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1、精选学习资料 - - - - - - - - - 生物安全手册目录目录 .1 第一部分 基本规范 .2 进入规定 .2 人员防护 .3 试验室工作区 .3 生物安全治理 .4 其次部分 试验室技术 . .4 移液管和移液帮助器的使用 .5 生物安全柜的使用 .5 血清的分别 .6 离心机的使用 .6 冰箱与冰柜的爱护和使用 .7 装有冻干物质安瓿的开启.8 第三部分 消毒和灭菌 . .8 一、定义 .8 二、化学杀菌剂 .9 氯（次氯酸钠）.10 乙醇 .10 碘和碘伏 .11 三、清除局部环境的污染.12 四、洗手清除手部污染 .12 五、高压灭菌 .12 高压灭菌参数 .12 高压灭菌器的
2、装载.13 高压灭菌器使用留意事项 .13 附录 1 .14 设备的安全性 . .14 表 A1-1 可能产生危害的仪器设备及其操作 . .14 表 A1-2 仪器设备相关事故的缘由 . .8 表 A1-3 生物安全设备 . .9 表 A1-4 个体防护装备 . .10 1 名师归纳总结 - - - - - - -第 1 页,共 10 页精选学习资料 - - - - - - - - - 第一部分 基本规范依据感染性微生物的相对危害程度（危急度 2级,病原体能够对人致病,但对试验 室工作人员或环境不易导致严峻危害）,本试验室为基础试验室,属于二级生物安全水平；进入规定 1、在试验室门上应标有国际
3、通用的生物危害警告标志（图1）；2、只有经批准的人员方可进入试验室工作区域；3、试验室的门应保持关闭；4、儿童不应被批准或答应进入试验室工作区域；5、与试验室工作无关的动物不得带入试验室；人员防护 1、在HIV试验室工作时,任何时候都必需穿着工作服；2、在进行可能直接或意外接触到血液、体液以及其他具有潜在感染性的材料的操作时,应戴上合适的手套；手套用完后,应先消毒再摘除,随后必需洗手；3、在处理完感染性试验材料后,以及在离开试验室工作区域前,都必需洗手；4、为了防止眼睛或面部受到泼溅物、碰撞物或人工紫外线辐射的损害,必需戴安全眼镜、面罩（面具）或其他防护设备；5、严禁穿着试验室工作服离开试验室
4、,（如去餐厅、咖啡厅、办公室、图书馆、员 工休息室和卫生间）；6、不得在试验室内穿露脚趾的鞋子；7、禁止在试验室工作区域进食、饮水、吸烟、化妆和处理隐形眼镜；8、禁止在试验室工作区域储存食品和饮料；2 名师归纳总结 - - - - - - -第 2 页,共 10 页精选学习资料 - - - - - - - - - 9、在试验室内用过的工作服不得和日常服装放在同一柜子内；试验室工作区 1、试验室应保持清洁整齐,严禁摆放和试验无关的物品；2、发生具有潜在危害性的材料溢出以及在每天工作终止之后,都必需清除工作台面的污染；3、全部受到污染的材料、标本和培育物在废弃或清洁再利用之前,必需清除污染；4、在
5、进行包装和运输时必需遵循国家和或国际的相关规定；5、假如窗户可以打开,就应安装防止节肢动物进入的纱窗；生物安全治理1、试验室主任（对试验室直接负责的人员）负责制订和采纳生物安全治理方案以及 安全或操作手册；2、试验室主管（向试验室主任汇报）应当保证供应常规的试验室安全培训；3、要将生物安全试验室的特殊危害告知试验室人员,同时要求他们阅读生物安全或 操作手册,并遵循标准的操作和规程；试验室主管应当确保全部试验室人员都明白这些要求；试验室内应备有可供取阅的安全或操作手册；4、应当制订节肢动物和啮齿动物的掌握方案；5、如有必要,应为全部试验室人员供应相宜的医学评估、监测和治疗,并应妥当保 存相应的医
6、学记录；其次部分 试验室技术试验室损害以及与工作有关的感染主要是由于人为失误不良试验技术以及仪器使用不当造成的；本部分概要介绍了防止或尽量削减这类常见问题的技术和方法；移液管和移液帮助器的使用1、应用移液帮助器,严禁用口吸取；2、全部移液管应带有棉塞以削减移液器具的污染；3、不能向含有感染性物质的溶液中吹入气体；4、感染性物质不能使用移液管反复吹吸混合；5、不能将液体从移液管内用力吹出；6、污染的移液管应完全浸入适当的消毒液中,并在消毒液中浸泡适当时间后再进行 处理；7、盛放废弃移液管的容器应当放在生物安全柜内；8、为了防止感染性物质从移液管中滴出而扩散,在工作台面应当放置一块吸有消毒 液的纸
7、,使用后将其按感染性废弃物处理；生物安全柜的使用1、生物安全柜运行正常时才能使用；2、生物安全柜在使用中不能打开玻璃观看挡板；3、安全柜内应尽量少放置器材或标本,不能影响后部压力排风系统的气流循环；4、全部工作必需在工作台面的中后部进行,并能够通过玻璃观看挡板看到；5、尽量削减操作者身后的人员活动；6、操作者不应反复移出和伸进手臂以免干扰气流；7、不要使试验记录本移液管以及其他物品阻挡空气格栅,引起物品的潜在污染和操作者的暴露；3 由于这将干扰气体流淌,名师归纳总结 - - - - - - -第 3 页,共 10 页精选学习资料 - - - - - - - - - 8、工作完成后以及每天下班前
8、, 应使用 70%的酒精对生物安全柜的台面进行擦拭,但切忌用酒精擦拭玻璃挡板；9、在安全柜内的工作开头前和终止后,安全柜的风机应至少运行5min；10、在生物安全柜内操作时,不能进行文字工作；血清的分别1、只有经过严格培训的人员才能进行这项工作；2、操作时应戴手套以及眼睛和黏膜的爱护装置；3、血液和血清应当当心吸取,而不能倾倒；严禁用口吸液；4、移液管使用后应完全浸入适当的消毒液中,并在消毒液中浸泡适当的时间,然后 再丢弃或灭菌清洗后重复使用；5、带有血凝块等的废弃标本管,在加盖后应当放在适当的防漏容器内高压灭菌；离心机的使用1、应依据操作手册来操作离心机；2、离心管在使用前应检查是否破旧；3
9、、用于离心的离心管应当始终坚固盖紧；4、离心桶的装载、平稳、密封和打开必需在生物安全柜内进行；5、离心桶和十字轴应按重量配对,并在装载离心管后正确平稳；6、操作指南中应给出液面距离心管管口需要留出的空间大小；7、空离心桶应当用蒸馏水来平稳；8、每次使用后,要清除离心桶、转子和离心机腔的污染；9、使用后应当将离心桶倒置存放使平稳液流干；10、应当每天检查离心机内转子部位的腔壁是否被污染或弄脏,评估离心操作规范；如污染明显, 应重新冰箱与冰柜的爱护和使用1、冰箱、低温冰箱和干冰柜应当定期除霜和清洁,应清理出全部在储存 过程中破裂的安瓿和试管等物品；清理时应戴厚橡胶手套并进行面部防护,清理后要对内表
10、面进行消毒；2、储存在冰箱内的全部容器应当清晰地标明内装物品的科学名称、储存日期和储存 者的姓名；未标明的或废旧物品应当高压灭菌并丢弃；3、应当储存一份冻存物品的清单；4、除非有防爆措施,否就冰箱内不能放置易燃溶液；冰箱门上应注明这一点；装有冻干物质安瓿的开启 1、第一清除安瓿外表面的污染；2、假如管内有棉花或纤维塞,可以在管上靠近棉花或纤维塞的中部锉一痕迹；3、用一团酒精浸泡的棉花将安瓿包起来以爱护双手,然后手持安瓿从标记的锉痕处 打开；4、将顶部当心移去并按污染材料处理；5、假如塞子仍旧在安瓿上,用消毒镊子除去；6、缓慢向安瓿中加入液体来重悬冻干物,防止显现泡沫；第三部分 消毒和灭菌一、定
11、义4 名师归纳总结 - - - - - - -第 4 页,共 10 页精选学习资料 - - - - - - - - - 关于消毒和灭菌有很多不同的术语,下面是生物安全中较常用的：抗菌剂（ antimicrobial） 能够杀死微生物或抑制它们生长和繁衍的制剂；防腐剂（ antiseptic） 能够抑制微生物生长和繁衍但不足将其杀灭的物质；防腐剂常常应用于体表；生物杀灭剂（ biocide ） 全部能够杀死生物体的制剂的统称；化学杀菌剂（ chemicalgermcide ）用于杀死微生物的化学品或化学混合物；清除污染（ decontamination ）去除和或杀死微生物的任何过程；该词也用于
12、去除或中和有危害的化学品和放射性物质；消毒剂（ disinfectant） 用于杀死微生物的化学品或化学混合物,但不肯定杀死其孢子；消毒剂常用于非生命物体或其表面；消毒（ disinfection 灭菌剂（microbicide）杀死微生物的物理或化学手段,但不肯定杀死其孢子；） 能够杀死微生物的化学品或化学混合物；该词常常可以代替“ 生物杀灭剂” 、“ 化学杀菌剂” 或“ 抗菌剂” ；杀孢子剂（ sporocide ） 用于杀死微生物和孢子的化学品或化学混合物；灭菌（sterilization） 杀死和或去除全部微生物及其孢子的过程；二、化学杀菌剂很多杀菌剂对人或环境有害,应当按生产商的说明
13、当心地进行挑选、贮存、操作、使用和废弃；为了个人的安全,建议在稀释化学杀菌剂时应戴手套、围裙和爱护眼睛的器具；下面介绍一些常规使用的化学杀菌剂,并列出它们的一般用途和安全特点；除非另外标注,杀菌剂的浓度用重量体积（浓度；w/v）来表示；表 3-1 汇总了含氯消毒剂的举荐使用表1 含氯消毒剂的举荐使用浓度所需的有效氯浓度下“ 清洁” 情形 a下“ 污染” 情形 b0.1%（1 g/L ）0.5%（5 g/L ）次氯酸钠溶液（含有 5的有效氯）20 mL/L 100 mL/L 次氯酸钙（含有 70的有效氯）1.4 g/L 7.0 g/L 二氯异氰尿酸钠粉剂（含 60的有效氯）1.7 g/L 8.5
14、 g/L 二氯异氰尿酸钠片剂（每片含1.5 g 有效每升 1 片每升 4 片氯）20 g/L 20 g/L 氯胺（含有 25的有效氯）ca 去除大部分污染材料后 b 溢流情形（如血液）或大量污染材料没有除去时 c 参见正文 氯（次氯酸钠）1、氯属于快速作用的氧化剂,是一种可广泛应用的广谱化学杀菌剂；它一般以次氯 酸钠（ NaOCl）溶液来作为漂白剂销售；但氯的很多副产物可能对人体及环境有害,应该防止滥用含氯消毒剂,特殊是漂白剂；2、常规试验室消毒剂的有效氯浓度为1 g/L ；处理生物危害性物质的溢出以及含有大量有机物的情形时用含有 5 g/L 有效氯的更强作用的溶液；家用漂白剂的次氯酸钠溶液含
15、有 50 g/L 的有效氯,工业用漂白剂的次氯酸钠溶液含有近 必需进行相应的稀释来达到工作浓度；120 g/L 的有效氯,因此3、次氯酸钙 Ca（ClO）2的颗粒或片剂一般含有 70%的有效氯；用颗粒或片剂配制浓度 1.4 g/L 或7.0 g/L 的溶液,其有效氯浓度分别为1 g/L 和5 g/L ；5 名师归纳总结 - - - - - - -第 5 页,共 10 页精选学习资料 - - - - - - - - - 4、不建议将漂白剂当作防腐剂使用,但可以用作一般目的的消毒剂以及用于浸泡非金属类的污染材料；在紧急情形下也可以用终浓度含 饮用水；12 mg/L 有效氯的漂白剂来消毒5、氯气具有
16、强毒性；因此漂白剂只能在通风良好的地方储存和使用；6、漂白剂不能与酸混合以防止氯气快速释放；乙醇 1、乙醇（ C2H5OH）对于繁衍的细菌、真菌和含脂病毒具有活性,但不能灭活孢子,而对非含脂病毒的作用就不确定；2、其水溶液最有效的使用浓度约为70（v/v ）；更高或更低的浓度均不相宜杀菌；3、醇类溶液的主要优点是处理后物品不会留下任何残留物；4、将乙醇与其他试剂混合使用比单独使用更有效,如 甲醛混合使用,以及使用含有 2 g/L 有效氯的乙醇；70（v/v ）乙醇和 100 g/L 的5、70%（v/v ）乙醇溶液可以用于消毒皮肤、试验台和生物安全柜的工作台面,以及 浸泡小的外科手术器械；6、
17、由于乙醇可以使皮肤干燥,所以常常与润滑剂混合使用；7、在不便于或不行能进行完全洗手的情形下,举荐使用含乙醇的擦手液对轻度污染 的手进行消毒；但是必需记住,乙醇对孢子无效,而且不能杀死全部类型的非含脂类病 毒；8、乙醇是易挥发和易燃的,不能在明火邻近使用；9、其工作液应储存在适当的容器内以防止醇类挥发；10、乙醇可以硬化橡胶并溶解某些胶质；11、为了防止乙醇用于其他非灭菌目的,特别重要的；在试验室里对乙醇进行特地的清点和储存是12、含有乙醇溶液的瓶子必需清晰标记以防止被意外高压灭菌；碘和碘伏 1、这类消毒剂的作用与氯类似,只是有机质对它们的抑制作用略弱；2、碘可以使纤维和环境表面着色,一般不适合
18、作为消毒剂；但是,碘伏和碘酊是很 好的抗菌剂；3、多聚碘（ polyvidone iodine ）是一种安全牢靠的外科手术擦手剂和手术前皮肤抗 菌剂；4、碘类抗菌剂一般不适于医疗牙医器械的消毒；5、碘不能在铝或铜上使用；6、碘有毒性； 含有有机碘的产品必需于 410储存,以防止有潜在危害性的细菌在 里面生长；三、清除局部环境的污染 清除表面污染时使用次氯酸钠 （NaOCl）溶液；含有 1有效氯的溶液适于一般的环境卫生设备,但是当处理高危环境时,建议使用高浓度（染时,含有 3过氧化氢的溶液也可以作为漂白剂的 代用品；5 g/L ）溶液；用于清除环境污四、洗手清除手部污染 1、试验室人员需要常常地
19、、完全地洗手；2、处理完生物危害性材料后以及离开试验室前均必需洗手；3、大多数情形下,用一般的肥皂和水完全冲洗对于清除手部污染就足够了；但在高 度危急的情形下,建议使用杀菌肥皂；手要完全抹上肥皂,搓洗至少 10 秒钟,用洁净6 名师归纳总结 - - - - - - -第 6 页,共 10 页精选学习资料 - - - - - - - - - 水冲洗后再用洁净的纸巾或毛巾擦干；4、应使用纸巾或毛巾来关上水龙头,以防止再度污染洗净的手；5、假如没有条件完全洗手或洗手不便利,应当用酒精擦手来清除双手的轻度污染；五、高压灭菌高压灭菌的湿热法是最常用、最为有效的清除病原体污染的物理手段；灭菌后的物品必需当
20、心操作并储存,以保证在使用之前不再被污染；高压灭菌参数对于大多数目的,以下组合可以确保正确装载的高压灭菌器的灭菌成效：1、134、3min 2、126、10min 3、121、30min 4、115、45min 高压灭菌器的装载为了利于蒸汽的渗透和空气排出,高压灭菌物品应松散包装放置在灭菌器内；要使蒸汽能够作用到其内容物；高压灭菌器使用留意事项1、应由受过良好培训的人员负责高压灭菌器的操作和日常爱护；2、由有资质人员定期检查灭菌器柜腔、门的密封性以及全部的外表和掌握器；3、应使用饱和蒸汽,并且其中不含腐蚀性抑制剂或其他化学品,这些物质可能污染正在灭菌的物品；4、全部要高压灭菌的物品都应放在空气
21、能够排出并具有良好热渗透性的容器中；灭菌器柜腔装载要松散,以便蒸汽可以匀称作用于装载物；5、当灭菌器内部加压时,互锁安全装置可以防止门被打开,而没有互锁装置的高压灭菌器,应当关闭主蒸汽阀并待温度下降到80以下时再打开门；6、当高压灭菌液体时,由于取出液体时可能因过热而沸腾,故应采纳慢排式设置；7、即使温度下降到 80以下,操作者打开门时也应当戴适当的手套和面罩来进行防 护；8、在进行高压灭菌成效的常规监测中,生物指示剂或热电偶计应置于每件高压灭菌 物品的中心；最好在“ 最大” 装载时用热偶计和记录仪进行定时监测,以确定灭菌程序 是否恰当；9、应当留意保证高压灭菌器的安全阀没有被高压灭菌物品中的
22、纸等堵塞；附录 1 设备的安全性仪器设备在使用时, 有些操作可能造成微生物学危害,门设计用来防止或削减生物学危害的；而另外一些操作或处理就是专表A1-1 可能产生危害的仪器设备及其操作仪器危害如何排除或削减危害皮下注射意外接种、产生不要重新给针头戴护套或截断针头；针头气溶胶或有害物质7 名师归纳总结 - - - - - - -第 7 页,共 10 页精选学习资料 - - - - - - - - - 仪器危害如何排除或削减危害溢出使用针头锁定型注射器以防止针头和注射器的分别,或使用针头和注射器为一体的一次性注射 器；采纳规范的试验室技术,例如：注射器抽液时要当心,尽可能削减形成气泡 和 接种物泡
23、沫；防止用注射器来混合感染性液体；否就,要 确 保针头的尖端伸入到容器中液面之下,并防止 用力过大；从有橡皮塞的瓶子中取下针头之前,应用经 适 当消毒剂浸湿的脱脂棉来包裹针头和塞子；竖直向上将注射器中过量的液体和气泡排 到 经适当消毒剂浸湿的脱脂棉或装有棉花的小 瓶中；操作感染性物质时均应在生物安全柜中进行；使用后要进行高压灭菌并确保进行了妥当处 理；假如使用的是一次性针头和注射器,只有在高 压灭菌后才能拆卸；使用可封闭性的容器（安全杯）或密封转子；在气溶胶沉降后（ 30min）再打开容器或转子,或在 生物安全柜中操作；离心机产愤怒溶胶、喷沉在离心机和真空泵之间安装HEPA 过滤器；溅及离心管
24、破裂振荡器产愤怒溶胶、泄在打开匀浆器以前先等候30min 以使气溶胶漏和容器破裂积；冷却以使气溶胶凝结；表A1-2 仪器设备相关事故的缘由事故事故缘由削减或排除危害设计或建造有缺陷击培育箱有电火花电没有温度过高断路装置符合国家标准没有供应牢靠的接地不适当使用离心事故衡转轴上的离心桶吊篮没有平培训和监督工作人员厌氧培育箱爆炸不正确使用气体培训和监督工作人员不正确配用8 名师归纳总结 - - - - - - -第 8 页,共 10 页精选学习资料 - - - - - - - - - 事故事故缘由削减或排除危害家用型冰箱爆炸危急性化学品没有储存在防低闪点溶剂和提取物仅火防爆容器中,如用渗漏的螺贮存在
25、具有火花爆炸爱护旋瓶盖储存乙醚；装置的冰箱或安全柜中；表A1-3 生物安全设备设备防止的危害安全性特点生物安全柜级气溶胶和喷溅尽量减小工作入口处向内的气流（正面气流速度）；排风经充分过滤级气溶胶和喷溅不能爱护操作对象尽量减小工作窗口处向内的气流（正面气流速度）；排风经充分过滤级气溶胶和喷溅可以爱护操作对象最高防护假如内部为层流气流, 就可以爱护操作对象移液帮助器由于口吸产生的危便于使用害,例如病原体的食掌握吸管吸入端的污染, 爱护移液辅入、吸入用口抽吸吸管助器、操作者和真空管道时所生成的气溶胶、 从可以灭菌吸管中吹出或滴出液微 型 接种 环 加体、吸管吸入端的污染掌握吸管尖端的泄漏等遮护玻璃管
26、或陶瓷管的开口端,采纳移动接种环时造成热器、一次性接种气体或电加热的喷溅环一次性的,不需加热设施内用产愤怒溶胶、溢出有罩或盖子的防漏结构于 收 集 并 运 送 感耐用染 性 物 质 进 行 灭和泄漏菌的防漏容器意外刺伤耐高压灭菌盛 放 锐器 的 一耐高压灭菌次性容器坚固,不易刺破实 验 室和 单 位微生物泄漏坚固能盛放溢出物的防水性一级和二级容间 运 送 物 品 的 容器器用于吸取溢出物的材料手 动 或自 动 的感染性物质（以保经批准的设计证丢弃或重复使用时有效的加热灭菌高压灭菌器的安全）螺口盖的瓶子产愤怒溶胶和泄漏有效的防护9 名师归纳总结 - - - - - - -第 9 页,共 10 页精选学习资料 - - - - - - - - - 表A1-4 个体防护装备装备防止的危害安全性特点试验服、隔离衣、污染衣服背面开口连体衣罩在日常服装外鞋袜碰撞和喷溅不露脚趾护目镜碰撞和喷溅防碰撞镜片 （必需有视力校正或外戴视力校正眼镜）N95口罩碰撞和喷溅侧面有护罩罩住面部发生意外时易于取下得到微生物学认可的一次性乳胶、乙烯树脂或聚腈类材料手套直 接 接 触 微爱护手生物划破网孔结构10 名师归纳总结 - - - - - - -第 10 页,共 10 页