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1、六章中药制剂中各类化学成分分析 Still waters run deep.流静水深流静水深,人静心深人静心深 Where there is life,there is hope。有生命必有希望。有生命必有希望 1 1 生物碱类成分分析生物碱类成分分析n n概述概述概述概述n n理化性质理化性质理化性质理化性质 物理性状物理性状物理性状物理性状（存在的形态，升华性，挥发性，光学活性）（存在的形态，升华性，挥发性，光学活性）碱性碱性碱性碱性 溶解性溶解性溶解性溶解性 沉淀反应沉淀反应沉淀反应沉淀反应n n沉淀剂：碘化物复盐、重金属盐、大分子酸沉淀剂：碘化物复盐、重金属盐、大分子酸沉淀剂：碘化物复
2、盐、重金属盐、大分子酸沉淀剂：碘化物复盐、重金属盐、大分子酸 显色反应显色反应显色反应显色反应n n+酸性染料（磺酸肽类）酸性染料（磺酸肽类）酸性染料（磺酸肽类）酸性染料（磺酸肽类）有色配合物有色配合物有色配合物有色配合物 紫外光谱特征紫外光谱特征紫外光谱特征紫外光谱特征游离易溶于CHCl3，Et2O，EtOH等有机溶剂生物碱盐水溶性增强n n生物碱类成分的分离生物碱类成分的分离溶剂萃取溶剂萃取溶剂萃取溶剂萃取柱层析（氧化铝、硅藻土、离子交换柱）柱层析（氧化铝、硅藻土、离子交换柱）柱层析（氧化铝、硅藻土、离子交换柱）柱层析（氧化铝、硅藻土、离子交换柱）n n定性鉴别定性鉴别 沉淀反应、显色反应
3、沉淀反应、显色反应沉淀反应、显色反应沉淀反应、显色反应n n多肽、蛋白质、鞣质等多肽、蛋白质、鞣质等多肽、蛋白质、鞣质等多肽、蛋白质、鞣质等假阳性反应假阳性反应假阳性反应假阳性反应n n麻黄碱、秋水仙碱等麻黄碱、秋水仙碱等麻黄碱、秋水仙碱等麻黄碱、秋水仙碱等假阴性反应假阴性反应假阴性反应假阴性反应马钱子散中生物碱成分的鉴别马钱子散中生物碱成分的鉴别取马钱子散取马钱子散1g，加浓氨试液数滴及氯仿，加浓氨试液数滴及氯仿10ml，浸泡数小时，浸泡数小时，滤过，取滤液滤过，取滤液1ml蒸干，残渣加稀盐酸蒸干，残渣加稀盐酸1ml使溶解，加碘化铋使溶解，加碘化铋钾试液钾试液12滴，即生成黄棕色沉淀。滴，即
4、生成黄棕色沉淀。n n定性鉴别定性鉴别薄层色谱鉴别薄层色谱鉴别薄层色谱鉴别薄层色谱鉴别n n吸附剂：氧化铝、硅胶吸附剂：氧化铝、硅胶吸附剂：氧化铝、硅胶吸附剂：氧化铝、硅胶n n展开剂：氯仿、苯等展开剂：氯仿、苯等展开剂：氯仿、苯等展开剂：氯仿、苯等n n显色剂：改良碘化铋钾试剂，碘蒸气等显色剂：改良碘化铋钾试剂，碘蒸气等显色剂：改良碘化铋钾试剂，碘蒸气等显色剂：改良碘化铋钾试剂，碘蒸气等气相色谱气相色谱气相色谱气相色谱麻黄碱、苦参碱、颠茄类生物碱的含量测定麻黄碱、苦参碱、颠茄类生物碱的含量测定麻黄碱、苦参碱、颠茄类生物碱的含量测定麻黄碱、苦参碱、颠茄类生物碱的含量测定液相色谱液相色谱液相色谱
5、液相色谱n n含量测定含量测定总生物碱含量测定总生物碱含量测定总生物碱含量测定总生物碱含量测定 n n化学分析法化学分析法化学分析法化学分析法 n n分光光度法分光光度法分光光度法分光光度法 直接测定直接测定直接测定直接测定 离子对萃取比色法离子对萃取比色法离子对萃取比色法离子对萃取比色法n n酸性染料比色法酸性染料比色法酸性染料比色法酸性染料比色法 BH BH十十十十十十十十InIn（BHBH十十十十InIn）BHBH十十十十InIn n n苦味酸盐比色法苦味酸盐比色法苦味酸盐比色法苦味酸盐比色法 n n雷氏盐比色法雷氏盐比色法雷氏盐比色法雷氏盐比色法 n n异羟肟酸铁比色法异羟肟酸铁比色法
6、异羟肟酸铁比色法异羟肟酸铁比色法 （含有酯键结构的生物碱含有酯键结构的生物碱含有酯键结构的生物碱含有酯键结构的生物碱 ）n n含量测定含量测定单体生物碱含量测定单体生物碱含量测定单体生物碱含量测定单体生物碱含量测定 n n薄层色谱法薄层色谱法薄层色谱法薄层色谱法 n n高效液相色谱法高效液相色谱法高效液相色谱法高效液相色谱法 液液液液液分配色谱法（以反相为主，如液分配色谱法（以反相为主，如液分配色谱法（以反相为主，如液分配色谱法（以反相为主，如ODSODSODSODS或或或或C C C C18181818）n n改进流动相（硅醇基抑制剂、低浓度的离子对试改进流动相（硅醇基抑制剂、低浓度的离子对
7、试改进流动相（硅醇基抑制剂、低浓度的离子对试改进流动相（硅醇基抑制剂、低浓度的离子对试剂、季铵盐试剂、电解质缓冲液）剂、季铵盐试剂、电解质缓冲液）剂、季铵盐试剂、电解质缓冲液）剂、季铵盐试剂、电解质缓冲液）n n固定相改进（封尾技术）固定相改进（封尾技术）固定相改进（封尾技术）固定相改进（封尾技术）液液液液固吸附色谱法固吸附色谱法固吸附色谱法固吸附色谱法 离子交换色谱法（阳离子交换树脂）离子交换色谱法（阳离子交换树脂）离子交换色谱法（阳离子交换树脂）离子交换色谱法（阳离子交换树脂）检测器检测器检测器检测器n n气相色谱法气相色谱法气相色谱法气相色谱法 2 2 黄酮黄酮类成分分析类成分分析n n
8、概述概述概述概述n n理化性质理化性质理化性质理化性质 物理性状物理性状物理性状物理性状（存在的形态，颜色，挥发性，光学活性）（存在的形态，颜色，挥发性，光学活性）溶解性溶解性溶解性溶解性 酸碱性酸碱性酸碱性酸碱性n n酸性：与酚羟基的数目和位置有关酸性：与酚羟基的数目和位置有关酸性：与酚羟基的数目和位置有关酸性：与酚羟基的数目和位置有关 7,4-7,4-二羟基二羟基二羟基二羟基 7-7-或或或或4-4-羟基羟基羟基羟基 一般酚一般酚一般酚一般酚 5-5-羟基羟基羟基羟基n n碱性碱性碱性碱性游离甙元易溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯、乙醚等黄酮甙易溶于水、甲醇、乙醇n n理化性质理化性质显色反应显色
9、反应显色反应显色反应n n还原反应（盐酸镁粉反应）还原反应（盐酸镁粉反应）还原反应（盐酸镁粉反应）还原反应（盐酸镁粉反应）n n金属盐类试剂的配合反应（铝、铅、锆、金属盐类试剂的配合反应（铝、铅、锆、金属盐类试剂的配合反应（铝、铅、锆、金属盐类试剂的配合反应（铝、铅、锆、镁盐）镁盐）镁盐）镁盐）紫外光谱特征紫外光谱特征紫外光谱特征紫外光谱特征I I带带带带(300-400nm)(300-400nm)BBBB环桂皮酰基环桂皮酰基环桂皮酰基环桂皮酰基IIIIIIII带带带带(240-285nm)(240-285nm)AAAA环苯甲酰基环苯甲酰基环苯甲酰基环苯甲酰基n n黄酮类成分的分离黄酮类成分的
10、分离溶剂萃取溶剂萃取溶剂萃取溶剂萃取柱层析（聚酰胺柱）柱层析（聚酰胺柱）柱层析（聚酰胺柱）柱层析（聚酰胺柱）沉淀法沉淀法沉淀法沉淀法n n定性鉴别定性鉴别 显色反应显色反应显色反应显色反应n n盐酸盐酸盐酸盐酸-镁粉反应镁粉反应镁粉反应镁粉反应n n金属盐类配合反应金属盐类配合反应金属盐类配合反应金属盐类配合反应n n定性鉴别定性鉴别薄层色谱鉴别薄层色谱鉴别n n硅胶硅胶硅胶硅胶-分离弱极性黄酮分离弱极性黄酮分离弱极性黄酮分离弱极性黄酮 展开系统：甲苯展开系统：甲苯展开系统：甲苯展开系统：甲苯-甲酸乙酯甲酸乙酯甲酸乙酯甲酸乙酯-甲酸，氯仿甲酸，氯仿甲酸，氯仿甲酸，氯仿-甲醇甲醇甲醇甲醇 n n
11、聚酰胺聚酰胺聚酰胺聚酰胺-分离含游离酚羟基的黄酮及其苷分离含游离酚羟基的黄酮及其苷分离含游离酚羟基的黄酮及其苷分离含游离酚羟基的黄酮及其苷 展开系统：醋酸，醋酸乙酯展开系统：醋酸，醋酸乙酯展开系统：醋酸，醋酸乙酯展开系统：醋酸，醋酸乙酯-甲酸甲酸甲酸甲酸-水等水等水等水等n n纤维素纤维素纤维素纤维素-分离多糖苷混合物分离多糖苷混合物分离多糖苷混合物分离多糖苷混合物 展开系统：正丁醇展开系统：正丁醇展开系统：正丁醇展开系统：正丁醇-乙酸乙酸乙酸乙酸-水，甲酸，乙酸水，甲酸，乙酸水，甲酸，乙酸水，甲酸，乙酸n n含量测定含量测定总黄酮含量测定总黄酮含量测定总黄酮含量测定总黄酮含量测定 n n紫外
12、分光光度法紫外分光光度法紫外分光光度法紫外分光光度法n n比色法比色法比色法比色法n n高效液相色谱法高效液相色谱法高效液相色谱法高效液相色谱法 正相色谱正相色谱正相色谱正相色谱n n硅胶固定相硅胶固定相硅胶固定相硅胶固定相没有羟基或乙酰化黄酮类成分没有羟基或乙酰化黄酮类成分没有羟基或乙酰化黄酮类成分没有羟基或乙酰化黄酮类成分 反相色谱（反相色谱（反相色谱（反相色谱（C C C C18181818或或或或C C C C8 8 8 8）n n流动相：甲醇流动相：甲醇流动相：甲醇流动相：甲醇-水水水水-乙酸（磷酸缓冲液），乙腈乙酸（磷酸缓冲液），乙腈乙酸（磷酸缓冲液），乙腈乙酸（磷酸缓冲液），乙腈
13、-水水水水 检测器检测器检测器检测器银杏叶提取物银杏叶提取物银杏叶提取物银杏叶提取物总黄酮醇苷总黄酮醇苷总黄酮醇苷总黄酮醇苷含量含量含量含量测定测定测定测定 含含含含量量量量测测测测定定定定 色色色色谱谱谱谱条条条条件件件件与与与与系系系系统统统统适适适适用用用用性性性性试试试试验验验验 用用十十八八烷烷基基硅硅烷烷键键合合硅硅胶胶为为填填充充剂剂；以以甲甲醇醇-0.4%-0.4%磷磷酸酸溶溶液液（5050：5050）为为流流动动相相；检检测测波波长长为为360nm360nm。理理论论板板数数按按槲槲皮皮素素峰峰计计算算应应不不低低于于25002500，山山柰柰素素酚酚峰峰与与异异鼠鼠李李素素
14、峰峰的的分分离离度应大于度应大于1.51.5。对照品溶液的制备对照品溶液的制备对照品溶液的制备对照品溶液的制备（略）（略）供供供供试试试试品品品品溶溶溶溶液液液液的的的的制制制制备备备备 取取本本品品1010片片，除除去去包包衣衣，精精密密称称定定，研研细细，取取约约相相当当于于总总黄黄酮酮醇醇苷苷19.2mg19.2mg的的粉粉末末，精精密密称称定定，精精密密加加入入甲甲醇醇20ml20ml，称称定定重重量量，超超声声处处理理2020分分钟钟，放放冷冷，再再称称定定重重量量，用用甲甲醇醇补补足足减减失失的的重重量量，摇摇匀匀，滤滤过过，精精密密量量取取续续滤滤液液10ml10ml，置置100
15、ml100ml锥锥形形瓶瓶中中，加加甲甲醇醇10ml10ml、25%25%盐盐酸酸溶溶液液5ml5ml，摇摇匀匀，置置水水浴浴中中加加热热回回流流3030分分钟钟，迅迅速速冷冷却却至至室室温温，转转移移至至50ml50ml量量瓶瓶中中，用用甲甲醇醇稀稀释释至至刻刻度度，摇摇匀匀，用用微微孔孔滤滤膜膜（0.450.45mm）滤滤过过，取取滤液，即得。滤液，即得。测测测测定定定定法法法法 分分别别精精密密吸吸取取对对照照品品溶溶液液与与供供试试品品溶溶液液各各1010l l，注注入入液液相相色色谱谱仪仪，测测定定，分分别别计计算算槲槲皮皮素素、山山奈奈素素和和异异鼠鼠李李素素的的含含量量，按按下下
16、式式换换算算成成总黄酮苷的含量。总黄酮苷的含量。总黄酮醇苷含量总黄酮醇苷含量=（槲皮素含量（槲皮素含量+山奈素含量山奈素含量+异鼠李素含量）异鼠李素含量）2.512.51 3 3 三萜皂甙三萜皂甙类成分分析类成分分析n n概述概述n n理化性质理化性质 物理性状（存在的形态，表面活性，吸湿性）物理性状（存在的形态，表面活性，吸湿性）物理性状（存在的形态，表面活性，吸湿性）物理性状（存在的形态，表面活性，吸湿性）溶解性溶解性溶解性溶解性 紫外光谱特征紫外光谱特征紫外光谱特征紫外光谱特征大多无明显的紫外吸收或仅在大多无明显的紫外吸收或仅在大多无明显的紫外吸收或仅在大多无明显的紫外吸收或仅在200n
17、m200nm附近有末端吸附近有末端吸附近有末端吸附近有末端吸收收收收 皂甙元能溶于石油醚、苯、乙醚、氯仿等皂甙可溶于水，易溶于热水、含水稀醇等甘草酸甘草酸人参皂甙人参皂甙(A型型)n n理化性质理化性质 显色反应显色反应显色反应显色反应n n醋酐醋酐醋酐醋酐-浓硫酸反应浓硫酸反应浓硫酸反应浓硫酸反应n n五氯化锑反应五氯化锑反应五氯化锑反应五氯化锑反应n n三铝醋酸反应三铝醋酸反应三铝醋酸反应三铝醋酸反应n n冰醋酸冰醋酸冰醋酸冰醋酸-乙酰氯反应乙酰氯反应乙酰氯反应乙酰氯反应n n氯仿氯仿氯仿氯仿-硫酸反应硫酸反应硫酸反应硫酸反应 金属盐类反应金属盐类反应金属盐类反应金属盐类反应n n+铅、钡
18、、铜盐铅、钡、铜盐铅、钡、铜盐铅、钡、铜盐沉淀沉淀沉淀沉淀 酸性皂甙酸性皂甙酸性皂甙酸性皂甙+硫酸铵硫酸铵硫酸铵硫酸铵/醋酸铅醋酸铅醋酸铅醋酸铅/中性盐中性盐中性盐中性盐沉淀沉淀沉淀沉淀 中性皂甙中性皂甙中性皂甙中性皂甙+碱式醋酸铅碱式醋酸铅碱式醋酸铅碱式醋酸铅/氢氧化钡氢氧化钡氢氧化钡氢氧化钡/碱性盐碱性盐碱性盐碱性盐沉淀沉淀沉淀沉淀n n三萜皂甙类成分的分离三萜皂甙类成分的分离溶剂萃取溶剂萃取柱层析（大孔树脂柱）柱层析（大孔树脂柱）沉淀法沉淀法n n定性鉴别定性鉴别泡沫反应泡沫反应泡沫反应泡沫反应显色反应显色反应显色反应显色反应n n定性鉴别定性鉴别薄层色谱鉴别薄层色谱鉴别n n吸附剂：硅
19、胶、氧化铝、硅藻土吸附剂：硅胶、氧化铝、硅藻土吸附剂：硅胶、氧化铝、硅藻土吸附剂：硅胶、氧化铝、硅藻土n n展开剂：展开剂：展开剂：展开剂：三萜皂三萜皂三萜皂三萜皂甙甙甙甙氯氯氯氯仿仿仿仿-甲醇甲醇甲醇甲醇-水、正丁醇水、正丁醇水、正丁醇水、正丁醇-醋酸乙酯醋酸乙酯醋酸乙酯醋酸乙酯-水水水水等等等等极性较大的极性较大的极性较大的极性较大的体系体系体系体系 三萜皂甙元三萜皂甙元三萜皂甙元三萜皂甙元-以苯、氯仿、己烷等为主要组分以苯、氯仿、己烷等为主要组分以苯、氯仿、己烷等为主要组分以苯、氯仿、己烷等为主要组分n n显色剂显色剂显色剂显色剂 三氯醋酸、三氯醋酸、三氯醋酸、三氯醋酸、50%50%50
20、%50%及及及及10%10%10%10%硫酸乙醇液、磷钼酸、浓硫酸乙醇液、磷钼酸、浓硫酸乙醇液、磷钼酸、浓硫酸乙醇液、磷钼酸、浓硫酸硫酸硫酸硫酸-醋酸酐、碘蒸气等醋酸酐、碘蒸气等醋酸酐、碘蒸气等醋酸酐、碘蒸气等n n含量测定含量测定总皂甙含量测定总皂甙含量测定总皂甙含量测定总皂甙含量测定 n n重量法重量法重量法重量法n n比色法比色法比色法比色法 显色剂：香草醛显色剂：香草醛显色剂：香草醛显色剂：香草醛-硫酸，香草醛硫酸，香草醛硫酸，香草醛硫酸，香草醛-高氯酸，酸酐高氯酸，酸酐高氯酸，酸酐高氯酸，酸酐-硫酸等硫酸等硫酸等硫酸等等等等等三萜皂甙类单体成分含量测定三萜皂甙类单体成分含量测定三萜皂
21、甙类单体成分含量测定三萜皂甙类单体成分含量测定n n薄层色谱法薄层色谱法薄层色谱法薄层色谱法n n高效液相色谱高效液相色谱高效液相色谱高效液相色谱 甘草酸、远志皂甙甘草酸、远志皂甙甘草酸、远志皂甙甘草酸、远志皂甙紫外检测器紫外检测器紫外检测器紫外检测器 其他其他其他其他蒸发光散射检测器（蒸发光散射检测器（蒸发光散射检测器（蒸发光散射检测器（ELSDELSDELSDELSD）n n概述概述n n理化性质理化性质 物理性状（存在的形态，升华性，光不稳定性）物理性状（存在的形态，升华性，光不稳定性）物理性状（存在的形态，升华性，光不稳定性）物理性状（存在的形态，升华性，光不稳定性）溶解性溶解性溶解性
22、溶解性 酸碱性酸碱性酸碱性酸碱性酚羟基酚羟基酚羟基酚羟基酸性酸性酸性酸性游离溶于乙醇、苯、乙醚、氯仿等醌甙可溶于热水，易溶于甲醇、乙醇丹参醌丹参醌IIA大黄素大黄素 4 4 醌醌类成分分析类成分分析n n理化性质理化性质显色反应显色反应显色反应显色反应n n羟基蒽醌羟基蒽醌羟基蒽醌羟基蒽醌+碱碱碱碱橙，红，紫红，蓝橙，红，紫红，蓝橙，红，紫红，蓝橙，红，紫红，蓝n n+Pb+Pb2+2+/Mg/Mg2+2+配合物配合物配合物配合物n n+对亚硝基二甲基苯胺对亚硝基二甲基苯胺对亚硝基二甲基苯胺对亚硝基二甲基苯胺紫，绿，蓝，灰紫，绿，蓝，灰紫，绿，蓝，灰紫，绿，蓝，灰n n定性鉴别定性鉴别显色反应
23、显色反应显色反应显色反应升华法升华法升华法升华法薄层鉴别薄层鉴别薄层鉴别薄层鉴别n n吸附剂：硅胶吸附剂：硅胶吸附剂：硅胶吸附剂：硅胶n n展开剂：多含甲醇或水的混合溶剂系统展开剂：多含甲醇或水的混合溶剂系统展开剂：多含甲醇或水的混合溶剂系统展开剂：多含甲醇或水的混合溶剂系统分离甙和甙元分离甙和甙元分离甙和甙元分离甙和甙元 不含甲醇或水的混合溶剂系统不含甲醇或水的混合溶剂系统不含甲醇或水的混合溶剂系统不含甲醇或水的混合溶剂系统分离甙元分离甙元分离甙元分离甙元n n显色：碱性试剂，醋酸镁甲醇液、氨熏显色：碱性试剂，醋酸镁甲醇液、氨熏显色：碱性试剂，醋酸镁甲醇液、氨熏显色：碱性试剂，醋酸镁甲醇液、
24、氨熏n n含量测定含量测定游离蒽醌的测定游离蒽醌的测定游离蒽醌的测定游离蒽醌的测定弱极性溶剂提取后，加碱比色弱极性溶剂提取后，加碱比色弱极性溶剂提取后，加碱比色弱极性溶剂提取后，加碱比色 结合蒽醌的测定结合蒽醌的测定结合蒽醌的测定结合蒽醌的测定极性溶剂提取，水解测甙元极性溶剂提取，水解测甙元极性溶剂提取，水解测甙元极性溶剂提取，水解测甙元先酸水解后，非先酸水解后，非先酸水解后，非先酸水解后，非极性溶剂提取甙元后测定极性溶剂提取甙元后测定极性溶剂提取甙元后测定极性溶剂提取甙元后测定醌类单体成分含量测定醌类单体成分含量测定醌类单体成分含量测定醌类单体成分含量测定n n薄层色谱法薄层色谱法薄层色谱法
25、薄层色谱法n n高效液相色谱高效液相色谱高效液相色谱高效液相色谱牛黄解毒片中游离蒽醌和总蒽醌的测定牛黄解毒片中游离蒽醌和总蒽醌的测定牛黄解毒片中游离蒽醌和总蒽醌的测定牛黄解毒片中游离蒽醌和总蒽醌的测定混合碱液比色法混合碱液比色法混合碱液比色法混合碱液比色法对对对对照照照照品品品品溶溶溶溶液液液液测测测测定定定定：以以1 1，8-8-二二羟羟基基蒽蒽醌醌为为对对照照品品，精精密密称称取取10mg10mg于于100mL100mL量量瓶瓶中中，加加甲甲醇醇溶溶解解并并稀稀释释至至刻刻度度（100100 g/mLg/mL）。取取1mL1mL对对照照品品液液于于10mL10mL量量瓶瓶中中，在在水水浴浴
26、上上蒸蒸干干，加加5%5%氢氢氧氧化化钠钠-2%-2%氢氢氧氧化化铵铵混混合合碱碱溶溶解解并并稀稀释释至至刻刻度度，放放置置1 1小小时时，以以5%5%氢氢氧氧化化钠钠-2%-2%氢氢氧氧化化铵铵混混合合碱碱液液为为空空白白，在在510nm510nm波长处测定。波长处测定。样样样样品品品品测测测测定定定定：游游离离蒽蒽醌醌的的测测定定：取取牛牛黄黄解解毒毒片片1010片片，刮刮去去糖糖衣衣，精精密密称称定定重重量量，研研细细。称称取取一一片片重重，置置于于具具塞塞三三角角瓶瓶中中，精精密密加加入入氯氯仿仿100mL100mL，称称重重，水水浴浴上上回回流流4 4小小时时，取取下下，加加塞塞，放
27、放冷冷，称称重重，用用氯氯仿仿补补充充至至原原重重量量，滤滤过过，吸吸取取滤滤液液50mL50mL于于分分液液漏漏斗斗中中，用用蒸蒸馏馏水水20mL20mL洗洗涤涤数数次次，至至水水层层无无色色，弃弃去去水水液液。氯氯仿仿层层用用5%5%氢氢氧氧化化钠钠-2%-2%氢氢氧氧化化铵铵混混合合碱碱液液振振摇摇萃萃取取数数次次，直直至至混混合合碱碱液液无无色色，合合并并碱碱液液，用用20mL20mL氯氯仿仿洗洗涤涤数数次次，至至氯氯仿仿层层无无色色，弃弃去去氯氯仿仿层层。将将混混合合碱碱液液在在水水浴浴上上加加热热数数分分钟钟至至氯氯仿仿挥挥尽尽，冷冷却却，移移入入100mL100mL量量瓶瓶中中，
28、并并稀稀释释至至刻刻度度，放放置置1 1小小时时，以以5%5%氢氢氧氧化化钠钠-2%-2%氢氢氧氧化化铵铵混混合合碱碱液液为为空空白白，在在510nm510nm处处测测定定，计计算算游游离离蒽蒽醌醌的的含含量量（相相当当于于1 1，8-8-二二羟基蒽醌含量）。羟基蒽醌含量）。牛黄解毒片中游离蒽醌和总蒽醌的测定牛黄解毒片中游离蒽醌和总蒽醌的测定牛黄解毒片中游离蒽醌和总蒽醌的测定牛黄解毒片中游离蒽醌和总蒽醌的测定混合碱液比色法混合碱液比色法混合碱液比色法混合碱液比色法 总总总总蒽蒽蒽蒽醌醌醌醌的的的的测测测测定定定定：精精密密称称取取游游离离蒽蒽醌醌项项下下的的牛牛黄黄解解毒毒片片粉粉一一片片置置
29、于于150mL150mL烧烧瓶瓶中中，加加2.5mol/L2.5mol/L硫硫酸酸30mL30mL直直火火回回流流4 4小小时时，放放冷冷，加加入入氯氯仿仿20mL20mL，水水浴浴回回流流0.50.5小小时时，放放冷冷，吸吸出出氯氯仿仿液液，再再加加氯氯仿仿，反反复复操操作作至至氯氯仿仿无无色色为为止止。合合并并氯氯仿仿层层液液，用用蒸蒸馏馏水水洗洗涤涤数数次次，至至水水层层无无色色，弃弃去去水水液液。氯氯仿仿液液用用5%5%氢氢氧氧化化钠钠-2%-2%氢氢氧氧化化铵铵混混合合碱碱液液振振摇摇萃萃取取数数次次，至至碱碱液液无无色色，合合并并，用用20mL20mL氯氯仿仿洗洗涤涤数数次次，至至
30、氯氯仿仿层层无无色色，弃弃去去氯氯仿仿液液。将将碱碱液液置置水水浴浴上上加加热热至至氯氯仿仿挥挥尽尽，冷冷却却，移移入入50mL50mL量量瓶瓶中中，用用混混合合碱碱液液稀稀释释至至刻刻度度，放放置置1 1小小时时，以以5%5%氢氢氧氧化化钠钠-2%-2%氢氢氧氧化化铵铵液液为为空空白白，在在510nm510nm处处测测定定，计计算算游游离离蒽蒽醌醌的的含含量量（相相当当于于1 1，8-8-二二羟羟基蒽醌含量）。基蒽醌含量）。结合蒽醌的计算：结合蒽醌的计算：结合蒽醌的计算：结合蒽醌的计算：每片含结合蒽醌量每片含结合蒽醌量=每片含总蒽醌量每片含总蒽醌量每片含游离蒽醌量。每片含游离蒽醌量。复方丹参
31、片中丹参酮复方丹参片中丹参酮复方丹参片中丹参酮复方丹参片中丹参酮AA含量测定含量测定含量测定含量测定高效液相色谱法高效液相色谱法高效液相色谱法高效液相色谱法 色色色色谱谱谱谱条条条条件件件件与与与与系系系系统统统统适适适适用用用用性性性性试试试试验验验验：用用十十八八烷烷基基硅硅烷烷键键合合硅硅胶胶为为填填充剂；甲醇充剂；甲醇-水（水（7373：2727）为流动相；检测波长为）为流动相；检测波长为270nm270nm。对对对对照照照照品品品品溶溶溶溶液液液液的的的的制制制制备备备备：精精密密称称取取丹丹参参酮酮AA对对照照品品10mg10mg，置置50mL50mL棕棕色色量量瓶瓶中中，用用甲甲
32、醇醇溶溶解解并并稀稀释释至至刻刻度度，摇摇匀匀，精精密密量量取取5mL5mL，置置25mL25mL棕棕色色量量瓶瓶中中，加加甲甲醇醇至至刻刻度度，摇摇匀匀，即即得得（每（每1mL1mL中含丹参酮中含丹参酮A40A40 g g）供供供供试试试试品品品品溶溶溶溶液液液液的的的的制制制制备备备备：取取本本品品1010片片，糖糖衣衣片片除除去去糖糖衣衣，精精密密称称定定，研研细细，取取1g1g，精精密密称称定定，精精密密加加入入甲甲醇醇25mL25mL，称称定定重重量量，超超声声处处理理1515分分钟钟，放放冷冷，再再称称定定重重量量，用用甲甲醇醇补补足足减减失失的的重重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得
33、。量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测测测测定定定定法法法法：分分别别精精密密吸吸取取对对照照品品溶溶液液与与供供试试品品溶溶液液各各1010 L L，注入液相色谱仪，测定，即得。注入液相色谱仪，测定，即得。5 挥发性成分分析n n概述概述n n理化性质理化性质 物理性状（气味，比重，折光性）物理性状（气味，比重，折光性）物理性状（气味，比重，折光性）物理性状（气味，比重，折光性）溶解性：易溶于有机溶剂溶解性：易溶于有机溶剂溶解性：易溶于有机溶剂溶解性：易溶于有机溶剂 显色反应显色反应显色反应显色反应n n酚类酚类酚类酚类+三氯化铁三氯化铁蓝，蓝紫，绿蓝，蓝紫，绿n n羰基羰基羰基羰基+苯肼、羟
34、胺苯肼、羟胺结晶体结晶体n n醛类醛类醛类醛类+硝酸银胺硝酸银胺银镜银镜n n内酯类内酯类内酯类内酯类+亚硝酰铁氰化钠亚硝酰铁氰化钠+NaOH+NaOH红色并逐渐消红色并逐渐消失失n n奧类奧类奧类奧类+浓硫酸浓硫酸蓝，紫蓝，紫柠檬烯柠檬烯薄荷醇薄荷醇桂皮醛桂皮醛 5 挥发性成分分析n n定性鉴别定性鉴别 化学反应化学反应化学反应化学反应n n氧化反应氧化反应氧化反应氧化反应(高锰酸钾，铬酸）高锰酸钾，铬酸）高锰酸钾，铬酸）高锰酸钾，铬酸）n n香草醛硫酸反应香草醛硫酸反应香草醛硫酸反应香草醛硫酸反应 薄层色谱薄层色谱薄层色谱薄层色谱n n吸附剂：硅胶、氧化铝吸附剂：硅胶、氧化铝吸附剂：硅胶、
35、氧化铝吸附剂：硅胶、氧化铝n n展开剂：石油醚，正己烷，（加少量的乙酸乙脂展开剂：石油醚，正己烷，（加少量的乙酸乙脂展开剂：石油醚，正己烷，（加少量的乙酸乙脂展开剂：石油醚，正己烷，（加少量的乙酸乙脂或苯）或苯）或苯）或苯）n n显色剂显色剂显色剂显色剂 气相色谱法气相色谱法气相色谱法气相色谱法 GC-MSGC-MS或或或或GC-FTIRGC-FTIR5 挥发性成分分析n n含量测定含量测定总挥发油含量测定总挥发油含量测定总挥发油含量测定总挥发油含量测定 n n挥发油测定器挥发油测定器挥发油测定器挥发油测定器n n蒸馏法蒸馏法蒸馏法蒸馏法单一成分含量测定单一成分含量测定单一成分含量测定单一成分
36、含量测定n n气相色谱气相色谱气相色谱气相色谱n n薄层色谱法薄层色谱法薄层色谱法薄层色谱法n n高效液相色谱高效液相色谱高效液相色谱高效液相色谱n nGC-MSGC-MS或或或或GC-FTIRGC-FTIR联用技术联用技术联用技术联用技术 4 其他类型成分分析n n香豆素类香豆素类显色反应显色反应显色反应显色反应n n异羟肟酸铁反应异羟肟酸铁反应异羟肟酸铁反应异羟肟酸铁反应n n与酚羟基反应与酚羟基反应与酚羟基反应与酚羟基反应 FeClFeClFeClFeCl3 3 3 3 GibbsGibbsGibbsGibbs试剂（试剂（试剂（试剂（2,6-2,6-2,6-2,6-二氯苯醌氯亚胺）反应二
37、氯苯醌氯亚胺）反应二氯苯醌氯亚胺）反应二氯苯醌氯亚胺）反应蓝色蓝色蓝色蓝色 重氮试剂化反应重氮试剂化反应重氮试剂化反应重氮试剂化反应 4 其他类型成分分析n n香豆素类香豆素类定性鉴别定性鉴别定性鉴别定性鉴别n n化学反应法化学反应法化学反应法化学反应法n n荧光法荧光法荧光法荧光法n n薄层色谱法薄层色谱法薄层色谱法薄层色谱法七宝美髯颗粒中补骨脂素、异补骨脂素的鉴别七宝美髯颗粒中补骨脂素、异补骨脂素的鉴别取本品取本品10g，研细，加醋酸乙酯，研细，加醋酸乙酯20ml、盐酸、盐酸0.5ml，超声处，超声处理理20分钟，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯分钟，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯0.5ml
38、使溶解，使溶解，作为供试品溶液。作为供试品溶液。薄层条件：硅胶薄层条件：硅胶G薄层板，展开剂正已烷薄层板，展开剂正已烷醋酸乙酯（醋酸乙酯（4:1），），显色剂为显色剂为10%氢氧化钾甲醇溶液，紫外光灯氢氧化钾甲醇溶液，紫外光灯365nm下检视。下检视。4 其他类型成分分析n n香豆素类香豆素类含量测定含量测定含量测定含量测定n n分光光度法分光光度法分光光度法分光光度法n n荧光光度法荧光光度法荧光光度法荧光光度法n n薄层色谱法薄层色谱法薄层色谱法薄层色谱法n n高效液相色谱法高效液相色谱法高效液相色谱法高效液相色谱法n n气相色谱法气相色谱法气相色谱法气相色谱法 4 其他类型成分分析n n
39、有机酸有机酸概述概述概述概述理化性质理化性质理化性质理化性质n n物理性状物理性状物理性状物理性状（存在的形态，溶解性，挥发性）（存在的形态，溶解性，挥发性）提取分离提取分离提取分离提取分离n n有机溶剂提取法有机溶剂提取法有机溶剂提取法有机溶剂提取法n n离子交换法离子交换法离子交换法离子交换法n n水蒸气蒸馏法水蒸气蒸馏法水蒸气蒸馏法水蒸气蒸馏法 4 其他类型成分分析n n有机酸有机酸有机酸有机酸 定性鉴别定性鉴别定性鉴别定性鉴别n n吸附色谱吸附色谱吸附色谱吸附色谱n n分配色谱分配色谱分配色谱分配色谱 含量测定含量测定含量测定含量测定n n酸碱滴定法酸碱滴定法酸碱滴定法酸碱滴定法总有机
40、酸总有机酸总有机酸总有机酸n n分光光度法分光光度法分光光度法分光光度法n n高效液相色谱法高效液相色谱法高效液相色谱法高效液相色谱法n n薄层色谱法薄层色谱法薄层色谱法薄层色谱法n n其他方法其他方法其他方法其他方法 4 其他类型成分分析n n环烯醚萜类环烯醚萜类概述概述概述概述特殊的单萜特殊的单萜特殊的单萜特殊的单萜理化性质理化性质理化性质理化性质n n物理性状物理性状物理性状物理性状（存在的形态，多苦味，稳定性）（存在的形态，多苦味，稳定性）n n溶解性：溶解性：溶解性：溶解性：易溶于水、甲醇，可溶于乙醇、丙酮、易溶于水、甲醇，可溶于乙醇、丙酮、正丁醇正丁醇 薄层定性鉴别薄层定性鉴别薄层
41、定性鉴别薄层定性鉴别n n吸附剂：吸附剂：吸附剂：吸附剂：硅胶、聚酰胺硅胶、聚酰胺n n显色剂：显色剂：显色剂：显色剂：硫酸乙醇，茴香醛试液，香草醛硫酸试硫酸乙醇，茴香醛试液，香草醛硫酸试液，对二甲氨基苯甲醛硫酸试液液，对二甲氨基苯甲醛硫酸试液龙胆苦甙龙胆苦甙 4 其他类型成分分析n n环烯醚萜类环烯醚萜类含量测定含量测定含量测定含量测定n n高效液相色谱法高效液相色谱法高效液相色谱法高效液相色谱法n n薄层扫描法薄层扫描法薄层扫描法薄层扫描法n n荧光分光光度法荧光分光光度法荧光分光光度法荧光分光光度法n n分光光度法分光光度法分光光度法分光光度法复方栀子冲剂中栀子甙的含量测定复方栀子冲剂中
42、栀子甙的含量测定精密称取本品精密称取本品3g，置索氏提取器内，加甲醇回流提取，置索氏提取器内，加甲醇回流提取6小时，小时，回收甲醇至干，加水回收甲醇至干，加水10ml溶解，用水饱和正丁醇提取，提取溶解，用水饱和正丁醇提取，提取液蒸干，以甲醇溶解，通过已处理好的活性炭液蒸干，以甲醇溶解，通过已处理好的活性炭-中性氧化铝柱，中性氧化铝柱，用甲醇用甲醇100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用2ml甲醇溶甲醇溶解，作为供试品溶液。解，作为供试品溶液。薄层条件：硅胶薄层条件：硅胶GF254薄层板，展开剂氯仿薄层板，展开剂氯仿甲醇甲醇25%氨氨水（水（4:1:0.1），检测波
43、长），检测波长247nm，参比波长，参比波长370nm。4 其他类型成分分析n n单萜及二萜类单萜及二萜类含芍药甙中药制剂的分析含芍药甙中药制剂的分析含芍药甙中药制剂的分析含芍药甙中药制剂的分析n n薄层色谱薄层色谱薄层色谱薄层色谱n n高效液相色谱高效液相色谱高效液相色谱高效液相色谱含穿心莲内酯中药制剂的分析含穿心莲内酯中药制剂的分析含穿心莲内酯中药制剂的分析含穿心莲内酯中药制剂的分析n n薄层色谱薄层色谱薄层色谱薄层色谱n n回滴法回滴法回滴法回滴法n n比色法比色法比色法比色法总内酯总内酯总内酯总内酯n n薄层扫描或高效液相色谱法薄层扫描或高效液相色谱法薄层扫描或高效液相色谱法薄层扫描或
44、高效液相色谱法单体成分单体成分单体成分单体成分穿心莲内酯穿心莲内酯 4 其他类型成分分析n n多糖（多糖（polysaccharides）概述概述概述概述理化性质理化性质理化性质理化性质n n物理性状物理性状物理性状物理性状（存在形式，还原性）（存在形式，还原性）n n溶解性：溶解性：溶解性：溶解性：溶于水，低浓度的酸碱，盐溶液，不溶溶于水，低浓度的酸碱，盐溶液，不溶于醇、醚、丙酮于醇、醚、丙酮提取分离提取分离提取分离提取分离n n水提醇沉水提醇沉水提醇沉水提醇沉防止水解，注意消除酶、酸、碱等的影响防止水解，注意消除酶、酸、碱等的影响 4 其他类型成分分析n n多糖（多糖（polysaccha
45、rides）提取分离提取分离提取分离提取分离n n金属盐沉淀法金属盐沉淀法金属盐沉淀法金属盐沉淀法n n季胺氢氧化物沉淀季胺氢氧化物沉淀季胺氢氧化物沉淀季胺氢氧化物沉淀n n柱色谱法柱色谱法柱色谱法柱色谱法（活性炭活性炭活性炭活性炭+等量的硅藻土）等量的硅藻土）等量的硅藻土）等量的硅藻土）n n凝胶色谱法（葡聚糖凝胶凝胶色谱法（葡聚糖凝胶凝胶色谱法（葡聚糖凝胶凝胶色谱法（葡聚糖凝胶sephadexsephadex，琼脂糖，琼脂糖，琼脂糖，琼脂糖凝胶凝胶凝胶凝胶sepharosesepharose，聚丙烯酰胺凝胶，聚丙烯酰胺凝胶，聚丙烯酰胺凝胶，聚丙烯酰胺凝胶Bio-gel Bio-gel P
46、P）n n制备型区域电泳制备型区域电泳制备型区域电泳制备型区域电泳4 其他类型成分分析n n多糖（多糖（多糖（多糖（polysaccharidespolysaccharides）定性鉴别定性鉴别定性鉴别定性鉴别n n薄层色谱（硅胶、纤维素、硅藻土）薄层色谱（硅胶、纤维素、硅藻土）薄层色谱（硅胶、纤维素、硅藻土）薄层色谱（硅胶、纤维素、硅藻土）n n纸色谱纸色谱纸色谱纸色谱展开剂：正丁醇、水混合体系展开剂：正丁醇、水混合体系显色剂：苯胺显色剂：苯胺-邻苯二甲酸的正丁醇饱和水溶液等邻苯二甲酸的正丁醇饱和水溶液等n n电泳法电泳法电泳法电泳法 滤纸电泳、玻璃纤维纸电泳、醋酸纤维薄膜电泳、凝胶电泳滤纸
47、电泳、玻璃纤维纸电泳、醋酸纤维薄膜电泳、凝胶电泳滤纸电泳、玻璃纤维纸电泳、醋酸纤维薄膜电泳、凝胶电泳滤纸电泳、玻璃纤维纸电泳、醋酸纤维薄膜电泳、凝胶电泳n n高效液相色谱法高效液相色谱法高效液相色谱法高效液相色谱法n n气质联用气质联用气质联用气质联用酸水解酸水解酸水解酸水解中和中和中和中和柱前衍生柱前衍生柱前衍生柱前衍生GC-MSGC-MS4 其他类型成分分析n n多糖（多糖（多糖（多糖（polysaccharidespolysaccharides）含量测定含量测定含量测定含量测定n n总多糖的测定总多糖的测定总多糖的测定总多糖的测定 3,5-3,5-二硝基水杨酸比色法二硝基水杨酸比色法二硝
48、基水杨酸比色法二硝基水杨酸比色法棕红色（棕红色（棕红色（棕红色（550nm550nm）半微量定量法半微量定量法 苯酚苯酚苯酚苯酚-硫酸法硫酸法硫酸法硫酸法蓝绿色（蓝绿色（蓝绿色（蓝绿色（480-490nm480-490nm）蒽酮蒽酮蒽酮蒽酮-硫酸法硫酸法硫酸法硫酸法黄绿色黄绿色黄绿色黄绿色(620nm)(620nm)n n单体多糖的含量测定单体多糖的含量测定单体多糖的含量测定单体多糖的含量测定 高效凝胶液相色谱法高效凝胶液相色谱法高效凝胶液相色谱法高效凝胶液相色谱法确定分子量确定分子量确定分子量确定分子量 高效液相色谱法高效液相色谱法高效液相色谱法高效液相色谱法确定组成确定组成确定组成确定组成
49、色谱柱：氨基键合相硅胶柱，或普通硅胶柱色谱柱：氨基键合相硅胶柱，或普通硅胶柱色谱柱：氨基键合相硅胶柱，或普通硅胶柱色谱柱：氨基键合相硅胶柱，或普通硅胶柱检测器：示差折光检测器检测器：示差折光检测器检测器：示差折光检测器检测器：示差折光检测器 4 其他类型成分分析n n多糖多糖灵芝多糖的灵芝多糖的灵芝多糖的灵芝多糖的测定测定测定测定 含含含含量量量量测测测测定定定定 对对对对照照照照品品品品溶溶溶溶液液液液的的的的制制制制备备备备 精精密密称称取取105105干干燥燥至至恒恒重重的的葡葡萄糖对照品适量萄糖对照品适量 标准曲线的制备标准曲线的制备标准曲线的制备标准曲线的制备 (硫酸蒽硫酸蒽酮酮法，
50、法，=625nm=625nm)供供供供试试试试品品品品溶溶溶溶液液液液的的的的制制制制备备备备 取取本本品品粉粉末末约约2g2g，精精密密称称定定，置置索索氏氏提提取取器器中中，加加水水90ml90ml，电电加加热热器器加加热热回回流流提提取取至至提提取取液液无无色色，提提取取液液转转移移至至100ml100ml量量瓶瓶中中，加加水水稀稀释释至至刻刻度度，摇摇匀匀，精精密密量量取取10ml10ml，加加入入乙乙醇醇150ml150ml，摇摇匀匀，4 4 放放置置1212小小时时，取取出出，离离心心，倾倾去去上上清清液液，沉沉淀淀加加水溶解并转移至水溶解并转移至50ml50ml量瓶中，加水稀释至