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1、质谱法及其联用技术的质谱法及其联用技术的原理与应用原理与应用 解题解题n质谱法（质谱法（MassSpectrometry,MS）n有机有机/无机无机/生物生物/同位素同位素MSn质谱仪可干脆进样质谱仪可干脆进样n常见仪器分析技术常见仪器分析技术n液相色谱法（液相色谱法（LC）n气相色谱法（气相色谱法（GC）n毛细管电泳法毛细管电泳法n感耦等离子体（感耦等离子体（ICP）原子放射光谱法）原子放射光谱法nn解题解题n为何要联用？为何要联用？n以以LC-MS为例：为例：LC的色谱分别的色谱分别MS的质谱分的质谱分n离（离（m/z分别）分别）n两个维度依次分别，是乘法，非加法！两个维度依次分别，是乘法
2、，非加法！n结合了结合了LC和和MS二者的优点二者的优点n辨证地看待辨证地看待“联用联用”n仪器的小型化、微型化，如仪器的小型化、微型化，如waters公司的公司的Qda检检测器；测器；ICP-MS。Waters公司的液质联用仪公司的液质联用仪QqQQTOFSciex公司的质谱仪公司的质谱仪QTRAPQTOFQqQOrbitrapThermoFisher公司的液质联用仪公司的液质联用仪Agilent公司的质谱联用仪公司的质谱联用仪ICP-QqQ质谱仪质谱仪GC-QqQ质谱仪质谱仪用途和优点用途和优点以LC-QqQ-MS定性、定量最常用的多反应监测（MultipleReactionMonitor
3、ing，MRM）模式为例灵敏度高精确地说信噪比高LC：g/mL（ppm）LC-MS：ng/mL（ppb）、pg/mL（ppt）特异性好干扰小，定性精确降低了对样品前处理的要求是公认的确证分析技术！低辨别率质谱仪低辨别率质谱仪用途和优点用途和优点以QTOF和Q-Orbitrap为代表：质量精确度高（m/z精确到小数点后3-5位）定性筛查的利器：半未知、全未知化合物 如：北京CDC高辨别率质谱仪高辨别率质谱仪从历史谈起从历史谈起n离子源和质量分析器有多种不同的类型离子源和质量分析器有多种不同的类型n以两大主线介绍质谱仪的发展史以两大主线介绍质谱仪的发展史n进样系统进样系统n离子源（使分析物电离）离
4、子源（使分析物电离）n离子光学系统离子光学系统n质量分析器（实现质量分析器（实现m/z分别，质谱仪通常据其命名）分别，质谱仪通常据其命名）n检测器检测器n真空系统真空系统n计算机系统计算机系统质谱发展史上的两位先驱质谱发展史上的两位先驱n1897年年，J.J.Thomson（汤汤 姆姆 孙孙，18561940）质谱仪的雏形）质谱仪的雏形n1919年，年，F.W.Aston（阿斯顿，（阿斯顿，18771945）n首首次次制制成成具具有有较较高高聚聚焦焦性性能能的的质质谱谱仪仪，用用其其成成功功发觉了多种同位素，获发觉了多种同位素，获1922年年n的诺贝尔化学奖的诺贝尔化学奖质量分析器发展史质量分
5、析器发展史n1917年，年，Dempstern独创扇形磁场质谱仪（扇形磁场分析器）独创扇形磁场质谱仪（扇形磁场分析器）n1934年，年，Mattauch和和Herzogn1953年，年，Johnson和和Niern分分别别设设计计出出了了两两种种双双聚聚焦焦质质谱谱仪仪（扇扇形形磁磁场场分分析析器器n扇形电场分析器）扇形电场分析器）n1946年，年，Stephensn独创飞行时间（独创飞行时间（Time-of-Flight，TOF）质谱仪）质谱仪n1949年，年，Hipplen独独创创离离子子回回旋旋共共振振（IonCyclotronResonance，ICR）n质谱仪，是首个超高辨别率质谱仪
6、质谱仪，是首个超高辨别率质谱仪质量分析器发展史质量分析器发展史n1953年，年，W.Paul（保罗，（保罗，19131993）提出四极质量分析器（QuadrupoleMassAnalyzer，QMA）和四极离子阱（QuadrupoleIonTrap，QIT）的理论，随后出现了四极质谱仪和QIT质谱仪nH.G.Dehmelt（德梅尔特，（德梅尔特，1922）对ICR质谱仪的发展作出突出贡献与Paul共享了1989年诺贝尔物理奖的一半质量分析器发展史质量分析器发展史n1977年和年和1984年年两种重要的串联质谱仪三重四极（TripleQuadrupole，QqQ）质谱仪和QTOF质谱仪诞生n19
7、95年和年和1998年，年，Bier等和等和Hager 分别设计出了两种线性离子阱（LinearIonTrap，LIT）n1999年，年，A.Makarov（1966）全新概念的分析器轨道阱（Orbitrap）离子源发展史离子源发展史n气体放电电离、火花电离、辉光放电电离、热电离气体放电电离、火花电离、辉光放电电离、热电离n最出现的电离技术，属于无机电离技术最出现的电离技术，属于无机电离技术n1918年，年，A.J.Dempstern独创电子电离（独创电子电离（ElectronIonization，EI）n最早的有机电离技术，至今仍广泛运用最早的有机电离技术，至今仍广泛运用n1954年，年，I
8、nghram和和Gomern场电离，最早的场电离，最早的“软软”电离技术电离技术n1966年，年，Munson和和Fieldn独创化学电离（独创化学电离（ChemicalIonization，CI）离子源发展史离子源发展史n1969年，年，Beckeyn场解吸，打开了场解吸，打开了MS用于生物大分子分析的大门用于生物大分子分析的大门n1980s，Fenn（芬恩，（芬恩，19172010）n使使电电喷喷雾雾电电离离（ElectrosprayIonization，ESI）取得重取得重n大突破大突破n1973年，年，Horningn大大 气气 压压 化化 学学 电电 离离（Atmospheric P
9、ressureChemicalIonization，APCI）n1980年，年，Houkn以以 电电 感感 耦耦 合合 等等 离离 子子 体体（Inductively CoupledPlasma，ICP）为为离离子子源源，独独创创了了ICP-MS，是是元元素分析的利器素分析的利器离子源发展史离子源发展史n1987年，年，Tanaka（田中耕一，（田中耕一，1959）n将将基基质质协协助助激激光光解解吸吸电电离离（Matrix-AssistedLaserDesorption/Ionization，MALDI）用用于于蛋蛋白质分析；白质分析；n因因将将ESI和和MALDI引引入入生生物物大大分分子
10、子领领域域的的卓卓越越贡贡献献，Tanaka与与ESI的的独独创创者者Fenn共共享享了了2002年年诺诺贝贝尔尔化学奖的一半化学奖的一半MS基本原理基本原理nMS是是与与光光谱谱法法、核核磁磁共共振振波波谱谱法法并并称称的的三三大大物物质质定定性手段之一性手段之一nMS是是通通过过形形成成气气相相离离子子来来探探讨讨物物质质的的一一种种方方法法，依依据据质质量量、电电荷荷、结结构构和和（或或）理理化化性性质质的的差差异异，运运用质谱仪对离子进行表征用质谱仪对离子进行表征n提前是化合物能形成离子提前是化合物能形成离子nm/z分分别别通通过过质质量量分分析析器器实实现现（电电场场；磁磁场场；电电
11、场场磁场）磁场）关于关于m/z的理解的理解n什么是什么是“质质”？什么是？什么是“荷荷”？n用于描述微观离子用于描述微观离子质量的质量的单位单位千克（Kg，SI单位，但单位太大）道尔顿（Dalton，Da）JohnDalton（17661844）统一原子质量单位（UnifiedAtomicMassUnit，u）1u1Da1.660538921（73）1027kg注：原子质量单位（AtomicMassUnit，amu，已废弃）关于关于m/z的理解的理解n相对质量相对质量VS确定质量确定质量n初中化学的重要概念初中化学的重要概念“相对原子质量（原子量）相对原子质量（原子量）”n相对质量单位为相对质
12、量单位为“1”，确定质量单位为，确定质量单位为u、Da等等n相对质量与以相对质量与以u为单位的确定质量在数值上相等为单位的确定质量在数值上相等n实际质量实际质量VS平均质量平均质量n要区分要区分“元素元素”和和“原子原子”的质量。的质量。n例如，原子质量是实际质量，元素养量是平均质量例如，原子质量是实际质量，元素养量是平均质量（考虑了同位素丰度）。（考虑了同位素丰度）。n原子量（是元素的质量）原子量（是元素的质量）原子质量原子质量n分子量（是元素养量的加和，分子量（是元素养量的加和，MS中不能干脆运用）中不能干脆运用）同位素分布同位素分布Sn的同位素分布的同位素分布同位素分布同位素分布瘦肉精（
13、瘦肉精（C12H18Cl2N2O）的同位素分布）的同位素分布同位素标记内标同位素标记内标：选择占比较少的同位素组成形式：选择占比较少的同位素组成形式质谱图质谱图n质谱图（质谱图（MassSpectrum）n以离子的以离子的m/z为横坐标，质量峰的强度为纵坐标为横坐标，质量峰的强度为纵坐标n留意：质谱图并非指留意：质谱图并非指MS所得图谱的总称所得图谱的总称n横坐标既非保留时间，也非离子质量横坐标既非保留时间，也非离子质量a、轮廓图、轮廓图b、棒图、棒图提取离子色谱图提取离子色谱图n质谱仪干脆采集得到的是质谱图，经计算机加工得到色谱图n质谱图是色谱图的基本组成单元辨别率辨别率n辨别率（Resol
14、ution，R）反n映的是相邻质谱峰的分别程度n目前最常用的定义是“半峰n全宽（FullWidthatHalfnMaximum，FWHM）定义”辨别率辨别率n低辨别率：R1000n中辨别率：R100010000n高辨别率：R10000100000n超高辨别率：R100000nQMA是低辨别率，TOF和Orbitrap是（超）高辨别率n通常，QMA的质谱峰的半峰宽为0.7质量精确度质量精确度n精确质量（AccurateMass）：实测值n精确质量（ExactMass）：理论值n质量精确度：二者的误差n辨别率会影响质量精确度nQMA的质量精确度一般为0.1u质谱仪简介质谱仪简介nSCIEX的QqQ
15、和QTRAPTMnThermoFisher的OrbitrapnSCIEX、Waters、Bruker的QTOFnBruker的FT-ICR价格价格nGC-MSnQ：80万nQqQ：120万nLC-MSnQqQ：220330万nQTOF：300400万nQ-Orbitrap：400600万nICP-MSnQ：100150万nQqQ：200250万质谱仪硬件组成质谱仪硬件组成n进样系统进样系统n干脆进样（如注射泵）、干脆进样（如注射泵）、色谱仪等色谱仪等n离子源离子源n离子光学系统离子光学系统n冷却、聚焦、准直等冷却、聚焦、准直等n质量分析器质量分析器n检测器检测器n电子倍增器、微通道板电子倍增器
16、、微通道板等等n真空系统真空系统n为何须要保持真空？为何须要保持真空？n为何通常须要待机？为何通常须要待机？n须要液氮，是否冲突？须要液氮，是否冲突？n计算机系统计算机系统离子源离子源n离子源是使样品分子、原子或自由基转变为气相离子离子源是使样品分子、原子或自由基转变为气相离子的器件，是质谱仪的的器件，是质谱仪的“门户门户”n有机有机MSMS中几种常见的离子源中几种常见的离子源n电子电离（电子电离（Electron IonizationElectron Ionization，EIEI）源）源n化学电离（化学电离（CICI）源）源n较较“软软”电离；须要试剂气；适合电离；须要试剂气；适合GCGC
17、n大气压电离（大气压电离（Atmospheric Pressure IonizationAtmospheric Pressure Ionization，APIAPI）源）源n基质协助激光解吸电离（基质协助激光解吸电离（MALDIMALDI）源）源n适合蛋白质分析适合蛋白质分析n无机无机MSMS中几种常见的离子源中几种常见的离子源n 感耦等离子体（感耦等离子体（Inductively Coupled PlasmaInductively Coupled Plasma，ICPICP）源）源EI源源n曾称为“电子轰击（ElectronImpact，EI）”电离源特点特点n“硬硬”电离电离 分子离子、碎
18、片离子；分子离子、碎片离子；多用于一级多用于一级MSn质谱图重复性好质谱图重复性好API源源n顾名思义，顾名思义，API是在是在大气压大气压而非高（如而非高（如EI）或）或低（如低（如CI）真空环境中实现的一类电离技术）真空环境中实现的一类电离技术nAPI源的出现，解源的出现，解决决了色谱仪与质谱仪接口的了色谱仪与质谱仪接口的难题难题，极大地推动了，极大地推动了LC-MS的成熟的成熟API源源n主要包括以下主要包括以下3种类型种类型电喷雾电离（E Electrolectros sprayprayI Ionizationonization，ESIESI）源大气压化学电离（AtmosphericP
19、ressureChemicalIonization，APCI）源大气压光电离（AtmosphericPressurePhotoionization，APPI）源ESI源源SCIEX公司的公司的ESI源源ESI源源Waters公司的公司的ESI源（源（Z-Spray）ESI源源Agilent公司的公司的ESI源源ESI的机理的机理n电离过程大致可分成三个阶段（以电离过程大致可分成三个阶段（以ESI为例）：为例）：n第一阶段：使溶液分散成带电雾滴第一阶段：使溶液分散成带电雾滴n强电场强电场液滴形成泰勒锥液滴形成泰勒锥瑞利稳定极限瑞利稳定极限锥喷锥喷流（流（Cone-Jet）约约1mm后就快速膨胀为
20、羽流后就快速膨胀为羽流（Plume），即多个带正电荷的直径为），即多个带正电荷的直径为12m的的雾滴（高压静电气动协助）雾滴（高压静电气动协助）ESI的机理的机理锥喷流的照片锥喷流的照片ESI的机理的机理n其次阶段是溶剂蒸发与雾滴其次阶段是溶剂蒸发与雾滴-喷流分裂（喷流分裂（Droplet-JetFission）n溶剂蒸发溶剂蒸发雾滴缩小雾滴缩小电荷密度增加电荷密度增加当达到瑞当达到瑞利稳定极限时利稳定极限时遂发生遂发生“雾滴雾滴-喷流分裂喷流分裂”循循环往复环往复体积越来越小体积越来越小ESI的机理的机理n第三阶段是产生气相离子，即离子从溶液中转移出第三阶段是产生气相离子，即离子从溶液中转移
21、出来以气态存在来以气态存在n离子蒸发模型（离子蒸发模型（IonEvaporationModel，IEM）n当雾滴半径达当雾滴半径达nm级时，高挥发性的离子聚集在雾级时，高挥发性的离子聚集在雾滴表面，在强电场作用下发生场协助蒸发，干脆从滴表面，在强电场作用下发生场协助蒸发，干脆从雾滴中雾滴中“弹出弹出”，成为气相离子。，成为气相离子。n带电残渣模型（带电残渣模型（ChargedResidueModel，CRM）n该模型认为只有雾滴中的溶剂完全蒸发时，化合物该模型认为只有雾滴中的溶剂完全蒸发时，化合物才能继承多电荷形成一个气相离子。才能继承多电荷形成一个气相离子。n两种模型均有试验支持。一般认为，
22、小分子化合物两种模型均有试验支持。一般认为，小分子化合物可用可用IEM说明，大分子化合物则用说明，大分子化合物则用CRM说明说明ESI的特点的特点n在大气压下进行在大气压下进行n对比：对比：EIEI在真空状态下进行在真空状态下进行n“软软”电离电离n形成离子：加合离子形成离子：加合离子MMHH、MMNaNa、MMNH4NH4 、MMClCl等；去质子化分子等；去质子化分子MHMHn 对比：对比：EIEI是是“硬硬”电离电离n单电荷与多电离离子单电荷与多电离离子n小分子以单电荷离子为主，大分子以多电荷离子为小分子以单电荷离子为主，大分子以多电荷离子为主主n基质效应基质效应n可能存在基质增加或抑制
23、可能存在基质增加或抑制n如何推断是否存在？如何推断是否存在？n解决方法？（同位素标记内标、基质加标、改进样解决方法？（同位素标记内标、基质加标、改进样品前处理品前处理）质量分析器质量分析器n1.四极质量分析器（四极质量分析器（QMA）n定性、定量的利器；灵敏、特异，线性范围宽定性、定量的利器；灵敏、特异，线性范围宽n2.四极离子阱（四极离子阱（QIT）n捕获离子；可实现多级质谱法；定性实力强，定捕获离子；可实现多级质谱法；定性实力强，定量实力不及量实力不及QMAn3.线性离子阱（线性离子阱（LIT）n离子容量比离子容量比QIT大，很多性能优于大，很多性能优于QIT；n有有2种类型，其中一种为种
24、类型，其中一种为QTRAPTM（Q-LIT）n注：以上注：以上3种质量分析器有共同的理论基础种质量分析器有共同的理论基础Mathieu（马蒂厄）方程（马蒂厄）方程质量分析器质量分析器n4.飞行时间（飞行时间（TOF）质量分析器）质量分析器n高辨别率（高质量精确度）；（半）未知物筛查高辨别率（高质量精确度）；（半）未知物筛查n5.轨道阱（轨道阱（Orbitrap）n超超高高辨辨别别率率（高高质质量量精精确确度度）；（半半）未未知知物物筛筛查查n6.扇形磁场分析器扇形磁场分析器n7.扇形电场分析器扇形电场分析器n不不能能单单独独组组成成质质谱谱仪仪；与与扇扇形形磁磁场场分分析析器器组组成成双双聚聚
25、焦焦分分析析器器（最最早早出出现现的的分分析析器器之之一一，辉辉煌煌的的时时代已成过去时代已成过去时）n8.离子回旋共振离子阱（离子回旋共振离子阱（ICR-IT）n超高辨别率（高质量精确度）；价格特别昂贵超高辨别率（高质量精确度）；价格特别昂贵四极质量分析器四极质量分析器U是直流（是直流（DC）电压）电压V是射频（是射频（RF）电压）电压理论基础理论基础Mathieu方程方程n由 法 国 数 学 家.Mathieu（马 蒂 厄，18351890）于1868年提出，最初是为了解决椭圆形鼓膜的横向振动一类的问题，后来发觉可用来描述离子在四极场中的运动轨迹及稳定运动的条件运动方程运动方程Orbitr
26、ap（轨道阱）（轨道阱）TOF串联质谱仪和多级质谱仪串联质谱仪和多级质谱仪n由两个及以上的质量分析器串联组成由两个及以上的质量分析器串联组成n碰撞池是连接各质量分析器的桥梁碰撞池是连接各质量分析器的桥梁n单一型单一型QqQ、QqQqQ、TOF-TOFn杂交型杂交型Q-LIT、QTOF、Q-Orbitrap、LIT-Orbitrap、QIT-TOFQqQ和和Q-LIT质谱仪质谱仪nQqQ（QoQ、QhQ）nh表示六极杆（表示六极杆（Hexapole）、）、o表示八极杆表示八极杆（Octopole）n碰撞池碰撞池n仅加仅加RF电压；小写电压；小写q以示区分以示区分n碰撞气（以碰撞气（以N2居多）居
27、多）QqQ和和Q-LIT质谱仪质谱仪QTRAP系列系列串联质谱法和多级质谱法串联质谱法和多级质谱法n串串 联联 质质 谱谱 法法（MS/MS，MS2）和和 多多 级级 质质 谱谱 法法（MSn）n先先驱驱离离子子（母母离离子子、前前体体离离子子）和和产产物物离离子子（子子离离子子、孙离子、第孙离子、第n代产物离子）是相对而言的代产物离子）是相对而言的nm1m2m3m4m5n空间空间MS/MS和和MSnn在串联质谱仪和多级质谱仪上实现在串联质谱仪和多级质谱仪上实现n时间时间MS/MS和和MSnn通通过过不不断断增增加加分分析析器器个个数数来来增增加加MS的的级级数数终终归归是是不不现实的现实的n
28、不须要串联质谱仪和多级质谱仪不须要串联质谱仪和多级质谱仪nQIT、LIT和和ICR等离子阱类质谱仪等离子阱类质谱仪单级单级MS扫描模式扫描模式n以四极质谱仪为例：以四极质谱仪为例：nQ1全扫描（全扫描（Q1FullScan）Q1选择一段m/z范围的离子通过，q2、Q3全通过用于需找未知化合物；目标化合物的方法开发nQ3全扫描（全扫描（Q3FullScan）Q1、q2全通过，Q3选择一段m/z范围的离子通过单级单级MS扫描模式扫描模式n选择离子监测（选择离子监测（SelectedIonMonitoring，SIM）Q1选择一个特定m/z的离子通过，q2、Q3全通过或者，Q1、q2全通过，Q3选择
29、一个特定m/z的离子通过目标化合物的定性、定量分析信噪比比全扫描更高GC-MS最常用的扫描模式MS/MS扫描模式扫描模式n多多反反应应监监测测（MultipleReactionMonitoring，MRM）又称为“选择反应监测（SelectedReactionMonitoring，SRM）”“反应”指的是碰撞反应MRM是QqQ最主要的工作模式，用于定量分析MS/MS扫描模式扫描模式nMRM模式下，每一化合物选择模式下，每一化合物选择2组组离子对即可确证离子对即可确证Commission Decision of 12 August 2002:Implementing Council Direct
30、ive96/23/EC Concerning the Performance of Analytical Methods and theInterpretationofResults(2002/657/EC).OffJEurCommunities，2002，L221：8.MS/MS扫描模式扫描模式n产物离子扫描（ProductIonScan）与MRM不同的是，Q3是选择一段m/z范围的离子通过 进一步增加定性的牢靠性食品平安风险监测食品平安风险监测n食源性食源性疾病疾病、食品、食品污染污染以及食品中以及食品中有害有害因素（物因素（物理、化学、生物因素）理、化学、生物因素）食品平安风险监测食品平
31、安风险监测食品平安风险监测食品平安风险监测食品平安风险监测食品平安风险监测真菌毒素（真菌毒素（DONs和和ZON）真菌毒素（真菌毒素（DONs和和ZON）化合物化合物母离子（母离子（m/z）子离子（子离子（m/z）所用内标所用内标DON295.1264.9*13C15-DON138.13-ADON337.1307.1*13C15-DON173.115-ADON337.1150.1*13C15-DON219.0ZON317.2175.013C18-ZON273.213C15-DON310.1279.0*144.913C18-ZON335.3185.2*290.2*定量离子。定量离子。真菌毒素（真
32、菌毒素（DONs和和ZON）硝基呋喃代谢物硝基呋喃代谢物硝基呋喃代谢物硝基呋喃代谢物n样品匀浆加入10mL甲醇-水（1:1）振荡提取弃去液体加10mL0.2mol/L盐酸均质加入混合内标标准溶液、邻硝基苯甲醛溶液置37恒温箱中过夜加1mL0.3mol/L磷酸钾氢氧化钠调pH7.4分别加入10mL乙酸乙酯提取两次收集乙酸乙酯层氮吹残渣用1mL0.1%甲酸溶解再用3mL乙腈饱和的正己烷分两次液液安排下层水相过0.2m微孔滤膜取10L供仪器测定硝基呋喃代谢物硝基呋喃代谢物化合物化合物母离子（母离子（m/z）子离子（子离子（m/z）2-NP-AOZ236.2134.1*104.22-NP-AMOZ33
33、5.2291.2*262.32-NP-AHD249.2133.8*104.12-NP-SEM209.2166.2*192.22-NP-D4-AOZ240.1134.0*2-NP-D5-AMOZ340.1296.0*2-NP-13C3-AHD252.1134.0*2-NP-13C15N2-SEM212.1168.0*生活饮用水分析生活饮用水分析n灭草松和2,4-滴是两种常见的除草剂。nLC由于紫外检测的灵敏度较低，需取大体积水样进行浓缩，否则不能满足卫生标准的检出要求GB/T5750-2006生活饮用水标准检验方法接受GC，水样需先经液液萃取，浓缩后再甲基化衍生，操作步骤较为繁琐 灭草松灭草松2
34、,4-滴滴生活饮用水分析生活饮用水分析化合物化合物前体离子（前体离子（m/z）产物离子（产物离子（m/z）灭草松灭草松238.7132.0*175.1196.92,4-滴滴221.0160.8*162.8n水样水样0.45m滤膜过滤滤膜过滤干脆进样分析干脆进样分析n基质加标工作曲线基质加标工作曲线生活饮用水分析生活饮用水分析生活饮用水分析生活饮用水分析化合物化合物检出限检出限（mg/L）卫生限量卫生限量（mg/L）灭草松灭草松0.00040.32,4-滴滴0.00060.03仪器安装的环境条件仪器安装的环境条件n温度、湿度温度、湿度n高辨别率质谱仪要求更严；仪器和操作高辨别率质谱仪要求更严；仪器和操作者在不同的隔离空间；者在不同的隔离空间；n排风、补风排风、补风n废弃排放废弃排放n电压、电流电压、电流n氮气氮气/零级发生器（噪音、电压、通风）零级发生器（噪音、电压、通风）感谢！感谢！