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1、第三章第三章 生化检验试验室生化检验试验室基本学问基本学问第一节第一节 试验用纯水试验用纯水第三节第三节 试验方法的选择试验方法的选择其次节其次节 试验用玻璃仪试验用玻璃仪器器 第四节第四节 试验方法的评价试验方法的评价第五节第五节 试验的诊断试验的诊断 性能评价性能评价 水水是是常常用用的的溶溶剂剂，自自然然水水中中含含有有很很多多杂杂质质，如如悬悬浮浮物物、胶胶体体物物质质和和溶溶解解物物质质，必必需需经经处处理理去去除除杂杂质质成成为为纯纯水水，才才能能用用于于生生物物化化学学试试验验。否否则则，将将严严峻峻影影响响试试验验结结果的精确度和精密度。果的精确度和精密度。一、纯水的制备方法一
2、、纯水的制备方法 （一）蒸馏法（一）蒸馏法 将将自自来来水水在在蒸蒸馏馏器器中中加加热热气气化化，然然后后冷冷凝凝水水蒸蒸气气即即得得蒸蒸馏馏水水，必必要要时时可可将将蒸蒸馏馏水水再再进进行行蒸蒸馏馏得得双双蒸蒸水水。蒸蒸馏馏水水在在25时时的电阻率为的电阻率为1105/cm左右。左右。第一节第一节 试验用纯水试验用纯水 （二）离子交换法（二）离子交换法 将将自自来来水水通通过过离离子子交交换换柱柱去去除除水水中中杂杂质质的的方方法法。离离子子交交换换树树脂脂是是一一种种人人工工合合成成的的带带有有交交换换活活性性基基团团的的多多孔孔网网状状结结构构的的高高分分子子化化合合物物，在在网网状状结
3、结构构的的骨骨架架中中，含含有有很很多多能能溶溶液液中中的的离离子子起起交交换换作作用用的的“活活性性基基团团”。当当水水通通过过阳阳离离子子交交换换树树脂脂时时，水水中中带带正正电电荷荷的的阳阳离离子子与与树树脂脂中中的的H+交交换换，而而水水中中带带负负电电荷荷的的阴阴离离子子则则与与树树脂脂中中的的OH交交换换。离离子子交交换换水水在在25时时的的电电阻阻率率为为5106/cm左右。左右。水水的的纯纯度度检检查查包包括括用用电电导导仪仪测测定定其其电电导导率率或或电电阻阻率率，用用特特定定试试剂剂检检测测水水中中残残留留的的Ca2+、Mg2+、Cl、SO42等等成成分分，细菌培育计数菌落
4、。细菌培育计数菌落。1.电电阻阻率率 用用电电导导仪仪或或兆兆欧欧表表测测定定，用用电电导导仪仪测测得得的的电电导导率率，可可与与电电阻阻率率进进行行换换算算。电电导导单单位位为为西西门门子子（s），电电导导是是电电阻阻的的倒倒数数，即即1s=11；每每cm长长的的电电导导为为电导率（电导率（scm1）。）。二、水的纯度检查二、水的纯度检查 2.可可溶溶性性硅硅检检验验 定定性性方方法法：纯纯水水10ml加加1%的的钼钼酸酸溶溶液液15滴滴，草草酸酸与与硫硫酸酸的的混混合合液液（4%草草酸酸1份份，加加4mol/L硫硫酸酸3份份）8滴滴，混混匀匀，置置室室温温10分分钟钟，滴滴加加1%硫硫酸酸
5、亚亚铁铁溶溶液液5滴滴，摇摇匀匀，以以不不显显蓝色为合格（蓝色为合格（0.5mg/L）3.细细菌菌菌菌落落计计数数 按按常常规规菌菌落落计计数数法进行。法进行。4.试试验验用用纯纯水水标标准准及及用用途途 1976年年，CAP提提出出了了试试验验用用水水的的三三级级标标准准，1985年，年，NCCLS又提出了新标准。又提出了新标准。生化试剂及生化检验用水标准生化试剂及生化检验用水标准（CAP）特性指标特性指标 级级 级级 级级pH 6.07.0 6.07.0 6.07.0 电导率电导率（s/cm，25）0.1 2.0 5.0电阻率电阻率（M/cm，25）10 0.5 0.2硅酸盐硅酸盐（mg/
6、L）0.01 0.01 0.01 重金属重金属（mg/L）0.01 0.01 0.01 NCCLS、CAP规定的等级纯水的用途规定的等级纯水的用途 级别级别 用用 途途NCCLS 原子吸取、火焰光度、电解质、荧原子吸取、火焰光度、电解质、荧光、酶、高灵敏度层析、光、酶、高灵敏度层析、电泳、参比液、缓冲液电泳、参比液、缓冲液 一般试验检验、玻璃器皿冲洗一般试验检验、玻璃器皿冲洗 玻璃器皿洗涤、要求不高的定玻璃器皿洗涤、要求不高的定性试验性试验CAP 原子吸取、火焰光度、电解质、原子吸取、火焰光度、电解质、血气及血气及pH、酶、缓冲液、酶、缓冲液、无机元素、参比液无机元素、参比液 一般试验检验、血
7、液学、血清、一般试验检验、血液学、血清、微生物检验等微生物检验等 一般定性测定、尿液检验、组一般定性测定、尿液检验、组织切片、寄生虫、器皿洗涤织切片、寄生虫、器皿洗涤第二节第二节第二节第二节 实验用玻璃仪器实验用玻璃仪器实验用玻璃仪器实验用玻璃仪器 试验用玻璃仪器分为容器类和量器类。试验用玻璃仪器分为容器类和量器类。容器类玻璃仪器为常温或加热条件下，物质容器类玻璃仪器为常温或加热条件下，物质的反应容器和贮存容器，如试管、烧杯、锥的反应容器和贮存容器，如试管、烧杯、锥形瓶、试剂瓶等。量器类玻璃仪器用于计量形瓶、试剂瓶等。量器类玻璃仪器用于计量溶液体积，不能作为试验容器，如量筒、容溶液体积，不能作
8、为试验容器，如量筒、容量瓶、移液管、吸量管、滴定管等。量瓶、移液管、吸量管、滴定管等。一、普通玻璃仪器的使用一、普通玻璃仪器的使用一、普通玻璃仪器的使用一、普通玻璃仪器的使用 （一）量筒（一）量筒 用于不太精确的液体计量。不能用做反用于不太精确的液体计量。不能用做反应容器，不能装热的液体。应容器，不能装热的液体。（二）容量瓶（二）容量瓶 用于把精确称量的物质配置成精确浓度用于把精确称量的物质配置成精确浓度的溶液或是将精确容积及浓度的浓溶液稀释的溶液或是将精确容积及浓度的浓溶液稀释成精确浓度及容积的稀溶液。成精确浓度及容积的稀溶液。容量瓶与瓶塞要配套运用，运用时不要容量瓶与瓶塞要配套运用，运用时
9、不要一次性将溶液加至刻度。容量瓶不能烘烤。一次性将溶液加至刻度。容量瓶不能烘烤。（三）移液管、吸量管（三）移液管、吸量管 移液管和吸量管是用于精确量取确定体移液管和吸量管是用于精确量取确定体积液体的量出式的玻璃量器。积液体的量出式的玻璃量器。移液管用于吸取固定量的溶液。最精确。移液管用于吸取固定量的溶液。最精确。吸量管是具有分刻度的玻璃管，用于吸吸量管是具有分刻度的玻璃管，用于吸取非固定量的溶液。取非固定量的溶液。（四）自动加样器（四）自动加样器 俗称加样枪，有固定式和可调式两种。俗称加样枪，有固定式和可调式两种。其精密度和精确度高于吸量管。其精密度和精确度高于吸量管。二、一般玻璃仪器的清洗二
10、、一般玻璃仪器的清洗初用玻璃仪器的清洗初用玻璃仪器的清洗 新购买的玻璃仪器表面常附着有游离的碱性物质，可先用肥皂水（或去污粉）洗刷再用自来水洗净，然后浸泡在l2盐酸溶液中过夜（不少于4小时），再用自来水冲洗，最终用蒸馏水冲洗23次，在100130烘箱内烤干备用。二、一般玻璃仪器的清洗二、一般玻璃仪器的清洗运用过的玻璃仪器的清洗运用过的玻璃仪器的清洗 1.容器类玻璃仪器容器类玻璃仪器 如试管、烧杯、锥如试管、烧杯、锥形瓶等。先用自来水洗刷至无污物，再选用形瓶等。先用自来水洗刷至无污物，再选用大小合适的毛刷蘸取去污粉（掺入肥皂粉）大小合适的毛刷蘸取去污粉（掺入肥皂粉）或浸入肥皂水内。将器皿内外（特
11、殊是内壁）或浸入肥皂水内。将器皿内外（特殊是内壁）细心刷洗，用自来水冲洗干净后，蒸馏水冲细心刷洗，用自来水冲洗干净后，蒸馏水冲洗洗23次，烤干或倒置在清洁处，干后备用。次，烤干或倒置在清洁处，干后备用。2.量器类玻璃仪器量器类玻璃仪器 如吸量管、滴定管、如吸量管、滴定管、容量瓶等。运用后应马上浸泡于凉水中，勿容量瓶等。运用后应马上浸泡于凉水中，勿使物质干枯；然后用流水冲洗，除去附着的使物质干枯；然后用流水冲洗，除去附着的试剂、蛋白质等物质。晾干后浸泡在铬酸洗试剂、蛋白质等物质。晾干后浸泡在铬酸洗液中液中46小时（或过夜），再用自来水充分小时（或过夜），再用自来水充分冲洗，最终用蒸馏水冲洗冲洗，
12、最终用蒸馏水冲洗24次，晾干备用次，晾干备用 。运用过的玻璃仪器的清洗运用过的玻璃仪器的清洗 3.其它其它 具有传染性标本的容器，具有传染性标本的容器，如病毒、传染病患者的血清等动污过的如病毒、传染病患者的血清等动污过的容器。应浸泡在杀菌剂（容器。应浸泡在杀菌剂（5煤酚皂溶煤酚皂溶液）中过夜，进行消毒后再清洗液）中过夜，进行消毒后再清洗。运用过的玻璃仪器的清洗运用过的玻璃仪器的清洗清洁液的配制和运用清洁液的配制和运用 配制时，先将重铬酸钾溶于水中，加配制时，先将重铬酸钾溶于水中，加热助溶，待冷。然后将粗浓硫酸缓慢加人热助溶，待冷。然后将粗浓硫酸缓慢加人上液中，边加边搅拌，切勿过快，以免产上液中
13、，边加边搅拌，切勿过快，以免产生高热使容器裂开。不要把重铬酸钾溶液生高热使容器裂开。不要把重铬酸钾溶液向硫酸中倾倒！配制时，依据用量选向硫酸中倾倒！配制时，依据用量选用烧杯或陶瓷缸作容器。用烧杯或陶瓷缸作容器。清洁液的配制和运用清洁液的配制和运用 清洁液的腐蚀性强，用时留意勿溅在皮清洁液的腐蚀性强，用时留意勿溅在皮肤和衣服上。它的吸水性较强，故应加盖贮肤和衣服上。它的吸水性较强，故应加盖贮存。假如清洁液的颜色渐渐变为绿色，表示存。假如清洁液的颜色渐渐变为绿色，表示效力降低，再加人适量的重铬酸钾和浓硫酸，效力降低，再加人适量的重铬酸钾和浓硫酸，还可接着运用；如已变成黑色，则不能再用。还可接着运用
14、；如已变成黑色，则不能再用。清洁液适用于事先清洗过但未能洗净的玻璃清洁液适用于事先清洗过但未能洗净的玻璃器皿，将水甩干后浸泡。未清洗或未消毒的器皿，将水甩干后浸泡。未清洗或未消毒的器皿不要干脆浸泡于清洁液中，否则会使清器皿不要干脆浸泡于清洁液中，否则会使清洁液快速失效，减低洗涤实力。洁液快速失效，减低洗涤实力。第三节第三节 试验方法的选择试验方法的选择 目的：选择精密度和精确度符合临床要目的：选择精密度和精确度符合临床要求，快速，操作简便，成本低的检测手段。求，快速，操作简便，成本低的检测手段。意义：分析方法的选择是生化检验质控意义：分析方法的选择是生化检验质控的基础，而方法学评价是方法选择的
15、依据，的基础，而方法学评价是方法选择的依据，由此可见，方法的选择与评价是全面质控工由此可见，方法的选择与评价是全面质控工作中必不行少的重要环节。作中必不行少的重要环节。一、方法选择的目的和意义一、方法选择的目的和意义方法选择方法选择 试验试验 方法评价方法评价 发展发展 调整常规应用调整常规应用 预防措施统计质控预防措施统计质控 结果报告结果报告试验方法的选择和评价过程示意图试验方法的选择和评价过程示意图 国际临床化学联合会（国际临床化学联合会（IFCC）依）依据分析方法精确度和精密度的不同分为据分析方法精确度和精密度的不同分为三级三级 （一）确定性方法：是指经过彻底（一）确定性方法：是指经过
16、彻底探讨未发觉任何不精密和不精确因素的探讨未发觉任何不精密和不精确因素的测定方法。测定结果最接近测定方法。测定结果最接近“真值真值”。主要是美国国家标准局和英国的探讨中主要是美国国家标准局和英国的探讨中心，用于评价参考方法与标准品。心，用于评价参考方法与标准品。二、试验方法的分级二、试验方法的分级 （二二）参参考考方方法法：是是指指精精密密度度和和精精确确度度稍稍低低于于确确定定性性方方法法，其其各各种种稍稍微微干干扰扰因因素素为为已已知知的的分分析析方方法法。用用于于鉴定常规方法。鉴定常规方法。（三三）常常规规方方法法：这这类类方方法法的的性性能能指指标标符符合合临临床床或或其其它它目目的的
17、须须要要，有有足够的灵敏度，精确度和特异性。足够的灵敏度，精确度和特异性。标准试剂（标准品、参考物）是一标准试剂（标准品、参考物）是一种物理或化学性质已充分确定用来校正种物理或化学性质已充分确定用来校正仪器或证明某种试验方法的物质。仪器或证明某种试验方法的物质。1.一级标准品（原级参考物）一级标准品（原级参考物）是是一种已经确定的稳定而均一的物质。其一种已经确定的稳定而均一的物质。其数值已由确定性方法确定，全部杂质均数值已由确定性方法确定，全部杂质均已定量，并附由证书。已定量，并附由证书。三、标准试剂的分级三、标准试剂的分级 2.二二级级标标准准品品（次次级级参参考考物物）这这类类物物质质包包
18、括括纯纯物物质质（水水或或有有机机溶溶剂剂溶溶液液）和和生生物物源源性性介介质质（透透析析后后血血清清）中中含含有有参参考考物物质质成成分分的的制制品品。用用于于常常规规方方法法的的标化或质控物定质。标化或质控物定质。3.质质控控物物质质 用用生生物物活活性性介介质质制制成成，用用原原级级或或次次级级参参考考物物质质为为标标准准，接接受受参参考方法定值，用于常规室内、室间质控。考方法定值，用于常规室内、室间质控。选择方法需考虑下列三个方面的选择方法需考虑下列三个方面的性能性能 1.方法学特性方法学特性 是指供应最好性是指供应最好性能的那些根本因素，常与反应的灵敏能的那些根本因素，常与反应的灵敏
19、度及特异性有关。包括化学反应原理、度及特异性有关。包括化学反应原理、最适反应条件、标化方法及分析操作最适反应条件、标化方法及分析操作的严密性等。的严密性等。四、试验方法选择的原则四、试验方法选择的原则 2.工工作作特特性性 是是证证明明方方法法性性能能的的那那些些因因素素，包包括括分分析析测测定定范范围围（线线性性或或工工作作范范围围）、精精密密度度、回回收收率率、干干扰、精确度及检出限度等。扰、精确度及检出限度等。3.应应用用特特性性 即即好好用用性性、成成本本费费用用、标标原原来来源源与与种种类类、样样品品用用量量、分分析析速速度度，对对设设备备条条件件与与操操作作技技术术要要求求，方法的
20、平安性。方法的平安性。（一）广泛查阅文献（一）广泛查阅文献 依据方法选择的依据方法选择的要求对各种方法进行比较，了解各方法的科要求对各种方法进行比较，了解各方法的科学依据和运用价值。学依据和运用价值。（二）选定候选方法（二）选定候选方法 依据本试验室的依据本试验室的设备条件、人员素养、工作量等具体状况，设备条件、人员素养、工作量等具体状况，选择合适的方法。选择合适的方法。（三）候选方法的初步试验（三）候选方法的初步试验 包括：包括：标准曲线和重复性；标准曲线和重复性；质控血清和标本的重质控血清和标本的重复试验；复试验；分析不同浓度标本，与参考方法分析不同浓度标本，与参考方法的结果对比。的结果对
21、比。五、试验方法选择的步骤五、试验方法选择的步骤 试验方法评价的过程就是对试验误差的测定。依据评价试验的结果和方法性能推断的标准，确定该方法是否可以被接受。第四节第四节 试验方法的评价试验方法的评价一、试验误差一、试验误差 是指给出值（包括测定值和标称值）与是指给出值（包括测定值和标称值）与客观真值的不符合性。客观真值的不符合性。第四节第四节 试验方法的评价试验方法的评价（一）试验误差的来源（一）试验误差的来源 1.仪器误差仪器误差 2.环境误差环境误差 3.人员误差人员误差 4.方法误差方法误差 （二）试验误差的分类（二）试验误差的分类 1.1.系系统统误误差差：指指一一系系列列测测定定结结
22、果果与与真真值值有有同同一一倾倾向向的的偏偏离离。由由恒恒定定的的缘缘由由引引起起，具具有有单单向向性性，在在确确定定条条件下重复出现，可校正。件下重复出现，可校正。系系统统误误差差又又分分为为恒恒定定误误差差（CECE）和比例误差（）和比例误差（PEPE）。）。恒恒定定误误差差：是是指指由由干干扰扰物物引引起起的的使使测测定定值值与与真真值值存存在在恒恒定定大大小小的的误误差差。误误差差大大小小与与被被测测物物浓浓度度无无关关，而与干扰物浓度相关。而与干扰物浓度相关。比比例例误误差差：是是指指相相对对于于被被测测物物浓浓度度有有相相同同的的百百分分比比误误差差，误误差差的的确定量与被测物浓度
23、呈正比。确定量与被测物浓度呈正比。2.偶然误差（随机误差）：是偶然误差（随机误差）：是一类不易测定的偏差，以偶然不行一类不易测定的偏差，以偶然不行预料的方式出现，没有确定的大小预料的方式出现，没有确定的大小和方向，可正可负，数据呈正态分和方向，可正可负，数据呈正态分布。不行避开，也不行校正。布。不行避开，也不行校正。3.过失误差：由于工作人员责过失误差：由于工作人员责任不强，工作粗枝大叶，操作不正任不强，工作粗枝大叶，操作不正确所引起的误差。确所引起的误差。（三）试验误差的表示方法（三）试验误差的表示方法 1.平均误差平均误差 是指一组测定值中，测定值是指一组测定值中，测定值与均值之差的平均值
24、。即算术平均偏差，用与均值之差的平均值。即算术平均偏差，用dm表示。表示。2.标准差标准差 是方差的平方根值是方差的平方根值，用，用S表示。表示。是表示精密度的较好指标。是表示精密度的较好指标。3.3.绝对误差和绝对偏差绝对误差和绝对偏差 绝对误差是指绝对误差是指实验测定值与客观真值之差。实验测定值与客观真值之差。绝对误差测定值真值绝对误差测定值真值 测定值与测定均值间的差异称为绝对偏测定值与测定均值间的差异称为绝对偏差。差。绝对偏差表示误差绝对值的大小，不能绝对偏差表示误差绝对值的大小，不能表示测定误差之间的大小。表示测定误差之间的大小。绝对偏差测定值（绝对偏差测定值（X）测定均值（测定均值
25、（X）4.相对误差和相对偏差相对误差和相对偏差 相对误相对误差为确定误差与真值的百分比。相对差为确定误差与真值的百分比。相对偏差为确定偏差与测定均值的百分比。偏差为确定偏差与测定均值的百分比。5.变异系数（变异系数（CV）是样本标准是样本标准差与样本均数的百分比值。用于比较差与样本均数的百分比值。用于比较各组数据间的变异状况，不受单位影各组数据间的变异状况，不受单位影响，响，CV值越大，说明测定值离散度越值越大，说明测定值离散度越大，精密度越差。大，精密度越差。（一）方法评价的基本内容（一）方法评价的基本内容 通过试验途径，测定并评价方法的通过试验途径，测定并评价方法的精密度和精确度。但在试验
26、中实际测定精密度和精确度。但在试验中实际测定的是不精密度和不精确度，强调的是误的是不精密度和不精确度，强调的是误差，评价试验就是对误差的测定。差，评价试验就是对误差的测定。二、方法评价的基本内容和步骤二、方法评价的基本内容和步骤方法评价试验与试验误差类型的关系方法评价试验与试验误差类型的关系 （二）方法评价步骤（二）方法评价步骤 1.评价前试验评价前试验 探讨候选方法的最适条探讨候选方法的最适条件。包括试剂浓度、缓冲液的种类、离子强件。包括试剂浓度、缓冲液的种类、离子强度和度和pH值、反应的温度和时间、检测波长等。值、反应的温度和时间、检测波长等。2.初步评价初步评价 包括批内和日内重复性试包
27、括批内和日内重复性试验、回收试验、干扰试验等。验、回收试验、干扰试验等。3.最终评价最终评价 包括日间重复性试验、方包括日间重复性试验、方法比较试验和总体推断方法是否可接受。法比较试验和总体推断方法是否可接受。4.评价后试验评价后试验 进行临床相关探讨，包进行临床相关探讨，包括参考值确定和特殊病人标本的测定等。括参考值确定和特殊病人标本的测定等。5.方法应用方法应用 建立质控系统，培训操作建立质控系统，培训操作者，引入常规工作等。者，引入常规工作等。1.精精密密度度 是是指指对对同同一一样样品品多多次次测测定定，每每次次测测定定结结果果与与均均值值的的符符合合程程度度。是是表表示示测测定定结结
28、果果中中随随机机误误差差大大小小的的指指标标。精精密密度度有有批批内内、天天内内和和天天与与天天之之间间的的精精密密度度之之分分，表表示示精精密密度度的的指指标标有有标标准准差差（s）、变变异异系系数数（CV）、标标准准误误、平平均均偏偏差差等等。评评价价精精密密度的方法有平行试验和重复性试验。度的方法有平行试验和重复性试验。三、方法评价指标三、方法评价指标 2.精确度精确度 指测定值与真值之间指测定值与真值之间的符合程度。一般用偏差和偏差系数的符合程度。一般用偏差和偏差系数表示。精确度没有度量指标，往往以表示。精确度没有度量指标，往往以不精确度来衡量，即重复测定的均值不精确度来衡量，即重复测
29、定的均值与真值之差。精确度主要受系统误差与真值之差。精确度主要受系统误差支配，也受随机误差的影响。评价精支配，也受随机误差的影响。评价精确度的方法由于回收试验、干扰试验、确度的方法由于回收试验、干扰试验、对比试验。对比试验。3.灵灵敏敏度度 是是指指化化学学反反应应中中能能检检出出的的最最低低量量。分分mg、ug、pg等等数数量量级级水水平平，在在方方法法学学评评价价时时，用用最最低低检检出出量量或摩尔吸光系数作为灵敏度指标。或摩尔吸光系数作为灵敏度指标。4.特特异异性性 指指分分析析测测定定中中对对某某一一成成分分起起反反应应，其其他他物物质质对对反反应应无无影影响响或或基基本本无无影影响响
30、。评评价价特特异异性性的的方方法法有有干干扰试验。扰试验。5.线线性性范范围围 是是指指试试验验方方法法所所能能检检测测标标本本中中某某物物质质的的浓浓度度范范围围。通通过过线线性试验确定。性试验确定。（一）重复性试验（一）重复性试验 目的是考察候选方目的是考察候选方法的随机误差，评价方法的精密度。分为：法的随机误差，评价方法的精密度。分为：1.批内重复性试验批内重复性试验 在很短的时间内对在很短的时间内对同一样品进行重复（一般为同一样品进行重复（一般为20次），计算次），计算 、S、CV，CV一般应小于一般应小于5%。2.天内重复性试验天内重复性试验 同一天内对同一样同一天内对同一样品作数批
31、重复测定，天内品作数批重复测定，天内CV值大于批内值大于批内CV值。值。3.天与天之间重复性试验天与天之间重复性试验 在一段时间在一段时间内将同一样每天一次随机插入常规标本中内将同一样每天一次随机插入常规标本中测定，反映实际工作状况，其测定，反映实际工作状况，其CV大于批内大于批内CV、天内、天内CV值。值。四、评价试验四、评价试验 （二二）回回收收试试验验 目目的的是是检检测测比比例例误误差差，以衡量分析方法的精确度。以衡量分析方法的精确度。1.方方法法 是是在在样样品品中中加加入入确确定定量量被被测测物物质质，然然后后用用同同样样方方法法测测定定，测测得得值值与与理理论论值值之之比比乘乘以
32、以100%即即为为回回收收率率，合合格格的的回回收收率率应应为为100%5%。2.计算计算回收浓度分析标本测得浓度基础标本测得浓度回收浓度分析标本测得浓度基础标本测得浓度加入浓度加入浓度 标准液浓度标准液浓度标准液量（标准液量（ml）病人样品量标准液量病人样品量标准液量（ml）回收率（回收率（%）100回收浓度回收浓度加入浓度加入浓度 3.留意事项：留意事项：（1）吸量要精确。所用吸管应校正并按）吸量要精确。所用吸管应校正并按正规要求操作。正规要求操作。（2）加入标准液后的浓度应达到医学确）加入标准液后的浓度应达到医学确定水平，同时应在该方法的线性范围内。定水平，同时应在该方法的线性范围内。（
33、3）加入标准液的体积应在总体积的）加入标准液的体积应在总体积的10%以内。以内。（4）一般应做高、中、低不同浓度标准）一般应做高、中、低不同浓度标准液的回收试验，计算平均回收率。液的回收试验，计算平均回收率。（5）为了削减随机误差对检测比例误差）为了削减随机误差对检测比例误差的干扰，最好能重复测定的干扰，最好能重复测定23次。次。举例举例 某法测定血糖回收率的标本制备和测定结果如下：某法测定血糖回收率的标本制备和测定结果如下：（1）样本制备：）样本制备：基础样本：基础样本：血清血清2ml蒸馏水蒸馏水0.1ml分析样本分析样本1：血清血清2ml25mmol/L葡萄糖标准液葡萄糖标准液0.1ml。
34、分析样本分析样本2：血清血清2ml100mmol/L葡萄糖标准液葡萄糖标准液0.1ml。（2）按操作要求测定上述样本，将结果填入下表按操作要求测定上述样本，将结果填入下表血糖回收试验结果血糖回收试验结果 回收率的志向值为回收率的志向值为100%，现在的，现在的平均回收率为平均回收率为102.2%，比例误差为，比例误差为2.2%，表明当一个标本的葡萄糖浓度，表明当一个标本的葡萄糖浓度为为5.5mmol/L时，用该法测定值为时，用该法测定值为5.62mmol/L，误差为，误差为0.12mmol/L（5.5mmol/L2.2%）。）。平均回收率平均回收率 100%102.2%10599.42 （三三
35、）干干扰扰试试验验 目目的的是是检检测测恒恒定定误误差差，以衡量方法的特异性和精确度。以衡量方法的特异性和精确度。1.方方法法 基基本本与与回回收收试试验验一一样样，但但在在标标本本中中加加入入的的是是疑疑有有干干扰扰作作用用的的物物质质。用用候候选选方方法法对对未未加加干干扰扰物物和和加加入入干干扰扰物物的的两两种种标标本本同同时时测测定定，两两者者之之差差即即表表示示该该干干扰扰物物产产生生的的干扰所引起的误差，即干扰值。干扰所引起的误差，即干扰值。干扰值分析标本测得值基础标本测得值干扰值分析标本测得值基础标本测得值举例举例 尿酸对尿酸对GOD-POD法测定血糖的干扰：法测定血糖的干扰：（
36、1）样本制备：）样本制备：基础样本：基础样本：血清血清0.9ml蒸馏水蒸馏水0.1ml分析样本分析样本1：血清血清0.9ml4mmol/L尿酸标准液尿酸标准液0.1ml。分析样本分析样本2：血清血清0.9ml8mmol/L尿酸标准液尿酸标准液0.1ml。（2）用用GOD-POD法测定上述样本，将结果填入下表法测定上述样本，将结果填入下表干扰试验检测结果（干扰试验检测结果（mmol/L）单位浓度尿酸使葡萄糖削减值单位浓度尿酸使葡萄糖削减值干扰值干扰值1干扰值干扰值2加入尿酸值加入尿酸值1加入尿酸值加入尿酸值20.300.550.400.80 0.7mmol/L 测定表明血清尿酸测定表明血清尿酸0
37、.4mmol/L时，时，可使血糖测定结果约削减可使血糖测定结果约削减0.28mmol/L。3.留意事项留意事项 （1）被试验的物质）被试验的物质 依据方法的原理，依据方法的原理，提出可能的干扰物。一般应考虑的因素是胆提出可能的干扰物。一般应考虑的因素是胆红素、溶血、脂血、抗凝剂等。红素、溶血、脂血、抗凝剂等。（2）可疑干扰物的浓度）可疑干扰物的浓度 加入可疑干扰加入可疑干扰物的浓度须达到有价值的范围，有可能应达物的浓度须达到有价值的范围，有可能应达到病理标本的最高浓度值，在确证有影响后到病理标本的最高浓度值，在确证有影响后应测定在何浓度时，产生的误差在临床上无应测定在何浓度时，产生的误差在临床
38、上无意义。意义。（3）本试验检测的误差包括方法特异性）本试验检测的误差包括方法特异性不高和干扰物的作用所引起的误差。不高和干扰物的作用所引起的误差。4.消退干扰的常用方法消退干扰的常用方法 （1）作空白试验。包括试剂空白和标本空白。）作空白试验。包括试剂空白和标本空白。（2）接受物理、化学方法分别去除干扰物质。）接受物理、化学方法分别去除干扰物质。（3）接受双波长或多波长检测方法解除干扰。）接受双波长或多波长检测方法解除干扰。（四）对比试验（四）对比试验 对对比比试试验验可可检检测测方方法法的的系系统统误误差差，经经统统计计分分析析后后可可供供应应系系统统误误差差的的性性质质，属属比比例例误误
39、差还是恒定误差。差还是恒定误差。对对一一组组病病人人的的样样品品同同时时用用候候选选方方法法与与参参考考方方法法测测定定，并并统统计计量量组组结结果果有有无无显显著著性性差差异异。（统统计计方方法法、配配对对t检检验验、直直线线回回来来）一一般般P0.01者，该候选方法不能接受，者，该候选方法不能接受，留意事项留意事项 （1）试验样品数）试验样品数 一般做一般做40100例。例。最好要包括各种疾病的标本，即包括在最好要包括各种疾病的标本，即包括在常规工作中可能遇到的整个分析范围。常规工作中可能遇到的整个分析范围。（2）重复分析）重复分析 一般每个样品用两种一般每个样品用两种方法各测定一次，最好
40、能分批测定两次。方法各测定一次，最好能分批测定两次。两种方法及两批测定，在同一天进行。两种方法及两批测定，在同一天进行。（3）试验的时间间隔）试验的时间间隔 每天测定每天测定25个样品，约个样品，约20天。天。（4）结果的图示）结果的图示 比较方法的结果比较方法的结果为横坐标（为横坐标（X），候选方法的结果为），候选方法的结果为纵坐标（纵坐标（Y），结果应刚好绘于坐标），结果应刚好绘于坐标纸上，以便刚好检查结果，发觉问题。纸上，以便刚好检查结果，发觉问题。溶血、脂血、黄疸标本，应在对应的溶血、脂血、黄疸标本，应在对应的散点上标以散点上标以H、L、I等符号。等符号。统计处理统计处理（1）配对）配
41、对t 检验：检验：用于比较两法间的系统误差。用于比较两法间的系统误差。X，Y 表示两法的均数；表示两法的均数；YX 为偏差，为偏差，即系统误差；即系统误差；Sd是两种方法的标准差是两种方法的标准差。t 检检验对随机误差和比例误差敏感。当不存在比验对随机误差和比例误差敏感。当不存在比例误差时，例误差时，表示随机误差，这时表示随机误差，这时t 值表示值表示系统误差相当于随机误差的倍数系统误差相当于随机误差的倍数。（2）F检验：用于比较方法间的随检验：用于比较方法间的随机误差或精密度。机误差或精密度。S1、S2分别为两种方法的标准差，分别为两种方法的标准差，且且S1 S2。假如。假如F值值F 临界值
42、，则临界值，则统计学上认为两种方法的精密度有差别；统计学上认为两种方法的精密度有差别；F值值F 临界值，则表示两种方法的精临界值，则表示两种方法的精密度无明显差别。密度无明显差别。（3）直线回归：）直线回归：根据两法所测数据根据两法所测数据得回归方程得回归方程Y abX。a为回归线截距，为回归线截距，a=ybx仅对恒定误差敏感；仅对恒定误差敏感；a=0时，表示无恒时，表示无恒定误差。定误差。b为回归线斜率，为回归线斜率，仅对比例误差敏感；仅对比例误差敏感；b=1时，表示无比时，表示无比例误差。例误差。（一）性能标准（一）性能标准 1.允许分析误（允许分析误（EA）被规定为）被规定为95%样品的
43、允许误差限度样品的允许误差限度 2.医学确定性水平（医学确定性水平（Xc）是指对疾）是指对疾病诊治具有参考价值的临床分析物浓度病诊治具有参考价值的临床分析物浓度。对于某一分析物，每一医学确定对于某一分析物，每一医学确定性水平规定相应的性能标准，即在确定性水平规定相应的性能标准，即在确定Xc值下的值下的EA值。值。五、方法性能推断五、方法性能推断（二）性能推断指标（二）性能推断指标 单值推断指标 评价某项试验方法的好坏，除了分析测测评价某项试验方法的好坏，除了分析测测定方法的随机误差和系统误差外，还必需与临床定方法的随机误差和系统误差外，还必需与临床诊断结合，建立参考值，接受临床评价指标诊断结合
44、，建立参考值，接受临床评价指标诊断灵敏度、特异度、预料值、似然比等作进一诊断灵敏度、特异度、预料值、似然比等作进一步评价。步评价。第五节第五节 试验的诊断性能评价试验的诊断性能评价第五节第五节 试验的诊断性能评价试验的诊断性能评价一、参考值和医学确定水平一、参考值和医学确定水平 （一）参考值与参考范围（一）参考值与参考范围 1.概概念念 是是指指从从若若干干标标准准规规定定的的参参考考人人群群中中选选取取一一定定数数量量的的参参考考个个体体检检测测的的结结果果。经经统统计计学学处处理理求求得得均均值值（X）和和标标准准差差（S），均均值值即即为为参参考考值值，结结果果的的95%的的分分布布区区
45、间间即即为为参参考考范范围围。（正正态态分分布布一一般般以以X2S表表示示，偏偏态态分分布布可可用用百百分分位位数数表表示示）。2.参考值的制订参考值的制订 （1）参参考考个个体体的的选选择择 选选择择的的参参考考个个体体应应具具有有典典型型性性、代代表表性性，能能反反映映出出目目标标总总体体的的特特征征。如如人人群群的的来来源源，健健康康的的标标准准、年年龄龄、性性别别、民族、职业等。民族、职业等。（2）测测定定方方法法的的选选择择与与标标准准化化 一一般般应应选选择择国国内内或或国国际际上上举举荐荐方方法法，并并参参与与标标准准化化工工作作，达达到到标标准准化化后后再再对对参参考考样样本本
46、中中每每一一参参考考个个体体测测定定。标标准准化化工工作作除除方方法法本本身身外外，还还包包括括被被检检对对象象的的准准备备、标标本本采采集集、处处理理和和保保存存、记记录录格格式式和填写方法。和填写方法。（3）应有确定数量的受检人数）应有确定数量的受检人数 一般应一般应有有100例以上。例以上。（4）依据专业学问确定单、双侧位界）依据专业学问确定单、双侧位界 如如双侧均有意义的应接受双侧位界（参考值上双侧均有意义的应接受双侧位界（参考值上限、下限），如血糖限、下限），如血糖3.96.1mmol/L,大于、大于、小于这上限、下限均为异样。如单侧有意义小于这上限、下限均为异样。如单侧有意义的接受
47、单侧位界，单值上限，如血清的接受单侧位界，单值上限，如血清ALT 025单位，大于单位，大于25为异样。为异样。（二）医学确定水平（二）医学确定水平 1.1.概概念念：是是指指对对疾疾病病诊诊疗疗具有参考价值的临床分析物浓度。具有参考价值的临床分析物浓度。2.2.医医学学确确定定水水平平与与参参考考值值的的关关系系 现现有有两两组组人人群群，组组A A是是参参考考人人群群，所所得得出出的的参参考考值值在在箭箭头头之之间间，组组B B是是某某种种疾疾病病患患者者，DL1DL1为为第第一一确确定定性性水水平平，此此值值左左侧侧可可解解除除B B疾疾病病，DL2DL2为为其其次次确确定定性性水水平平
48、，该该值值右右侧侧可可确确定定患患者者有有B B疾疾病病，由由此此可可见见医医学确定水平与参考值不同。学确定水平与参考值不同。如血清白蛋白正常值如血清白蛋白正常值3550g/L 可分为可分为三个确定性水平。第一确定性水平三个确定性水平。第一确定性水平20g/L，预，预后严峻，其次确定性水平后严峻，其次确定性水平35g/L，低白蛋白血，低白蛋白血症界线值，第三确定性水平症界线值，第三确定性水平52g/L，解除，解除FP。属于属于A？属于属于B组组A DL1 DL2 组组B （一）诊断试验和金标准（一）诊断试验和金标准 诊诊断断试试验验是是指指对对疾疾病病作作出出推推断断的的一一般般临临床床试试验
49、验检检查查方方法法。金金标标准准则则是是对对疾疾病病作作出出的的确确定定性性诊诊断断的的方方法法。诊诊断断试试验验的的评评价价是是先先用用金金标标准准诊诊断断结结果果为为患患者者和和非非患患者者，然然后后用用诊诊断断试试验验测测得其阳性和阴性结果，再进行各种分析。得其阳性和阴性结果，再进行各种分析。二、诊断灵敏度、特异度、预料值和似然比二、诊断灵敏度、特异度、预料值和似然比诊断试验结果与患病的关系诊断试验结果与患病的关系TP真阳性，真阳性，FP假阳性，假阳性，TN真阴性，真阴性，FN假阴性。假阴性。（二二）诊诊断断灵灵敏敏度度：是是指指在在金金标标准准诊诊断断为为“有有病病”的的患患者者中中用
50、用诊诊断断试试验验检检出出的的阳阳性性百百分分率率。表表示示诊诊断断试试验验查查出出患患病病者者的的实实力力，这称为真阳性率。这称为真阳性率。真阳性数真阳性数患者的总数患者的总数TPTPFN诊断灵敏度诊断灵敏度=100%=100%灵敏度高的诊断试验常用于灵敏度高的诊断试验常用于普查普查或定期或定期健康体检健康体检，能筛选某一疾病。防止漏诊。，能筛选某一疾病。防止漏诊。1诊断灵敏度称为假阴性率。诊断灵敏度称为假阴性率。（三三）诊诊断断特特异异度度：是是指指在在金金标标准准诊诊断断为为“无无病病”的的非非患患病病者者中中，用用诊诊断断试试验验检检出出的的阴阴性性结结果果的的百百分分率率。表表示示诊