需是一种良好的微量分析技术,一般每次测定仅需25100 L样品溶液。由于样品与试剂用量甚微,又在封闭系统中完样品溶液。由于样品与试剂用量甚微,又在封闭系统中完成测定,因此极大地降低了对人体的毒害和对环境的污染。成测定,因此极大地降低了对人体的毒害和对环境的污染。现代分析化学的发展趋势是向现场、实时、动态、现代分析化学的发展趋势是向现场、实时、动态、高灵敏度、高选择性、高通量的方向发展!高灵敏度、高选择性、高通量的方向发展!1990s初期发展起来的微全分析系统初期发展起来的微全分析系统(微流控芯片、生微流控芯片、生物芯片和芯片试验室物芯片

6、和芯片试验室)为实现上述目标供应了可能性。为实现上述目标供应了可能性。7.2流淌注射分析流淌注射分析7.2.1 流淌注射分析的基本原理流淌注射分析的基本原理7.2.1.1 受控扩散和定时重现受控扩散和定时重现流淌注射分析常在对流和径向扩散两种分散共存的状况下进行。流淌注射分析常在对流和径向扩散两种分散共存的状况下进行。当样品通过流通池时,检测器所记录的是连续变更的信号,可当样品通过流通池时,检测器所记录的是连续变更的信号,可以是吸光度,电极电势或其他物理参数,因而不须要达到化学以是吸光度,电极电势或其他物理参数,因而不须要达到化学平衡。平衡。图图7.1 对流和扩散作用对流和扩散作用(a)无分散

7、;无分散;(b)对流引起的分散;对流引起的分散;(c)对流和径向扩散引起对流和径向扩散引起的分散;的分散;(d)径向扩散引起的分散径向扩散引起的分散 例如,以分光光度法测定例如,以分光光度法测定Cl-,所基于的反应是:,所基于的反应是:图图7.2 流淌注射测定流淌注射测定Cl-(a)流路设计图;流路设计图;(b)5-75 gmL-1的平行测定;的平行测定;(c)30 gmL-1和和75 gmL-1样品的快速扫描。样品的快速扫描。这些试验清晰地显示了这些试验清晰地显示了FIA的基本特点:在样品通过分析流路的基本特点:在样品通过分析流路时,以完全相同的方法依次处理全部的样品。即对一个样品如时,以完

8、全相同的方法依次处理全部的样品。即对一个样品如何处理,对其他任何样品也以完全相同的方法进行处理。流淌何处理,对其他任何样品也以完全相同的方法进行处理。流淌注射体系中精确体积样品的注入、重现和精确的定时进样以及注射体系中精确体积样品的注入、重现和精确的定时进样以及从注入点到检测点体系的完全相同的操作(所谓限制或可控分从注入点到检测点体系的完全相同的操作(所谓限制或可控分散),形成注入样品的浓度梯度,从而产生瞬间的、但可精确散),形成注入样品的浓度梯度,从而产生瞬间的、但可精确重现的记录信号,使得流路中的任何一点都能像稳态一样精确重现的记录信号,使得流路中的任何一点都能像稳态一样精确测量。一般用峰

9、值作为分析信号,可以获得较高的灵敏度。测量。一般用峰值作为分析信号,可以获得较高的灵敏度。7.2.1.2 分散系数分散系数为了合理地设计为了合理地设计FIA体系,须要知道原始样品溶液在它流到检测体系,须要知道原始样品溶液在它流到检测器的途中稀释的程度,以及从样品注入到读数消耗了多长时间。器的途中稀释的程度,以及从样品注入到读数消耗了多长时间。定义分散系数定义分散系数(dispersion coefficient,D)为为D c0/c (D 0)(7.1)式中式中c0为注入样品中分析物的浓度,为注入样品中分析物的浓度,c为检测器中分析物的浓度。为检测器中分析物的浓度。分散系数主要受三种相互作用且

10、可以限制的变量的影响,即样品分散系数主要受三种相互作用且可以限制的变量的影响,即样品体积、管的长度和流淌速度。体积、管的长度和流淌速度。设计设计FIAFIA体系时,需依据试验目的综合考虑各种因素的影响,以体系时,需依据试验目的综合考虑各种因素的影响,以确定最佳流路。例如,建立的确定最佳流路。例如,建立的FIAFIA系统是用于常规大批量分析的,系统是用于常规大批量分析的,那么提高分析速度、增加进样频率就是要考虑的主要方面,就应那么提高分析速度、增加进样频率就是要考虑的主要方面,就应当削减进样体积,缩短管长,提高流速。当削减进样体积,缩短管长,提高流速。分散系数大致可分为分散系数大致可分为4 4种

11、状况:有限的(种状况:有限的(D=13D=13)、中度的()、中度的(D=3D=31010)、高度的()、高度的(D10D10)以及减小的()以及减小的(D1D1)。相应设计的)。相应设计的FIAFIA体体系已被用于各种各样的分析任务。当注入的样品以未被稀释的形系已被用于各种各样的分析任务。当注入的样品以未被稀释的形式被运载到检测器时,接受的是有限分散,也就是将式被运载到检测器时,接受的是有限分散,也就是将FIAFIA体系用体系用作将样品严格而精确地运载到检测装置(如离子选择电极、原子作将样品严格而精确地运载到检测装置(如离子选择电极、原子吸取分光光度计等)的工具。当待测物必需与载液混合并发生

12、反吸取分光光度计等)的工具。当待测物必需与载液混合并发生反应,以形成要检测的产物时接受中度分散。只有当样品必需被稀应,以形成要检测的产物时接受中度分散。只有当样品必需被稀释到测量范围内时才应用高度分散。减小的分散意味着检测的样释到测量范围内时才应用高度分散。减小的分散意味着检测的样品浓度高于注入的样品浓度,即发生了在线预浓缩(例如通过离品浓度高于注入的样品浓度,即发生了在线预浓缩(例如通过离子交换柱或经过共沉淀等)。子交换柱或经过共沉淀等)。7.2.2 流淌注射分析仪的基本组成流淌注射分析仪的基本组成FIA仪一般由流体驱动单元、进样阀、反应管道和仪一般由流体驱动单元、进样阀、反应管道和检测器组

13、成。检测器组成。7.2.2.1 流体驱动单元流体驱动单元图图7.3 单管路蠕动泵示意图单管路蠕动泵示意图在流淌注射体系中,最常见的是用蠕动泵驱动溶液。图在流淌注射体系中,最常见的是用蠕动泵驱动溶液。图7.37.3表明表明了蠕动泵的操作原理。了蠕动泵的操作原理。蠕动泵一般都有蠕动泵一般都有810810个排列成圆圈的滚轴,通过转动的滚轴将个排列成圆圈的滚轴,通过转动的滚轴将液体压进塑料或橡胶管。流速由马达的转速和管子的内径限制。液体压进塑料或橡胶管。流速由马达的转速和管子的内径限制。若固定蠕动泵的旋转速度若固定蠕动泵的旋转速度,流速就由每个管子的内径确定。商品流速就由每个管子的内径确定。商品化的管

14、子具有化的管子具有0.254mm0.254mm的内径,允许流速最小为的内径,允许流速最小为0.0005 mL/min0.0005 mL/min,最大为最大为40 mL/min40 mL/min。蠕动泵可以进行几个管子的同时操作,特殊。蠕动泵可以进行几个管子的同时操作,特殊适于应用多种试剂但又不能预先混合的状况。适于应用多种试剂但又不能预先混合的状况。FIAFIA也可以用活塞也可以用活塞泵,但价格较贵,且只允许单流路传送,对于多路管线,则需泵,但价格较贵,且只允许单流路传送,对于多路管线,则需几个单独的泵。几个单独的泵。7.2.2.2 进样阀进样阀进样阀进样阀(valve for injecti

15、on)又称采样阀、注入阀或注射阀。用又称采样阀、注入阀或注射阀。用得最多、且效果最令人满足的是类似于高效液相色谱(得最多、且效果最令人满足的是类似于高效液相色谱(HPLC)中所用的旋转式六通阀。注入样品的体积可以为中所用的旋转式六通阀。注入样品的体积可以为5 200 L,典,典型的是型的是1030 L,用具有适当长度和内径的外部环管计量。这,用具有适当长度和内径的外部环管计量。这种种“塞式塞式”注入的进样方式对载流流淌干扰很小,取样和注入过注入的进样方式对载流流淌干扰很小,取样和注入过程均可精确重复。程均可精确重复。7.2.2.3 反应管道反应管道在在FIA管线中所用的导管多数是由细孔径的聚乙

16、烯管和聚四氟乙管线中所用的导管多数是由细孔径的聚乙烯管和聚四氟乙烯管组成,典型的内径为烯管组成,典型的内径为0.50.8 mm。反应管道。反应管道(reaction pipeline)通常是盘围着的,可以增加径向扩散、减小轴向扩散,减弱试样塞通常是盘围着的,可以增加径向扩散、减小轴向扩散,减弱试样塞增宽的程度而导致更对称的峰,获得较高的灵敏度,而且可以提高增宽的程度而导致更对称的峰,获得较高的灵敏度,而且可以提高进样频率。假如在反应管道内填充直径为管道内径进样频率。假如在反应管道内填充直径为管道内径60%的玻璃球,的玻璃球,则称为单珠串反应器,用这种管道可以得到特别对称的峰形,而分则称为单珠串

17、反应器,用这种管道可以得到特别对称的峰形,而分散程度比同规格内径的敞口直管反应器的分散度小散程度比同规格内径的敞口直管反应器的分散度小10倍。倍。为了连接管道,并使液流按须要分支或集合,常常运用被称为为了连接管道,并使液流按须要分支或集合,常常运用被称为“化化学块学块”或或“功能组合块功能组合块”的装置。在的装置。在“化学块化学块”的管道连接处可以产生的管道连接处可以产生“径向效应径向效应”,使试样与试剂有效地混合,因而提高进样频率和分析,使试样与试剂有效地混合,因而提高进样频率和分析灵敏度。灵敏度。7.2.2.4 检测器检测器FIA事实上可以与任何类型的检测器事实上可以与任何类型的检测器(p

18、robe unit)相匹配相匹配,这也是这也是FIA取得很大成功的缘由之一。例如取得很大成功的缘由之一。例如AAS、AES、分光光度计、分光光度计、荧光光度计、电化学系统、折射仪等。荧光光度计、电化学系统、折射仪等。带流通式液槽的分光光度计检测器是带流通式液槽的分光光度计检测器是FIA中用得最多的。流通池中用得最多的。流通池和一般吸取池的区分在于:流通池是动态测定,吸取池是静态测和一般吸取池的区分在于:流通池是动态测定,吸取池是静态测定。除了为获得确定的灵敏度而要求有足够的光程外,还要求流定。除了为获得确定的灵敏度而要求有足够的光程外,还要求流通池体积尽可能小,以便削减载流量、试剂量、试样量,

19、并提高通池体积尽可能小,以便削减载流量、试剂量、试样量,并提高分析速度。在液体流通的区域内要避开死角,以避开试样残余液分析速度。在液体流通的区域内要避开死角,以避开试样残余液滞留于死角区影响重现性,或截留气泡而干扰测定。滞留于死角区影响重现性,或截留气泡而干扰测定。下图为两种常用的玻璃或石英流通池。然而,用泵输送载流通下图为两种常用的玻璃或石英流通池。然而,用泵输送载流通过分光光度计的做法远不如把光束从分光光度计引入流淌注射过分光光度计的做法远不如把光束从分光光度计引入流淌注射分析系统,然后再返回光度计更为合理。因而在最近的设计中,分析系统,然后再返回光度计更为合理。因而在最近的设计中,广泛地

20、运用了光导纤维。这样,可以将流通池和微管道结合在一广泛地运用了光导纤维。这样,可以将流通池和微管道结合在一起,进行吸光度测定或荧光检测。起,进行吸光度测定或荧光检测。图图7.4 发光光度法中的流通池发光光度法中的流通池(a)固定在多数商品光度计上的固定在多数商品光度计上的Hellma池;池;(b)Z型池,其中型池,其中A为透亮窗,并为聚四氟为透亮窗,并为聚四氟乙烯池体,乙烯池体,C为池套,为池套,CH为入口通道。为入口通道。图图7.5 离子选择性电极流通池离子选择性电极流通池(a)射流壁式结构流通池;射流壁式结构流通池;(b)梯流式结构梯流式结构流通池流通池7.2.3 FIA技术与应用技术与应

21、用7.2.3.1 用于重复的和精确的样品传送(有限分散的应用)用于重复的和精确的样品传送(有限分散的应用)由于由于FIA固有的严格定时性,可以用此项技术将给定的样品精确固有的严格定时性,可以用此项技术将给定的样品精确而重复地传递到检测器,从而保证每一个测量循环过程中全部的而重复地传递到检测器,从而保证每一个测量循环过程中全部的条件严格保持一样。条件严格保持一样。例如,当火焰原子吸取光谱、原子放射光谱或电感耦合等离子体例如,当火焰原子吸取光谱、原子放射光谱或电感耦合等离子体原子放射光谱与原子放射光谱与FIA结合时,样品的等分试样被干脆吸入火焰或结合时,样品的等分试样被干脆吸入火焰或等离子体等离子

22、体,这些分析仪器的性能就会获得改善,且在某些状况下这些分析仪器的性能就会获得改善,且在某些状况下被大大加强。与传统的样品溶液吸入法相比,可以提高进样频率,被大大加强。与传统的样品溶液吸入法相比,可以提高进样频率,进样速率可达进样速率可达300样样/h。更重要的是,在一般吸入一个样品的时间。更重要的是,在一般吸入一个样品的时间内可以分别注入两份样品,这意味着内可以分别注入两份样品,这意味着FIA法不仅能提高精度,也能法不仅能提高精度,也能改善精确度。另一个优点是样品与检测器接触的时间特别短,其余改善精确度。另一个优点是样品与检测器接触的时间特别短,其余的时间可以用载液清洗检测器。这意味着有高的清

23、洗的时间可以用载液清洗检测器。这意味着有高的清洗-进样比,因进样比,因此可以大大地削减或消退由高浓度盐造成的燃烧器堵塞的机会。此可以大大地削减或消退由高浓度盐造成的燃烧器堵塞的机会。7.2.3.2 FIA7.2.3.2 FIA转换技术(中度分散的应用)转换技术(中度分散的应用)FIAFIA转换技术转换技术(conversion techniques)(conversion techniques)可以被定义为:借助适当可以被定义为:借助适当的样品预处理、试剂生成或基体改性,通过动力学限制的化学的样品预处理、试剂生成或基体改性,通过动力学限制的化学反应使不能被检测的物质转化成可被检测的成分的过程。

24、反应使不能被检测的物质转化成可被检测的成分的过程。在这类在这类FIAFIA体系中,分散应当足够快,以使样品和试剂部分混体系中,分散应当足够快,以使样品和试剂部分混合,发生反应,但又不过度分散,以免不必要的稀释待测物,合,发生反应,但又不过度分散,以免不必要的稀释待测物,使检测灵敏度降低。多数使检测灵敏度降低。多数FIAFIA步骤是基于中度分散,因为待测步骤是基于中度分散,因为待测物必需经验某种形式的智能物必需经验某种形式的智能“转化转化”。说明此方法应用的例子是在临床化学中有意义的硫氰酸盐的测定。说明此方法应用的例子是在临床化学中有意义的硫氰酸盐的测定。除了吸烟者外,存在于人体的硫氰酸盐浓度是

25、极低的。硫氰酸盐除了吸烟者外,存在于人体的硫氰酸盐浓度是极低的。硫氰酸盐在人体中的半衰期大约是在人体中的半衰期大约是14天,因此通过体液(唾液、血液和尿天,因此通过体液(唾液、血液和尿液)分析就很简洁区分吸烟者和非吸烟者。一个测定硫氰酸盐的液)分析就很简洁区分吸烟者和非吸烟者。一个测定硫氰酸盐的快速而简便的快速而简便的FIA方法是基于以下的反应:方法是基于以下的反应:产物生成快速,摩尔吸光系数很高,但随后就褪色,寿命约产物生成快速,摩尔吸光系数很高,但随后就褪色,寿命约10s。因此在生色最大的那一刻读数很重要。所用的因此在生色最大的那一刻读数很重要。所用的FIA系统示于图系统示于图7.6。样品

26、(样品(50 L唾液)被注入到水载流中,随后与试剂唾液)被注入到水载流中,随后与试剂5-Br-PADAP2-(5-溴溴-2-吡啶偶氮吡啶偶氮)-5-二乙氨基酚二乙氨基酚合并,再和氧化剂重铬酸钾合合并,再和氧化剂重铬酸钾合并,最终的混合体系中酸的浓度约为并,最终的混合体系中酸的浓度约为2mol/L。由于。由于FIA可重现的可重现的定时性,故可定量检测亚稳态的有色产物。定时性,故可定量检测亚稳态的有色产物。图图7.6 用于测定亚稳态反应产物的用于测定亚稳态反应产物的FIA流程图流程图图图7.7 用图用图7.6所示的所示的FIA系统获得到硫氰酸盐信号系统获得到硫氰酸盐信号在在FIA系统中可以通过多相

27、转换技术提高分析测定的系统中可以通过多相转换技术提高分析测定的选择性。例如把气体扩散、渗析、溶剂萃取、离子交选择性。例如把气体扩散、渗析、溶剂萃取、离子交换或固定化酶等操作与管线步骤结合,以便将样品成换或固定化酶等操作与管线步骤结合,以便将样品成分转变成可检测的物质。分转变成可检测的物质。从从1975年第一篇年第一篇FIA论文发表以来,流淌注射分析这论文发表以来,流淌注射分析这一新颖一新颖而独特的分析方法在环境监测、地质冶金、临而独特的分析方法在环境监测、地质冶金、临床医学、农业、林业等诸领域得到了广泛的应用。它床医学、农业、林业等诸领域得到了广泛的应用。它的精确限制几乎适于任何分析领域,它的

28、敏捷设计组的精确限制几乎适于任何分析领域,它的敏捷设计组装使其功能可以无止境地发展。装使其功能可以无止境地发展。7.3微型全分析系统微型全分析系统7.3.1 导言导言科学仪器在人类的整个科技发展过程中都起到极其重要的作用,科学仪器在人类的整个科技发展过程中都起到极其重要的作用,这在近代科技发展中反映得尤其突出。这在近代科技发展中反映得尤其突出。分析仪器的发展趋势就是微型化分析仪器的发展趋势就是微型化/集成化与便携化。当前,主要为集成化与便携化。当前,主要为了适应生命科学发展的须要,分析仪器的发展正在出现一个以微了适应生命科学发展的须要,分析仪器的发展正在出现一个以微型化为主要特征的,带有革命性

29、的重要转折时期。型化为主要特征的,带有革命性的重要转折时期。自从自从Manz和和Widmer于于1990首次提出微型全分析系统首次提出微型全分析系统(TAS,miniaturized total analysis system或或micro total analysis system)的概念以来,经验了发展初期的冷落和彷徨,在短短的十几年中的概念以来,经验了发展初期的冷落和彷徨,在短短的十几年中已发展为当今世界上最前沿的科技领域之一。已发展为当今世界上最前沿的科技领域之一。2001年,英国年,英国RSC创刊创刊Lab-on-a-chip(芯片试验室)。(芯片试验室)。2002年,美国年,美国A

30、nal.Chem.将将 TAS列入每两年一次的综述中,标列入每两年一次的综述中,标志着它作为分析化学的一个独立领域,已被学术界承认。并将微志着它作为分析化学的一个独立领域,已被学术界承认。并将微流控芯片系统作为其主要发展方向。流控芯片系统作为其主要发展方向。TAS的目的是通过化学分析设备的微型化与集成化,最大限的目的是通过化学分析设备的微型化与集成化,最大限度地把分析试验室的功能转移到便携的分析设备中,甚至集成度地把分析试验室的功能转移到便携的分析设备中,甚至集成到方方寸大小的芯片上。由于这种特征,本事域的一个更为通到方方寸大小的芯片上。由于这种特征,本事域的一个更为通俗的名称俗的名称“芯片试

31、验室芯片试验室”(Lab-on-a-chip,LOC)已经被日益地接受。已经被日益地接受。在分析系统微型化与集成化的基础上,在分析系统微型化与集成化的基础上,TAS的最终目标是实现的最终目标是实现分析试验室的分析试验室的“个人化个人化”,“家用化家用化”,从而使分析科学及分析仪,从而使分析科学及分析仪器从化学试验室解放出来,进入千家万户。器从化学试验室解放出来,进入千家万户。微流控芯片微流控芯片(microfluidic chips)是是 TAS中目前最活跃的领域和中目前最活跃的领域和发展前沿,它最集中地体现了将分析试验室的功能转移到芯片发展前沿,它最集中地体现了将分析试验室的功能转移到芯片上

32、的思想,其将来的发展将对上述目标的实现起到特别重要的上的思想,其将来的发展将对上述目标的实现起到特别重要的作用。作用。Microfluidic chip1.1.Sample preparationSample preparation2.2.Mass transportMass transport3.3.mixingmixing4.4.reactionreaction5.5.Sample injectionSample injection6.6.separationseparation7.7.detectiondetection作为分析化学的前沿技术,作为分析化学的前沿技术,TAS的快速发展不仅

33、是该领域科学的快速发展不仅是该领域科学工作者不懈努力的结果,而且得益于微机电加工工作者不懈努力的结果,而且得益于微机电加工(MEMS)、生物、生物化学、材料学、微光学机械等多门学科最新成果的投入。化学、材料学、微光学机械等多门学科最新成果的投入。然而,然而,TAS的实际应用目前尚处于初级阶段,对分析系统来讲的实际应用目前尚处于初级阶段,对分析系统来讲要求达到既要求达到既“微微”又又“全全”,从总体上看,还仅仅是目标,离真正实,从总体上看,还仅仅是目标,离真正实现还有相当大的距离。现还有相当大的距离。这些目标的实现必需靠大力发展微流控技术;生物这些目标的实现必需靠大力发展微流控技术;生物(阵列阵

34、列)芯片虽芯片虽然是很重要的生物检测手段,但难以在实际分析系统的然是很重要的生物检测手段,但难以在实际分析系统的“微、全微、全”方面发挥优势。方面发挥优势。一个新学科的发展既须要强大先进的技术支撑,更须要先进的理一个新学科的发展既须要强大先进的技术支撑,更须要先进的理论指导,论指导,TAS在发展中还须要更多的基础理论来更深化地理解在发展中还须要更多的基础理论来更深化地理解和驾驭物质在微米尺度流淌状态下的行为,例如微米通道中的传和驾驭物质在微米尺度流淌状态下的行为,例如微米通道中的传质、导热、吸附及微区反应规律等。这些都对相关的理论探讨提质、导热、吸附及微区反应规律等。这些都对相关的理论探讨提出

35、了新的挑战!出了新的挑战!7.3.2 微型全分析系统及微流控分析芯片发展简史微型全分析系统及微流控分析芯片发展简史微流控分析芯片的出现在现代分析科学与分析仪器的发展中有其微流控分析芯片的出现在现代分析科学与分析仪器的发展中有其历史的必定性。回顾近历史的必定性。回顾近40余年发展历史会看到分析系统的自动化余年发展历史会看到分析系统的自动化微型化趋势早在微型化趋势早在1950s和和1960s即已出现,其发展动力主要来自于即已出现,其发展动力主要来自于环境及材料科学的发展中对更多更准更快地获得物质成分信息的环境及材料科学的发展中对更多更准更快地获得物质成分信息的须要。须要。Skeggs创始的间隔式连

36、续流淌分析创始的间隔式连续流淌分析(segmented continuous flow analysis,SCFA)是这一时期发展的有代表性的成功范例。其成功是这一时期发展的有代表性的成功范例。其成功之处在于首次突破了持续了之处在于首次突破了持续了200年的分析化学传统操作中以玻璃年的分析化学传统操作中以玻璃器皿和量器为主要工具的操作模式,把分析化学转移到有流体连器皿和量器为主要工具的操作模式,把分析化学转移到有流体连续流淌的管道中,数毫米内径数米长的玻璃或聚合物管道不仅是续流淌的管道中,数毫米内径数米长的玻璃或聚合物管道不仅是化学反应的新容器,而且也成为分析操作实现连续化自动化的化学反应的新

37、容器,而且也成为分析操作实现连续化自动化的“传送带传送带”。液体连续驱动手段蠕动泵!液体连续驱动手段蠕动泵!图图7.8 SCFA系统示意图系统示意图(a)和和FIA系统示意图系统示意图(b)S 试样;试样;A空气;空气;R试剂;试剂;CR载液载液SCFA虽然在溶液分析自动化方面取得了成功,在分析操作所虽然在溶液分析自动化方面取得了成功,在分析操作所需面积的削减方面也有所贡献,但在设备和试样、试剂消耗及需面积的削减方面也有所贡献,但在设备和试样、试剂消耗及微型化方面却进展不大,分析速度比传统的手工操作也无显著微型化方面却进展不大,分析速度比传统的手工操作也无显著提高。后者是因为限制分析速度的因素

38、是化学反应本身,而非提高。后者是因为限制分析速度的因素是化学反应本身,而非溶液操作过程。溶液操作过程。Ruzicka和和Hansen于于1975年提出了年提出了FIA。他们在继承连续流淌观。他们在继承连续流淌观念的同时,彻底抛弃了念的同时,彻底抛弃了SCFA中要求在流淌中必需实现物理平衡中要求在流淌中必需实现物理平衡(完全混合完全混合)与化学平衡与化学平衡(反应完全反应完全)的观念,去除了管道中同时起的观念,去除了管道中同时起间隔与搅拌作用的气泡,提出了在非平衡间隔与搅拌作用的气泡,提出了在非平衡(不完全混合、不完全不完全混合、不完全反应反应)条件下实现重现性定量分析的技术条件。他们利用了细管

39、条件下实现重现性定量分析的技术条件。他们利用了细管道道(1 mm内径内径)中液体层流状态的可控性与重现性,加上精确的中液体层流状态的可控性与重现性,加上精确的时间时间(即流速即流速)限制,实现了重现、但非完全的混合状态,并在此限制,实现了重现、但非完全的混合状态,并在此基础上来实现重现、而未必完全的化学反应。基础上来实现重现、而未必完全的化学反应。这一观念的提出大大地提高了分析速度,使每小时测定上百种试这一观念的提出大大地提高了分析速度,使每小时测定上百种试样成为可能,同时也促进了分析系统的微型化。试样与试剂消耗样成为可能,同时也促进了分析系统的微型化。试样与试剂消耗从从10 mL水平降低到水

40、平降低到10200 L水平。分析操作也从简洁的自动水平。分析操作也从简洁的自动进样进样-检测发展到包括溶剂萃取、柱分别、沉淀、共沉淀、气检测发展到包括溶剂萃取、柱分别、沉淀、共沉淀、气-液液分别、渗吸等在内的试样多种前处理自动化。分别、渗吸等在内的试样多种前处理自动化。经过经过30年的发展,年的发展,FIA已经渗透到涉及溶液分析的几乎全部分析已经渗透到涉及溶液分析的几乎全部分析化学领域,不仅促进了分析化学自动化和微型化的发展,同时也化学领域,不仅促进了分析化学自动化和微型化的发展,同时也为为 TAS的提出铺平了道路。的提出铺平了道路。Ruzicka和和Hansen早在早在1984年就提出了集成

41、化微管道系统年就提出了集成化微管道系统(Integrated microconduit systems,IMCS)的概念,并取得了确定的概念,并取得了确定的成功。但由于当时科学技术整体水平的局限性,至少他们当时的成功。但由于当时科学技术整体水平的局限性,至少他们当时并未清晰地意识到须要通过多学科交叉来进一步发展他们的学术并未清晰地意识到须要通过多学科交叉来进一步发展他们的学术思想,从而错过了一次重要的发展机遇!思想,从而错过了一次重要的发展机遇!Manz和和Widmer则在发展则在发展 TAS方面要显得更为幸运和富有远见。方面要显得更为幸运和富有远见。他们最初的尝试是首先把他们最初的尝试是首先

42、把FIA转移到微加工芯片上。所构建的流转移到微加工芯片上。所构建的流动注射光度测定动注射光度测定 TAS装置为多层芯片结构,主要是接受了单晶装置为多层芯片结构,主要是接受了单晶硅材料加工。装置的困难性使人们对其将来发展前景不敢过于乐硅材料加工。装置的困难性使人们对其将来发展前景不敢过于乐观。观。然而当时分析化学另一学科大快速崛起为然而当时分析化学另一学科大快速崛起为 TAS供应了一个重要供应了一个重要的发展机遇毛细管电泳分别!一方面,毛细管电泳为的发展机遇毛细管电泳分别!一方面,毛细管电泳为 TAS提提供了便利敏捷的,在微尺度下电渗驱动手段;另一方面,在芯片供了便利敏捷的,在微尺度下电渗驱动手

43、段;另一方面,在芯片上加工的毛细管电泳上加工的毛细管电泳-TAS又显示出比传统毛细管电泳更优良的又显示出比传统毛细管电泳更优良的性能。性能。Manz与与Harrison于于1992年合作发表了首篇微加工芯片上完成的毛年合作发表了首篇微加工芯片上完成的毛细管分别的论文,展示了细管分别的论文,展示了 TAS大发展潜力。随后,科学家们快速大发展潜力。随后,科学家们快速把把 TAS大发展重点定位在基于大发展重点定位在基于MEMS技术的平板玻璃或石英芯片技术的平板玻璃或石英芯片上的电渗驱动的毛细管电泳分别微流控系统。上的电渗驱动的毛细管电泳分别微流控系统。1994年以后,美国一些著名高校探讨组的介入使该

44、领域的发展年以后,美国一些著名高校探讨组的介入使该领域的发展快速出现高潮。快速出现高潮。1994年年Ramsey group1995年年Mathies group1995年年 Caliper Technologies 公司公司1995年年Whitesides group1999年惠普公司研制出第一台微流控芯片商品化仪器起先销售年惠普公司研制出第一台微流控芯片商品化仪器起先销售2001年年 Lab-on-a-chip学术季刊创建学术季刊创建7.3.3 微型全分析系统的分类微型全分析系统的分类 TAS可分为芯片式与非芯片式两大类。芯片式是发展重点。可分为芯片式与非芯片式两大类。芯片式是发展重点。在

45、芯片式在芯片式 TAS中,依据芯片结构及工作机理又可分为微流控中,依据芯片结构及工作机理又可分为微流控芯片和微阵列芯片和微阵列(生物生物)芯片。它们均依托于芯片。它们均依托于MEMS技术,目前又技术,目前又都主要服务于生命科学,但前者以微通道网络为结构特征,后都主要服务于生命科学,但前者以微通道网络为结构特征,后者以微探针阵列为结构特征。者以微探针阵列为结构特征。微阵列芯片目前的主要应用对象是微阵列芯片目前的主要应用对象是DNA分析,所以也称为分析,所以也称为DNA或基因芯片。其发展要略微早于微流控芯片,始于或基因芯片。其发展要略微早于微流控芯片,始于1980s,主要,主要是在生物遗传学领域发

46、展起来的。是在生物遗传学领域发展起来的。微流控芯片主要是在分析化学的学科领域发展起来的,微流控芯片主要是在分析化学的学科领域发展起来的,表表7.1图图7.9 (a)典型的微流控芯片典型的微流控芯片(b)典型的微阵列典型的微阵列(生物生物)芯片芯片Microarray(Bio)Chips1.1.Sample preparationSample preparation2.2.Mass transportMass transport3.3.mixingmixing4.4.reactionreaction5.5.Sample injectionSample injection6.6.separatio

47、nseparation7.7.detectiondetectionMicrofluidic chipsStructureStructure:microchannel netmicrochannel netfunctionsfunctions:all functions of an analytical Lab all functions of an analytical LabMicrofluidic chipMain functions:Main functions:7.3.4 流控分析芯片特点流控分析芯片特点微流控芯片的优点微流控芯片的优点(1)微流控芯片具有极高的效率,可在数秒至数十秒时

48、间内自动微流控芯片具有极高的效率,可在数秒至数十秒时间内自动完成分别、测定或其他更困难的操作。分别和分析速度常高于完成分别、测定或其他更困难的操作。分别和分析速度常高于相对应当宏观分析方法一至二个数量级。其高分析或处理速度相对应当宏观分析方法一至二个数量级。其高分析或处理速度即来源于微米级通道中的高导热和传质速率,也干脆来源于结即来源于微米级通道中的高导热和传质速率,也干脆来源于结构尺寸的缩小。构尺寸的缩小。(2)微流控分析的试样与试剂消耗已降低到数微升水平,并随着微流控分析的试样与试剂消耗已降低到数微升水平,并随着技术的提高,还可能进一步削减。降低了分析费用户珍贵生物技术的提高,还可能进一步

49、削减。降低了分析费用户珍贵生物试样的消耗,也削减了环境的污染。试样的消耗,也削减了环境的污染。(3)用微加工技术制作的微流控芯片部件的微小尺寸使多个部件用微加工技术制作的微流控芯片部件的微小尺寸使多个部件与功能可能集成在数平方厘米的芯片上,在此基础上易制备功与功能可能集成在数平方厘米的芯片上,在此基础上易制备功能齐全的便携式仪器,用于各类现场分析。能齐全的便携式仪器,用于各类现场分析。(4)微流控芯片的微小尺寸使材料消耗甚微。当实现批量生产后,微流控芯片的微小尺寸使材料消耗甚微。当实现批量生产后,芯片成本可望大幅度降低,有利于普及。芯片成本可望大幅度降低,有利于普及。微流控芯片的局限性微流控芯

50、片的局限性(1)作为作为 TAS的主要发展前沿,当前的微流控芯片系统总体的主要发展前沿,当前的微流控芯片系统总体上既不够上既不够“微微”,分析功能也远达不到,分析功能也远达不到“全全”。主要缘由是集成。主要缘由是集成度不够高,多数检测器的体积过大,实现集成化还有很长的度不够高,多数检测器的体积过大,实现集成化还有很长的路要走。路要走。(2)在目前加工条件下微流控分析制作成本还难以满足有关成在目前加工条件下微流控分析制作成本还难以满足有关成果推广应用的要求。一块供探讨用的标准玻璃芯片价值果推广应用的要求。一块供探讨用的标准玻璃芯片价值100多多美元。一块供分析美元。一块供分析12个试样的一次性专

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